OBTENCIN DEL CARIOTIPO DE Columbina talpacoti

MARYURI NARVAEZ CARVAJAL COD. 2003200423 ANGELA BEATRIZ TRUJILLO PASCUAS COD. 2003200730 MARIA ALEJANDRA YAGUARA GALVIS COD. 200101950

UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA FACULTAD DE EDUCACIN LIC. EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIN AMBIENTAL SEMINARIO DE INVESTIGACIN NEIVA 2008

OBTENCIN DEL CARIOTIPO DE Columbina talpacoti

MARYURI NARVAEZ CARVAJAL COD. 2003200423 ANGELA BEATRIZ TRUJILLO PASCUAS COD. 2003200730 MARIA ALEJANDRA YAGUARA GALVIS COD. 200101950

Presentado a: GUSTAVO GONZALEZ

UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA FACULTAD DE EDUCACIN LIC. EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACIN AMBIENTAL SEMINARIO DE INVESTIGACIN NEIVA 2008

1. INFORMACIN GENERAL DEL PROYECTO

Titulo OBTENCION DEL CARIOTIPO DE Columbina talpacoti Investigador principal: Maryuri Narvez Carvajal Correo electrnico: narvaez1608@hotmail.com TEL: 8765591 Direccin: calle 80 C N 1 i 27 Neiva Huila Nombre del Grupo de investigacin: Genetics Birds Total de Investigadores: 3 Tipo de entidad: Universidad pblica Tipo de contribuyente: Universidad Surcolombiana Lugar de Ejecucin del Proyecto: Ciudad: Neiva Departamento: Huila Duracin del proyecto: tres meses (3) Tipo de Proyecto: Investigacin descriptiva Tipo de financiamiento solicitado: recursos propios del grupo Valor del Proyecto: Descriptores/ palabras claves: mecanismos para obtencin de cariotipo ave talpacoti Nombre de los investigadores: 1. Maryuri Narvez Carvajal narvaez1608@hotmail.com Universidad Surcolombiana 8 765591 2. ngela Beatriz Trujillo Pascuas angelis007@hotmail.com Universidad Surcolombiana 8 76 21 03 3. Mara Alejandra Yaguara Galvis alejayagu@hotmail.com Universidad Surcolombiana 8 76 56 29

2. INTRODUCCION Un cariotipo es el conjunto de caractersticas que permiten reconocer la dotacin cromosmica de una clula. Es propio de cada especie y se identifica por el nmero de cromosomas y por el tamao y forma de stos. Para su reconocimiento son importantes ciertas caractersticas, como la posicin del centrmero y la presencia de satlites, entre otras. Si tienen el mismo tamao se atiende a la posicin del centrmero. Para que la identificacin sea ms ajustada se realizan tcnicas de tincin diferencial que delimitan regiones especficas en cada par de cromosomas. Esta tcnica se llama bandeado cromosmico. Las aves constituyen una de las clases de vertebrados que sentimos ms cercanos a nuestra vida cotidiana y a nuestra visin de la naturaleza. Sin embargo, el conocimiento de la biologa bsica de este grupo animal ("taxn"), que en la actualidad incluye a ms de 9000 especies, es bastante incompleto, en especial en lo que se refiere a su gentica y a su evolucin. Amrica del Sur posee en este sentido una interesante ventaja con relacin a otras regiones del mundo ya que el subcontinente es el hbitat natural de ciertos grupos especiales de aves que se diferencian de todas las dems por su gentica, por la estructura de sus cromosomas y por su posicin en el esquema evolutivo de las aves. Recientes hallazgos sobre los cromosomas relacionados con el sexo (esto es, cromosomas que contienen los genes que deciden cul de los sexos se desarrolla, y que por eso son tambin llamados cromosomas sexuales) han permitido esbozar una cadena de cambios sucesivos en dichos cromosomas los que, sorprendentemente, muestran un considerable paralelismo con la informacin obtenida de la anatoma comparada, de la paleontologa y de otras disciplinas. (1) En aves se ha analizado el nmero diploide, la cantidad de macro y microcromosomas, los grados de evolucin de los cromosomas y la diversidad. La diferencia visible entre ellos puede ser explicada por un mecanismo evolutivo de las especies de aves donde los microcromosomas se fusionan para formar macrocromosomas. El escaso material gnico contenido en los macrocromosomas y la gran cantidad de genes presente en los microcromosomas, y en general el genoma, se ha considerado como uniforme y conservado en las especies aviares por 150 millones de aos. En la realizacin de este proyecto se procedi de la siguiente manera: se escogi el ave correspondiente en el rea urbana y rural del departamento del Huila, debido a la presencia de un numero elevado de estas aves, de acuerdo a la observaciones hechas de forma inesperadas y al azar por los investigadores. Se ejecuta la consulta bibliogrfica referente a cariotipos tcnicas realizadas en humanos y en aves, para luego ser llevada a la prctica, siguiendo el procedimiento correcto de acuerdo a la gua elaborada previamente. Finalmente se hace la sistematizacin de los datos obtenidos, posteriormente se har la sustentacin y presentacin de resultados.

3. DESCRIPCIN DEL PROYECTO 3.1DESCRIPCIN DEL PROBLEMA

La identificacin cromosomal del ave Columbina talpacoti, se podr realizar con los procedimientos ya existentes en el rea de Gentica, que sern puestos a consideracin en el momento de la prctica. Se debe tener en cuenta que el procedimiento para cazar el ave ser realizada por expertos, utilizando las tcnicas necesarias para ello. De igual forma en la extraccin de fluido sanguneo. Por lo tanto, se identificaran la cantidad de cromosomas, cromosomas sexuales y autosomas, y la clasificacin por estructura, tamao y tipo de bandas de los mismos. Segn el procedimiento planteado por la gua elaborada, los resultados solo sern analizadas por medio de tomas fotogrficas de microscopia electrnica, para luego ser contabilizados y clasificados segn los criterios planteados tericamente.

