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03 Inmunoglobulinas

F. Garca-Cozar, E. Aguado y J. Pea Estructura Isotipos Dominios Subclases Alotipos Idiotipos Distribucin Funcin Propiedades Unin ag-ac IgG y otras

INTRODUCCION A finales del siglo XIX, Von Behring observ que los sueros de animales que haban padecido difteria contenan sustancias que neutralizaban el efecto de la toxina diftrica. A estas sustancias, que se caracterizaban por ser termolbiles y no dializables, se les denomin anticuerpos, debido a su capacidad de reconcer a las toxinas bacterianas. En 1937 Tiselius descubre la electroforesis y aplica este nuevo mtodo al fraccionamiento de protenas plasmticas, identificando as los anticuerpos como las protenas del suero que se desplazan ms lentamente. Esta fraccin recibi el nombre de g-globulina, quedando as asociados temporalmente, los conceptos de anticuerpo y de g-globulina, como equivalentes (Figura 3.1).Posteriormente, se comprueba que no todos los anticuerpos migran electroforticamente con las g-globulinas, sino que muchos de ellos lo hacen con las a y b globulinas. Esto se observ analizando los niveles de las distintas fracciones de globulinas antes y despus de la inmunizacin de animales con un antgeno (Figura 3. 2). Se concluye entonces, que no todos los anticuerpos son gammaglobulinas, por lo que Hebermans propone el trmino de inmunoglobulinas para designar a todas las sustancias con capacidad de anticuerpo. Hoy se conocen cinco tipos de inmunoglobulinas: IgM, IgA, IgG, IgD e IgE, cada una de ellas con ciertas caractersticas distintas (Tabla 3.1).

ESTRUCTURA DE LAS INMUNOGLOBULINAS Las inmunoglobulinas son glicoprotenas que, segn ya indic Porter en 1959, estn formadas por cadenas polipeptdicas agrupadas, dependiendo del tipo de inmunoglobulina, en una o varias unidades estructurales bsicas.

Unidad estructural bsica Cada unidad est compuesta por cuatro cadenas polipeptdicas unidas entre s por puentes disulfuro y otras uniones de tipo no covalente (Figura 3.3.). Para su estudio se han empleado diferentes procedimientos. Por ejemplo, tras la rotura de los puentes disulfuro por sustancias de carcter reductor, como el mercaptoetanol, se individualizan las cuatro cadenas polipeptdicas y stos atendiendo a su tamao, son de dos tipos: de bajo peso molecular (aproximadadamente 22 KD) y de alto peso molecular (50-70 KD, dependiendo del tipo de Ig). Los polipptidos de bajo peso molecular reciben el nombre de cadenas ligeras o cadenas L (Light) y las de alto peso molecular, cadenas pesadas o cadenas H (Heavy) (Tabla 3.2). Dos cadenas ligeras y dos cadenas pesadas se agrupan de tal manera que existe una proximidad espacial entre los cuatro extremos amnicos de las cadenas ligeras y pesadas por una parte, y entre los dos extremos carboxlicos de las cadenas pesadas por otra. Esta estructura bsica de las inmunoglobulinas puede ser fraccionada mediante la utilizacin de enzimas (papana, pepsina, etc.), como fue efectuado por Porter en 1959, obtenindose diferentes tipos de fragmentos (Figura 3 4). El tratamiento con papana produce la ruptura especfica de las cadenas H, en el espacio comprendido entre el puente disulfuro que las une entre s y los que las unen a las cadenas ligeras. Se obtienen tres fragmentos: uno denominado Fc, que determina la actividad biolgica, contiene el alotipo y determina la clase y subclase de cadena pesada y dos denominados cada uno de ellos Fab, que contienen el idiotipo y es por donde la molcula se une al antgeno.

