AO

DE LA INTEGRACIN NACIONAL Y EL

RECONOCIMIENTO DE NUESTRA BIODIVERSIDAD

Universidad Nacional de Piura

Facultad de Ciencias Escuela Profesional de Ciencias Biolgicas

Efecto de la Dieta Sobre la Concentracin de Glucgeno en Hgado de Patos. ALUMNA DOCENTE : : Ruiz Azaero, Grecia Elena Blgo. Henry Robles Cueva Mcblo: Cesar Torres Das CTEDRA CICLO : : Bioqumica VI PIURA, 16 DE NOVIEMBRE DEL 2012

Introduccin
El glucgeno, forma de almacenamiento de la glucosa, es un polisacrido ramificado de glucosa compuesto de cadenas de unidades glucosilo unidas por enlaces -1,4 con ramificaciones -1,6 cada 8-10 residuos. En esta molcula tan ramificada slo un residuo de glucosa presenta su carbono anomrico libre (no est unido a otro residuo de glucosa). Este carbono anomrico ubicado al principio de la cadena est unido a la protena glicogenina. A diferencia de este residuo de glucosa, los ubicados en los extremos de las ramificaciones son no reductores (su carbono anomrico forma parte de un enlace glicosdico).( Stryer et al, 2003) La estructura ramificada del glucgeno permite su rpida sntesis y degradacin dado que las enzimas que lo metabolizan pueden actuar sobre varias cadenas simultneamente dado que presenta mltiples extremos no reductores. El glucgeno se encuentra en los tejidos como un polmero de muy alto peso molecular (107-108) en grupos o clusters de molculas formando las denominadas partculas de glucgeno. Las enzimas involucradas en su metabolismo y algunas de las enzimas regulatorias estn unidas a la superficie de las partculas de glucgeno. (Nelson et al, 2000) El hgado tiene una gran capacidad de almacenamiento de glucgeno, llegando a constituir un 10% del peso del rgano. En cambio, en el msculo los depsitos slo llegan al 1-2% del peso del tejido pero, considerando que la masa muscular es mayor que la heptica, los depsitos de glucgeno del msculo son casi dos veces los hepticos. La funcin de estos depsitos de glucgeno es completamente diferente en el hgado y en el msculo esqueltico. El glucgeno se degrada principalmente a glucosa 1-fosfato, que se convierte en glucosa 6fosfato. En el msculo esqueltico y otros tipos celulares, la glucosa 6-fosfato entra en la va glicoltica. ( Stryer et al, 2003) El glucgeno es una fuente de combustible extremadamente importante para el msculo esqueltico cuando la demanda de ATP es elevada y cuando se utiliza rpidamente la glucosa 6-fosfato en la gluclisis anaerbica. En muchos otros tipos celulares los pequeos depsitos de glucgeno cumplen una funcin similar; son una fuente de combustible de emergencia que aporta glucosa para la generacin de ATP en ausencia de oxgeno o cuando el flujo sanguneo es restringido. En general, en estas clulas la glucogenlisis y la gluclisis se activan simultneamente. (Clark, 1966) El glucgeno puede ser aislado de los tejidos por digestin con soluciones de KOH caliente en las cuales los enlaces no reductores alfa 1-4 y alfa 1-6 son estables, el glucgeno es tambin fcilmente hidrolizado por alfa y beta amilasas para rendir glucosa y maltosa respectivamente, la accin de la beta amilasa tambin rinde una dextrina mltiple. (Alemany, 1983)

Objetivos:

El objetivo de la presente prctica es cuantificar el glucgeno heptico en patos y evaluar los valores encontrados relacionndolos con los factores que determinan su sntesis y degradacin.

Material y Mtodos
Material que debe traer el alumno: Hgado de patos en ayunas Hgado de pato alimentado Reactivos y material biolgico KOH al 60% Alcohol absoluto Fenol 8% H2SO4 concentrado El procedimiento que se hizo para llevar a cavo esta prctica fue primeramente homogenizar cada uno de los hgados de pato con magua destilada fra. A) COMPONENTES Tubo I Tubo II Homogenizado de hgado de pato en ayunas 1 ml Homogenizado de hgado de pato 1 ml alimentado KOH 60% 1 ml 1 ml Calentar los tubos en bao maria a 100 C por diez minutos Alcohol al 98% 5 ml 5 ml Na2SO4 0.2 ml 0.2 ml
Mezclar y dejar en reposo por una hora Centrifugar a 3.500 por diez minutos Eliminar el sobrenadante