3.2 FORMULACION DEL PROBLEMA

Qu caractersticas estructurales son observadas en el proceso de obtencin de cariotipo del ave Columbina talpacoti.?

3.3 JUSTIFICACION
Este trabajo tendr como finalidad hallar el cariotipo de la especie Columbina talpacoti el cual ser un importante alcance en el desarrollo de la citogentica, pues aqu se describir la caracterizacin de cada cromosoma mediante la tcnica bandeo G y se propone que la investigacin desarrollada ser de gran utilidad en los campos de la biologa y estudios citogenticas de las especies aviar. Debido a que son muy pocos los estudios realizados en esta rea del conocimiento; pues, en Colombia y en el departamento del Huila, no se encuentran proyectos de investigacin referentes a los recursos nativos de las mismas. Adems cabe resaltar que tambin se le har uso en el campo de la pedagoga pues se diseara una gua Didctica para el desarrollo de actividades de Cariotipos a nivel escolar. Tambin se profundizar en el conocimiento sobre el origen y evolucin de cromosomas y genomas completos; facilitando la localizacin de genes con utilidad en prcticas biotecnolgicas, aportar datos para resolver problemas sistemtico- evolutivos en diversos taxones cuya delimitacin es confusa. As como colaborar en programas de conservacin de los recursos genticos y de la biodiversidad.

4. OBJETIVOS
4.1 Objetivo General

Obtencin de cromosomas metafsicos a partir de sangre perifrica de Columbina talpacoti iniciando el cariotipo de especies endmicas del Huila cuyo procedimiento quedar plasmado en una gua de estudio dirigida a estudiantes de bsica secundaria como componente pedaggico.

4.2

Objetivo Especifico

Efectuar las diferentes modalidades de extraccin de sangre en aves, y elegir la ms adecuada teniendo en cuenta el tamao y peso de estas. Adquirir destrezas en el montaje y recolecta de un cultivo de linfocitos a partir de sangre perifrica. Identificar el nmero y estructura de los cromosomas de la especie Columbina talapcoti, mediante bandas G. Iniciar con esta especie el cariotipo de las especies endmicas del departamento del Huila. Realizar una gua de estudio para la identificacin de los cromosomas de la especie estudiada, dirigida a estudiantes de Bsica Secundaria como componente pedaggico. Dejar gua de estudio en la biblioteca de la Universidad Surcolombiana, como referencia bibliogrficas para estudios posteriores relacionados con citogentica de aves.

5. HIPOTESIS
Se identificaran cambios en la cantidad y estructura de los cromosomas de acuerdo al hbitat del ave. La manifestacin fenotpica del ave talpacoti se diferencia en el tamao corporal de la Zenaida por las estructuras cromosomales de la misma. La alimentacin es un factor que determina el tamao, distribucin y las estructuras cromosomales.

6. VARIABLES E INDICADORES
1. 2. 3. 4. 5. Cromosomas Tipo de cromosomas Cantidad de cromosomas Cariotipo Aberraciones cromosmicas

7. MARCO DE REFERENCIA
7.1 MARCO CONTEXTUAL ESTATUS Y HABITAT: Comn a abundante en terreno abierto y seco, campos, granjas, prados, jardines y reas pobladas; locales en Amazona, donde probablemente est extendindose con la deforestacin. DISTRIBUCIN: La Tortolita Castaa (Columbina talpacoti) es natural de las Amricas. Su distribucin se extiende desde Mxico hasta Argentina. Tambin se encuentra presente en las islas de Trinidad y Tobago. Algunos ejemplares se registran en Chile. Zonas ms secas en todo el pas (no en vertiente Pacfico S de Jurad, Choc). S Mxico. ELEVACIN: Usualmente a menos de 1600m; localmente hasta 2400m en Cordillera Oriental. HBITAT: Habita en las selvas tropicales de tierras bajas, en las selvas tropicales en las montaas, en las selvas de galera, en las sabanas donde hay algunos rboles, en los llanos, en regiones semiridas donde hay arbustos, en los terrenos de cultivo y en zonas urbanas. 7.2 MARCO TEORICO DESCRIPCION DE Columbina talpacoti

La Tortolita Castaa (Columbina talpacoti) fue registrada por Temminck en 1.811.

CATEGORA

Reino Subreino Rama Filo Subfilo Superclase Clase Subclase Superorden Orden Familia Gnero Especie

TAXA Animalia Eumetazoa Bilateria Chordata Vertebrata Gnathostomata Aves Neornithes Neognathae Columbiformes Columbidae Columbina Columbina talpacoti

DESCRIPCIN Animales: Sistemas multicelulares que se nutren por ingestin. Animales con cuerpo integrado por dos o ms lados simtricos Cuerpo con simetra bilateral con respecto al plano sagital. Cordados: animales con mdula espinal, o cordn nervioso. Vertebrados: cordados con columna vertebral. Vertebrados con mandbula. Vertebrados con plumas. Aves verdaderas: vrtebras de la cola fundidas. Aves de vuelo Palomas y Gangas Palomas Tortolitas Tortolita castaa