Cadenas Ligeras. Hay dos tipos de cadenas ligeras, estructuralmente diferentes, que se conocen como cadenas ligeras tipo kappa (k) y cadenas ligeras tipo lambda (l). La familia de genes que codifica para la cadena ligera k se localiza en el cromosoma 2 y los loci de los genes homlogos que codifican para la cadena l, en el cromosoma 22. En cada molcula de inmunoglobulina las dos cadenas ligeras son del mismo tipo, k o bien l, pero nunca existe una de cada tipo en la misma inmunoglobulina. Las cadenas ligeras estn formadas por unos 200 aminocidos con la particularidad de que existen dos puentes disulfuro que unen grupos de unos cincuenta aminocidos. Concretamente la IgG1 posee 214 aminocidos y su estructura secundaria y terciaria estn determinadas por dos puentes disulfuro intracatenarios que unen los aminocidos 23 con el 88 y 134 con el 193, (Figura 3.5) . A su vez, estas cadenas ligeras tienen otro puente disulfuro intercatenario, por el cual cada una de ellas se une a una cadena pesada para constituir la unidad bsica de las inmunoglobulinas. Este puente se encuentra en el ltimo aminocido (214) de la parte carboxlica para el tipo k y en el penltimo para el tipo l. Cadenas pesadas. Estas cadenas poseen unos cuatrocientos aminocidos establecindose entre algunos de ellos puentes disulfuro (intracatenarios) que asocian unos 60 aminocidos y que condicionan la estructura secundaria del polipptido. Por ejemplo, las cadenas pesadas de la IgG1 poseen 440 aminocidos y los puentes disulfuro unen el aminocido 22 con el 96, el 144 con el 200, el 261 con el 321 y el 367 con el 425. Estas dos cadenas pesadas estn unidas la una a la otra por puentes disulfuro intercatenarios, ya indicados anteriormente, y que pueden ser de uno a cinco dependiendo del tipo de inmunoglobulina. En estas cadenas pesadas, y a nivel de los puentes disulfuro intercatenarios, hay una zona de unos 15 aminocidos, de gran flexibilidad debido a su estructura y constituye lo que se denomina zona bisagra por donde se deforma la molcula de inmunoglobulina cuando se produce la unin con el antgeno, facilitndose as su acoplamiento con ste. Los loci de los genes que codifican para la cadena pesada se localizan en el brazo largo del cromosoma 14. Parte variable y constante de las cadenas ligeras y pesadas. Estructuralmente, las cadenas ligeras poseen dos partes: una corresponde al extremo carboxlico que diferencia las cadenas ligeras en dos tipos k y l, y constituye la parte constante de las cadenas ligeras (CL). La otra corresponde al extremo amnico, que es muy variable y constituye la parte variable de las cadenas ligeras (VL) y corresponde a la zona de interaccin con el antgeno. Las partes constante y variable son prcticamente de igual tamao en las cadenas ligeras. Tambin las cadenas pesadas poseen una parte variable y otra constante. Aproximadamente el tercio del extremo amnico de estas cadenas se caracteriza por ser estructuralmente muy variable, por lo que se conoce como parte variable de las cadenas pesadas (VH). La estructura de este fragmento, al igual que en las cadenas ligeras, depende del tipo de antgeno que reconoce, dado que este extremo tambin participa en la unin de la inmunoglobulina con el antgeno. Por el contrario, aproximadamente los dos tercios del extremo carboxlico de todas las cadenas pesadas de un mismo tipo de inmunoglobulinas poseen una estructura idntica. De ah que esta parte de las cadenas pesadas se conozca como parte constante de las cadenas pesadas (CH). Esta parte constante es diferente segn la clase de inmunoglobulina que consideremos, determinando la existencia de cinco tipos de cadenas pesadas: g, a, m, d y e que definen a su vez las cinco clases de inmunoglobulinas: IgG, IgA, IgM, IgD e IgE respectivamente. (Figura 3. 6).

Caractersticas de los distintos tipos de inmunoglobulinas Debido a esta distinta estructura, las cadenas pesadas van a presentar distintas propiedades biolgicas, tales como la capacidad de unirse entre s, fijar complemento, fijar la pieza de secrecin y unirse a macrfagos, neutrfilos y clulas NK. En la tabla 3.1 se recogen las principales tipos de inmunoglobulinas y en la tabla 3.3 las principales propiedades de las mismas. Hemos de considerar que incluso entre molculas de una misma clase existen, segn a la subclase a la que pertenezcan, ciertas diferencias cmo se observa en la Tabla 3.4.

Isotipos Si inmunizamos un animal de una especie con inmunoglobulinas procedentes de una especie distinta, la mayora de los anticuerpos generados (antisuero heterlogo) irn dirigidos contra la regin constante de la inmunoglobulina que hayamos inyectado, permitiendo definir lo que llamamos el isotipo de una inmunoglobulina determinada. Los genes que codifican para las distintas variantes isotipicas estn presentes en todos los individuos sanos, es decir, todos los individuos sanos poseen los genes g1, g2, g3, g4, m, a1, a2, d, e, k y l; que codifican respectivamente para las regiones constantes G1, G2, G3, G4, M, A1, A2, D y E de las cadenas pesadas y para las regiones kappa y lambda de las cadenas ligeras. Existen cinco isotipos de cadena pesada (M, G, A, D y E) y dos de cadena ligera (k y l). As diremos que el isotipo de una determinada inmunoglobulina es G1 o que esa inmunoglobulina es de la clase G y subclase 1, que a su vez puede tener unas cadenas ligeras del isotipo kappa o lambda.

Dominios moleculares en las cadenas ligeras y pesadas. Tanto las cadenas pesadas como las ligeras poseen grupos de aminocidos unidos por puentes disulfuro intracatenarios. Estos segmentos repetidos en las cadenas L y H se conocen como dominios. Los dominios de la parte constante de las cadenas pesadas presentan una gran homologa secuencial no slo entre ellos, sino tambin con la regin constante de la cadena L. De forma similar, los nicos segmentos variables en las cadenas L y H presentan cierta homologa entre ellos y en menor grado a los de la regin constante. La cadena L tiene dos dominios, uno corresponde a la regin variable (VL) y otro a la constante (CL). La cadena H tiene un dominio en la regin variable (VH) y tres o cuatro en la constante dependiendo de la clase de inmunoglobulina que consideremos (tres en la IgG, IgA e IgD y cuatro en las IgM e IgE). Estos dominios de la regin C se denominan CH1, CH2, CH3 y CH4 cuando aparece este ltimo (Figura 3. 7). Los dominios V son los responsables de la unin con el antgeno y los dominios C, con excepcin del CH1, constituyen el fragmento Fc que, como ya se ha indicado, determina las propiedades biolgicas de las inmunoglobulinas. Concretamente es por el dominio CH2 por donde se produce la unin a las protenas del complemento y se establece el enlace con la cadena glicosilada que completa la molcula glicoproteica de las inmunoglobulinas. Es entre los dominios CH1 y CH2 donde se establece la zona bisagra.. Regiones hipervariables Las zonas variables, tanto de la cadena L como H, poseen a su vez unas regiones en donde se concentra fundamentalmente la variabilidad. Son tres pequeos segmentos que constituyen las denominadas regiones o segmentos hipervariables o regin determinante de complementariedad CDR (Complementarity Determining Region), pues determinan la forma del centro activo que permite el reconocimiento y unin al antgeno. Cada una de estas regiones hipervariables se componen de 17 a 20 aminocidos y cambios en muy pocos aminocidos de estas zonas suponen una enorme diversidad de posibilidades de unin al antgeno sin variar el resto de la molcula (Figura 3. 8.). El resto de la parte variable es relativamente constante, de modo que sustituciones en los residuos que la constituyen, no afectan la especificidad de combinacin; constituye un sostn de trabajo pues su misin es presentar adecuadamente en el espacio las regiones hipervariables al antgeno, por lo que los residuos que componen esta zona se denominan residuos FW (Framework).

