Manual Veterinrio de Colheita e Envio de Amostras

2010
Sade Pblica Veterinria
Centro Pan-Americano de Febre Aftosa

Captulo 3

AVES

Autores Antonio Guilherme Machado de Castro Renato Lus Luciano Ana Maria Iba Kanashiro Ana Lcia S. P. Cardoso Eliana Neire Castiglioni Tessari Centro Avanado de Pesquisa Tecnolgica do Agronegcio Avcola (CAPTAA) Instituto Biolgico, Descalvado, SP (APTA/SAA-SP) 144 145

Principais doenas que acometem as aves

A avicultura industrial caracteriza-se por possuir um sistema de criao intensivo, com as aves alojadas em galpes, para se obter o mximo de produtividade. Essa particularidade torna necessria a adoo de medidas de biosseguridade, visando a obter elevados ndices de produo, alm da preveno das doenas. Por essa razo imprescindvel o diagnstico e o monitoramento freqente do status sanitrio dos plantis avcolas.

As principais doenas que acometem as aves so: Salmonelose Micoplasmose Inuenza Aviria Doena de Newcastle Bronquite Infecciosa Laringotraquete Doena de Gumboro Anemia Infecciosa Colibacilose Coccidiose Clostridiose A maioria delas no ocorre isoladamente, havendo uma interao entre diversos patgenos, com a possibilidade de ocorrerem associaes simultneas entre vrias doenas, dentro de um mesmo lote, acarretando elevadas perdas econmicas.

IMPORTANTE

Em casos de suspeita de Doena de Newcastle e Inuenza Aviria de alta patogenicidade, o Servio Veterinrio Ocial no estado dever ser imediatamente noticado, sendo somente competncia do mesmo a colheita das amostras

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Material para colheita de amostras para diagnstico de doenas das aves

Frasco para remessa histopatolgico Tesoura trinchante Tesoura

Frasco com gua peptonada

Pina

Plstico Bolsa de amostras com gua peptonada Frasco coletor

Luvas

Suabe Gaze Gaze para suabe de arrasto Palitos esterilizados

Caneta

Seringa e agulha Frascos para colheita de sangue Bolsa plstica para colheita Prop
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Pipeta pasteur

Microtubos tipo Eppendorf

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Amostras para diagnstico de doenas das aves

1. Material
Sangue (para obteno de soro)

3. Como colher sangue para obteno do soro

AVES ADULTAS Veia ulnar (asa): Colocar a ave em decbito lateral, para que a colheita seja feita na veia ulnar (veia da asa). Colher o sangue usando seringa descartvel de 5 mL atravs da puno venosa; transferir para frascos de vidro ou tubo de ensaio de 10 mL, limpos e secos, sem anticoagulante. AVES DE 1 DIA Decapitao: Aps a insensibilizao do animal, com o auxlio de tesoura, proceder tcnica de seco da primeira vrtebra cervical (decapitao). Colher o sangue em frasco de vidro ou tubo de ensaio (10 mL), limpo e seco, sem anticoagulante. AVES ADULTAS E AVES DE 1 DIA Puno cardaca: Realizar a conteno da ave com a imobilizao das pernas e asas com uma das mos e puncionar no meio da regio da quilha (base do esterno), onde h um vazio, tendo o cuidado para no atingir o pulmo. Inserir a seringa com agulha no peito da ave de maneira perpendicular ao ponto de entrada e paralelo coluna vertebral, at atingir o corao. Puxar lentamente o mbolo at obter a quantidade desejada. Transferir para frascos de vidro ou tubo de ensaio de 10 mL, limpos e secos, sem anticoagulante. Aps colheita do sangue da ave atravs de puno cardaca, venosa ou outros mtodos de prtica; manter o frasco ou tubo inclinado a temperatura ambiente para que o sangue coagule e libere o soro; transferir a amostra de soro para microtubo tipo Eppendorf ou outro frasco de vidro.

2. Onde colher
Aves adultas: puno cardaca ou veia ulnar (asa) Aves de 1 dia: puno cardaca ou veia jugular (decapitao)

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4. Quantidade
Sangue para obteno do soro: 4,0 mL por ave Soro: 1 mL por ave

NMERO DE AMOSTRAS

5. Recipiente
Tubo de ensaio ou frasco de vidro (para sangue); e microtubo tipo Eppendorf (para sangue ou soro)

ELISA: mdia 25 soros/lote Soroagltinao Rpida (SAR): sma 100 soros/lote para Mycopla synoviae (MS) e Salmonella s/ pullorum (SP) e 150 ou 300 soro m para Mycoplasma gallisepticu lote legislao vigente (MG). Consultar a em caso de monitoria ocial

NOTA

Para se obter um soro sem hemlise, ao transferir o sangue da seringa para o tubo, deve-se faz-lo cuidadosamente, deixando que o sangue escorra pela parede lateral do tubo . Nunca esgotar o san gue de forma brusca e nem no fund o do tubo. Evitar mexer os frascos ou tubos enquanto o sangue est em descanso para separar o soro .