COLUMBIFORMES: De alas largas y puntiagudas, son buenas voladoras. Cabeza, pico y patas de tamao pequeo. Cuerpo compacto. Por lo general, el pico tiene cera carnosa. La mayora busca su alimento (granos, semillas, frutos y a menudo de invertebrados) en el suelo. Las palomas y las trtolas (familia Columbidae) son las representantes de este orden. IDENTIFICACIN: 16,5cm. Pico negro. Macho: paloma pequea principalmente. Rufo canela con partes inferiores ms plidas y coronilla contrastante gris clara; coberturas alares con algunos puntos negros; rectrices externas negras, remiges principalmente rufas. Hembra: mucho ms opaca, especialmente por debajo, pero espalda principalmente caf rojizo. ESPECIES SIMILARES: Macho: distintivo. Hembra: se confunde fcilmente con la tortolita diminuta y la tortolita azul. VOZ: En el macho un ca-juu, ca-juuhueco y montono (Hilty), o juu-juup, juujuuprepetido 3 a 10 veces a un ritmo ms lento que en tortolita diminuta. COMPORTAMIENTO: Notablemente sociable y confiada. Se alimenta principalmente en el suelo, solitaria, en pares o en grupos de tamao variable. Camina mecnicamente con pasos cortos y rpidos. En querellas a menudo amenaza levantando un ala. Se levanta repentinamente con un aleteo sonoro y vuela a corta distancia. REPRODUCCIN: Nido en construccin 7 de Agosto (Hilty); otros nidos AbrilJunio y Octubre-Noviembre, Santa Marta (Darlington 1931); volantn 3 Abril Cali; nido (huevos) 6 Junio, cerca de Buga Valle (Hilty). 5 CR Mayo-Agosto, Cartagena y Cesar (Carriker). Nido frgil y somero a 1m o ms en arbusto; 2 huevos blancos. El nido lo hace en los rboles. La nidada cuenta de dos huevos blancos. La incubacin toma de 12 a 13 das. Los pichones se van del nido a las dos semanas. Es posible que una pareja anide dos y hasta tres veces en una temporada. ALIMENTACIN: Se alimenta de semillas. DESCRIPCIN: El color base de su cuerpo es el pardo-rojizo. El macho tiene un color mucho ms vivo y rojizo que la hembra, que tiene una tonalidad parda ms apagada. Tienen pequeas motas de color negro en las alas. Se distinguen los gneros al tener los machos la cabeza color gris claro, mientras que las hembras lo tienen del mismo color castao rojizo que el resto del cuerpo. De longitud mide de 15 a 17 cm. OTROS NOMBRES: A la Tortolita Castaa tambin se le llama Palomita Colorada, Torcacita Colorada y Tortolita Rojiza. En ingls se le conoce por Rubby Ground Dove.

MARCO LEGAL Caza y trfico de especies silvestres La manera como el colombiano concibe y utiliza la fauna silvestre se ve influenciada por un lado de sus races indgenas y por otro del proceso colonizador y urbano, afectado por medios de comunicacin masivos como la televisin, que puede motivar o desmotivar actividades como la caza, tenencia trfico. En publicaciones como Actitudes hacia la fauna en Latinoamrica de NassarMontoya, 2000 (www.araguatos.org) y Nuestros vnculos con los animales de Pramo y col. 1999, se describe ampliamente las motivaciones que llevan a considerar a los animales como medicina, deidad, agero, alimento, afrodisaco, atraccin turstica, objeto cientfico, mercanca, compaa, recurso, objeto de proteccin entre otras. Tambin incluyen cuales son las especies ms afectadas y qu se est haciendo por protegerlas en Colombia y algunos pases latinoamericanos. Caza La actividad de caza se considera como todo acto dirigido a la captura de animales silvestres ya sea dndoles muerte, mutilndolos o atrapndolos vivos y la recoleccin de sus productos. Son actividades de caza o relacionadas con ella, la captura de individuos, especmenes de la fauna silvestre y la recoleccin, transformacin, procesamiento, transporte, almacenamiento y comercializacin de los mismos o de sus productos. (Cdigo de Recursos Naturales- decreto 1608/78, captulo III art. 54 y 55). En Colombia existen la caza de subsistencia, cientfica, de fomento, de control, deportiva y comercial. La primera no requiere de permisos legales pues es realizada principalmente por los indgenas para abastecer necesidades alimenticias y dependen de ella para sobrevivir. Otro grupo conformado por colonos, la practican pero no es imprescindible, ya que cuentan con otras fuentes de protena. Para las poblaciones indgenas la caza de fauna silvestre es motivada por la obtencin de alimento principalmente (quizs el concepto ms divulgado entre todas las culturas del pas) y en menor grado para uso medicinal y mtico. Aunque se tiene el concepto general que cazan y aprovechan de manera sostenible este recurso, procesos como el de aculturamiento y el mejoramiento de tecnologas de cacera, pueden estar afectando negativamente las poblaciones naturales segn Roda,1997 y Bedoya-Gaitn, 2000.