Molculas adicionales a la unidad estructural bsica. En las inmunoglobulinas aparecen, adems de las cuatro cadenas polipeptdicas bsicas, un componente glucdico (que representa el 2-14 % del peso total de la molcula) y en algunas clases de inmunoglobulinas, glicoprotenas adicionales conocidas como cadena J y pieza de secrecin (Figura 3. 9.). La cadena J es una glicoprotena con un 12 % de azcares y un peso molecular de 15 kD que une, mediante puentes disulfuro, extremos Fc en la IgA e IgM. La pieza de secrecin es una glicoprotena de 58 kD de peso molecular que sintetizan las clulas epiteliales de las mucosas y glndulas exocrinas.

Estructura espacial de las inmunoglobulinas. Una vez conocida la secuencia primaria de aminocidos en las cadenas peptdicas de las inmunoglobulinas, la deduccin de su estructura espacial permiti entender la forma en que millones de diferentes sitios de unin al antgeno son construidos sobre una estructura comn. Las inmunoglobulinas pueden estar constituidas por unidades bsicas simples, como es el caso de la IgG, IgD e IgE; en forma de dmeros (dos unidades bsicas unidas), como es el caso de la IgA, o incluso por hasta cinco estructuras bsicas unidas por sus extremos Fc como es el caso de la IgM. Esto se debe a la cualidad que tienen las cadenas m y a de unirse entre s. Esta unin se realiza a travs de la cadena J y mediante puentes disulfuro (Figura 3.10). Las cadenas pesadas y ligeras estn plegadas sobre si mismo, tal como se ha visto mediante anlisis cristalogrfico (Figura 3.11.). Cada uno de los dominios de las cadenas est constituido a modo de cilindros en los que se encuentran plegados en forma de sandwich dos grupos de cadenas proteicas, una con tres cadenas polipeptdicas y la otra con cuatro, que presentan estructuras secundarias es de hoja plegada b. Estas dos capas proteicas estn alineadas paralelamente rodeando un espacio interior en el que predomina la presencia de aminocidos hidrfobos (Figura 3.12.) . La unin de esas dos capas se efecta por puentes disulfuro. En las zonas constantes, las capas de cuatro segmentos estn en el exterior de la molcula y las de tres en el interior, mientras que en las variables es al contrario; por lo dems, el modelo global de plegado guarda gran semejanza entre los dominios variables y constantes. Sin embargo, las regiones hipervariables constituyen tres bucles adicionales que no se someten al plegamiento del resto del dominio.

Subclases de Inmunoglobulinas. Se sabe que no todas las Inmunoglobulinas de una misma clase tienen idntica estructura, sino que dentro de las clases se pueden establecer subclases considerando la secuencia de aminocidos de la regin constante de las cadenas H y el diferente nmero y situacin de los puentes disulfuro intercatenarios establecidos entre las cadenas pesadas. As, la IgG humana se divide en cuatro subclases (IgG1, IgG2, IgG3 e IgG4) y la IgA e IgM en dos (IgA1 e IgA2; IgM1 e IgM2) respectivamente. En la tabla 3.4 se exponen las distintas propiedades biolgicas de las subclases de inmunoglobulinas G. Las regiones constantes de las cadenas pesadas de estas diferentes clases y subclases de inmunoglobulinas se conocen, como veremos en el apartado siguiente, con el nombre de variantes isotpicas y son las mismas en todos los individuos normales de la misma especie.

Alotipos Las inmunoglobulinas, como protenas que son, pueden actuar como antgenos. Esta propiedad se ha aprovechado para generar anticuerpos contra ellas, que posteriormente han sido utilizados como instrumentos para analizar su estructura y funcin. Mediante el uso de los anticuerpos generados contra las inmunoglobulinas se ha podido detectar la existencia de variaciones en las mismas. Si inmunizamos un animal con inmunoglobulinas de otro animal de la misma especie (Figura 3.13.) obtendremos antisueros homlogos. Estos antisueros homlogos pueden ir dirigidos contra las regiones constantes de las inmunoglobulinas, solo contra aquellas zonas que sean distintas entre ambos animales. Estas diferencias reflejan variaciones mnimas, a veces de un solo aminocido debidas a diferencias en la secuencia de ADN de los genes que codifican para las inmunoglobulinas. Los genes que codifican para las inmunoglobulinas se heredan en forma de alelos mendelianos, por lo que a cada uno de este tipo de variante se le denomina variante allica y al conjunto de variantes allicas, se le denomina alotipo. Los determinantes alotpicos o simplemente alotipos, se sitan como hemos dicho en la regin constante de las cadenas pesadas y ligeras. En el hombre se han descrito tres tipos de alotipos: Gm en las cadenas g de las IgG. Am en las cadenas a de las IgA.

