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No. 1 NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO El trabajo en el laboratorio requiere la observacin de una serie de normas de seguridad que eviten posibles accidentes debido a desconocimiento de lo que se est haciendo o a una posible negligencia de los alumnos y alumnas que estn en un momento dado trabajando en el laboratorio. La bioseguridad se refiere a las medidas para evitar la transmisin de agentes lesivos (biolgicos, qumicos o fsicos) tanto a los usuarios como a los encargados de dar un servicio mdico. El riesgo ms importante es la infeccin, no obstante se debe de tomar en cuenta todos los riesgos de accidentes que pueda llevar a lesiones. Los centros de atencin mdica producen desechos slidos y lquidos los cuales, para fines prcticos son clasificados en comunes, peligrosos y especiales. Los desechos comunes provienen de actividades administrativas, de recreacin, de cocina y preparacin o venta de alimentos. Su destino depende de un manejo municipal que los lleva usualmente a un relleno sanitario administrativo por la municipalidad. Los desechos peligrosos son los producidos en instituciones dedicadas al cuidado de pacientes, que por naturaleza pueden afectar la salud humana, animal y medio ambiente. Esta categora de desechos se dividen en: Bio-infecciosos: sangre y derivados, secreciones humanas, equipo, materiales contaminados con las mismas, material punzo cortante (principalmente agujas hipodrmicas). Qumicos: reactivos de laboratorio, corrosivos, txicos y citotxicos. Y Radioactivos. Los desechos Especiales son mobiliario y equipo en desuso, objetos de gran tamao, frmacos y reactivos de laboratorio vencidos y otros que no deben ser depositados en los recipientes normales de desechos. NORMAS 1. Lavado de manos. 2. Cada grupo de prcticas se responsabilizar de su zona de trabajo y de su material. 3. El uso de la bata es de carcter obligatorio, ya que evita posibles proyecciones de sustancias qumicas lleguen a la piel. Por supuesto adems, evitars posibles deterioros en tus prendas de vestir. 4. Si tienes el pelo largo, es conveniente que lo lleves recogido. 5. En el laboratorio est terminantemente prohibido: fumar, tomar bebidas, comer y jugar con sus compaeros. 6. Se debe de llevar zapatos cerrados. 7. Trabajar con guantes. 8. Presentarse a la hora indicada por el docente 9. No entrar bolsas, maletas o mochilas. 10. No abrir las vitrinas con materiales o reactivos. 11. Tapar los microscopios despus de usarlos 12. Manejar los equipos y materiales cuidando su conservacin y orden.

13. No sacar del laboratorio material o equipo 14. Desechar el material inservible en el basurero. Segn su clasificacin. 15. Mantener limpia el rea de trabajo 16. Dejar limpio y en su lugar los instrumentos utilizados. 17. No manchar mesas, instrumentos o equipos del laboratorio. 18. Queda prohibida la entrada, permanencia y uso del laboratorio a personas no Autorizadas. UTILIZACIN DE PRODUCTOS QUMICOS 1. Antes de utilizar un compuesto, asegurarse bien de que es el que se necesita, fijarse bien el rtulo. 2. Como regla general, no tocar ningn producto qumico. Tu profesor o profesora te lo proporcionar. 3. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. 4. Es muy importante que cuando los productos qumicos de desecho se viertan en la pila de desage, aunque estn debidamente neutralizados, debe dejarse que circule por la misma, abundante agua. 5. No tocar con las manos y menos con la boca los productos qumicos. 6. No pipetear con la boca. Utilizar la bomba manual, una jeringuilla. 7. Los cidos requieren un cuidado especial. Cuando queramos diluirlos, nunca echar agua sobre ellos; siempre al contrario, es decir, cido sobre agua. 8. Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) no deben estar cerca de fuentes de calor. Si hay que calentar tubos con estos productos se har al bao de Mara, nunca directamente a la llama. 9. Si se vierte sobre ti cualquier cido o producto corrosivo, lvate inmediatamente con mucho agua y avisa al profesor. 10. Al preparar cualquier disolucin se colocar en un frasco limpio y rotulado convenientemente. UTILIZACIN DEL VIDRIO 1. Cuidado con los bordes y puntas cortantes de los tubos u objetos de vidrio. 2. El vidrio caliente no se diferencia a simple vista del vidrio fro. Para evitar quemaduras, dejarlo enfriar antes de tocarlo. 3. Las manos se protegern con guantes o trapos cuando se introduzca un tapn en un tubo de vidrio. 4. Si tienes que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, observa cuidadosamente estas dos normas: a.Tener sumo cuidado y tener en cuenta que la boca del tubo de ensayo no apunte a ningn compaero. Puede hervir el lquido y salir disparado, por lo que podras ocasionar un accidente. b. Calentar el tubo de ensayo lateralmente y no por el fondo, agitar suavemente.

UTILIZACIN DE LA BALANZA 1. Cuando se determinan masas de productos qumicos con balanza, se colocar papel filtro sobre los platos de la misma y si es necesario porque el producto a pesar fuera corrosivo, se utilizar un vidrio de reloj. 2. Se debe evitar cualquier perturbacin que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes, aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza, etc.

INCLUIR EN INVESTIGACIN
1. Clasificar el laboratorio por niveles de bioseguridad y clasificar microorganismos por grupo de riesgo en el trabajo que realizar el grupo de clase y deber presentarlo por escrito. 2. Normas del manejo de desechos comunes. 3. Normas para el manejo de material punzo-cortante. 4. Normas para manejo de material bioinfeccioso no anatmico. 5. Normas para el manejo de material bioinfeccioso anatmico. 6. Normas de manejo de material bioinfeccioso lquido. 7. Normas para el manejo de residuos qumicos (lquidos). 8. Normas para el manejo de muestras de laboratorio. 9. Normas en el momento de tomar muestras biolgicas. 10. Normas para el manejo de instrumentos y equipos.

Entregar trabajo la siguiente semana en perodo de laboratorio o da mircoles.

No. 2 ESPECTROFOTOMETRIA Objetivo Que el estudiante, despus de haber realizado su prctica de laboratorio, est en la capacidad de conocer como funciona un espectrofotmetro. Definicin de espectroscopia Mtodo instrumental en el cual se mide la interaccin de compuestos qumicos con radiacin electromagntica. Estos instrumentos electrnicos acortan considerablemente el tiempo para extraer informacin, aumenta la capacidad para obtener informacin estructural y requiere cantidades muy pequeas de muestra. Todas las sustancias qumicas interactan con radiacin electromagntica de alguna manera. Cuando una molcula absorbe energa, ocurre una transformacin o perturbacin que puede ser temporal o permanente. La radiacin de baja energa puede causar simplemente una rotacin molecular o la vibracin un enlace. La energa viaja en ondas y corresponden a una luz blanca que en el interior del aparato se hace pasar a travs de un prisma, el cual descompone la luz, separndolas en sus colores constituyentes (segn longitud de onda), formando un abanico de colores, en los experimentos de fsica de luz. La luz del sol es una forma de energa, conocida como energa electromagntica, llamada radiacin que viaja en ondas rtmicas. La distancia entre las crestas de ondas electromagnticas se conoce con el nombre de longitud de ondas, se representa por una letra griega llamada lambda () y su dimensin se expresa en manmetros (nm) (1 nm = 10 m). El nmero de ondas que pasan por un punto en un tiempo dado o nmero de ondas por unidad de distancia es la frecuencia, que se expresa como ciclos por segundo o hertz (Hz).

Luz visible La luz, que llega a nuestros ojos y nos permite ver, es un pequeo conjunto de radiaciones electromagnticas de longitudes de onda comprendidas entre los 400 nm y los 750 nm. Espectrofotmetro Es un aparato instrumental electrnico que es utilizado para medir las proporciones de luz de diferentes longitudes de onda que son absorbidas y transmitidas por una solucin coloreada que contiene compuestos qumicos. La espectrofotometra se refiere a los mtodos cuantitativos de anlisis qumicos que utilizan la luz para medir la concentracin de las sustancias qumicas. Se conocen como mtodos espectrofotomtricos y segn sea la radiacin utilizada como espectrofotometra de absorcin visible (colorimetra), ultravioleta o infrarroja. Los espectrofotmetros que se utilizan habitualmente proporcionan longitudes de onda que van de 340 a 1000 nm, utiliza lmpara incandescente de tungsteno como fuente de emisores, y de los 200 a 1000 nm cuando poseen la combinacin de lmparas de deuterio y tungsteno. Los componentes bsicos son: fuente de radiacin, selector de longitud de onda, portamuestra, detector y dispositivo de registro. El espectrofotmetro tiene un botn donde un prisma sea movido y conforme va girando, permite que en cada momento sea diferente color de luz, la que es dirigida sobre una pieza metlica que posee una rejilla por la que podr pasa la energa del rayo que en este momento se haya escogido. Eso permite que se pueda elegir que color se har pasar a travs de la rejilla. Simultneamente que cambia el color, aparece en la ventana de lectura de longitud de onda, la que corresponde al color que estamos usando. Despus de la rejilla esta el espacio donde se colocan los tubos de ensayo con las sustancias que se estn estudiando. No se usara luz blanca (policromtica) que emite la bombilla (monocromtica). El tubo de ensayo (cubeta ptica) recibe un rayo de luz monocromtica que posee una determinada cantidad de energa, en funcin de su color. El contenido de la cubeta ptica (solvente y soluto) podr absorber alguna parte de la energa de ese rayo luminoso a su paso a travs de la misma, y la luz que logre atravesar la solucin seguir su curso hasta chocar contra un dispositivo (foto celda o tubo fotoelctrico) sensible a la cantidad de energa que logra pasar, convirtindola en electricidad y trasladndola, por medio de un galvanmetro, a una pantalla donde el movimiento de una aguja demuestra los cambios en la cantidad de energa que logr llegar a la foto celda.

Si el rayo luminoso no encuentra ningn obstculo en su camino, la pantalla mostrar su energa en 100% y si una sustancia, por ejemplo absorbe la mitad de la energa del rayo luminoso, en la pantalla se observar su energa en el 50%. En otras palabras, el selector separa y seleccin las longitudes de onda que se presentan a la muestra desde la fuente, un haz se trasmite directamente al detector, el haz de la muestra que pasa a travs de la misma antes de alcanzar el detector. Si la muestra interacta con radiacin de una longitud de onda en particular, la absorbe y la intensidad del haz de muestra disminuye. El detector compara la intensidad de los haces de referencia y de la muestra. El porcentaje del haz de la muestra que se trasmite se registra como un pico o banda en el dispositivo de registro. Con la incorporacin de una computadora en los instrumentos, la presentacin y comparacin de los haces de muestra y de referencia se pueden hacer de manera diferente, pero el PRINCIPIO no cambia.