La caza cientfica y de fomento requieren de permisos para poder ser llevadas a cabo; la primera es practicada con fines de investigacin y la ltima busca individuos o especmenes para el establecimiento de zoocriaderos (ley 611 de

2000) y se les exige planes de investigacin, especies objeto, requisitos de instalacin, licencias, etc. La caza deportiva (fin recreativo y no lucrativo), de control (regulacin de poblaciones por rdenes social, ecolgica y econmica) y comercial (obtencin de beneficio econmico), estn prohibidas por la ley 84 de 1989; pues la poblacin civil las ha ejercido sin criterio ni conocimiento por las percepciones errneas al atribuirles a los animales poderes, considerarlos competencia por fuentes alimenticias, para obtener sus productos, exhibirlos como trofeo, tenerlos de recuerdo, e incluso venderlos a un alto precio. La presin de caza ha llevado a muchas especies silvestres a la extincin, como ocurri desde 1911 con las aves de los humedales (el pato pico de oro (Anas georgica niceforoi), el pato pico azul (Anas cyanoptera borreroi), el capitn enano (Pygidium bogotense) y el zambullidor Cira (Podiceps andinus) cuando se practicaba la cacera deportiva y a muchas otras la ha puesto en serio peligro como el Oso de Anteojos (Tremarctos ornatus), felinos y aves rapaces por ser consideradas plagas. As ste patrn de uso sea permitido por la ley, puede repercutir en forma negativa si es manejado irresponsablemente y parmetros como la reproduccin se ven afectados, disminuyendo las poblaciones de fauna natural.

8. DISEO METODOLGICO
8.1 TIPO DE ESTUDIO DESCRIPTIVO: Es de tipo descriptivo, debido a que en el proceso de investigacin se llevan a cabo la identificacin de tipo cualitativa de los diferentes cromosomas encontrados en la muestra recogida del ave Columbina talpacoti.

Cromosoma
Diagrama de un cromosoma eucaritico duplicado y condensado (en metafase mittica). (1) Cromtida, cada una de las partes idnticas de un cromosoma luego de la duplicacin del ADN. (2) Centrmero, el lugar del cromosoma en el cual ambas cromtidas se tocan. (3) Brazo corto. (4) Brazo largo.

Cromosoma (del griego chroma, color, y soma, cuerpo o elemento) es cada uno de los pequeos cuerpos en forma de bastoncillos en que se organiza la cromatina del ncleo celular en la mitosis y la meiosis, cada uno de los cuales se divide longitudinalmente, dando origen a dos cadenas gemelas (iguales). Su nmero es constante para una especie determinada; en Homo sapiens sapiens (el ser humano) se tienen 46. De ellos 44 son autosmicos y 2 son sexuales o gonosomas. Se llama cromatina al material microscpico constituido del ADN y de protenas especiales llamadas histonas que se encuentra en el ncleo de las clulas eucariotas en las cuales los cromosomas se ven como una maraa de hilos delgados. Cuando la clula comienza su proceso de divisin (cariocinesis), la cromatina se condensa y los cromosomas se hacen visibles como entidades independientes. La unidad bsica de la cromatina son los nucleosomas. Los cromosomas se suelen representar por pares, en paralelo con su homlogo.

Constancia del nmero de cromosomas

Usualmente las especies animales y vegetales tienen un nmero de cromosomas constante y determinado que constituyen su cariotipo (ley de la constancia numrica de los cromosomas), aunque existen especies con una alta variabilidad cariotpica, no slo en nmero sino en forma y tamao de los cromosomas. Cariotipo: Forma, cantidad y tamao de los cromosomas. Aunque la diferencia entre un individuo y otro es la informacin especificada en los genes de estos cromosomas. El nmero de cromosomas de una especie (o fase vital) diploide se identifica como 2n mientras que ese nmero en una especie (o fase vital) haploide se identifica con la letra n. En aquellas especies que presentan un nmero repetido de cromosomas superior a dos complementos se habla de poliploida, representndose el mltiplo por delante de la letra n. As: 3n indicara un complemento cromosmico triploide, 4n un tetraploide, etc. Todas estas son situaciones euploides. Con la indicacin x se quiere expresar el nmero bsico de cromosomas de una especie que presenta individuos con diversos grados de ploida o el de una lnea filogentica a partir de la cual diversos txones han alcanzado situaciones aneuploides variadas, siendo en este caso el nmero cromosmico una variacin del nmero original con aumento o disminucin del nmero bsico, por prdida, fusin o divisin de cromosomas (p. ej., n+1 o n-1). Un ejemplo de esta situacin anormal la tenemos en los individuos de la especie humana que presentan el llamado sndrome de Down, situacin de aneuploida (2n=47) por la presencia de un ejemplar ms de lo habitual del cromosoma 21 (trisoma).

Cromosomas sexuales En muchos organismos, uno de los pares de los cromosomas homlogos es distinto al resto, realizando la determinacin gentica del individuo. A estos cromosomas se les llama cromosomas sexuales o heterocromosomas e incluso gonosomas, porque determinan el sexo por la proporcin de los dos cromosomas homlogos. Sistema de determinacin XY: es propio del ser humano y muchos otros animales. Las hembras, siendo XX, darn gametos iguales con cromosoma X, sexo homogamtico y los machos, siendo XY, darn dos tipos de gametos, uno con el cromosoma X y otro con el cromosoma Y. La probabilidad de que en la fecundacin, al unirse los gametos, resulte una combinacin XX (hembra) o XY (macho) es aproximadamente del 50%. Sistema de determinacin ZW: en otras especies (mariposas, p.e.) ocurre lo contrario, el sexo masculino es homogamtico (ZZ) y el femenino heterogamtico (ZW). Sistema de determinacin XO: otras especies (peces, insectos, anfibios) que no tienen el cromosoma Y, determinndose el sexo por el nmero de cromosomas X, macho XO y hembra XX. Forma de los cromosomas La forma de los cromosomas es para todas las clulas somticas constante y caracterstica de cada especie. La forma depende fundamentalmente de las constricciones que presente el cromosoma y de su localizacin en la cromtida. El cromosoma se encuentra constituido bsicamente por el centrmero que divide el cromosoma en un brazo corto o brazo p y un brazo largo o brazo q. Algunos cromosomas presentan satlites en el brazo corto. Segn la posicin del centrmero, los cromosomas se clasifican en: Metacntricos El centrmero se localiza a mitad del cromosoma y los dos brazos presentan igual longitud. Submetacntricos La longitud de un brazo del cromosoma es algo mayor que la del otro. Acrocntricos Un brazo es muy corto (p) y el otro largo (q). Telocntricos Slo se aprecia un brazo del cromosoma al estar el centrmero en el extremo. Es posible visualizar los cromosomas por medio de la microscopa de luz y de tinciones especiales, el proceso para obtener el material cromosmico se realiza en diversos pasos: Obtencin de la muestra: Se realiza exclusivamente de tejidos vivos que contengan clulas con ncleo. Principalmente se emplean los glbulos blancos que encontramos en la sangre por su fcil accesibilidad. Siembra: La cual se realiza agregando aproximadamente 1 mililitro de sangre entera heparinizada a un medio de cultivo enriquecido con suero fetal bovino, antibiticos y mitgenos, lo cual estimular el crecimiento y divisin de las clulas.