Km en las cadenas ligeras k que dan lugar a tres alotipos: Km (12), Km (1) y Km (3), cuyas diferencias estructurales se recogen en la tabla 3.5.

Idiotipos Los antisueros homlogos que referamos anteriormente que se producen al inmunizar animales con inmunoglobulinas de otro animal de la misma especie, tambin pueden ir dirigidos contra las regiones hipervariables de las cadenas H y/o L de las inmunoglobulinas. Todas las inmunoglobulinas que poseen los mismos determinantes antignicos en sus regiones hipervariables se dice que pertenecen al mismo idiotipo, o que poseen los mismos determinantes idiotipicos. Los determinantes idiotpicos son exclusivos para las molculas producidas por un clon determinado de clulas productoras de anticuerpos. Todos los animales tienen una representacin de todas las regiones hipervariables posibles, generadas por recombinacin gentica (como veremos en el capitulo 5). Estas en condiciones normales, no dan lugar a una masiva produccin de anticuerpos al encontrarse cada una en cantidades muy pequeas, cuando experimentalmente inyectamos una cantidad suficiente de inmunoglobulinas de una especificidad determinada, se desarrollara una respuesta de anticuerpos contra el idiotipo de esa inmunoglobulina en particular (Figura 3.14.). Los idiotipos parecen tener importancia fisiolgica en la regulacin del sistema inmune. Segn la teora de la red de Jerne, frente a los idiotipos se formaran anticuerpos que al unirse a los mismos formaran un entramado (red) de anticuerpos unidos a otros anticuerpos que tendran como accin final la regulacin del proceso de sntesis de nuevas inmunoglobulinas. Como decamos anteriormente, cada uno de los idiotipos se encuentra representado en tan pequea cantidad que pasa desapercibido para el sistema inmune, sin embargo, cuando un determinado clon de clulas B reconoce su antgeno especifico, prolifera, se diferencia a clula plasmtica y produce una gran cantidad de inmunoglobulinas de una misma especificidad, sus determinantes idiotipicos pasaran a encontrarse en mucha mayor cantidad y ahora s darn lugar a una respuesta de anticuerpos contra ellos, anticuerpos anti-idiotipo, que podrn unirse a las inmunoglobulinas que ocasionaron su generacin. La unin de los anticuerpos anti-idiotipo al idiotipo que los origino podr dar lugar al bloqueo de las inmunoglobulinas solubles que compartan ese idiotipo o unirse a las inmunoglobulinas de membrana presentes en linfocitos B de la misma especificidad, o incluso a las regiones hipervariables del receptor para el antgeno de la clula T que reconocen ese mismo antgeno, con efectos en cada uno de los casos inhibidores o estimuladores. Los idiotipos se encontraron mediante estudios serolgicos, al observarse que cuando en un conejo se inyectaban anticuerpos antisalmonella de otro conejo del mismo alotipo, producan anticuerpos que reaccionaban con el anticuerpo inyectado, incluso aunque los dos conejos fueran genticamente idnticos. Estos anticuerpos anti-idiotipo, en la mayora de los casos, estn dirigidos contra la estructura exclusiva de la porcin fijadora de antgeno y por tanto solo reconocen a inmunoglobulinas de la misma especificidad, sin embargo en algunos casos, los anticuerpos anti-idiotipo pueden estar dirigidos contra zonas de la regin hipervariable distintas de la porcin fijadora del antgeno y en este caso podrn unirse a inmunoglobulinas de varias especificidades distintas regulando la respuesta inmune frente a varios antgenos.

DISTRIBUCIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS. Las inmunoglobulinas se encuentran distribuidas en todos los fluidos orgnicos de la economa de los vertebrados y en las membranas de los linfocitos B y clulas plasmticas. Las cantidades relativas de cada una de las clases de inmunoglobulinas en los diferentes compartimentos del organismo son muy diferentes. En el torrente sanguneo predomina la IgG mientras que en las secreciones (saliva, lgrimas, secrecin bronquial, as como en el lquido cefalorraqudeo y mucosas) la IgA es la predominante. Los niveles de inmunoglobulinas sricas fluctan ampliamente en funcin de diversos aspectos, tales como el estado nutricional, la edad, etc. Los valores normales en suero de un hombre adulto (entre 20 y 40 aos) se recogen en la tabla 3.6. Ontognicamente se producen mltiples cambios en los niveles de inmunoglobulinas desde el nacimiento hasta los 8 10 aos, en que estos se estabilizan. En la figura 3.17 se expresan las concentraciones de inmunoglobulinas desde antes del nacimiento hasta los 5 aos de edad. Los niveles de Ig G son muy altos en la vida fetal y en las primeras semanas de vida extrauterina, debido a que esta inmunoglobulina es la nica que pasa de la madre al feto a travs de la placenta. Durante la lactancia, descienden los niveles de IgG por catabolismo de esas molculas que no son repuestas por carecer el nio an de la capacidad de sntesis de las mismas. Tambin en la edad fetal se sintetizan pequeas cantidades de IgM (Figura 3.15.).

Cuando las inmunoglobulinas se encuentran insertas en la membrana de los linfocitos (inmunoglobulinas de membrana), actan como receptores de las seales de activacin antignicas por su capacidad de reconocimiento del antgeno constituyendo el receptor para el antgeno del linfocito B.

