GENTICA BACTERIANA Elementos celulares implicados na Gentica Bacteriana: polissomos

plasmdeo F-pilus

ribossomo mesossomo cromossomo bacteriano Cromossomo bacteriano: nico, cerca de 4,2x103kb (Escherichia coli); apresenta poliaminas; no contm ntrons. Plasmdeo: DNA extra-cromossmico de fita dupla, circular, autoreplicvel, com 1/100 da extenso do genoma F-pili: apndice celular implicado na transferncia de plasmdeos (comum em G-) Ribossomos: cerca de 15.000/clula; 80% dispostos em polissomos; composto pelas sub-unidades 30S (rRNA 16S + 21 protenas) e 50S (rRNA 23S + 5S + 35 protenas) Sntese protica 30S
transcrio

DNA mRNA
traduo

50S

tRNA aa

Variaes fenotpicas

Resultam das adaptaes das bactrias ao ambiente, so reversveis; sem comprometimento gentico. Ex: Serratia marcescens (37C sem pigmentao Bacillus spharericus (2% peptona clulas vegetativas Gram positivos (cultura nova clulas azuis Variaes genotpicas 25C vermelhas) 0,1% peptona esporos) cultura velha clulas vermelhas)

Alteraes na seqncia de nucleotdios; irreversveis; MUTAO mutao puntiforme: envolve um nico par de bases
5 3 5 3 5 3

G T
(His)

G T
(His)

G T
(Gln)

mutao por insero

A G A

A G

C C

(Ser) G

(Asn)

(Gly)

(Ser)

(Gln)

(Try)

mutao por deleo

A G

C C

A G A

(Ser)

(Gln)

(Try)

(Ser)

(Asn)

(Gly)

transposies
328pb 523.098pb

A G A

C C A

G G

328pb

523.098pb

A G A

C C A

G G

REGULAO DA EXPRESSO EM BACTRIAS

OPERON lac Em Escherichia coli a lactose, que um dissacardio composto por galactose e glucose, pode ser empregada como fonte de energia, se for ativado o operon da lactose, denominado operon lac. Esse operon composto por trs genes moduladores: um gene repressor (lacL), um gene promotor (lacP) onde se acopla a mRNA polimerase, e um gene operador (lacO) que libera ou retem a mRNA polimerase. Esse operon composto por trs outros genes funcionais: um gene que codifica a enzima -galactosidase (lacZ) que hidrolisa a molcula de lactose em glucose e galactose, um gene para a enzima lactose-permease (lacY) que favorece a entrada da lactose para o interior da clula, e um gene lacA que codifica a tiogalactosdeo-transacetilase, enzima responsvel pela eliminao dos galactosdeos no hidrolisados.

Caso 1: presena de glucose (pouco cAMP); ausncia de lactose

mRNA pol

lacL

lacP lacO
mRNA

lacZ

lacY

lacA

repressor

Caso 2: presena de glucose (pouco cAMP); presena de lactose

cAMP mRNA pol

lacL

lacP lacO

lacZ

lacY
Baixos nveis de mRNA funcional

lacA

mRNA

lactose

repressor

Caso 3: ausncia de glucose (muito cAMP); presena de lactose

cAMP mRNA pol

lacL

lacP lacO
lactose
mRNA

lacZ

lacY

lacA

repressor

-galactosidase

permease

transacetilase

OPERON sat O Streptococcus mutans a bactria de maior importncia na evoluo do processo carioso. Essa bactria capaz de desmineralizar o esmalte dental atravs da gerao de um ambiente cido localizado, pela rpida gliclise dos acares da dieta em cido lctico. Em adio a essa acidogenicidade, o S. mutans est apto a tolerar a exposio contnua ao choque cido que pode abaixar o pH local, de 7,0 a 4,0 em cerca de 20 minutos aps a ingesto de carboidratos. Essa aciduricidade apresentada pelo S. mutans um fenmeno multifatorial. Um mecanismo muito interessante envolve a disposio de bombas dependentes de ATPase (na membrana citoplasmtica) que eliminam os

prtons H+ do citoplasma, mantendo o pH intracelular prximo de 7,5. A rpida sntese e translocao dessas bombas, que tm natureza protica, durante eventos de queda brusca e continuada de pH, garante a homeostase e adaptao da clula ao ambiente cido que a envolve. A pronta translocao dessas protenas determinada por duas protenas denominadas Ffh e YlxM que esto dispostas num operon chamado de sat (secretion and acid tolerance). A Ffh (fifty-four homologue) apresenta uma massa molecular de 54kDa e homloga das partculas de reconhecimento de sinal (SRP) dependentes de GTP, dos eucariotos, e que tambm esto envolvidas em processos de translocao de protenas na membrana citoplasmtica de E. coli. A YlxM apresenta uma massa molecular de 13,2kDa e sua funo permanece incerta, porem com a forte suposio de que seja uma protena envolvida na secreo de outras macromolculas. Experimentos com mutantes afuncionais (knock-out) para o operon sat mostraram que quando essas clulas so submetidas um choque cido (pH5,0) a transcrio desse operon permanece constante, com os mesmos nveis de satmRNA transcritos a pH7,5. Por outro lado, tipos selvagens de S. mutans elevam em at oito vezes a taxa de transcrio desse operon quando em pH5,0.

Caso 1: cepa selvagem de S. mutans em pH7,5

mRNA pol

satL

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

Caso 2: cepa selvagem de S. mutans em pH5,0

Estmulo cido satL

mRNA pol

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

YlxM

Ffh

Caso 3: cepa mutante (sat :: Tn917) de S. mutans em pH7,5

mRNA pol

satL

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

Caso 4: cepa mutante (sat :: Tn917) de S. mutans em pH5,0

Estmulo cido satL

mRNA pol

satP satO

ylxm

ffh

mRNA

repressor

OBJETIVOS Mostrar ao aluno de Odontologia as principais estruturas celulares que apresentam relevncia na Gentica Bacteriana, princpios de mutao e os mecanismos de controle da expresso gnica em procariotos. PERGUNTAS 1. Quais fatores favorecem o ganho de tempo por parte das bactrias? 2. O que so mutaes? 3. Quais as vantagens que o operon oferece para as bactrias? 4. Qual a importncia do operon sat para o Streptococcus mutans? 5. Na sntese protica, qual a funo dos tRNAs?