UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA JULIO DE MESQUITA FILHO

FACULDADE DE CINCIAS AGRRIAS E VETERINRIAS CAMPUS DE JABOTICABAL

DESCOBERTA DA FRUTOSE 2,6 BISFOSFATO

DOCENTE: JOO MARTINS PIZAURO JUNIOR

DISCENTES: CAIO PUCCIARELLI FELIPE FABBRI GABRIELA BONF FREZARIM LETICIA FARIA RENAN BUZETTI

CURSO: ZOOTECNIA

JABOTICABAL 2012

SUMRIO

RESUMO

REVISO DE LITERATURA

VISO CRTICA

BIBLIOGRAFIA

1. RESUMO Em 1909, Young, no laboratrio Harden, isolou da levedura a frutose bifosfato (o ster de Harden e Young), que mais tarde foi identificada por Levene & Raymond (1928) como frutose-1,6-bifosfato. A frutose-1,6-bifosfato, na cadeia da gliclise, originada a partir de fosforilao da frutose-6-fosfato na

3 reao da cadeia, por meio da enzima fosfofrutoquinase, que transferir um fosfato ao 1 carbono da frutose-6-P. A frutose-2,6-bifosfato, descoberta 71 anos aps a frutose-1,6-bifosfato (Van Schaftigen et al., 1980c), no um componente intermedirio da gliclise, mas sim o seu mais potente regulador, estando ligada diretamente com a via de sintetizao da glicose: a gliconeognese. A produo da glicose a partir do piruvato uma sequncia de vias opostas quelas conhecidas na gliclise, diferenciando-se em trs reaes: a formao do fosfoenolpiruvato, a partir do piruvato; a formao da frutose-6-P, a partir da frutose-1,6-bisfosfato; e a formao da glicose, a partir da glicose-6-P. A frutose-2,6-bifosfato est ligada regulao do segundo desvio da gliconeognese, agindo como um regulador alostrico. Na gliclise a frutose2,6-bifosfato funcionar ativando a enzima fosfofrutocinase-I, catalisando a fosforilao de frutose-6-P em frutose-1,6-bifosfato, e na gliconeognese ela inibir a enzima frutose-1,6-bifosfatase, que catalisa a formao de frutose-6-P a partir de frutose-1,6-bifosfato. Existem dois tipos principais de regulao enzimtica: uma intracelular, comandada pela presena de moduladores alostricos enzimticos positivos ou negativos [1-4], e uma que vem de fora da clula, sistmica, e que fundamental para que hajam aes coordenadas entre os diversos rgos e tecidos. Este ltimo tipo de regulao, a extracelular, deflagrada por hormnios, e, relacionada variao do perfil de fosforilao enzimtica. (A. MARZZOCO, B.B. TORRES (1999) BIOQUMICA BSICA.) A regulao enzimtica executada pela frutose-2,6-bifosfato pode ser descrita como extracelular, pois o envolvimento do glucagon est intimamente ligado ao seu funcionamento.

2. REVISO DE LITERATURA Quatro grupos de pesquisadores (Castano et al., 1979); Clarke et al, 1979; Kagimoto & Uyeda, 1979; Pikis et al., 1979) reportaram que as propriedades cinticas da fosfofrutoquinase, em extratos de hepatcitos, foram modificados depois de incubados na presena do glucagon. A ao hormonal

decresceu a afinidade da enzima por frutose-6-fosfato e aumentou a inibio pelo ATP. Acreditava-se que era uma consequncia da fosforilao do fosfofrutoquinase pelo AMPciclco-protena dependente de quinas (Castano et al., 1979; Kagimoto & Uyeda, 1979, 1980; Claus et al., 1980). Em contraste a isso, quando o mesmo problema foi re-pesquisado por Van Schaftingen et al., 1980b., sendo descoberto que a diferena do controle de fosfofrutoquinase ou do controle de glucagon(dos hepatcitos tratatos) desapareceu quando filtrado em gel ou purificando a enzima. Uma possibilidade para isso foi proposta por Castano et al. (1979) que co purificou a fosfofrutoquinase-2 com a fosfofrutoquinase-1, tendo a frutose-2,6-bisfosfato formada a partir da frutose-6fosfato e ATP, que estava presente na mistura de eluio no passo de cromatografia. O estimulador da fosfofrutoquinas foi identificado como a frutose-2,6bifosfato com base nas seguintes observaes de Van Schaftingen et al.(1980b): (1) filtrao em gel revelou que o peso molecular do estimulador era muito prximo do peso da frutose-1,6-bisfosfato; (2) o estimulador foi destrudo