Espectrofotmetro sus partes:

Ventajas de la espectrofotometra: Las ventajas de la espectrofotometra sobre otros mtodos analticos de laboratorio son: es rpida, precisa, verstil, fcil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotmetros se han mejorado en precisin y versatilidad en los ltimos aos con los avances de la tecnologa, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de qumica analtica. Usos de la espectrofotometra La espectrofotometra se usa para diversas aplicaciones, como: anlisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de investigacin, estandarizacin de colores en diversos materiales, como plsticos y pinturas, deteccin de niveles de contaminacin en aire y agua, y determinacin de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos. Parmetros que utiliza la espectrofotometra (expresada en %) Los espectrofotmetros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A). Transmitancia: La transmisin se puede considerar una doble refraccin. Si pensamos en un cristal; la luz sufre una primera refraccin al pasar del aire al vidrio, sigue su camino y vuelve a refractarse al pasar de nuevo al aire. 1. Si despus de este proceso el rayo de luz no es desviado de su trayectoria se dice que la transmisin es regular como pasa en los vidrios transparentes. 2. Si se difunde en todas las direcciones tenemos la transmisin difusa que es la que pasa en los vidrios translcidos. Y si predomina una direccin sobre las dems tenemos la mixta como ocurre en los vidrios orgnicos o en los cristales de superficie labrada. 3. El porcentaje de transmitancia se refiere a la cantidad de radiacin que pasa a travs de la muestra y alcanza el detector.

4. Una solucin lmpida, no absorbente, mostrar una lectura de 100% de transmitancia en un espectrofotmetro calibrado. Absorbancia (expresada en logaritmos) La absorcin es un proceso muy ligado al color. El ojo humano slo es sensible a las radiaciones pertenecientes a un pequeo intervalo del espectro electromagntico. Son los colores que mezclados forman la luz blanca. Su distribucin espectral aproximada es: 1. Cuando la luz blanca choca con un objeto una parte de los colores que la componen son absorbidos por la superficie y el resto son reflejados. Los componentes reflejados son las que determinan el color que percibimos. 2. Si la refleja toda es blanco y si la absorbe todas es negro. Un objeto es rojo porque refleja la luz roja y absorbe las dems componentes de la luz blanca. Si iluminamos el mismo objeto con luz azul lo veremos negro porque el cuerpo absorbe este componente y no refleja ninguna. 3. Las unidades de absorbancia van de 0 a 2. 4. La absorbancia se relaciona con la transmitancia como:

A = - log T = - log I/I0

Ejemplo: Una sustancia que absorbe el 30% de la energa del rayo mostrara en la pantalla un 70% de transmitancia y un 30% de absorbancia. El concepto se aplica de la misma forma y por esa razn una sustancia que logre absorber el 50% de la engra del rayo luminoso nos dar una transmitancia del 50%. Como norma general siempre se utiliza la Absorbancia, debido a que las cifras obtenidas en logaritmos pueden graficarse en mejor forma cuando el procedimiento de fonometra es utilizado en estudio de investigacin mdica.

La mayora de los componentes biolgicos, tales como protenas, grasas, carbohidratos y los cidos nuclicos, absorben luz en alguna parte de fonometra es utilizado en estudios de investigacin mdica. BASES TEORICAS PARA EL CALCULO DE CONCENTRACIN DE SUSTANCIAS BIOLOGICAS Cuando el rayo de luz llega a la cubeta ptica lleva el 100% de su energa. A medida que penetra en la sustancia, puede ir perdiendo su potencia en funcin de tres variables: 1. El grado de concentracin de solutos en la sustancia que analiza. 2. La longitud del medio absorbente o sea la distancia que el rayo debe recorrer depende del ancho del tubo que se esta utilizando. 3. Longitud de onda (o color) del rayo que se esta usando. Si la sustancia que se esta estudiando tiene un color determinado, se comporta diferente frente a los diferentes colores de luz que se puedan hacer pasar a travs de ella. Por ello la fraccin de la luz incidente (lo) absorbida por una solucin, a una determinada longitud de onda, esta relacionada con la concentracin de la especie que absorbe y con el espesor de la capa absorbente. Ley de Beer: Se aplica cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a media que la concentracin del medio absorbente aumenta. Ley de Lambert: Se aplica cuando un rayo de luz monocromtica pasa a travs de un medio absorbente, su intensidad disminuye exponencialmente a media que la longitud del medio absorbente aumenta. La combinacin de ambas leyes puede expresarse en forma integral de la manera siguiente: Long Io / I = e c I Donde: Io = intensidad de la luz incidente. I = intensidad de la luz transmitida. e = coeficiente de absorcin molar ( unidades de litros por mol por cm) c = especie absorbente. I = espesor de la muestra absorbente.

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Ley de Lamber-Beer: Supone que la luz incidente es paralela, monocromtica y que las molculas del solvente y el soluto estn orientadas al azar de manera uniforme. La expresin log (Io/I) se denomina absorbancia y se designa como A. Es la base matemtica que permite calcular cuanta energa, puede haber sido absorbida por la sustancia que se estudia. Es importante considerar que cantidad de milmetros de espesor de una solucin absorben en una cubeta ptica de 10 cm (medida estndar) no absorbe una cantidad constante de la luz incidente. La absorbancia (A) es directamente proporcional a la concentracin de la solucin absorbente. El coeficiente de absorcin molar vara tanto con la naturaleza del compuesto absorbente, como con las propiedades del solvente, la longitud de onda del rayo utilizado, el pH de la solucin, y el estado de oxidorreduccin de los componentes, las cuales pueden presentar perdida o ganancia de protones o electrones al asociarse. El uso del espectrofotmetro se puede obtener los datos para elaborar una grfica del espectro de absorcin de cualquier sustancia, en la cual podemos comparar objetivamente las diferencias de cada sustancia en funcin de su coeficiente de absorcin molar y de la longitud de onda del rayo empleado. Una grfica construida con el espectrofotmetro ( A vrs. c ) muestra la absorbancia a diferentes longitudes de onda, nos proporciona la informacin necesaria para saber cual es la longitud de onda a la que se absorbe mas la luz un compuesto en solucin. Por ello cuando la necesidad de hacer un anlisis de un compuesto especial, se tendr que ajustar el fotmetro a la longitud de onda de mxima absorbancia, ya que en la calibracin se obtendr las determinaciones ms exactas ante cualquier variacin de la concentracin de la muestra que obtengamos conteniendo este compuesto. Los ordenamientos especficos de los tomos o de las molculas, poseen espectros de absorcin caractersticos y por eso pueden utilizarse para identificar molculas y medir sus concentraciones. Debe tenerse en cuenta que la ley de Beer, no toma en cuenta la luz dispersada o reflejada y no se cumple por altas concentraciones del material absorbente. La base de calorimetra y de la espectrofotometra radica en que muchas sustancias tienen color propio o pueden dar lugar a productos finales coloreados en ciertas reacciones qumicas. Existe relacin entre la intensidad de este color y la concentracin del producto final o sea la concentracin de uno o varios de los reactivos, de esta manera, la intensidad del color puede utilizarse para medir la concentracin.

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Clculo de la concentracin de Compuestos: El espectrofotmetro, permite conocer la concentracin de un compuesto en una solucin, en casi todas las tcnicas de laboratorio deber a proceder con la preparacin de tres tubos: 1. Tubo blanco. 2. Tubo estndar. 3. Tubo muestra. Tubo blanco Tubo que contiene diluyente (estabilizadores del pH, reactivos colorantes y enzimas que producen la reaccin) sin la sustancia en estudios. Los usos: 1. Sirve para la calibracin del espectrofotmetro, desechando la absorbancia de todos los componentes diferentes de la sustancia en estudio. 2. Esto permite que la sustancia sin reaccionar en la cubeta ptica permita ajustar manualmente la absorbancia en cero y transmitancia en 100%. 3. De esta forma la misma sustancia en otros tubos ya no interfiera en las prximas lecturas. Tubo estndar: Contiene la sustancia del blanco + la sustancia del estudio a concentracin conocida. Se define como una absorbancia patrn dependiente de la concentracin. 1. Se prepara en el laboratorio pesando determinada cantidad de la sustancia que vamos a analizar y diluyndola en un determinado volumen de solvente o bien, es proporcionado a travs de una casa comercial. 2. Esto permite comparar su absorbancia (en funcin a su concentracin) con la de la muestra. Tubo muestra: Contiene lo mismo que el tubo blanco, slo que en este caso se agrega la sustancia en estudio (muestra), cuya concentracin no se conoce. Se prepara a partir de fluidos biolgicos (sangre, lquido cefalorraqudeo, orina u otros) en los que se desea medir la concentracin de algn soluto.

Para calcular la concentracin de la muestra se utiliza la siguiente formula: Concentracin = Concentracin Absorbancia

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De la Muestra

del Estndar

de la Estndar

Absorbancia de la Muestra

A= 2-Log de %T
Para esta prctica se utilizar glucosa con estndar de valor conocido. Se deber enfocar en el uso del equipo y su funcionamiento. Escriba el procedimiento para sus compaeros de laboratorio. BIBLIOGRAFA 1. 2. CAMPBELL, N. A. Biology. The Benjamin Cumming Publishing Company Menlo Park, California, 1987. 3. HAWK and OSER. Practical Physiological Chemistry. 4th Ed. McGraw-Hill, Co. S. A. 1965. 4. LYNCH, M. J. Mtodos de Laboratorio. 2 edicin Omega, S. A. Barcelona 19987 5. STROTHER, G. K. Fisica aplicada de las ciencias de Salud. MacGraw-Hill Latinoamrica, S. A. Bogota, Colombia. 1980.