6. Exames
Sorolgico para pesquisa de anticorpos

a) Soroaglutinao rpida (SAR)

hemaglutinao (HI), ELISA, Soroneutralizao, Soroaglutinao lenta e Imunodifuso em Gel de gar

b) Teste de inibio da

a) Refrigerada

7. Temperatura da amostra para transporte

b1) Refrigerada
(+ 2C a + 8C);

(+ 2C a + 8C). Nunca congelar

ou

b2) Congelada

(- 20C)

a) At 24 horas
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8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

b1) At 24 horas; ou b2) At 48 horas

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1. Material
rgos

2. O que colher
Traquia, pulmo, orofaringe, corao, fgado, bao, rim, bursa, crebro, cerebelo, nervo citico, proventrculo, moela, pncreas, tonsilas cecais, duodeno e ceco.

fgado bao

3. Como colher
Utilizar luvas. Com o auxlio de uma tesoura de destrinchar aves, realizar a abertura da cavidade abdominal e torcica, em ave recm sacricada; Colher cuidadosamente rgos ou fragmentos de eleio, utilizando-se de tesouras e pinas esterilizadas; Cortar fragmentos com espessura mxima de 2,0 cm, dos tecidos com alteraes; Evitar encostar as mos nos rgos, mesmo com luvas, para evitar a contaminao. Agrupar os rgos em 4 conjuntos e coloc-los em recipientes separados, sendo: 1. Traquia, pulmo e orofaringe; 2. Corao, fgado, bao e rins; 3. Crebro, cerebelo e nervo citico; e 4. Proventrculo, moela, bursa, duodeno, pncreas, tonsilas NOTA ve ser cecais e ceco. 1. Traquia de a ntegra. mantid ultas Para o histopatolgico, colher 2. Em aves ad al), a fragmentos de todos os rgos ade sexu (maturid a atroa acima descritos em um nico bursa sofre um mais frasco com formol a 10%. a, sendo siolgic aves jovens. Incluir o nervo citico. evidente em
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corao

moela proventrculo duodeno

pulmo testculo rim

ceco pncreas bursa

tonsilas cecais

nervo citico

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4. Quantidade
rgos de no mnimo 5 aves/lote, sendo 3 aves com sintomas e 2 aves aparentemente sadias

a) Bacteriolgico b) Isolamento viral e biologia molecular c) Histopatolgico

O volume ideal de formol para cada recipiente cerca de 10 vezes o volume do material.
NOTA

5. Exames

Somente para mdicos veterinrios do Servio Ocial Para o diagnstico da doena de Newcastle e Inuenza Aviria, os rgos devem ser colhidos separadamente, sendo cada rgo de cada ave acondicionado em um nico recipiente.

6. Meio
a) Nenhum

a e b) Frasco coletor ou tubos tipo Falcon, agrupados

segundo descrito no item 3.

7. Recipiente

b) MEM (Meio Essencial Mnimo) com 10% de soro bovino (ou 10% de soro fetal bovino) com soluo de antibiticos (0,5X); BHI com soluo de antibiticos (0,5X); Caldo Triptose Fosfato Tamponado (TPB) com soluo de antibiticos (0,5X) c) Soluo de formol 10% (100 mL de formaldedo
a 37% e 900 mL de gua v/v)

8. Temperatura da amostra para transporte

a e b) Refrigerada (+ 2C a + 8C); c) Ambiente. Nunca congelar

9. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

a) At 24 horas; b) At 48 horas; c) Remeter no mesmo tempo que as demais

amostras. As amostras em soluo de formol 10%, mesmo no completamente xadas, podem ser enviadas ao laboratrio
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1. Material
Suabe de traquia

2. Como colher

Abrir o bico da ave, abaixar a lngua, introduzir o suabe esterilizado na traquia e esfregar em toda a circunferncia, evitando tocar o suabe nas mucosas da boca, para evitar contaminao; Passar um suabe por ave e, em seguida, cortar a extremidade do suabe que estava em contato com a mo e mergulhar o restante no frasco que contm o meio de transporte. Ateno: no momento da colheita, sempre usar luvas descartveis e abrir a embalagem com o suabe pelo lado que est o cabo, evitando tocar no algodo.