SUPERFAMILIA DE LAS INMUNOGLOBULINAS La estructura de las cadenas pesadas y ligeras de las inmunoglobulinas posee ciertas similitudes entre s (por ejemplo, la estructura en dominios equivalentes). Esto hizo pensar que ambas cadenas procedan de una molcula ancestral comn. Idntica similitud se ha observado con la b-2-microglobulina y con una gran cantidad de molculas, todas ellas agrupadas, por tanto, bajo el mismo epgrafe de superfamilia de las inmunoglobulinas. Estas molculas son: el receptor T para el antigeno, las molculas de histocompatibilidad clase I y II, LFA-3, ICAM-1 y otras muchas que irn siendo estudiadas en diferentes captulos de este libro, especialmente en el captulo 8, donde se estudian las molculas de adhesin (Figura 3.16.).

FUNCIN DE LAS INMUNOGLOBULINAS. La funcin esencial de las inmunoglobulinas es la de unirse al antgeno. De esta manera las inmunoglobulinas actan como receptoras de seales antignicas o bien pueden colaborar en la destruccin antignica. La primera funcin se presenta cuando las inmunoglobulinas se encuentran insertas en la membrana de los linfocitos B (inmunoglobulinas de membrana), y para la segunda requieren la colaboracin del complemento, macrfagos, neutrfilos y clulas NK, que tienen la propiedad de unir las inmunoglobulinas por su extremo Fc. Unin antgeno anticuerpo. Los eptopos de un antgeno pueden estar formados por aminocidos consecutivos en la secuencia de la protena, como las protenas se encuentran normalmente dobladas sobre si mismas segn lo que llamamos estructura terciaria, en la mayora de los casos los anticuerpos generados contra este tipo de eptopos solo reconocern a la protena desnaturalizada o linearizada y por ello se les llama epitopos lineales. En la mayora de los casos los eptopos suelen estar formados por aminocidos del antigeno que solo se encuentran suficientemente cerca unos de otros en la protena nativa, es decir en la protena que tiene estructura terciaria conservada, es decir una conformacin adecuada, por lo que a estos eptopos se les llama epitopos conformacionales (Figura 3. 17.). Cuando inmunizamos un animal con una protena, generaremos una serie de anticuerpos dirigidos contra los distintos eptopos de la misma, todos esos anticuerpos se encontraran circulando en el suero del animal al que, una vez extraido, llamaremos antisuero. El tipo de anticuerpos que compondrn ese antisuero depender en gran medida de la forma en que hayamos preparado la protena para la inmunizacin, si la hemos preparado desnaturalizada, solo existirn eptopos lineales, mientras que si hemos inyectado la protena en su estado nativo, coexistirn en el antisuero anticuerpos que reconozcan eptopos conformacionales con otros que reconozcan eptopos lineales. En el caso de anticuerpos monoclonales, todas los anticuerpos procedern de un clon de clulas plasmticas y por tanto estarn dirigidos contra un solo eptopo que ser de un tipo u otro. La importancia radica, en que dependiendo del tipo de epitopos que reconozcan los anticuerpos, las aplicaciones diagnosticas o de investigacin sern distintas. En general, los anticuerpos que reconocen epitopos lineales sern tiles para tcnicas de Western Blot (donde se analiza la protena generalmente desnaturalizada) mientras los que reconocen eptopos conformacionales lo sern para tcnicas de inmunofluoresencia, inmunoprecipitacin, etc.

Paratopo. Las inmunoglobulinas se unen a los epitopos de los antgenos por sus sitios activos, constituidos como se ha indicado anteriormente, por los segmentos variables de las cadenas pesadas y ligeras (Figura 3. 18) y donde intervienen principalmente las regiones hipervariables. Esta zona de unin al eptopo se conoce con el nombre de paratopo.

