AST/TGO

FINALIDADE Sistema cintico para determinao de AST/TGO no soro ou plasma. Somente para uso diagnstico in vitro. PRINCPIO Aspartato + 2-Oxoglutarato Glutamato Oxalacetato + NADH + H+ AST/TGO Oxalacetato +

BIOQUMICA CLNICA

(*) A quantidade de testes na automao varivel de acordo com o equipamento. Protocolos de automao encontram-se disponveis no site Doles ou atravs do Servio de Atendimento ao Consumidor. EQUIPAMENTOS E MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro com leituras em 340nm, cubeta termostatizvel, com 10mm de passagem de luz e banda espectral de 8nm ou menos. Pipetas graduadas Pipeta semiautomtica de 100L. Ponteiras descartveis Cronmetro ARMAZENAMENTO E ESTABILIDADE DOS REAGENTES Reagente 1: armazenar temperatura de 2-80C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo, obedecidas as condies de armazenamento. Reagente 2: armazenar temperatura de 2-80C. Estvel at a data de vencimento indicada no rtulo, obedecidas as condies de armazenamento. Reagente de Trabalho: armazenar temperatura de 2-80C. Estvel por 30 dias aps o preparo. CUIDADOS E PRECAUES COM O USO DOS REAGENTES Os reagentes so somente para uso diagnstico in vitro. Seu manuseio deve ser cuidadoso, evitando-se contato com pele e mucosas. Em caso de contaminao acidental, lavar a parte afetada em gua corrente. O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se aos critrios de biossegurana estabelecidos pelo laboratrio, de acordo com as normas locais, estaduais ou federais.
Observar a simbologia constante nos rtulos do produto:

MDH

Malato + NAD+

A aspartato aminotransferase (AST/TGO) cataliza a transferncia do grupo amino do aspartato para 2-oxoglutarato com a formao de oxalacetato e glutamato. O oxalacetato reduzido a malato por ao da malato desidrogenase (MDH), e paralelamente a coenzima NADH oxidada a NAD+ . A coenzima NADH tem um coeficiente de absoro molar elevado em 340 nm, sendo quase nula a absoro de NAD em 340 nm. A oxidao de NADH diretamente proporcional atividade da AST/TGO. A atividade enzimtica ento calculada atravs da diminuio da absorvncia da soluo de NADH em 340nm. METODOLOGIA Cintico, ultravioleta. REAGENTES Reagente 1: Tris 121mmol/L, L-aspartato 362mmol/L, malato dehidrogenasa>460U/L, lactato dehidrogenasa>660U/L, pH 7,8. Reagente 2: NADH 1,3mmol/L, 2-Oxoglutarato 75mmol/L. APRESENTAO Ref. A Reagente 1 Reagente 2 Ref. B Reagente 1 Reagente 2 NMERO DE TESTES Ref. A Manual Automao (*) Ref. B Manual Automao (*)

5 x 5 x

8mL 2mL

Irritante

5 x 16mL 5 x 4mL

50 testes 200 testes

100 testes 400 testes

AMOSTRA Soro ou plasma. O uso de heparina, EDTA, oxalato e citrato no inibem a atividade da enzima. Devido aos altos nveis de AST nos eritrcitos no utilizar amostras hemolisadas. A atividade enzimtica mantm-se inalterada por 4 dias, temperatura de 2-80C e 3 semanas a 10C negativos. Todas as amostras biolgicas devem ser consideradas como potencialmente infectantes.

SAC: (62) 3269 0000 (Grande Goinia) SAC: 0800 644 6433 (Demais localidades)

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PROCEDIMENTO TCNICO Preparo do Reagente de Trabalho Opo 1:Transferir todo o contedo do reagente 2 para o frasco de reagente 1 e homogeneizar. Armazenar temperatura de 2-80C. Estvel por 30 dias aps o preparo. Opo 2: Misturar 4mL do Reagente 1 com 1mL do Reagente 2 (no pipetar com a boca) e homogeneizar. Armazenar temperatura de 2-80C. Estvel por 30 dias aps o preparo. Realizao do teste 1.Transferir 1mL do reagente de trabalho para um tubo de ensaio e deix-lo por alguns minutos temperatura ambiente. 2.Adicionar 100L da amostra ao reagente de trabalho e homogeneizar com ligeira agitao. 3.Transferir a soluo para a cubeta termostatizada a 30C/37C (por aspirao em equipamentos dotados de cubeta de fluxo). 4.Esperar 1 minuto. 5.Fazer a leitura inicial em absorvncia, disparando simultaneamente o cronmetro. Anotar o achado. 6.Repetir as leituras em intervalos de 1, 2 e 3 minutos. 7.Calcular a mdia das diferenas de absorvncias por minuto (A/minuto), utilizando-a para calcular o resultado. 8.Processando-se a reao enzimtica a 30C, o resultado encontrado pode ser expresso em temperatura de 37C, multiplicando-se o valor encontrado por 1,59. Inversamente, valores a 37C podem ser expressos a 30C dividindo-se o valor encontrado por 1,59. CLCULO AST U.I./L = A/minuto x 1746 Exemplo : Leitura inicial(aps 1 minuto de incubao) = 1.319 Leitura (1 minuto) = 1.279 A = 1.319 1.279 = 0.040 Leitura (2 minuto) = 1.239 A = 1.279 1.239 = 0.040 Leitura (3 minuto) = 1.199 A = 1.239 1.199 = 0.040 A/minuto = A 1 minuto + A 2 minuto + A 3 minuto 3 0.040 + 0.040 + 0.040 = 0.040