Agregar agua destilada

5 ml

5 ml

Disolver el precipitado por agitacin

A) COMPONENTES Muestra de tubo I (paso anterior) Muestra de tubo II (paso anterior) Agua destilada Fenol 80 % Agregar Na2SO4 concentrado

Tubo I 1 ml ----1.0 ml 0.1 ml 5 ml

Tubo II ----1 ml 1.0 ml 0.1ml 5 ml

Colocar los tunos de agua helada durante 5 minutos Sin retirar los tubos de bao helado , agregar gota a gota en el centro del tubo y mezclar
Dejar en el bao helado durante 5 minutos Calcular la absorvancia con el espectofotmetro

RESULTADOS
Pato en ayunas:
F= F= 625ml/dl

mg. Glucgeno/100gr. Tejido hmedo= (lectura TUBO I- blanco) x factor mg. Glucgeno/100gr. Tejido hmedo= (0.21) x625 ml/dl

Pato alimentado:
F= F= 625ml/dl

mg. Glucgeno/100gr. Tejido hmedo= (lectura TUBO I- blanco) x factor mg. Glucgeno/100gr. Tejido hmedo= (0.26) x625 ml/dl

mg. Glucgeno/100gr. Tejido hmedo= (patohmedo= 162.5 mg/dl mg. Glucgeno/100gr. Tejido en ayunas)= 131.25

ml/dl
*

mg. Glucgeno/100gr. Tejido hmedo= (pato alimentado)= 162.5

mg/dl

Discusin
El glucgeno es la forma de almacenamiento de la glucosa en los tejidos animales. Se encuentra principalmente en el hgado y en el msculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso hmedo, respectivamente. Las propiedades fsicas y qumicas de muchos polisacridos neutros difieren lo bastante de las de otras biomolculas, para permitir su fcil aislamiento. El glucgeno se puede liberar del hgado por calentamiento con una base fuerte, hasta la destruccin total del tejido. Al aadir cido tricloroactico al homogeneizado anterior, precipitan numerosas sustancias de peso molecular elevado, como las protenas y los cidos nucleicos, en tanto que el glucgeno contina disuelto. El glucgeno puede separarse de los monosacridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitacin con alcohol, porque los polisacridos son mucho menos solubles en alcohol acuoso que los monosacridos.

( 2003)

Stryer

et

al,

Tal y como afirma el texto del prrafo anterior, al encontrarse el glucgeno en el hgado principalmente; este al ser un conjunto de tejidos; se utilizaron los 0.5ml de KOH 60% para romper los tejidos, y al final el H2SO4cc; que es el acido fuerte que permiti la liberacin del glucgeno; la glucosa total obtenida por hidrlisis se determin mediante una reaccin enzimtica, que da lugar a un sustrato coloreado

cuya concentracin se logr medir por espectrofotometra; siendo la absorvancia de 0.21 para el ave en ayunas y 0.26 para el ave alimentada. El glucgeno acta como regulador de la glucosa sangunea, almacenndola como glucgeno durante una buena alimentacin (glucogenognesis) y liberndola por fosforolisis (glucogenlisis) durante el ayuno, ya que en esta situacin no hay absorcin intestinal. La duracin del glucgeno heptico en ayunas es de aproximadamente 24 h. A partir de este momento, la concentracin en sangre se mantiene por sntesis de glucosa a partir de sustancias distintas a los carbohidratos (gluconeognesis). En estos mecanismos de control, actan la adrenalina y el cortisol. (Nelson et al, 2000) En efecto, al encontrarse el ave en ayunas, su organismo, se vio obligado a liberar el glucgeno almacenado en el hgado, es por eso que la determinacin de glucgeno fue menor en el ave en ayunas; caso contrario al ave alimentada, que present mayor concentracin de glucgeno.

Conclusiones
Se logr determinar que en el individuo en ayunas, la determinacin del glucgeno fue de 131.25 mg/dl; lo que indica, que hubo gasto del glucgeno almacenado; en comparacin del individuo alimentado que present 162.5 mg/dl.

Referencias Bibliogrficas
Alemany M, Font S (1983): Prcticas de Bioqumica, 1 ed. Editorial Alhambra (Madrid, Espaa), pp 99-107.

Clark JM (1966): Biqumica Experimental, 1 ed. Editorial Acribia (Zaragoza, Espaa), pp 40-42. Nelson DL, Cox MM (2001): Principios de Bioqumica, 3 ed. Editorial Omega (Barcelona, Espaa), pp 304-305.

Stryer L, Berg JM, Tymoczko JL (2003): Bioqumica, 5 ed. Editorial Revert (Barcelona, Espaa), Pp577-580.