Fuerzas de unin Ag-Ac La unin del antgeno (Ag) con el anticuerpo (Ac) o inmunoglobulina es semejante a la que se establece entre la enzima y su substrato o entre protenas que pertenecen a cualquier va de sealizacin intracelular. Estas interacciones se deben a la formacin de mltiples enlaces no covalentes (enlaces de hidrogeno, interacciones electrostticas, de Van der Waals e hidrfobas), cada uno de los cuales por si solos son dbiles. Sin embargo, como se establecen mltiples interacciones, la fuerza total de la unin puede ser muy elevada. Para que las interacciones mencionadas lleguen a ser efectivas, los grupos entre los que se establece deben estar situados a distancias muy cortas, y para que esto sea posible y se puedan producir un gran numero de interacciones, el eptopo y el paratopo deben encajar perfectamente, dependiendo de ello la fuerza de la interaccin que conocemos con el nombre de afinidad. La afinidad esta interaccin es de vital importancia, por cuanto de ello depender tanto la utilidad diagnsitca y de investigacin de un anticuerpo como su importancia fisiopatolgica. Para cuantificar la afinidad de una interaccin, deberemos entender primero una serie de conceptos de los que nos ocuparemos a continuacin. Al tratarse de uniones no covalentes, la unin Ag/Ac ser reversible de modo que cuando el antgeno y el anticuerpo se mezclan en solucin, se estarn formando y disociaciando complejos constantemente de acuerdo con la siguiente ecuacin: KA Ag + Ac = == Ag-Ac KD donde ka representa la constante de velocidad y kd la de disociacin. Llegara un momento en que la velocidades de asociacin y disociacin se igualen, es decir, que el numero de complejos Ag/Ac que se formen sea el mismo que el que se disocie, entonces decimos que se ha llegado a una situacin de equilibrio dinmico. Una forma indirecta de medir la afinidad de la interaccin de una pareja Ag/Ac, ser medir la velocidad de asociacin y disociacin antes de que se llegue al equilibrio, lo cual puede realizarse actualmente mediante biosensores. Cuanto mayor sea la velocidad de asociacin y menor la de disociacin mayor ser la afinidad de la interaccin de esa pareja Ag/Ac. Otra forma complementaria y ms directa de cuantificar la afinidad de la interaccin Ag/Ac, es hacerlo una vez que se ha alcanzado el equilibrio y utilizando concentraciones bajas de anticuerpo. En estas condiciones la concentracin de antgeno que permite que la mitad de los anticuerpos estn unidos a ellos y la otra mitad libre, medida en molaridad, se denomina constante de disociacin (KD) y es una medida directa de la afinidad de la interaccin. Cuanto menor sea la KD mayor ser la afinidad puesto que indica que es necesaria una menor concentracin de antgeno para que la mitad de los anticuerpos estn ocupados. La inversa de la KD es la constante de asociacin (KA) cuyo valor es directamente proporcional a la afinidad de la interaccin. Para determinar experimentalmente estas constantes tendremos que conocer las concentraciones de antgeno libre y unido, para lo cual existen varios mtodos entre los que destacan anlisis mediante dialisis de equilibrio (Figura 3.19). Esta tcnica se basa en la utilizacin de una membrana semipermeable de un poro tal, que permita el paso de un antgeno suficientemente pequeo (un hapteno) pero no del anticuerpo. A concentraciones bajas de antgeno, la concentracin de anticuerpo libre ira bajando rpidamente hasta que se alcance el equilibrio, puesto que todo el antgeno que entre a travs de la membrana semipermeable quedara retenido por el anticuerpo. Realizando el experimento anterior con varias concentraciones de antgeno, podremos encontrar aquella en la que la mitad del anticuerpo se encuentra unido al antgeno que como hemos dicho corresponde a la KD. La afinidad que hayamos calculado corresponder exclusivamente a la de la interaccin de esa pareja Ag/Ac. Un determinado anticuerpo podr unirse a mas de un antgeno con afinidades distintas en cada caso.

Avidez de la unin Ab-Ac Como apuntbamos anteriormente, el fenmeno de la unin Ag/Ac es en realidad mucho ms complejo, pues cada uno de los antgenos poseen varios eptopos distintos, por lo que podrn unir mas de un anticuerpo. Cada molcula de anticuerpo, por su parte, podr unir al menos dos molculas de antigeno, una por cada Fab y en el caso de la IgM hasta diez molculas (como se comento anteriormente las inmunoglobulinas IgM se ensamblan en unidades funcionales constituidas por cinco molculas de anticuerpo). Finalmente en un antgeno, un determinado

eptopo puede estar representado varias veces siendo capaz de unir varias molculas del mismo anticuerpo. La fuerza total de la interaccin que considera todas las interacciones eptopo/paratopo que tienen lugar entre antgenos y anticuerpos multivalentes (con varios sitios de unin), se denomina avidez y es mucho mayor que la suma de las afinidades puesto que las distintas interacciones se estabilizan entre ellas. Estas interacciones multivalentes poseen una gran importancia fisiopatolgica por cuanto cuando se encuentren Ag y Ac en solucin, como es el caso del plasma o los tejidos, se formaran agregados constituidos por muchas molculas que denominamos Inmunocomplejos. A concentraciones equivalentes de Ag y Ac estos inmunocomplejos sern de gran tamao y podrn quedar atrapados en los tejidos, iniciando una respuesta inflamatoria y dando lugar a las llamadas enfermedades por deposito de inmunocomplejos.

Especificidad de la unin Ag-Ac La unin entre el Ag y la Ig tiene una gran especficidad, de tal manera que una Ig se unir fundamentalmente y con mayor avidez, a un antgeno determinado. En algunos casos la inmunoglobulina podr unirse a antgenos con eptopos muy similares, aunque en este caso la afinidad de la unin es mucho menor (Tabla 3.7). Tambin es posible que un mismo eptopo se encuentre con dos antgenos diferentes en cuyo caso el anticuerpo reaccionara con los dos antgenos, dicindose entonces que existe una reactividad cruzada. La consecuencia final de la accin de las inmunoglobulinas es la de destruir al antgeno y/o neutralizar los efectos nocivos de los mismos. Para la consecucin de estos objetivos todas las inmunoglobulinas poseen, como ya se ha indicado, una caracterstica esencial y comn, que es la de unirse especficamente al antgeno, caracteristica que depende como hemos dicho, de sus regiones hipervariables contenidas en el fragmento Fab. Sin embargo, tanto la neutralizacin como la destruccin del antgeno, lo consiguen de muy diversas formas, dependiendo del tipo y manera de encontrarse el antgeno y tambin del tipo de inmunoglobulina que interviene en cada caso utilizando para ello, las regiones constantes y concretamente sus extremos Fc. Tras la unin del antgeno y la inmunoglobulina, sta puede anular la accin del antgeno por neutralizacin, precipitacin o aglutinacin del mismo. As si la Ig es especfica para una toxina bacteriana, cuando se produce la unin Ag-Ac (toxina-antitoxina), quedan neutralizados los efectos txicos de la toxina. De ah que clsicamente, cuando no se conoca la estructura de las inmunoglobulinas, se las denominase antitoxinas, precipitinas o aglutininas, en funcin de la reaccin que se detectaba en cada caso.