Incubacin: Se mantiene a 38.0 grados centgrados con una atmsfera de CO2 al 5 % y humedad por 72 horas idealmente. Cosecha: Se agrega colchicina a la muestra para detener los ncleos ceulares en metafase, posteriormente se cenfrifuga la mezcla para retirar el sobrenadante (suero sanguneo y medio de cultivo). Se agrega solucin hipotnica de cloruro de potasio para romper las membranas celulares y para finalizar el paso de la cosecha se realizan 3 lavados con una solucin de metanol-cido actico 3:1. Goteo: Posterior a los lavados, por medio de centrifugacin, se obtiene un botn celular blanco, el cual se suspende en la misma solucin fijadora metanol-cido actico 3:1 y se procede a gotear en un portaobjetos a unos cuantos centmetros, esto es con el objetivo de "reventar" las clulas y obtener los cromosomas. Envejecimiento: En este paso se espera a que los cromosomas pierdan humedad. Se puede aplicar calor al portaobjetos para deshidratar la muestra. Tincin: Existen muchos tipos de tinciones para observar los cromosomas. La ms utilizada es la tincin con colorante Giemsa, se conoce como tcnica de bandas GTG. En este caso se expone la muestra del portaobjetos a tripsina, con el objetivo de desnaturalizar algunas de las protenas constitucionales de los cromosomas. Posteriormente se tien con dos colorantes, Giemsa y Wrigth, en algunos laboratorios puede emplearse un solo colorante, pero el empleo de los dos mejora la calidad del resultado, puesto que facilita el anlisis al microscopio para el citogenetista creando un contraste de color en las bandas que se formaron al emplear la tripsina. Por medio de estas bandas podemos distinguir las caractersticas de un cromosoma y determinar si es normal o presenta alguna anomala estructural. Existen otras tcnicas de tincin, como bandas NOR, ICH, bandas Q, bandas R, tcnicas para teir centrmero y heterocromatina. Con este tipo de tcnicas se puede llegar a realizar un diagnstico citogentico acerca de una enfermedad cromosmica. Lectura: El ltimo paso consiste en leer por lo menos 20 metafases, es decir 20 clulas reventadas y formar un cariotipo o cariograma, donde se acomodan los cromosomas por grpos segn el tamao y la localizacin del centrmero. En el grupo A se tienen los cromosomas 1, 2, 3. Grandes metacntricos, excepto el 2, el cual es un cromosoma grande submetacntrico. En el grupo B se tienen los cromosomas 4 y 5, que son submetacntricos grandes. En el grupo C se tienen los cromosomas 6,7,8,9,10,11 y 12, que son los submetacntricos medianos. En el grupo D se tienen a los cromosomas 13,14 y 15, que son acrocntricos medianos y presentan satlites en sus brazos cortos. El grupo E se encuentra constituido por los cromosomas 16, 17, 18, submetacntricos pequeos. En el grupo F se tienen a los cromosomas 19 y 20, metacntricos pequeos. El grpo G se constituye por los cromosomas 21 y 22, acrocntricos pequeos.El par de gonosomas o sexocromosomas se constituyen por X (metacntrico mediano) e Y considerado acrocntrico sin satlites, aunque en algunas revisiones de la literatura se le refiere como submetacntrico.

Los cromosomas son los portadores del ADN, por lo tanto son parte integral estructural imprescindible de los seres vivos. Algunas entidades se encuentran formadas por hebras de ADN o ARN sin formar estructruras complejas como la de los cromosomas, un ejemplo claro son los virus.

8.2 POBLACION UNIVERSO: MUESTRA: (1% a 10%) Es importante resaltar que los datos que colocamos es de nuestra propia concepcin, pues actualmente no se conoce ningn tipo de estudio relacionado con la cantidad precisa de la especie Columbina talpacoti en la ciudad de Neiva. Segn la bsqueda de referencias bibliogrficas de la red en Colombia, se encontr un estudio relacionado con esta especie en la Universidad del Valle, donde el objetivo de ste fue, hallar la poblacin de aves que anidan sin la ayuda humana; esta poblacin encontrada fue del 74%, se estima que la especie Columbina talpacoti esta relacionada dentro de este porcentaje. Por tal razn, al no saber el universo de la especie a estudiar, se procedi a delimitar los sectores de la ciudad de Neiva donde habitan en mayor cantidad esta especie. Se realizo de la siguiente forma: 1. Se escoge una comuna de la ciudad de Neiva. Dentro de esta comuna se elige un parque, donde se halle la presencia de esta especie. 2. Luego, se contabiliza el nmero total de especies encontradas en cada comuna, para as realizar un promedio total de esta ave. De esta manera se estima el promedio de poblacin del ave Columbina talpacoti. 8.3 INSTRUMENTOS DE RECOLECCION Ver anexo. 8.4 INSTRUMENTOS DE SISTEMATIZACION DE LA INFORMACION Los instrumentos de sistematizacin que se van a utilizar en el proyecto, son: Diagramas de Barras Tablas de datos Lneas Crculos (tortas) Dendograma