No. 3 DETERMINACIN DE GLUCOSA EN SANGRE Mecanismos para mantener la glicemia:

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Despus de un ayuno de varias horas y en condiciones de reposo la concentracin de glucosa en sangre es de 65 a 100 mg / dl. Despus de la ingestin de alimentos, sobrevienen alzas hasta de 120 a 140 mg/ dl y, unas horas despus, regresan a los valores en ayunas. De la misma manera, las modificaciones producidas por las emociones violentas, el ejercicio intenso y la an inanicin, son equilibrados para volver a lo normal. Si la glucosa de la sangre se mantiene dentro de los lmites estrechos, es por que la serie de los fenmenos que concurren a proporcionar glucosa a la sangre, se equilibran con los mecanismos que la sustraen de ella. En ayunas, la nica fuente de glucosa sangunea es el hgado. La velocidad de formacin y degradacin del glucgeno heptico es uno de los factores ms importantes en la regulacin de la glicemia. Como la salida de glucosa del hgado depende, en gran parte, de la concentracin de glucosa en la sangre, cuando sta se modifica, funciona el mecanismo glucognico, el glucogenoltico, debido a las hormonas relacionadas: La insulina: que favorece la utilizacin y captacin de glucosa y es secretada al elevarse la glucemia, el glucagn y la epinefrina, impulsores de la glucogenlisis, y son secretados por pncreas y glndulas suprarrenales cuando hay hipoglucemia. La hormona insulina tiene gran importancia en la participacin de la regulacin de glucosa sangunea, se produce en las clulas beta del pncreas en respuesta a la hiperglucemia, la administracin de insulina produce hipoglucemia inmediata. La adrenalina y la noradrenalina impiden la liberacin de la insulina. Por otro lado, el glucagn se opone a la accin de la insulina, es producido en las clulas alfa del pncreas y es secretado cuando hay hipoglucemia llegando a travs de la vena porta al hgado para producir glucogenlisis y gluconeognesis. Otras hormonas influyen en la hiperglucemia como la hormona del crecimiento que inhibe la utilizacin de la glucosa y favorece la de cidos grasos, los glucocorticoides que aumentan la gluconeognesis, la adrenalina secretada cuando hay estmulos estresantes causa glucogenlisis. Al ascenso de la glucosa sangunea por arriba de 120 mg/dl se denomina hiperglucemia y puede ser signo de muchas enfermedades, la hiperglucemia siempre se da despus de una comida pero se regula por medio de la insulina que lleva la glucosa a los tejidos para su almacenamiento ya que es el principal combustible celular. La hiperglucemia se da por la disminucin de la entrada de glucosa a las clulas, por la disminucin de la utilizacin de glucosa por varios tejidos y por el aumento en la produccin por el hgado.

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La entrada de glucosa a las clulas la da la insulina, si la glucosa no entra a las clulas el cuerpo necesita tomar energa de otro lado, por lo general de las grasas, la degradacin de las grasas causa cuerpos cetnicos y consecuentemente cetosis, el hgado en este caso aumentara la produccin de glucosa al ver que las clulas no estn recibiendo la suficiente glucosa, agravando el problema. La hipoglucemia est presente en el ayuno pero es fcilmente regulada por los procesos gluconeognicos o glucogenolticos, si existe una buena reserva de glucgeno, se considera una hipoglucemia cuando los niveles de glucosa sangunea estn por debajo de los 60 mg/dl y esta es mucho mas peligrosa que la hiperglucemia ya que fcilmente puede causar un shock hipoglucmico con convulsiones y coma por falta de glucosa para el funcionamiento cerebral. La principal causa de hipoglucemia es la presencia de insulina en exceso y se puede regular por el glucagn o la adrenalina como se mencionaba anteriromente, ya que son antagnicos. Las causas principales de hipoglucemia en una persona sana son muy obvias, como por ejemplo ayunos prolongados, desnutricin, por vmitos y diarrea, ejercicio en exceso, etc. En el caso de una persona que se le suministre insulina tendr que ser muy bien controlada ya que al darse en gran cantidad, y s no hay buenos niveles de glucosa en sangre la insulina en exceso que entr se encarga de la poca glucosa que existe poniendo en riesgo al paciente, causndole una hipoglucemia severa. La enfermedad que se caracteriza por hiperglucemia es la Diabetes Mellitus, en este caso la insulina de la persona es de baja calidad o hay total ausencia de ella causando que la glucosa no pueda entrar en las clulas y se adquiere la energa de las grasas o lpidos. Existen dos tipos de Diabetes: 1. La Diabetes tipo I o tambin llamada insulino dependiente, las clulas beta del pncreas se han destruido debido al desarrollo de anticuerpos en contra de los receptores de insulina. 2. La Diabetes tipo II o no insulino dependiente, que sta es la que presenta el 90% de los afectados y por lo general son obesos y aunque producen insulina es de muy mala calidad y los receptores trabajan mal. Los principales sntomas, son la hiperglucemia, la polifagia, polidipsia y poliuria, causndole mucha fatiga y desnutricin. La gran complicacin es la glucosilacin nerviosa y vascular que inclusive un infarto o cortadas pequeas pasan desapercibidos, sin olvidar el pie diabtico que muchas veces se tienen que amputar.

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Otro gran problema es la cetosis por los cuerpos cetnicos que pueden llegar a causar la muerte en especial a los de diabetes tipo I. Datos clnicos que se obtienen con la curva de Tolerancia a la Glucosa: Las caractersticas de la curva de la glucosa sangunea despus de la administracin de una cantidad conocida de glucosa indica la tolerancia a esta. La diabetes mellitus tipo I se caracteriza por la disminucin de la tolerancia a la glucosa debido a la disminucin de secrecin de insulina en respuesta a la carga de glucosa. Esto se manifiesta por la hiperglucemia, glucosuria y metabolismo de las grasas. La tolerancia a la glucosa disminuye en la diabetes tipo I, en trastornos relacionados con lesin heptica, infecciones, diabetes tipo II que se acompaa de obesidad y aumentos de concentraciones plasmticas de cidos grasos, disminuye la tolerancia bajo la influencia de algunos frmacos y algunas veces en la arteroesclersis. La insulina incrementa la tolerancia a la glucosa, su administracin disminuye el contenido sanguneo de glucosa e incrementa la utilizacin y almacenamiento heptico de esta. Un exceso de insulina puede producir hipoglucemia intensa y esta resulta en convulsiones y muerte, a menos que se administre glucosa de inmediato. En las insuficiencias hipofisiaria y corticosuprarrenal se incrementa la tolerancia a la glucosa debido a la disminucin del antagonismo de la accin de la insulina a cargo de la hormonas secretadas por estas glndulas. Mtodos de medicin: Antes se utilizaban mtodos no especficos que aprovechaban las propiedades reductoras de la glucosa, los que eran susceptibles a error causado por la presencia de sustancias reductoras distintas a la glucosa, presentes tambin en sangre. Actualmente se utilizan mtodo enzimtico altamente especfico. Glucosa Oxidasa Peroxidasa: la glucosa es oxidada a cido glucnico y perxido de hidrgeno, por la accin de la enzima glucosa oxidasa. El perxido de hidrgeno, en presencia de peroxidasa, oxida el cromogeno (4aminofenazona/fenol), convirtindolo en un compuesto coloreado rosado fuerte rojo, cuya intensidad es proporcional a la concentracin de glucosa en la muestra. D- glucosa + O2 + H2O----GOD------- D- gluconato + H2O2 H2O2 + fenol + 4-aminofenazona-------POD----- compuesto coloreado + H2O Glucosa hexoquinasa: la glucosa es fosforilada por el triofosfato de adenosina (ATP) en presencia de la enzima hexoquinasa. La grlucosa 6-fosfato (G-6-P) formada es oxidada a 6-fosfogluconato (6-PG) en presencia de dinucletido de

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nicotinamida (NAD). Esta reaccin es catalizada por la enzima glucosa-6fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH). Durante esta oxidacin, una cantidad equimolar de NAD es reducida a NADH. El consecuente incremento en la absorvancia a 340 nm es directamente proporcional a la concentracin de glucosa.

MATERIALES Algodn. Hipoclorito de sodio al 4.72% (dilucin 1:10). Jabn antisptico. Descartador de puntas de pipeta. Gradillas. Liga. Guantes. Bata. Jeringas para puncin venosa de 5cc. Micropipetas de volumen variable. Papel absorbente. Puntas de pipeta para micropipetas de volumen variable. Recipiente descartador para punzocortantes. Tubos vacutainer sin anticoagulante. Viales de almacenamiento Alcohol Espectrofotmetro Centrfuga Agua Destilada Reactivo de Glucosa PROCEDIMIENTO Se debe de extraer 5 ml de muestra de sangre venosa (de un estudiante en ayuno y que tenga inters personal de verificar sus niveles de glicemia), la cual se deber colocar en un tubo si anticoagulante el cual se deber de centrifugar por 10 minutos para separa las clulas sanguneas y obtener el suero el cual servir para prepara el tubo de muestra. La hemolisis visible (suero rojo por destruccin de eritrocitos) hace inadecuada la muestra. La bilirrubinas no interfieren mientras sean menor a 20 mg/dl, cido rico < 20mg/dl y hemlisis ligera.

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El resultado debe ser antes de dos horas desde el momento de la extraccin de la muestra, por la destruccin enzimtica de la glucosa (gluclisis) por los eritrocitos y leucocitos, esto es proporcional al tiempo y a la temperatura, siendo mximo a los 37C. Ya separado el suero este se puede procesar en un plazo no mayor de 4 horas a temperatura ambiente (25C) o 24 horas en refrigeracin. 1. Rotular un tubo E (estndar). Se prepara agregando 10 L de la solucin estndar de glucosa con valor conocido o tambin llamado calibrador y luego 1 ml de Reactivo de glucosa. Agitar e incuba 10 minutos o 25 a temperatura ambiente. 2. Rotular un tubo M (muestra). Se agrega 10 L de muestra y 1ml de reactivo de glucosa. Agitar e incubar. 3. Rotular el tercer tubo B (blanco). Se prepara al colocar 10 L de agua y 1 ml de reactivo de glucosa. Agitar e incubar. 4. Calibrar el espectrofotmetro con 505 nm de longitud de onda y medir la absorbancia, en un plazo no mayor de 30 minutos (margen de estabilidad de las reacciones efectuadas). Para LCR la muestra debe ser 20 L, ya que la concentracin es baja. Luego el resultado obtenido se le divide entre 2. Estndar= 100 mg/dl Formula: [M] = Estndar X Absorbancia de la Mx/Absorbancia del estndar. Valores de referencia 60 a 110 mg/dl Es importante la separacin rpida del suero o plasma de los componentes celulares para evitar gluclisis, lo cual disminuir el valor de la glucosa. El mtodo de glucosa oxidasa-peroxidasa interfiere los anticoagulantes citrato y oxalato, mientras que en le mtodo glucosa hexoquinasa no interfiere ningn anticoagulante. BIBLIOGRAFA 1. Manual de prcticas de laboratorio de Bioqumica General y Bioqumica II. Guatemala: Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia (USAC). 2003. pp 0103. 2. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007.