6,3 = absoro molar de NADH+ (um mmol de NADH+ em um mililitro de soluo, cubeta de 10mm dimetro interno, 340nm tem uma absorvncia de 6,3). 1,1 = volume total da reao 0,1 = volume de soro 1000 fator / transformao de mililitro em litro. LINEARIDADE A reao linear at uma concentrao, aproximada, de 350U.I./L o que corresponde a um A/minuto de 0,200. Sendo o A/minuto > 0,200 diluir a amostra com soluo fisiolgica e repetir o teste. Multiplicar o valor encontrado pelo fator de diluio. LIMITAES DO SISTEMA Para se obter timo desempenho do sistema, necessrio que o procedimento tcnico seja rigorosamente seguido conforme instrues de uso. Alteraes no procedimento tcnico podem levar a resultados errneos. Valores elevados de AST podem ser encontrados em amostras hemolisadas. A dosagem de AST no deve ser utilizada para o diagnstico de infarto agudo do miocrdio (IAM). Para tal utilizar dosagens enzimticas mais especficas tais como: CK, CK-MB. CONTROLE DA QUALIDADE DO SISTEMA 1.A limpeza e a secagem adequada do material a ser utilizado so de fundamental importncia para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados corretos. 2.As pipetagens devem ser precisas. 3.O uso de soro controle de referncia deve ser uma prtica rotineira do laboratrio. Recomendase utilizar um soro controle com valor na faixa de normalidade (soro controle N - Doles) e outro soro controle de valor elevado (soro controle P Doles) . VALORES DE REFERNCIA recomendado que cada laboratrio estabelea sua prpria faixa de valores de referncia na populao atendida. Como orientao, sugerimos os seguintes valores: 8 22 UI/L (30C) 12 42 UI/L (37C)

SIGNIFICADO CLNICO A AST uma enzima encontrada em altas concentraes no msculo cardaco, msculos esquelticos, hepatcitos e em menor escala no pncreas e rins. A dosagem de AST srica est limitada, atualmente, ao estudo das hepatopatias. Aumento de AST encontrado nas hepatites virais agudas ou crnicas, hepatite por drogas, cirrose alcolica, hemocromatose, ictercias hemolticas e nos tumores primitivos ou metastticos do fgado. Os nveis de AST srica, raramente ultrapassam a 10 vezes os valores normais. A relao AST/ ALT inferior a 1 nas hepatites virais agudas e torna-se em geral superior a 1 nas hepatopatias crnicas como cirrose alcolica, hepatite crnica progressiva e tambm na ictercia obstrutiva, hepatocarcinoma e nas metstases hepticas. CARACTERSTICAS DE DESEMPENHO Foram realizados 40 dosagens em amostras cujos nveis de AST situavam- se no intervalo de 12,9 e 218 UI/L. As mesmas feitas em paralelo com o kit de AST Doles (Y) e um produto comercial com metodologia similar (X) deram origem seguinte equao de regresso linear: Y= 1,01X 1,09 sendo o coeficiente de correlao de 0,99. Repetitividade: foram realizadas 20 dosagens sucessivas, com 2 amostras, obtendo-se os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2

Substncias interferentes: Certas drogas podem alterar os nveis de AST (ver Young D.S. et al., Clin. Chem. 21(5),1975 (Special issue). No utilizar amostras hemolisadas, pois os eritrcitos so ricos em AST. BIBLIOGRAFIA CONSULTADA Kaplan, L.A, Pesce, A.J., Clinical Chemistry, 3ed, 514 516, 1996. Pagana K.D., Pagana T.J., Diagnostic and Laboratory Test Reference, 78-80, 1992. Anderson S.C., Cockayne S., Clinical Chemistry Concepts and Applications, 240-262, 1993. Burtis, C.A, Ashwood, E.D., Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 2ed., 788-796, 1994. Henry, J.B., Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods, 268-280, 19 edio, 1996. Tibrcio, H.M.: Controle interno da qualidade analtica, 1aed. maro/1995. Doles: dados de arquivo. TERMOS E CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO As garantias do fabricante ao consumidor seguem estritamente as relacionadas na Lei no 8.078, de 11 de setembro de 1.990 - Cdigo de Defesa do Consumidor. Os reagentes que compem este sistema para diagnstico so garantidos na sua performance, reprodutibilidade e qualidade at a data de vencimento. Os produtos que apresentarem problemas tcnicos comprovados sero substitudos, sem nus para o consumidor. Doles Reag. Equip. para Laboratrios Ltda. CNPJ: 01.085.513/0001-05 Rodovia BR 153, Km 493, Lt.07 Chcara Retiro, Conjunto Palmares. CEP: 74775-027 Goinia - GO Brasil e-mail: doles@doles.com.br M.S.: n0 10231810069 Reviso: 18 (05/2011)

Concentrao (U.I./L) Desvio padro

Coeficiente de variao (%)

23,80 0,83 3,49

78,10 1,31 1,68

Reprodutibilidade: foram realizadas 20 dosagens durante 20 dias consecutivos, obtendose os seguintes resultados:
Amostra 1 Amostra 2

Concentrao (U.I./L) Desvio padro

Coeficiente de variao (%)

32,20 1,17 3,63

65,20 1,16 1,78

A/minuto =

3 AST U.I./L = 0.040 x 1746 = 69,8 DETERMINAO DO FATOR

Especificidade: a presente metodologia especfica para determinao de AST. Sensibilidade: utilizando-se de um espectrofotmetro de alta resoluo, cubetas 10mm de passagem de luz e a 30C,a variao de 0,001 na absorvncia corresponde a 1,75 U.I./L de AST.

AST (atividade U.I./L) = A x 1 x 1,1 x 1000 = A x 1746

min 6,3

0,1

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