8.5 TECNICAS DE ANALISIS DE LA INFORMACION Organizacin de la tabla de datos luego se interpretara por medio de las graficas (diagramad e barras y dems) e interpretacin de resultados. 9. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES
TIEMPO FASE: ACTIVIDADES

ABRIL 1 2 3 4

MAYO 1 2 3 4 1

JUNIO 2 3 4 1

JULIO 2 3 4

AGOSTO 1 2 3 4

FASE I: RECOPILACION DOCUMENTAL Y BIBLIOGRAFICA 1. 2. ELABORACION DE GUIA DE TRABAJO VIAJE AL CAMPO (ZONA RURAL), COMO LO ES GARZON (FINCA) RECOLECCION DE BIBLIOGRAFIA ( RED NACIONAL) RECOLECCION DE BIBLIOGRAFIA ( RED INTERNACIONAL) ADIESTRAMIENTO PRACTICA DE LABORATORIO (SEDE SALUD) SISTEMATIZACION DE LA INFORMACION SUSTENTACION Y PRESENTACION DE RESULTADOS ELABORACION DE GUIA DIDACTICA

3.

4.

5. 6.

7.

8.

9.

13. RECURSOS

1. MATERIALES (Lista de materiales que se encuentran en el trabajo de talpacoti) RECURSOS FISICOS: (LABORATORIO: SEDE SALUD) RECURSOS INSTITUCIONALES: a. Universidad Surcolombiana b. Universidad Javeriana RECURSOS ECONOMICOS a. El presupuesto ser dada por parte de los mismos investigadores.

14. PRESUPUESTO VALOR TOTAL DEL PROYECTO

CONCEPTO VIAJES A GARZON (FINCA): ALIMENTACION JAMAS MALLAS (METROS) JAULAS ALIMENTO DE AVES (VITAMINAS)

CANTIDAD TRES PERSONAS TRES PERSONAS 3 10 METROS 3 1 KILO TOTAL

VALOR UNITARIO $ 35.000 $ 190.000 $20.000 $ 18.000 $30.000 $3.000

VALOR TOTAL $105.000 $570.000 $60.000 $180.000 $90.000 $3.000 $1.008.000

CONCEPTO

CANTIDAD 10 10

JERINGA DESECHABLE ESTRIL DE 5 ML JERINGA DESECHABLE ESTRIL DE 10 ML CON AGUJA 20X32 MM HEPARINA. FITOHEMAGLUTININA
COLCHICINA GIEMSA TOTAL

VALOR UNITARIO $800 $1000

VALOR TOTAL $8000 $10000

10 10 10 10

$10000 $15000 $3000 $30000

$100000 $150000 $30000 $300000 $598.000

15. BIBLIOGRAFIA Therman E. Susman M. 1993 Human Chromosomes Structure Behavior and Effect. Spinger Verlag. New York. Thomson Mw. Mc Innes Rr, Willard Hf. 1991. Genetics in Medicine. Wb Saunders. Philadelphia. Vermin Rs, Babu A. 1995. Human Chromosomes, Principles and Techniques. 2 N D. Editorial Mc. Graw Hill. USA

Estas pginas fueron recopiladas el da 15 de junio de 2008 en las siguientes URL: http://www.damisela.com/zoo/ave/otros/columb/columbidae/columbina/talpacoti /taxa.htm http://www.mailxmail.com/curso/excelencia/ovservacionaves/capitulo18.htm http://www.opepa.org/index.php?option=com_content&task=view&id=27&Itemid =33

ANEXOS

UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA FACULTAD DE EDUCACION PROGRAMA DE LICENCIATURA BASICA CON ENFASIS EN CIENCIAS NATURALES Y EDUCACION AMBIENTAL. OBJETIVO: RECONOCIMIENTO CROMOSOMAL DEL AVE COLUMBINA TALPACOTI

GUA DE LABORATORIO: La siguiente gua sirve de ejemplo para desarrollar el cariotipaje en aves. CARIOTIPO HUMANO Objetivos. a) Realizar un cariotipo a partir de linfocitos de sangre perifrica. b) Conocer los diferentes tipos de cromosomas que existen en el humano, as como la forma en que stos se arreglan en un cariotipo. c) Conocer la existencia de aberraciones cromosmicas, comprendiendo los mecanismos que las producen y sus consecuencias. d) Determinar en que situaciones deber realizarse un cariotipo. Introduccin. Los cromosomas son las estructuras formadas por la condensacin de la cromatina durante los procesos de divisin celular. Se tien intensamente con colorantes bsicos que interaccionan con el DNA. Los cromosomas mitticos humanos cuando estn duplicados tienen una forma similar a una X. Las cromtidas hermanas se mantienen unidas por una regin de constriccin primaria llamada centrmero. Su posicin es variable; si se encuentra en la parte media, los cromosomas son metacntricos; si se encuentra desplazado hacia un extremo (dando brazos de diferente tamao, p y q), produce cromosomas submetacntricos; si est cerca del extremo final sern acrocntricos y si es terminal telocntricos. En el humano existen normalmente cromosomas de los tres primeros tipos, no existiendo telocntricos, los cuales se observan en otros organismos, como por ejemplo el ratn. Una constriccin secundaria puede ser observada en cualquiera de los cromosomas, la ms frecuente es la que producen los satlites citolgicos en los cromosomas acrocntricos humanos. El trmino cariotipo se refiere al arreglo sistematizado del complemento cromosmico de una clula. Si el cariotipo es representado en forma diagramtica o matemtica se obtiene un idiograma.