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No. 4 CUERPOS CETNICOS EN LA ORINA Nombres alternativos: Cuerpos cetnicos en orina; Cetonas urinarias; cido acetoactico y cido betahidroxibutrico. Los cuerpos cetnicos (acetoacetato y D()-3-hidroxibutirato) son compuestos que se producen en las mitocondrias del hgado a partir de acetil-CoA. El ciclo de Lynen sintetiza acetoacetato, el cual se transforma enzimticamente en 3hidroxibutirato. El equilibrio de esta reaccin est controlado por la proporcin mitocondrial de [NAD+]/[NADH]. La proporcin de [hidroxibutirato]/[acetoacetato] en la sangre vara entre 1:1 y 10:1. La acetona, un compuesto relacionado, se forma como producto de la descarboxilacin espontnea del acetoacetato. El acetoacetato e 3-hidroxibutirato son productos normales del metabolismo. Se forman principalmente a partir de los productos de degradacin de cidos grasos o como producto del metabolismo de algunos aminocidos (leucina, fenilalanina, tirorina). Los cuerpos cetnicos son liberados por el hgado a la sangre donde son captados por rganos y tejidos perifricos que los metabolizan por medio del ciclo de Krebs. Mediante la produccin de cuerpos cetnicos el hgado puede abastecer a los tejidos perifricos con un combustible hidrosoluble originado de la degradacin de las grasas. Especialmente el cerebro, que no puede utilizar los cidos grasos transportados en la sangre, puede cubrir una gran parte de sus requerimientos energticos con los cuerpos cetnicos despus de un cierto perodo de adaptacin metablica. Normalmente el hgado produce nicamente las cantidades de cuerpos cetnicos que los rganos perifricos pueden metabolizar. Por lo tanto, los niveles sanguneos de stos son bajos y no exceden de 0.2 mmol/l en la sangre de mamferos bien alimentados. Cantidades mas altas en la sangre (cetonemia) y en la orina (cetonuria) caracterizan un estado llamado cetosis. Los cuerpos cetnicos son cidos moderadamente fuertes y su prdida continua por la orina produce prdida del catin amortiguador, lo cual causa deplecin progresiva de la reserva alcalina y como causa cetoacidosis. Esto puede ser mortal en la diabetes sacarina no controlada. La forma ms simple de cetosis ocurre en la inanicin e implica la deplecin de los carbohidratos disponibles, acoplada a la movilizacin de cidos grasos libres. Ninguna otra situacin en la cual la cetosis ocurre parece diferir cualitativamente de este patrn general del metabolismo; cuantitativamente, una excesiva produccin de cuerpos cetnicos puede producir los estados patolgicos asociados a la diabetes mellitus. Otras formas no patolgicas asociados a la diabetes mellitus. Otras formas no patolgicas de cetosis ocurren en condiciones de alimentacin rica en grasas y bajas en carbohidratos y despus de ejercicio fuerte en el estado de posabsorcin. Las cetonas estn usualmente presentes en la orina, pero por debajo del nivel de deteccin de los mtodos de anlisis de rutina. Sin embargo, se observan cuerpos cetnicos positivos en sujetos normales en ayunas y hasta en un 30% de las muestras de orina de la maana en las mujeres embarazadas.

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Los anlisis de cetonas en orina que utilizan reactivos a base de nitroprusiato pueden dar falsos positivos en presencia de frmacos que contienen el grupo -SH, como es el caso del captopril, un frmaco antihipertensivo. Resultados falsos negativos tambin son posibles cuando las tiras reactivas han estado expuestas al aire durante un largo tiempo, o si las muestras de orina son muy cidas, como ocurre despus de la administracin de grandes dosis de cido ascrbico (vitamina C) Aunque en todas las consultas deben existir kits para la determinacin de cuerpos cetnicos en la orina, el profesional deber tener en cuenta que ninguna de las tcnicas hoy disponibles permiten diagnosticar o monitorizar una cetoacidosis diabtica. Existen mtodos de determinacin del cido 3-hidroxibutrico, el cuerpo cetnico predominante, en la sangre y estos mtodos son preferidos a los anlisis de cuerpos cetnicos en la orina. Forma en que se realiza el examen: Nios o adultos: Para tomar la muestra de orina, la persona recoge una cantidad limpia ("de la mitad de la miccin"). Para esto, los hombres y los nios deben tener limpia la cabeza del pene, mientras las mujeres y las nias deben lavar el rea que hay entre los labios de la vagina con agua y jabn y enjuagar muy bien. Cuando se inicie el proceso de eliminacin de la orina, se debe dejar que una pequea cantidad de sta caiga a la taza del bao (as se limpia la uretra de sustancias contaminantes). Posteriormente, en un recipiente limpio se recomienda recoger aproximadamente una o dos onzas (30 a 60 ml) de orina y retirarlo. Finalmente, se debe entregar este recipiente. Bebs: Es necesario lavar completamente el rea alrededor de la uretra y abrir una bolsa colectora de orina (bolsa plstica con una cinta adhesiva en un extremo) y luego colocarle la bolsa al beb. A los nios se les puede introducir todo el pene dentro de la bolsa y el adhesivo se pega a la piel. A las nias se les coloca la bolsa sobre los labios mayores. Se le puede colocar el paal al beb de la manera usual asegurndose de cubrir y asegurar la bolsa. Se recomienda revisar al beb frecuentemente y retirar la bolsa despus de que ste haya orinado en ella. Los bebs activos pueden desplazar la bolsa as es que puede necesitarse ms de un intento para obtener una muestra. Finalmente, se debe verter la orina en un recipiente limpio y entregarla. Las cetonas urinarias se miden usualmente como una "prueba rpida" con una tirilla (tira de orina) que contiene una zona sensible al color impregnada de qumicos especficos que reaccionan con los cuerpos cetnicos. Un cambio de color es un indicador cualitativo de la presencia de cetonas. Los tres cuerpos cetnicos se presentan casi siempre juntos en la orina y tienen esencialmente la misma significancia. Las pruebas usuales para la cetonuria investigan la acetona, el cido acetilactico o ambos a la vez. La reaccin de nitroprusiato

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revelar cualquiera de estos compuestos, aunque con sensibilidad muy diferente. No existe un ensayo directo, sencillo y satisfactorio para el cido beta-Hidroxibutrico de la orina. La reaccin del cloruro frrico para el cido acetilactico no la de la acetona, pero la reaccin no es sensible ni especfica por lo cual es poco aplicable a la clnica, salvo quizs como prueba confirmatoria que debe realizarse directamente con la orina. La reaccin de nitroprusiato (en particular la variante de Rothera) es mucho ms sensible (por lo menos cinco veces ms) al cido acetilactico que a la acetona. De aqu cuando se aplique directamente a la orina, el resultado depender en gran parte de las cantidades relativas de ambas sustancias. La orina fresca puede dar una prueba positiva, la misma orina dejada en reposo al poco tiempo despus de la descomposicin del cido acetilactico y su transformacin en acetona, puede dar una prueba negativa. La prueba no es completamente especfica para los cuerpos cetnicos, pero cuando es positivo indica fuertemente su presencia. Es probablemente la prueba ms usada en los trabajos clnicos para la cetonuria y se han propuesto infinidad de variantes en su tcnica; con todo, no puede considerarse enteramente satisfactoria. BIBLIOGRAFA. 1. GRRIS. J, et al. Nuevo Manual Merck de Informacin Mdica en General. Espaa. Merck Sharp & DOHME. 2007. pp 990. 2. Manual de prcticas de laboratorio de Bioqumica General y Bioqumica II. Guatemala: Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia (USAC). 2003. pp 1619. 3. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007.

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No. 5 DETERMINACIN DE COLESTEROL SRICO El colesterol est presente en los tejidos y en el plasma como colesterol libre o almacenado, combinado con un cido graso de cadena larga como ster de colesterilo. En el plasma, ambas formas son transportadas en lipoprotenas. El colesterol es un lpido anfiptico y, como tal, es un componente estructural esencial de membranas y de la capa externa de las lipoprotenas plasmticas. Se sintetiza a partir del acetil-CoA en muchos tejidos, y es el precursor de todos los otros esteroides en el cuerpo, como corticorsteroides, hormonas sexuales, cidos biliares y vitamina D. Como un producto caracterstico del metabolismo de los animales, el colesterol se encuentra en los alimentos de origen animal, el colesterol se encuentra en los alimentos de origen animal, como la yema de huevo, carne, hgado y cerebro. El origen del colesterol en el organismo tiene dos fuentes, la externa y el que produce el propio organismo. Debido a que el organismo puede producir su propio colesterol, existe la posibilidad que personas que no consuman colesterol, tengan niveles sanguneos elevados por tener algn desorden gentico-metablico que conlleva a dicha elevacin. Estos desordenes son ms comn de lo que se cree y son la principal causa de ateroma y de enfermedades vasculares, entre ellas el infarto agudo al miocardio. Por esto la importancia de determinar en forma precoz los niveles elevados de colesterol en los pacientes. Otros desrdenes en los cuales puede haber alteracin del colesterol srico son; diabetes, hipotiroidismo, y ciertos tipos de desrdenes renales. En el hipertiroidismo y desnutricin puede haber valores bajos. El hgado es el lugar de sntesis principal, pero la piel, glndulas adrenales, gnadas, intestino e incluso la aorta pueden efectuar la biosntesis del colesterol. Se estima que el hgado puede producir 1.5 gr por da. El colesterol por ser una grasa es poco soluble en agua, por lo que si se transportara libre por la sangre sera en forma de gotas de colesterol y se vera en nuestra sangre como gotas de grasa. Pero el caso, es que la naturaleza ha ideado una manera de hacer soluble en agua al colesterol y transportarlo por la sangre y esto es por medio de lipoprotenas. Las lipoprotenas son complejos lipoproteicos mediante los cuales el colesterol, steres de colesterol, los triglicridos y fosfolpidos son transportados a travs de la sangre. Existen distintos tipos de lipoprotenas. Cada uno de estos tipos de tiene un propsito diferente y se descompone y se excreta de forma ligeramente distinta. Las principales lipoprotenas son los quilomicrones, las lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL), las lipoprotenas de baja densidad (LDL) y las lipoprotenas de alta densidad (HDL). El colesterol transportado por las LDL se denomina colesterol LDL, y el transportdo por las HDL se denomina colesterol HDL.