dentro de poucos minutos em cido diludo em gelo-lquido; (3) tambm foi destrudo por fosfatase alcalina e era insolvel em brio; (4) foi retido em colunas aninicas e seu padro de eluio foi similar ao da frutose-1,6-bifosfato; (5) no foi adsorvido em carvo. Todas essas propriedades indicaram que o estimulador era um cido-lbil, no nucleotdico ester difosfrico com um peso molecular semelhante ao da frutose-1,6-bifosfato. Sua estrutura foi ento identificada pela anlise dos produtos formados durante a hidrlise do cido. Demonstrando-se ento que, em incubao a 0C e na presena de 0,01M-HCl, havia um estreito paralelismo entre o desparecimento do estimulador e da frutose-6-fosfato, em quantidades de mesmo peso que o cido-lbil fosfatado presente no preparado. A identificao do estimulador como frutose-2,6-bifosfato foi, de qualquer modo, relatada como uma tentativa, pois, no se poderia excluir a possibilidade de um outro grupo qumico que ainda no havia sido analisado, como um constituinte do estimulador. Essa possibilidade foi descartada, quando logo foi demonstrado que o estimulador havia todas as propriedades do natural formado sob incubao de frutose-6-fosfato, na presena de cido fosfrico concentrado a 0C, seguido da concluso que nenhum outro componente alm de frutose-6-fosfato e fosfato

enntraram na estrutura (Van Schaftigen & Hers, 1980). Alm do fato do estimulador sinttico ter a mesma atividade especfica que o natural, indicando que apenas uma forma anomrica estava presente. Sabendo que, as frutoses so -anomeros (Pontis & Fischer, 1963), a estrutura mais provvel para o estimulador era, portanto, o -fructofuranoside 2,6-bisfosfato. A reao irreversvel de fosforilao, catalizada pela fosfofrutocinase-1 (PFK-1), o mais importante ponto de controle e o passo limitante da velocidade da gliclise, alm de ser a primeira reao comprometida com a via. A PKF-1 controlada pelas concentraes disponveis de seus substratos, ATP e frutose-6-fosfato e pelas substncias reguladoras. A PFK-1 inibida alostericamente por nveis elevados de ATP, que atuam como sinal de riqueza energetica, indicando abundncia de compostos de alta energia. Nveis

elevados de citrato, um intermediario, um intermediariodo ciclo do cido ctrico, tambm inibem a PFK 1. Essa enzima, por sua vez, ativada alostericamente por altas concentraes de AMP, que sinalizam reduo das reservas de energia da clula. A frutose-2,6-bisfosfato o mais potente ativador da PFK 1, sendo capaz de ativar a enzima mesmo quando os nveis de ATP esto altos. A frutose2,6-bisfosfato formado pela fosfofrutocinase-2(PFK-2), uma enzima diferente da fosfofrutocinase-1. A PKF 2 uma protena bifuncional tendo tanto atividade cinsica, que produz frutose-2,6-bisfosfato, quanto atividade fosfatsica, que desforila a frutose -2,6-bisfosfato e a converte novamente em frutose-6-fosfato. No fgado, o domnio cinase ativo quando desfosforilado e inativo quando fosforilado. A frutose-2,6-bifosfato tambm atua como inibidor da frutose-1,6-bifosfatase, uma enzima da gliconeognese. As aes recprocas da frutose-2,6-bisfostato sobre a gliclise [ativao] e a gliconeognese [inibidor] asseguram que essas vias no estejam completamente ativas ao mesmo tempo, prevenindo um ciclo intil, em que a glicose seria convertida em piruvato, seguindo-se nova sntese de glicose a partir do piruvato. a) Durante o estado alimentado: A diminuio nos nveis de glucagon, juntamente com nveis elevados de insulina, como ocorre aps uma refeio rica em carboidratos, causa aumento na frutose-2,6-bisfosfato e, portanto, na velocidade da gliclise no fgado. Desse modo, a frutose-2,6-bisfosfato atua como sinal intracelular, indicando abundncia de glicose.

b) Durante o jejum: Nveis elevados de glucagon e baixos de insulina, como ocorre durante o jejum, determinam uma diminuio na concentrao intracelular de frutose-2,6-bisfosfato heptica. Isso resulta em diminuio na velocidade geral da gliclise e em aumento na gliconeognese.

(PRINCPIOS DE BIOQUMICA DE LEHNINGER, 5 ed.)

3. VISO CRTICA

4. BIBLIOGRAFIA Goldberg RF, Austen WG J., Zhang X, et al. Intestinal alkaline phosphatase is a gut mucosal defense factor maintained by enteral nutrition.

Bates JM, Akerlund J, Mittge E, et al. Intestinal alkaline phosphatase detoxifies lipopolysaccharide and prevents inflammation in zebrafish in response to the gut microbiota.

Poelstra K, Bakker WW, Klok PA, et al. A physiologic function for alkaline phosphatase: endotoxin detoxification.

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Cremonini, F. et al. Aliment. Pharmacol. Ther.

Gionchetti, P. et al. Gastroenterology.