La clasificacin bsica de los cromosomas humanos en metafase fue derivada de conferencias en Denver (1960), Londres (1963) y Chicago (1966). Se acord numerar los autosomas en pares del 1 al 22 de acuerdo al tamao decreciente y posicin del centrmero principalmente. Los 22 pares de autosomas se dividen en 7 grupos (A-G ) los cuales son fcilmente distinguibles con tinciones comunes. Los cromosomas sexuales fueron designados X y Y y se arreglan separadamente cuando es posible o en la vecindad de los grupos de autosomas que son similares en tamao y morfologa (el X en el grupo C y el Y en el G). El complemento cromosmico de la mujer es 46,XX y el del hombre 46,XY. Para lograr la identificacin individual de los cromosomas es necesario recurrir a otros mtodos como autorradiografa o tinciones y tratamientos especiales que producen un patrn de bandas especfico a lo largo de cada cromosoma. Tales mtodos incluyen el uso de colorantes fluorescentes, enzimas proteolticas, detergentes ,soluciones hipertnicas, calor, etc. La mayora de los estudios citogenticos se realizan a partir de linfocitos de sangre perifrica. La divisin de estas clulas se induce in vitro mediante mitgenos como la fitohemaglutinina. Sin embargo, es posible utlizar cualquier clula en divisin. La acumulacin de metafases se logra inhibiendo la formacin del huso mittico con colchicina. Una anormalidad cromosmica, ya sea en nmero o estructura que lleve a prdida o ganancia de material gentico, producir un desarrollo embrionario anormal. Esto conducir a diferentes malformaciones que dependern de los cromosomas implicados y de la cantidad de material cromosmico ganado o perdido, siendo la prdida mucho ms severa. Las aberraciones cromosmicas numricas incluyen las euploidas (nmeros cromosmicos mltiplos exactos del nmero haploide) como las triploidas y las tetraplodas y las aneuploidas (mltiplos inexactos del nmero haploide) como las monosomas y trisomas. Las fallas en el proceso de divisin que llevan a estas anormalidades pueden ocurrir tanto durante la meiosis como durante la mitosis. Las anomalas estructurales son rearreglos cromosmicos resultantes de rupturas en uno o ms cromosomas con la subsecuente reunin de los extremos en forma tal que se altera el orden lineal del material gentico. Entre las principales aberraciones estructurales estn las deleciones o prdidas, inversiones peri o paracntricas, anillos, duplicaciones, isocromosomas y translocaciones balanceada o no. La frecuencia de aberraciones cromosmicas en recin nacidos vivos es de 1-2%, siendo similar la proporcin entre anomalas numricas y estructurales. No obstante la frecuencia de alteraciones citogentica se eleva considerablemente en productos de aborto espontneo hasta 20 - 50%. Combinando ambas se puede concluir que de 4 a 20% de todas las concepciones son cromosmicamente anormales. Las indicaciones para realizar un estudio citogentico son

principalmente cuando existen rasgos dismrficos, retraso mental y psicomotor, corta estatura, genitales ambiguos, falta de desarrollo puberal, anenorrea primaria o secundaria, aborto habitual, infertilidad, procesos malignos o ser padres de productos fallecidos no estudiados o con rearreglos estructurales. Material biolgico. 2 mL de sangre venosa heparinizada. Material de laboratorio.

1 Jeringa desechable estril de 5 mL. 1 Jeringa desechable estril de 10 mL con aguja 20x32 mm. 1 Frasco vial con tapn estril. 1 Pipeta graduada de 1 mL estril. 1 Tubo cnicos de centrfuga de 15 mL o 2 tubos de 13x 100 mm. 1 pipeta de 10 mL. 2 vasos de precipitados de 100 mL. Portaobjetos. 2 pipetas Pasteur con bulbo.

Reactivos.

Heparina. Medio de cultivo Mac Coy 5a suplementado con 10% suero fetal bovino, penicilina (2,000 U/ mL) y estreptomicina (275 g/mL). Fitohemaglutinina. Colchicina 0.02% (en agua destilada estril). Solucin hipotnica de KCl 0.0375 M (a 37C). Fijador metanol-cido actico glacial 3:1. Este reactivo deber prepararse en el momento en que va a utilizarse y manejarse con extremo cuidado. Colorante de Giemsa. Aceite de inmersin.

Desarrollo de la prctica. 1. Tomar 2 mL de sangre venosa con una jeringa de 5 mL heparinizada (0.2 mL de heparina) en condiciones mximas de asepsia. La muestra debe obtenerse 48-72 hr. antes de la prctica. 2. Con la jeringa o la pipeta de 10 mL y en condiciones estriles, aadir a cada frasco vial, 5 mL de medio de cultivo suplementado, 0.2 mL de fitohemaglutinina y 7-9 gotas de sangre heparinizada. La sangre debe aadirse quitando la aguja de la jeringa. Incubar a 37C.