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El cuerpo regula los niveles de lipoprotenas (y, por lo tanto, lo niveles de lpidos) incrementando o disminuyendo la velocidad de produccin de las lipoprotenas. El organismo tambin puede regular la velocidad con que las lipoprotenas entran o son retiradas del torrente circulatorio. Los niveles de colesterol y triglicridos varan considerablemente de un da a otro. De una medicin a otra, los niveles de colesterol pueden variar alrededor de un 10%, y los niveles de triglicridos pueden variar hasta un 25%. Mtodo de medicin: El colesterol y sus steres se liberan de las lipoprotenas con el uso de detergentes. Los steres son hidrolizados por la enzima colesterasa. Luego acta la enzima colesterol oxidasa con produccin de H2O2. El H2O2 puede medirse utilizndolo para la conversin de yoduro en yodo, el cual se valora espectrofotomtricamente, o bien, puede reaccionar en presencia de peroxidasa con 4-aminoantipirina y fenol, formando un compuesto coloreado que es tambin medido.

MUESTRA: Suero o plasma heparinizado. Si bien se recomienda procesar las muestras dentro de las 48/72 hs, las mismas pueden conservarse una semana en heladera y dos meses en congelador. Valores de Referencia: Hasta 200 mg/dl El HDL, sintetizad en el hgado, remueven el colesterol no utilizado por las clulas (dentro de ciertos lmites de concentracin), transportndolo hacia el hgado para su degradacin. El HDL es conocido como un componente lpido protector contra las enfermedades coronarias. Valores de Referencia: Mujeres > de 35 mg/dl Hombrs > de 45 mg/dl Las LDL, producto del metabolismo de las VLDL en plasma, son las encargadas del transporte del colesterol exgeno (y en mucho menor proporcin, endgeno) hacia el interior de las clulas.

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Diversos estudios epidemiolgicos han confirmado que el exceso de colesterol LDL con respecto a un valor crtico (190.0 mg/dl) debe ser considerado un factor de riesgo para el desarrollo de enfermedad cardaca coronaria, considerando que el efecto protector de las HDL slo parece tener relevancia dentro cierto rango de concentraciones de colesterol circulante. Tales hallazgos permiten deducir que los valores aislados de colesterol HDL o de LDL no pueden tomarse como ndices predictivos de riesgo, sino que es necesario conformar un perfil lipdico con los valores de colesterol total, colesterol HDL y colesterol LDL.

Entre ms bajo sea el valor de colesterol LDL, es mejor para el paciente, esto significa que est transportando menos colesterol hacia los tejidos perifricos. Valores de Referencia < de 150 mg/dl. BIBLIOGRAFA. 1. GRRIS. J, et al. Nuevo Manual Merck de Informacin Mdica en General. Espaa. Merck Sharp & DOHME. 2007. pp 1100. 2. Manual de Bioqumica, LABOCLIP. Guatemala: Antigua Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia (USAC). 2005. pp 07 - 09. 3. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007. .

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No. 6 DETERMINACIN DE TRIGLICERIDOS Triacileglicridos o triacilgliceroles: son acilgliceroles un tipo de lpidos formados por una molcula de glicerol, que tiene esterificados, son el principal tipo de grasa transportado por el organismo. Recibe el nombre de su estructura qumica. Luego de comer, el organismo digiere las grasas de los alimentos y libera triglicridos a la sangre. Estos son transportados a todo el organismo para dar energa o para ser almacenados como grasa. El hgado puede cambiar cualquier fuente de exceso de caloras en triglicridos. La biosntesis de triglicridos La sntesis de triglicridos tiene lugar en el retculo endoplsmico de casi todas las clulas del organismo, pero es en el hgado, en particular en sus clulas parenquimatosas, los hepatocitos y en el tejido adiposo (adipocitos) donde este proceso es ms activo y de mayor relevancia metablica. En el hgado, la sntesis de triglicridos est normalmente conectada a la secrecin de lipoprotenas de muy baja densidad (VLDL, su acrnimo en ingls) y no se considera un sitio de almacenamiento fisiolgico de lpidos. Por tanto, toda acumulacin de triglicridos en este rgano es patolgica, y se denomina indistintamente esteatosis heptica o hgado graso. Por el contrario, el tejido adiposo tiene por principal funcin la acumulacin de energa en forma de triglicridos. Sin embargo, la acumulacin patolgica de triglicridos en el tejido adiposo (obesidad) se asocia, aparentemente de forma causal, con una serie de anormalidades endocrinometablicas, cuyas causas son actualmente motivo de intensa investigacin, dado el impacto de ellas en la mortalidad global de la poblacin contempornea. Una mnima cantidad de triglicridos son normalmente almacenados en el msculo esqueltico y cardaco, aunque solamente para consumo local. Causas de niveles altos de triglicridos: Exceso de peso: los triglicridos aumentan generalmente a medida que aumenta el peso. Los triglicridos se elevan a medida que se aumenta de peso o se ingieren demasiadas caloras, especialmente provenientes de azcar y del alcohol. El alcohol aumenta la produccin de triglicridos en el hgado. Los niveles de triglicridos aumentan regularmente con la edad. Algunas drogas como los anticonceptivos, esteroides, diurticos causan aumento en los niveles de los triglicridos. Algunas formas de altos niveles de triglicridos ocurren entre miembros de una misma familia.

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Observaciones La medicin es ms precisa si no se ha comido en las 14 horas previas al examen. Si el colesterol tiene un valor normal, un nivel elevado de triglicridos no parece ser un factor de riesgo de enfermedad cardiaca, pero s puede ser riesgoso al asociarse con diabetes y pancreatitis. MATERIALES Jeringas Liga Alcohol Algodn Centrifuga Tubos de ensayo plsticos Micropipeta manual de 10 ml Micropipeta manual de 1000 ml Viales Puntas plsticas Espectrofotmetro Rejilla plstica Agua destilada Reactivo de triglicridos PROCEDIMIENTO Se extrae el suero y se coloca en un vial de almacenamiento. Con la Micropipeta de 1000 l extraemos el reactivo de trigliceridos y lo colocamos en un vial. Con la Micropipeta de 10 l extraemos el suero y se agrega al reactivo de triglicridos. Agitar. Se incuba por 10 minutos a 37C. Se lee en el espectrofotmetro Interpretacin de resultado. Valores de referencia: < 200 mg/dL Los niveles de triglicridos varan con la edad, y tambin dependen de qu tan reciente ingiri alimentos antes del examen. BIBLIOGRAFA 1. WADE l. G Jr. Qumica Orgnica. Prentice-Hall Hispanoamericana, S. A. 1993 pp. 1312, 1151 y 1152.

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2. TAYLOS G. A. Qumica Orgnica para estudiantes de medicina y biologa. 1era Ed. Editorial Alambra S. A. 1974 Barcelona, Espaa. Pp 289, 223 a 226. 3. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007. 4. Curso de Bioqumica. 2do ao de la Carrera de Mdico y Cirujano. Centro Universitario de Oriente (CUNORI). Universidad de San Carlos de Guatemala. 2010.

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No. 7 DETERMINACIN DE BILIRRUBINA EN SANGRE La bilirrubina es un producto de degradacin de las protenas que contienen el grupo hemo, como es la hemoglobina. El proceso de formacin y metabolismo se explica a continuacin: Los hemates viejos, defectuosos o daados, son retirados por unas clulas fagocticas, llamadas macrfagos, que estn situados, por ejemplo, en el bazo. Dentro de estos macrfagos la hemoglobina se metaboliza y el hemo se transforma en la bilirrubina, que es liberada a la sangre. Esta bilirrubina es muy poco soluble en agua y para su transporte en sangre va unida a la albmina (bilirrubina no conjugada o indirecta, insoluble en agua). Una vez que llega al hgado esta bilirrubina es captada por el hgado. All el hgado la une al cido glucurnico (bilirrubina conjugada o directa, insoluble al agua), de forma que la bilirrubina se hace ms soluble. Este glucurnido de bilirrubina se secreta activamente en la bilis y se dirige hacia el intestino. Las bacterias intestinales metabolizan esta bilirrubina y la transforman en una serie de pigmentos denominados urobilingenos. Estos pigmentos son los que le dan a las heces el tpico color amarillo marrn. Una parte de estos urobilingenos, dado que son ms solubles en agua, se reabsorben hacia la sangre y son eliminados por los riones a la orina. Cuando hay una elevacin de bilirrubina directa en sangre, entonces se puede filtrar por el rin y aparece en orina, con lo que sta puede coger un color anaranjado. La presencia en orina de bilirrubina y urobilingeno se puede detectar de forma fcil cualitativamente empleando tiras reactivas. Un aumento de la concentracin en sangre de bilirrubina total conduce a una situacin denominada ictericia. La ictericia se puede definir como una decoloracin amarillo verdosa de la piel y membranas mucosas por una acumulacin de bilirrubina. La ictericia se puede clasificar en 3 grupos fundamentalmente: 1. Ictericia preheptica. Por ejemplo la producida por una hemlisis. El incremento de la rotura de hemates produce una hiperbilirrubinemia no conjugada que ser superior a la capacidad de depuracin del hgado. Habr un aumento de bilirrubina indirecta en sangre y la bilirrubina directa ser prcticamente normal. En orina habr generalmente una elevacin de urobilingeno y no se detectar la bilirrubina, ya que la bilirrubina no conjugada, al ir fuertemente unida a la albmina, no filtra por el rin a la orina.

2. Ictericia postheptica. Por una obstruccin extraheptica como es una coledocolitiasis La obstruccin hace que la bilirrubina conjugada vuelva a la sangre y no pase al intestino. La hiperbilirrubinemia ser fundamentalmente directa, con lo que habr un aumento tambin de bilirrubina en orina. Al eliminarse poca bilirrubina hacia el intestino se forma muy poco urobilingeno, con lo que las heces sern plidas. Una vez retirada la obstruccin, las heces han de recuperar el color y la orina ha de ser positiva para urobilingeno.