Propiedades biolgicas de las inmunoglobulinas. Los fenmenos de neutralizacin, precipitacin y aglutinacin de los antgenos no son suficientes por s solos para la destruccin y total eliminacin de stos. Para ello, adems de las inmunoglobulinas se requiere de la colaboracin de otros muchos elementos, tales como el sistema del complemento, macrfagos, polimorfonucleares o clulas NK. Podemos decir que las inmunoglobulinas, al detectar los antgenos y producirse la subsiguiente unin a ellos, actan como trans-ductores de la informacin de la presencia de los mismos que seran destruidos por el complemento, macrfagos, los polimorfonucleares o clulas NK a los que dan especificidad. Opsonizacin. Cuando se produce la unin de antgeno e inmunoglobulina G se producen una serie de cambios alostricos en el extremo Fc de la IgG que hacen que se una a receptores que se encuentran en la membrana de macrfagos y polimorfonucleares. A este fenmeno se le denomina opsonizacin (Figura 3.20). Al producirse esta unin, los macrfagos se activan, inicindose el fenmeno de fagocitosis y subsiguiente destruccin de los complejos antgeno anticuerpo por los procesos lticos intracelulares, propios de la accin de los enzimas contenidos en los lisosomas de estas clulas. Estos receptores pueden ser de distinta naturaleza, conociendose en la actualidad tres de estos receptores: FcgRI, FcgRII y FcgRIII, conocidos en la actualidad como CD64, CD32 y CD16 respectivamente. Adems de en los macrfagos estos receptores se encuentran en otras clulas como plaquetas, linfocitos B y NK (Tabla 3.8). Cuando se produce la

unin a clulas NK estas se activan y lisan a las clulas portadoras del antgeno por un mecanismo conocido como citotoxicidad celular dependiente de anticuerpos (ADCC). Cuando la inmunoglobulina que se une a un antgeno es de las clases IgM o IgG, en sus extremos Fc se producen ciertos cambios alostricos gracias a los cuales stas adquieren la propiedad de fijar y activar uno de los componentes del complemento. Las fracciones activas del complemento poseen diferentes acciones muy importantes en la defensa del organismo, una de las cuales es la lisis celular. Este fenmeno se conoce con el nombre de citotoxicidad mediada por el complemento. Adems de estas funciones, las inmunoglobulinas tienen la capacidad de ser esenciales en el fenmeno de reconocimiento del antgenos por parte de linfocitos B cuando se encuentran ligadas a la membrana celular de estas clulas como inmunoglobulinas de membrana constituyendo el receptor para el antgeno del linfocito B. Esta propiedad ser estudiada extensamente en captulos posteriores. En la actualidad y utilizando tcnicas de Ingeniera Gentica, podemos construir anticuerpos monoclonales que contengan una especificidad determinada y que sean del isotipo que deseemos para que predominen unas u otras funciones biolgicas. Incluso podemos, con fines teraputicos generar anticuerpos monoclonales de una determinada especificidad en ratones y posteriormente aislar el ADN que codifica para las regiones hipervariables que confieren la especificidad y fusionarlo con el ADN que codifica para las regiones constantes humanas, estos anticuerpos monoclonales humanizados tendrn indudables ventajas desde el punto de vista teraputico al no ser considerados como extraos por el sistema inmune humano (ver captulo 4).

Propiedades y funcin de cada una de las inmunoglobulinas Aunque en los apartados anteriores se ha hecho mencin a las propiedades y funcin de las inmunoglobulinas, a continuacin estudiaremos brevemente y por separado las caractersticas funcionales ms importantes de cada una de ellas (Figura 3.21).

Inmunoglobulina G. Son las inmunoglobulinas ms abundantes y representan ms del 70 % de las Igs sricas totales; las diferentes subclases se presentan en proporciones muy diferentes. La IgG1 es la subclase ms frecuente (ms del 60 %), seguida de la IgG2 (aproximadamente un 18 %), mientras que IgG3 e IgG4 se encuentran en mucha menor proporcin. Esta Ig posee capacidad neutralizante, precipitante, de fijar complemento, de unirse a clulas NK y a macrfagos (opsonizacin) y son capaces de atravesar activamente las membranas biolgicas. La propiedad de atravesar activamente las membranas biolgicas es de sumo inters por lo que, adems de ejercer esta inmunoglobulina, su efecto en toda la economa del organismo, lo hace tambin en el feto al atravesar la placenta desde la madre, merced a la existencia de receptores para la porcin Fc en el sincitiotrofoblasto. Como el feto slo sintetiza pequeas cantidades de inmunoglobulinas, adquiere de este modo la posibilidad de defensa, no solamente mientras se encuentra en el seno materno, sino incluso durante la lactancia, perodo en el cual todava no ha desarrollado la capacidad total de sntesis de inmunoglobulinas. Sin embargo, este paso de IgG desde la madre al feto no siempre es beneficioso para el feto. De todos es sabido que cuando hay incompatibilidad del tipo Rh entre la madre y el feto, se puede desarrollar el sndrome de eritroblastosis fetal como consecuencia de la destruccin de glbulos rojos fetales, de nefastas consecuencias si no se acude a tiempo. Esto no se presentara si la IgG no pasase de la madre al feto La IgG se sintetiza tardamente tras un primer contacto con el antgeno, sin embargo, tras un segundo contacto la mayora de las Igs formadas pertenecen a esta clase (Respuesta Secundaria) ( Tabla 3.9). Inmunoglobulina M. Los anticuerpos del tipo IgM son los que mas rpidamente se forman en respuesta a un estmulo antignico (Respuesta primaria). Esta Ig se caracteriza tambin por poseer capacidad neutralizante, precipitante, aglutinante, fijar complemento, activar la respuesta inmune, sin