3. Transcurridas 46-70 horas de incubacin, esto es, 2 horas antes de la prctica, aadir a cada vial 0.5 ml de la solucin de colchicina y continuar incubando a 37C hasta completar las 48-72 horas de incubacin. 4. Se procede a la cosecha. Vaciar el contenido de cada frasco, agitndolo previamente, a un tubo de centrfuga (pueden utilizarse tubos de 13x100 mm). Centrifugar a 2500-3000 r.p.m. durante 5 min. 5. Decantar el sobrenadante o eliminarlo con pipeta Pasteur. Resuspender el botn en el vortex y aadir, con agitacin, 5 mL de solucin hipotnica de KCl , la cual deber estar a 37C. Dejar reposar a 37C durante 30 minutos. 6. Centrifugar a 2500-3000 r.p.m. durante 5 minutos, eliminar el sobrenadante. Agitar directamente en el vortex y entonces agregar GOTA A GOTA el fijador SIN DEJAR DE AGITAR, hasta completar 5 ml. Dejar reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos. 7. Centrifugar 5 min. a 3000 r.p.m., eliminar el sobrenadante, resuspender el botn y agregar 5 mL de fijador como se seal anteriormente. Centrifugar nuevamente. Repetir esta operacin hasta obtener un botn blanco y un sobrenadante transparente (aprox. 4-5 veces). 8. Decantar el sobrenadante y aadir unas gotas de fijador para resuspender el botn. Tomar todo el volumen con la pipeta Pasteur y dejar caer desde una altura de 10-15 cm una o dos gotas de la suspensin sobre cada portaobjetos perfectamente limpio, desengrasado y seco. Dejar reposar las laminillas al aire y teir con colorante de Giemsa durante 5 minutos. Lavar con agua corriente y dejar secar al aire. 9. Observar al microscopio primero a bajo aumento para localizar las metafases. Una vez localizadas, observar a inmersin y proceder a contar e identificar los cromosomas con ayuda de un esquema adecuado. BIBLIOGRAFA. - Jacques Perrillat D, Cervantes Peredo A. 1982. Malformaciones congnitas secundarias anomalas cromosmicas. Rev Med Hosp Gen Mex XLV: 340-349. - King C. 1980. Cariotipo, Cuando solicitarlo y por qu. Tribuna Mdica XXXIX: 15. - Salamanca F. 1988. Citogentica humana. Mdica Panamericana. Mxico. pp 400

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IDENTIFICACIN: Maryuri Narvez Carvajal APELLIDOS: Narvez Carvajal NOMBRE: Maryuri

C.C: 33.750.714 de Neiva

FECHA DE NACIMIENTO: 14 de agosto de 1985 NACIONALIDAD: Colombiano CORREO ELECTRNICO: narvaez1608@hotmail.com DOCUMENTO DE IDENTIDAD: C.C 33.750.714 de Neiva TELEFONO: 876 55 91 316 559 80 90

CARGO O POSICION ACTUAL: Estudiante de IX semestre de Lic. Bsica con nfasis En Ciencias Naturales Y Educacin Ambiental. TIPO DE VINCULACION CON LA UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA: Tiempo completo. FORMACION (AREA DISCIPLINARIA): PRIMARIA: Bsica Primaria ENTIDAD: Institucin Educativa Eduardo Santos BACHILLER: Bachiller Comercial ENTIDAD. Institucin educativa INEM Julin Motta Salas CAMPOS DE LA CIENCIA Y LA TECNOLOGIA EN LAS CUALES ES EXPERTO: Biologa, fsica y qumica

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IDENTIFICACIN: ngela Beatriz Trujillo Pascuas C.C: 1.075.213.065 de Neiva APELLIDOS: Trujillo Pascuas NOMBRE: ngela Beatriz FECHA DE NACIMIENTO: 25 de julio de 1986 NACIONALIDAD: Colombiano CORREO ELECTRNICO: angelis007@hotmail.com DOCUMENTO DE IDENTIDAD: C.C 1.075.213.065 de Neiva TELEFONO: 8 76 21 03 316 333 87 13

CARGO O POSICION ACTUAL: Estudiante de IX semestre de Lic. Bsica con nfasis En Ciencias Naturales Y Educacin Ambiental. TIPO DE VINCULACION CON LA UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA: Tiempo completo. FORMACION (AREA DISCIPLINARIA): PRIMARIA: Bsica Primaria ENTIDAD: Colegio San Rafael Arcngel BACHILLER: Bachiller Comercial y tcnica en secretariado. ENTIDAD. Instituto Tulia Rosa Espinosa ITRE CAMPOS DE LA CIENCIA Y LA TECNOLOGIA EN LAS CUALES ES EXPERTO: Biologa, fsica y qumica

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IDENTIFICACIN: Maria Alejandra Yaguara Galvis C.C: 1.075.209.880 de Neiva APELLIDOS: Yaguara Galvis NOMBRE: Maria Alejandra FECHA DE NACIMIENTO: 22 de junio de 1985 NACIONALIDAD: Colombiano CORREO ELECTRNICO: alejayagu@hotmail.com DOCUMENTO DE IDENTIDAD: C.C 1.075.209.880 de Neiva TELEFONO: 8 76 56 29 316 730 65 87

CARGO O POSICION ACTUAL: Estudiante de IX semestre de Lic. Bsica con nfasis En Ciencias Naturales Y Educacin Ambiental. TIPO DE VINCULACION CON LA UNIVERSIDAD SURCOLOMBIANA: Tiempo completo. FORMACION (AREA DISCIPLINARIA): PRIMARIA: Bsica Primaria ENTIDAD: Colegio Mi Segundo Hogar BACHILLER: Bachiller Acadmico ENTIDAD. Colegio Departamental Femenino CAMPOS DE LA CIENCIA Y LA TECNOLOGIA EN LAS CUALES ES EXPERTO: Biologa, fsica y qumica