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3. Ictericia heptica. Es un estado intermedio entre las dos anteriores. Puede ser debido a toxinas o infecciones como, por ejemplo, la hepatitis vrica o bloque de la excrecin de la bilis. Pero el defecto se encuentra en le hgado en s y puede ser heredado o adquirido. Habr un aumento de bilirrubina directa e indirecta en sangre. En orina habr una elevacin de bilirrubina y el urobilingeno estar poco aumentado o incluso puede estar disminuido Mtodo de medicin: La bilirrubina total y la Bilirrubina directa se miden por una reaccin de diazotitizacin. Para ambas mediciones, la bilirrubina forma con el cido sulfanlico diazoado un colorante azoico; en el caso de la bilirrubina total, se aade un catalizador (cafena, benzoato de sodio, acetato de sodio), el cual permite la medicin tanto de la bilirrubina directa como el de la indirecta, mientras que en la medicin de la bilirrubina directa no se aade el catalizador, por lo que la bilirrubina indirecta no es medida. Es necesario trabajar con un blanco para cada muestra, para eliminar la coloracin dada por sueros ictricos. El valor de la bilirrubina indirecta se obtiene de la diferencia entre la bilirrubina total y la bilirrubina directa, as: Bilirrubina indirecta = Bilirrubita Total Bilirrubina Indirecta

Valores de Referencia Bilirrubina Total hasta 1 mg/dl Bilirrubina directa hasta 0.25 mg/dl Bilirrubina indirecta hasta 0.85 mg/dl Observaciones La bilirrubina del suero no es muy estable. Las determinaciones deben hacerse tan rpido como sea posible. Si la muestra no puede ser procesada inmediatamente se debe guardar en la oscuridad y en refrigeracin. Si se congela, ser estable por varios meses. BIBLIOGRAFA. 1. GRRIS. J, et al. Nuevo Manual Merck de Informacin Mdica en General. Espaa. Merck Sharp & DOHME. 2007. pp 950. 2. Manual de Bioqumica, LABOCLIP. Guatemala: Antigua Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia (USAC). 2005. pp 09 - 11. 3. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007.

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No. 8 DETERMINACIN DE CREATININA La creatinina es un compuesto orgnico generado a partir de la degradacin de la creatina, y es un producto de desecho del metabolismo normal de los msculos que usualmente es producida por el cuerpo en una tasa muy constante, y normalmente filtrada por los riones y excretada en la orina. La medicin de la creatinina es la manera ms simple de monitorizar la correcta funcin de los riones, pues si estos no funcionan adecuadamente la creatinina se acumula en la sangre. La importancia clnica radica en que puede indicar una posible disfuncin o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten sntomas. La creatinina es una prueba diagnstica esencial, ya que se ha observado que su concentracin en sangre indica con bastante fiabilidad el estado de la funcin renal. Por esto la creatinina puede avisar de una posible disfuncin o insuficiencia renal, incluso antes de que se presenten sntomas. Es un derivado de los aminocidos muy parecido a ellos en cuanto a su estructura molecular. Se sintetiza de forma natural en el hgado, el pncreas y en los riones a partir de aminocidos como la arginina, la glicina y la metionina a razn de un gramo de creatina por da. Constituye la fuente inmediata y directa para regenerar ATP y proveer de energa a las clulas musculares. Gran parte de la creatina se almacena en todos los msculos del cuerpo (alrededor del 90%), se sabe que un adulto que tenga 70 kg de peso corporal posee cerca de 120 g de creatina. La finalidad del almacenamiento es la creacin junto con el fsforo de la fosfocreatina presente en las clulas musculares de los vertebrados as como algunos invertebrados, se encuentra presente con la enzima creatina quinasa. Los msculos no son capaces de sintetizar la creatina y es por esta razn por la que la toman del torrente sanguneo. . Materiales y Mtodos sangre Aguja Algodn Alcohol Liga Tubos de ensayo sin coagulante Centrfuga Pipetas Automticas de 5 a 50, 10 a 100 y 100 - 1000. Tips Espectrofotmetro Agua destilada Viales Reactivos cido Pcrico Reactivo de Creatinina o Buffer.

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Procedimiento Calibracin del Espectrofotmetro: Cuando el espectrofotmetro est listo, indicamos la casilla de lo que se quiere analizar, en este caso Creatinina, luego colocamos los parmetros para que pueda realizar el anlisis, estos son: Temperatura: 37 C Longitud de Onda: 500 (reactivo pide 492 pero el espectrofotmetro nos da nmeros complejos y buscamos el que mas se aproxime) Volumen de Muestra: 25 Volumen de reactivo 1: 400 Volumen de reactivo 2: 100 Leer inmediatamente Preparacin: Tomamos 400 del reactivo 1 y lo colocamos en un vial, luego aadimos 100 de cido Pcrico o reactivo 2y lo aadimos al mismo vial, luego 50 de suero lo mesclamos rpidamente con la misma pipeta automtica y lo pasamos por el espectrofotmetro. Esperamos 80 segundos para que nos de el resultado. Los valores de referencia: Los resultados de las pruebas de laboratorio pueden variar dependiendo de la edad, gnero, historia clnica, el mtodo usado para esta prueba y muchos otros factores. Hombres: 0.6 a 1.2 mg/dL Mujeres: 0.5 a 1.1 mg/dL Observaciones Los adultos con mucha masa muscular pueden tener ms creatinina en la sangre que la poblacin normal. Las personas ancianas, por otro lado, pueden tener menos creatinina en la sangre de lo normal. Algunos frmacos pueden producir una elevacin anormal de las concentraciones de creatinina en sangre. Una concentracin muy elevada de creatinina en la sangre puede indicar la necesidad de someterse a dilisis para eliminar las sustancias de desecho de la sangre. BIBLIOGRAFIA. 1. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. Moderno, Mxico DF. 2007. 2. Inserto de reactivo. El Manual

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No. 9 DETERMINACIN DE PROTEINAS EN SUERO De los solutos presentes en el plasma, las protenas estn en mayor concentracin. Las protenas tienen diversas funciones en el ser humano: Nutricin: constituyen una porcin del fondo comn de los aminocios del cuerpo. Transporte: enlazando iones metlicos, hormonas y lpidos. Mantenimiento de presin osmtica coloidal: sirve para mantener un volumen normal de sangre y un contenido normal de agua en el lquido intersticial y los tejidos. Mantenimiento del balance cido-base. Coagulacin de la sangre y cicatrizacin de las heridas. Herencia.

De las protenas, la albmina y globulinas alfa y beta y quizs globulinas gama no inmunes son sintetizadas en el hgado. Las globulinas gama inmunes (anticuerpos) son sintetizadas en los linfocitos B. Importancia clnica: En los estados patolgicos el total de protenas puede variar, por ejemplo: Aumento de protenas (hiperproteinemia): Deshidratacin: por la disminucin del volumen de agua, existe una concentracin de soluto alta. Mieloma mltiple: Presencia de niveles elevados de protenas especficas de mieloma. Disminucin de protenas (hipoproteinemia): Sndrome nefrtico: se pierde albmina en orina. Quemaduras graves, hemorragias extensas, heridas abiertas. Perodo largo de baja ingesta o deficiente absorcin de protenas. El mdico puede solicitar un valor de protenas totales o bien requerir los valores de las fracciones de albmina o globulina y la proporcin de ellos A/G. Mtodos de Medicin: El mtodo ms comnmente utilizado es el de BIURET, segn el cual, al tratar una solucin de protena con iones cobre, en un medio moderadamente alcalino, se forma un complejo quelato coloreado entre el in cobre, en un medio moderadamente alcalino se forma un complejo quelato coloreado ente el in cobre y los grupos carbonilo y amino de los enlaces peptdicos, dando un color prpura.

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Valores de Referencia: 6.3-8.3 g/dl. Observaciones: Las pruebas para la determinacin de protena no deben realizarse con sueros hemolisados, lipmicos ni ictricos. BIBLIOGRAFA. 1. Manual de Bioqumica, LABOCLIP. Guatemala: Antigua Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia (USAC). 2005. pp 03. 2. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007.

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No. 10 DETERMINACIN DE CIDO RICO Los humanos convierten los principales nucletidos de purina, adenosina y guanosina, en cido rico. La adenosina se desamina inicialmente a inosina por la adenosina desaminasa. La fosforlisis de los enlaces N-Glicosdicos de la inosina y guanosina, se cataliza por la nuclesido de purina fosforilasa: se libera ribosa 1-fosfato y una base de purina. Posteriormente la Hipoxantina y la guanina forman Xantina en reacciones catalizadas por la xantina oxidasa y la guanasa respectivamente. La xantina formada se oxida a cido rico en una segunda reaccin catalizada por la xantina oxidasa. De esta forma, la xantina oxidasa proporciona un sitio potencial para la intervencin farmacolgica en los pacientes con hiperuricemia y gota. La cantidad de cido rico depende de la ingestin diettica de purinas y de la velocidad del catabolismo de las purinas endgenas, o sea las formadas en el interior del organismo. En situaciones normales se forman 5 gramos de purinas al da y solo 0.5 gramos se convierten en cido rico; por lo tanto, la mayor parte de las purinas formadas son reutilizadas. Vas de Eliminacin. La excrecin neta del cido rico total en personas sanas es, en promedio, de 400 a 600 mg/24h. , es eliminado por va renal o por las heces. Muchos compuestos farmacolgicos y naturales influyen en la absorcin y la secrecin renal de urato de sodio. La mayor parte del cido rico se disuelve en la sangre y viaja a los riones, donde sale a travs de la orina. Si el cuerpo produce demasiado cido rico o no lo elimina lo suficiente, la persona se puede enfermar. Los altos niveles de cido rico en el cuerpo se denominan hiperuricemia. Causas por las que aumenta o disminuye. La Hiperuricemia se debe principalmente a una alta ingesta de alimentos ricos en protena como las carnes y tambin el alcohol, algunas enfermedades tambin pueden causar hiperuricemia como es el caso de la leucemia ya que hay un aumento del catabolismo purnico. Tambin son numerosos los casos de hiperuricemia por trastornos genticos del catabolismo debido a falta de enzimas especficas. La disminucin del cido rico o Hipouricemia y la alta excrecin de Hipoxantina y xantina se relacionan con la deficiencia de la xantina oxidasa, debido a un defecto gentico o a un dao heptico severo. En la deficiencia grave de xantina oxidasa los pacientes pueden mostrar xantinuria y litiasis xantnica. Un buen tratamiento para bajar las concentraciones altas de cido rico seria la utilizacin del Alopurinol ya que es un inhibidor de la xantina oxidasa. Gota: La gota es una enfermedad metablica persistente, que produce un aumento del cido rico circulante, este se deposita en las articulaciones produciendo: Depsitos de cido rico que se convierten en cristales afilados en las articulaciones o coyunturas, y frecuentemente se acumulan en el dedo gordo del pie. Depsitos de cido rico (llamados tofo gotoso) que aparece como un chichn debajo de la piel. Piedras (clculos) renales debido a los cristales de cido rico en los riones. En las personas con gota, el cido rico se acumula y forma cristales puntudos que se