embargo no atraviesa activamente las membranas biolgicas. Esta ltima propiedad hace que esta inmunoglobulina ejerza su accin normalmente en los espacios intravasculares. Representa del 5 al 10 % de las Igs sricas totales y junto a la IgD es la ms frecuentemente encontrada en la superficie de los linfocitos B como inmunoglobulina de membrana. Inmunoglobulina A. Esta inmunoglobulina posee capacidad neutralizante y precipitante, mientras que su capacidad de fijar complemento y de opsonizacin son muy dbiles, limitndose su efecto a neutrfilos y no a macrfagos. La propiedad ms importante de esta inmunoglobulina viene determinada por su capacidad de unirse por el extremo Fc a la pieza secretora, gracias a la cual puede ser secretada por las mucosas y glndulas exocrinas, ejerciendo su accin ms importante en la superficie de mucosas y lquidos biolgicos (sobre todo IgA2), tales como el liquido cefaloraquideo, secrecin bronquial, lgrima, saliva, etc. Esto es importante porque as protegen precisamente los puntos ms vulnerables del organismo, esto es, las puertas de entrada al mismo, como son ojos, boca, aparato digestivo, sistema respiratorio, vagina, etc. No olvidemos que, por ejemplo, si desplegamos la mucosa del aparato respiratorio, la superficie que cubriramos es de unos 300 m2, superficie que se encuentra en contacto directo con el exterior a travs del aire que se respira. Se deduce de ello que, sin duda, deben ser importantes los mecanismos de defensa local entre los cuales la IgA tiene un papel esencial. Esta inmunoglobulina se encuentra tambin en la leche materna. Los niveles de todas las inmunoglobulinas, a excepcin de la IgG en recin nacidos son muy bajos, siendo por tanto de gran significacin el hecho de que la IgA se transfiera desde la madre al lactante a travs de la secrecin lctea. De ah que tengamos que insistir en que los lactantes se amamanten en el mayor grado posible directamente por las madres y no con leche de otros orgenes, a lo que actualmente existe excesiva tendencia. La IgA recibida de la madre ejerce un importante papel de defensa a nivel de todo el aparato digestivo. En ello parece que influyen las especiales caractersticas de pH gstrico del lactante que es menos cido que en el adulto y una especial resistencia de esta inmunoglobulina frente al mismo, por lo que no se destruye a su paso por el estmago. Inmunoglobulina D. . La concentracin de esta inmunoglobulina en suero es muy baja. Hasta fechas muy recientes no se haba demostrado que esta inmunoglobulina posea capacidad de unirse a antgenos, por lo que se dudaba de que actuase con funcin de anticuerpo. Sin embargo, aunque actualmente se ha demostrado su accin de anticuerpo, no se conoce con precisin cules son sus funciones especficas, aunque se piensa que colabora de forma importante en la activacin de linfocitos B al actuar como receptor en la superficie de los mismos. Inmunoglobulina E. En muchos individuos alrgicos esta inmunoglobulina se presenta en grandes cantidades. El estmulo para su sntesis puede proceder de una gran variedad de antgenos, a los que en este caso se conocen como alergenos. Estos alergenos pueden penetrar en el organismo a travs de la piel o de las mucosas respiratoria, ocular, del aparato digestivo, etc., as como por inyectables, como es el caso de la penicilina u otros medicamentos. La vida media de la IgE en sangre perifrica es de 24-48 horas. No tiene capacidad de atravesar la placenta, por lo tanto, las reacciones de hipersensibilidad inmediata no pueden transferirse de manera pasiva de la madre al feto. Sin embargo, puede existir una predisposicin de tipo familiar a padecer enfermedades de naturaleza alrgica. Esta predisposicin parece estar relacionada con una tendencia a producir anticuerpos de tipo IgE en la respuesta secundaria frente a antgenos, en lugar de IgG que seria la respuesta normal en individuos no alrgicos. La IgE se encuentra en forma libre en sangre (Tabla 3.10) en donde se observa que los niveles cambian a lo largo de la edad. Tambin la IgE se encuentra en otros lquidos biolgicos as como unida a basfilos y clulas cebadas, gracias a la propiedad que tiene esta inmunoglobulina de unirse por su extremo Fc a receptores de superficie presentes en dichas clulas. Estas clulas se caracterizan por encontrarse en la piel y mucosas y por contener abundantes grnulos citoplasmticos, ricos en sustancias vasoactivas que liberan una vez se activan.

BIBLIOGRAFA. 1. Galaktionov VG. (2004). Evolutionary development of the immunoglobulins super

family. Izv Akad Nauk Ser Biol,, (2): 133-45. 2. Chmielewski M, Hombach A, Heuser C, Adams GP, Abken H.(2004). T cell activation by antibody-like immunoreceptors: increase in affinity of the single-chain fragment domain above threshold does not increase T cell activation against antigen-positive target cells but decreases selectivity. J Immunol,, 173: 7647-53. 3.. Danke NA, Koelle DM, Yee C, Beheray S, Kwok WW.(2004). Autoreactive T cells in healthy individuals. J Immunol , 172: 5967-72. 4. Frasca D, Riley RL, Blomberg BB.(2004). Effect of age on the immunoglobulin class switch. Crit Rev Immunol., 24: 297-320. 5. Melchers F. (2005)The pre-B-cell receptor: selector of fitting immunoglobulin heavy chains for the B-cell repertoire. Nat Rev Immunol., 5: 578-84.

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