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pueden acumular alrededor de las articulaciones. Esto causa dolor e hinchazn en las articulaciones afectadas. Este problema se suele asociar tambin a la diabetes, obesidad y enfermedades renales. La gota tiene cuatro etapas: la asintomtica (sin sntomas), la aguda, la intercrtica y la crnica. Reactivos Reactivo de cido rico: 1000l Muestra de suero sanguneo: 20l Materiales

Liga Jeringa de 3cc Algodn Alcohol Espectrofotmetro Centrfuga 1 pipeta automtica de 100-1000 l 1 pipeta automtica de 10 100 l Tips Viales Tubos de ensayo

Procedimiento Colocar 1000 l de reactivo de cido rico en un vial. Colocar 20 l de suero en el vial que contiene reactivo. Mezclar ligeramente Se deja reposar por 5 minutos. Al transcurrir los 5 minutos se coloca en el espectrofotmetro para realizar la prueba. Se leen los resultados y se interpreta la prueba. Valores de referencia Hombres: 3.4-7.0 mg/dl Mujeres: 2.4- 5.7 mg/dl

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No. 11 DETERMINACIN DE UREA EN SANGRE Expiacin del ciclo de la Urea: El hgado, es el principal rgano donde se forma la urea; tres aminocidos, la ornitina, citruilina y arginina, promueven la formacin de urea en rebanadas del hgado; la enzima arginasa hidroliza la arginina y la convierte en ornitina y urea. El amonio obtenido por la desaminacin de los aminocidos a travs de la deshidrogenacin glutmica, en el sustrato de la carbamilfosfato sintetasa, enzima que junto con el CO2 y el ATP, cataliza la formacin de carbamilfosfato, que es el alimentador por excelencia del ciclo de la urea. La reaccin se lleva a cabo en varias etapas y necesita de la N-Acetil glutamato como modulador alostrico positivo. NH4+CO2+ATP+H2O H2N - C- O PO3H2 + 2ADP + Pi O CARBAMILFOSFATO El gasto de dos molculas de ATP desplaza el equilibrio de la reaccin a la derecha y fuerza la sntesis del carbamilfosfato. La ornitina se convierte en citruilina directamente por el paso del carbamilo del carbamilfosfato a la ornitina en la reaccin de transcarbamilacin. La citrulina es, por lo tanto, una carbamilornitina, cuya sntesis se realiza en la mitocondria de la cual sale al citosol para continuar el ciclo. La formacin de arginina es un proceso mas complejo que requiere la presencia de aspartato, ATP y Mg+2. El primer paso es la formacin de argino-succinato por la consideracin (en presencia de ATP y Mg+2) de citrulina y aspartato. El arginosuccinato se fragmenta en arginina (lista para ser atacada por arginasa) y fumarato, que entra al ciclo de krebs y permite la regeneracin de aspartato. Finalmente, la arginasa hidroliza a la arginina en urea y ornitina, la cual queda disponible para penetrar a la mitocondria e iniciar el ciclo aceptando otro carbamilfosfato. Dada la toxicidad y la necesidad de manejar las concentraciones cambiantes de NH4+, el ciclo de la urea muestra una gran capacidad de ajuste pudiendo de acuerdo con la dieta, formarse y eliminarse, cada 24 horas en condiciones normales de 5 a 50 gramos de urea. Los mecanismos de ajuste pueden ser lentos, requiriendo de 3 a 4 das para instalarse, por depender de la cantidad de enzimas presentes, o rpidos, bajo control hormonal, instalados en minutos, en este caso en relacin con mayor acopio de sustratos, sobre todo de acetilglutamato, el modulador alostrico positivo de la carbamilfosfato sintetasa que forma carbamilfosfato, alimentador del ciclo. Se conocen algunos cuadros clnicos por bloqueos parciales del ciclo de la urea. Se caracterizan por hiperamonemia, retraso mental, vmitos y aversin a comidas ricas en protenas. Se mejoran si disminuyen las protenas en la dieta y se suministran

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cetocidos correspondientes a los aminocidos esenciales, pues estos al eliminarse disminuyen la hiperamonemia. Toxicidad del amonaco y sntomas. El amonaco generado por las bacterias entricas se absorbe en la sangre de la vena porta, por tanto sta contiene niveles mas altos de amonaco que la sangre sistmica. Ya que un hgado sano metaboliza rpidamente el amonaco de la sangre portal, la sangre perifrica se encuentra virtualmente libre de amonaco; esto resulta esencial, puesto que an cantidades mnimas de amonaco son txicas para el sistema nervioso central. En caso de que la sangre portal no pase por el hgado, el amonaco en sangre sistmica puede elevarse a niveles txicos. Esto puede ser consecuencia de una disminucin pronunciada en la funcin heptica, o al desarrollo de comunicaciones colaterales entre venas porta y sistmicas, como sucede en la cirrosis. Los sntomas de intoxicacin por amonaco incluyen temblor, lenguaje poco entendible, visin borrosa y en casos graves, coma y muerte. Estos sntomas se asemejan a los del coma heptico, que se presenta cuando los niveles de amonaco en sangre y en cerebro se elevan en forma significativa. El tratamiento se orienta a la reduccin de los niveles sanguneos de amonaco. La toxicidad del amonaco parece residir en provocar, en el hgado y el cerebro, una disminucin del -cetoglutarato. Al disminuir el -cetoglutarato, baja el ritmo de actividad del ciclo de Krebs, as como el de las oxidaciones de sustratos en las clulas, lo que acarrea una grave inhibicin de la respiracin en el cerebro y un aumento en la produccin de cuerpos cetnicos por el hgado. Causas de disminucin y aumento de urea en sangre: El cuerpo produce en promedio 25 a 30 gramos de urea al da algo ms en personas que comen dieta rica en protenas, menos en personas con dieta pobre en protenas. Los dos factores principales que establecen el ritmo de excrecin de urea son: 1. La concentracin de urea en el plasma, y 2. La intensidad de filtracin glomerular. Estos factores aumentan la concentracin de urea principalmente porque la carga de urea que penetra en los tbulos proximales es igual al producto de la concentracin plasmtica de urea por la intensidad de filtracin glomerular. Una eleccin muy importante, que debe aprenderse de estas relaciones, es que en pacientes con insuficiencia renal es importante considerar la intensidad de filtrado glomerular en valores altos. Cuando la intensidad de filtracin glomerular disminuye

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demasiado, la concentracin proporcionalmente mayor.

de urea en sangre aumenta

hasta un nivel

El nitrgeno est presente en otro qumico llamado urea. La urea es un producto de desecho, producido cuando el cuerpo ha digerido las protenas. La urea es llevada a travs de la sangre a los riones, los cuales filtran la urea de la sangre y la depositan en la orina. Las enfermedades renales muchas veces dificultan el filtrado correcto de la urea. Esto causa niveles altos de urea en sangre. El anlisis tambin se realiza a pacientes que estn sometidos a dilisis renal para ver si se est realizando bien esta funcin. Ciertos medicamentos alteran las funciones de ciertos rganos como el rin y este estudio ayuda a monitorear si los medicamentos y la dosis son correctos. Este anlisis se debe pedir cuando se sospecha de problemas renales, o cuando se quiere saber sobre la dieta del paciente, muchas veces alta en protenas, aunque tambin es indicador de malnutricin en concentraciones bajas de urea. Concentraciones altas de urea pueden ayudar a diagnosticar, tambin fallo cardaco, hemorragias gastrointestinales, hipovolemia (quemaduras y deshidratacin), inanicin, obstrucciones renales como clculos o tumores. Concentraciones bajas de urea pueden ayudar a diagnosticar dietas pobres en protenas, fallo heptico, embarazo y exceso de hidratacin entre otras. Mtodo de medicin: En la actualidad se acostumbra reportar el valor del nitrgeno de urea en vez de la urea total. En presencia de tiosecarbazida: La urea forma un color rojo en solucin de cido diacetilmonoxima, lo que se mide espectrofotomtricamente. Ureasa: Utiliza la enzima ureasa que pasa la urea a amonaco y dixido de carbono. El amonaco en presencia de nitroprusiato forma un compuesto coloreado verde, cuya absorbancia es medida; o bien los iones amonio formados reaccionan con fenol e hipoclorito de sodio (reaccin de Berthelot), formando un compuesto de color azul, medido tambin espectrofotomtricamente. Valores de Referencia: Urea total: 10-50 mg/dl y nitrogeno de urea de 5-23 mg/dl.

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BIBLIOGRAFA. 1. LAGUNA, J, et al. Bioqumica. 4ta edicin. JGH RDITORES. Pp. 117 a 121. 2. MURRIA. RK, et al. Bioqumica de Harper. 15 ed. Pastrana VM, trad. Mxico: El manual moderno, 2007. pp. 365 373. 3. GUYTON: A,C. Fisiologa Mdica. 5ta edicin. EDITORIAL INTERNACIONAL. Pp.460. 4. Murray, Robert et al. Bioqumica de Harper, 17. Edicin. El Manual Moderno, Mxico DF. 2007.

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No. 12 DETERMINACIN DEL GRUPO SANGUNEO ABO y Rh. Fue descubierto a principios del siglo XX por Kart Lanndsteiner, que demostr que cuando se combinan dos muestras de sangre, en algunos casos se mezclaban sin signos apreciables de reaccin, pero en otro se produca aglutinacin de los glbulos rojos. En e suero esta aglutinacin se atribuye a la presencia de antgeno en los glbulos rojos y anticuerpos en el suero. El grupo sanguneo ABO es el grupo ms importante para medicina transfusional. Este sistema involucra tres antgeno: A, B, H. el antigeno H es convertido en el grupo A o B por accin de las transferasa A (N-acetil-galactosamina) o la transferasa B (Dgalactosa), el fenotipo O es el resultado de una glicosiltransferasa inactiva, la cual es capaz de glicosilar al antgeno (l-fucosa). El sistema ABO est formado principalmente por 4 grupos Sanguneos, cuya informacin gentica se encuentra codificada en el cromosoma 9. El desarrollo del antgeno A y B se inician en etapas tempranas de la vida fetal, aproximadamente 6 semanas de la vida y van aumentando lentamente hasta alcanzar el nacimiento. Landsteiner clasific los eritrocitos individuales en cuatro tipos: A, B, AB y O. En la actualidad se reconoce que los grupos A y B representan antgenos de carbohidratos sobre los eritrocitos. En la membrana de los glbulos rojos pueden existir unos carbohidratos cuya especificidad reside en los en los azucares terminales de un oligosacrido. Estas corresponderan a lo que denominan antgenos. En el plasma sanguneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podr tener anticuerpos anti-A, pues esto no sera viable (la sangre coagulara). As:

los individuos A tendrn anticuerpos anti-B los individuos B tendrn anticuerpos anti-A los individuos AB no tendrn anticuerpos de este tipo los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.

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Grupo sanguneo

AB

Glbulos rojos

En la membrana En el plasma

Antgeno A Anti-B

Antgeno B Anti-A

Antgenos A y B No anticuerpos

No antgenos Anti-A y Anti-B

De la misma manera, el factor Rh es otra protena que existe en los glbulos rojos de algunas personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario dominante. Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre. Como hemos visto, un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, as que no podr recibir sangre de un individuo B, pues estos anticuerpos provocaran la coagulacin de la sangre del donante en los vasos sanguneos de la persona receptora. En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir sangre. Como vemos, el grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de s mismo, as que se llama "receptor universal". El grupo O ,sin embargo, puede donar a cualquier grupo, as que se conoce como "donante universal".

RECEPTOR D grupo A grupo B grupo AB grupo O O grupo A SI NO SI NO N NO SI SI NO A grupo B NO SI NO N grupo AB NO T SI SI SI SI E grupo O

Materiales:

Solucin anti-A Solucin anti-B Solucin anti-D(anti Rh) Tarjetas de identificacin

Material punzante estril Algodn Agua oxigenada Una gota de sangre

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Tcnica1: 1. Colocar en la tarjeta o portaobjetos una gota se suero anti-A, una de anti-B, una mezcla de anti-A y anti-B, y una gota de anti-D, cada una en su casilla correspondiente, como se indica en la

FIGURA 1.

FIGURA 1 2. Pinchar la yema del dedo, previa desinfeccin con alcohol o agua oxigenada. Depositar una gotita de sangre en cada casilla y mezclar con los sueros.

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FIGURA 2.

FIGURA 2 3. Observar los resultados. El grupo sanguneo del individuo corresponder con el de la casilla en la que la sangre haya coagulado. Si el individuo es del grupo AB, la sangre coagular en las tres primeras casillas. Adems, si la sangre coagula en la casilla "anti-D", el individuo ser Rh. positivo, de lo contrario ser Rh negativo. FIGURA 3.

FIGURA 3

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En las tarjetas de la FIGURA 4, se puede observar el aspecto que presentan dos casos opuestos. En la tarjeta superior se observa que no existe coagulacin en ninguna casilla. Las tres primeras corresponden a los sueros del grupo sanguneo, por lo que interpretamos que esta persona pertenece al grupo O, la cuarta es la del factor Rh, y al no existir coagulacin interpretamos que es Rh negativo. En la tarjeta inferior, vemos coagulacin en todas las casillas, por lo que de una forma similar interpretamos que el alumno es del grupo sanguneo AB y Rh positivo FIGURA 4 Tcnica 2: 1. 2. 3. 4. 5. Colocar una gota del Anti- A en un tubo limpio y rotulado. Colocar una gota de Anti-B en un segundo tubo limpio y rotulado. Colocar una gota de Anti-D en un tubo limpio y rotulao. Agregar a cada tubo una gota de suspensin de clulas de 2 a 5%. Mezclar el contenido de los tubos gentilmente y centrifugar 1 minuto a 1,000 rpm. 6. Gentilmente resuspender el botn de clulas y examine si hay agutinacin. 7. Interpretar resultados.

No. 13 VENOPUNCIN

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Para obtener por venipuntura, la muestra se extrae directamente de una vena del paciente, con aguja hipodrmica estril y una jeringuilla o un tubo al vaco. La vena seleccionada debe ser grande y accesible y cerca de la superficie de manera que pueda verse o palparse. Las venas son la fuente de sangre para un nmero mayor de anlisis sanguneos y como va de introduccin de agentes teraputicos. El paciente debe estar acostado y si est sentado deber apoyar el brazo. Lugar de la toma de muestra: Se realiza en las venas del antebrazo, siendo las ms fciles del pliegue del codo, mediana baslica, mediana ceflica y la cubital o radial, ocasionalmente se puede utilizar las venas del dorso de la mano, yugular externa y femoral. Equipo a Utilizar: a. Jeringas hipodrmicas de calibre 20 y 21 b. Tubos vacutainer en extracciones en gran nmero c. Alcohol etlico al 70% d. Ligadura e. Algodn f. Tubos o frascos para recoleccin de sangre. Preparacin: a. Lavarse las manos con agua y jabn b. Etiquetar el frasco c. Colocarla aguja estril en la jeringa pero mantenerla tapada hasta utilizarla d. Inspeccionar y limpiar el rea de la puncin e. Inspeccionar la aguja y la punta de esta, que no este hmeda para evitar hemlisis. Procedimiento: a. Colocar la ligadura alrededor del brazo del paciente 2 pulgadas arriba del codo y apretarla. PRECAUCIN: no dejar que el torniquete permanezca en su lugar por ms de 2 minutos b. Instruir al paciente para abrir y cerrar la mano varias veces (si no se hace palpable la vena a puncionar). c. Localizar la vena deseada por medio de palpacin o inspeccin. d. Limpiar con algodn y alcohol el rea seleccionada. e. Pedir al paciente que cierre el puo y estire el brazo. f. Fijar la vena elegida con los dedos ndice y pulgar. NO TOCAR EL AREA DESINFECTADA.. g. Sostener la jeringa con la mano derecha aproximadamente a un ngulo de 30 grados con respecto al brazo del paciente, introduzca a travs de la piel inmediata adyacente a la vena que se va a puncionar. h. Si la presin de la vena es baja habr necesidad de sacar un poco el embolo para asegurar que la aguja a entrado en la vena.

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i. Introducir la aguja un poco ms adentro de la vena para evitar para evitar que se salga de la vena mientras se extrae la sangre. PRECAUCIN: NO TRASPASAR LA VENA j. Aflojar EL torniquete. Colocar un algodn con alcohol en el lugar de la puncin, pedirle al paciente que abra la mano, sacar la aguja y oprimir el algodn con la otra mano por 3 a 5 minutos o pedir al paciente que lo haga. PRECAUCIN: quite el torniquete antes de sacar la aguja de lo contrario se puede formar un hematoma en el sitio de la puncin. k. Si uso anticoagulante, invertir inmediatamente el tubo varias veces. l. Descartar adecuadamente en bote rojo y la jeringa en bolsa roja. Causas de error: a. Uso del torniquete por ms tiempo del debido b. Hemlisis de los eritrocitos, por uso de jeringas o tubos hmedos. c. Lipemia d. Ictericia e. Contaminacin bacteriana f. Usos equivocados de los anticoagulantes. 1. mediana bsica, 2. mediana ceflica 3. cubital o radial

Ceflica Mediana ceflica Radial Mediana

Baslica Mediana baslica Cubital anterior

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PUNCIN CAPILAR Utilizada para obtener pequeas muestras de sangre o en pacientes de corta edad. Lugar de la puncin: Los lugares ms adecuados son la superficie palmar o lateral de la punta del dedo, en los infantes se realiza la misma en el taln o dedo gordo del pie. Equipo a utilizar: a. Algodn b. Alcohol c. Lanceta d. Cubre o porta objetos, tubos capilares heparinizados, pipetas especiales. Procedimiento: a. El lugar de puncin debe estar caliente b. Limpiar el lugar de la puncin con alcohol c. Aplicar presin al rea y luego hacer la puncin perpendicular d. Limpiar la primera gota que aparezca e. No apretarse ni escurrir el algodn f. Colocar un algodn con alcohol para controlar la salida de sangre g. El muestreo de sangre en recin nacidos o nios pequeos presenta un problema especial. SANGRE CAPILAR: se obtiene mejor la sangre por puncin venosa del taln o primer dedo del pie. En recin nacidos los valores de hemoglobina de la sangre capilar son mucho mayores que los valores obtenidos en la sangre venosa de cordn umbilical. Recomendaciones: a. Utilizar lanceta desechable b. No puncionar un dedo de la mano que haya estado hacia abajo c. Realizar la puncin en el lado lateral del dedo. d. Si una muestra no puede ser procesada de inmediato, el tubo que la contenga debe de taparse y refrigerarse. Para algunas pruebas es necesario separarse el plasma de los glbulos rojos. Las muestras para recuento de plaquetas, determinacin de ndice de sedimentacin y tiempo de protrombina no debe de guardase mas de dos horas.

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ANTICOAGULANTES Si la sangre venosa va a utilizarse para recuentos hematolgicos es necesario usar un anticoagulante. Se emplean anticoagulantes secos para evitar dilucin de la muestra que disminuir la concentracin de los elementos de la sangre. Oxalatos: Actan removiendo el calcio de la sangre en forma insoluble de oxalato de calcio, ya que no afecta el valor globular medio y o interfiere en la velocidad de sedimentacin. Citratos: Actan como anticoagulantes por la combinacin de calcio formando una sal insoluble de calcio, el citrato trisdico no se usa como anticoagulante de rutina sino para investigacin de coagulacin. EDTA: Es la sal di potsica di sdica del cido etiloendiaminotetrcetico, vuelven insolubles las sales de calcio. Se usa la concentracin de 1 mg de polvo por mL de sangre preservndola 24 hr., la sangre refrigerada y es posible el recuento de plaquetas horas pasadas, es el anticoagulante ms caro. Heparina: Es el mejor anticoagulante para prevenir la hemlisis y para las pruebas de fragilidad osmtica, la ventaja es que no introduce electrlitos. Sin embargo posee una desventaja la cual consiste en aumentar la celularidad morfolgica. BIBLIOGRAFA. 1. Stites, Daniel P.; Terr, Abba I.; Parslow, Tristram G. Inmunologa Bsica y Clnica, Manual Moderno, 10a. edicin. 2002. 2. Goldsby, Richard A. Thomas. et al. Inmunologa, 5ta. Edicin. McGraw-Hill Interamericana S. A. de C. V. Mxico D. F. 2003. 3. Levinson, Warren. Microbiologa e Inmunologa Mdica. 8va. Edicin. . McGraw-Hill Interamericana S. A. Espaa. 2006.