Ao passar o suabe na traquia, devese tomar o cuidado de vericar se ele est sendo introduzido no local correto. Muitas vezes, pode-se confundir a traquia com o esfago. A traquia localiza-se na poro VENTRAL. Uma dica tracionar um pouco a lngua da ave, de modo que a traquia seja projetada em direo cavidade bucal, podendo ento ser visualizada.

NOTA

a) Isolamento viral

b) Isolamento bacteriolgico
ou tcnica de biologia molecular para Micoplasma

3. Exames

lote, agrupando 10 suabes em cada recipiente

a) Suabes de 30 aves/

b) Suabes de 20 aves/lote, agrupados em um recipiente

4. Quantidade

a) Soluo salina adicionada

de antimicrobianos especcos

b) Caldo Frey

5. Meio

esfago traquia

6. Recipiente
a e b) Bolsa de amostra ou frasco com tampa rosca

7. Temperatura da amostra para transporte

a) Refrigerada
(+ 2C a + 8C)

b1) Refrigerada (+ 2C a + 8C); ou b2) Congelada (- 20C)

a) At 24 horas

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

b1) At 24 horas; ou b2) se demorar mais de 24 horas
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1. Material
Suabe de cloaca

a) Bacteriolgico
para salmonela

b) Isolamento viral, tcnica

3. Exames

de biologia molecular

2. Como colher
Colher amostra com suabe estril, realizando movimentos circulares no orifcio da cloaca. Passar o suabe na ave; em seguida, cortar a extremidade do suabe que estava em contato com a mo e mergulhar o restante no frasco que contm o meio para transporte. Ateno: no momento da colheita, sempre usar luvas descartveis e abrir a embalagem do suabe pelo lado onde ca o cabo, evitando tocar no algodo.

a) 50 suabes, sendo um suabe para cada 2 aves, total de 100 aves por ncleo. Todos os suabes agrupados em um mesmo recipiente
NOTA

b) 30 suabes, sendo um suabe por ave, total de 30 aves por ncleo. Agrupar cada 10 suabes em um mesmo recipiente (3 recipientes/ncleo)

4. Quantidade

vigente legislao Consultar a onitoria ocial em em caso d

5. Meio

a) gua peptonada

tamponada esterilizada

b) Soluo salina adicionada de antimicrobianos especcos

6. Recipiente
Bolsa de amostra ou frasco esterilizado

7. Temperatura da amostra para transporte

a) Refrigerada
(+ 2C a + 8C)

b1) Refrigerada (+ 2C a + 8C); ou b2) Congelada (- 20C)

a) At 24 horas

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

b1) At 24 horas; ou b2) se demorar mais de 24 horas

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1. Material
Suabe de arrasto a) gaze ou esponja esterilizada b) prop esterilizado
NOTA

4. Quantidade
2 suabes por galpo do ncleo

2. Onde colher
Galpo

Gaze ou esponja esterelizada

Caso o laboratrio fornea um palito estril, utiliz-lo tro para colocar o suabe den do recipiente.

5. Meio

3. Como colher
a) Usando luvas
descartveis, abrir a embalagem do suabe de arrasto dentro do galpo a ser amostrado. Segurar o suabe pelo cordo e caminhar pelo galpo, arrastando-o sobre a cama, principalmente entre comedouros e bebedouros. Colocar o suabe dentro do recipiente com o meio para transporte, cortando fora o cordo.
Prop esterelizado

gua peptonada tamponada esterilizada

6. Recipiente
Bolsa de amostra ou frasco esterilizado

7. Temperatura da amostra para transporte

Refrigerada (+2C a +8C)

b) Calar o prop esterilizado

8. Tempo crtico

sobre a bota e caminhar pelo galpo, principalmente entre comedouros e bebedouros. Retirar o prop utlizando luvas descartveis e colocar dentro do recipiente com o meio para conservao.

para chegada ao laboratrio

At 24 horas

9. Exame
Bacteriolgico para Salmonela
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1. Material
Fundo de caixa

4. Quantidade
a) 1 suabe/2 caixas. Mnimo
de 4 caixas analisadas/lote, agrupando todos os suabes do lote num mesmo recipiente
NOTA

2. Onde colher
Caixa de transporte de aves de 1 dia

b) Fundos de no mnimo 4 caixas, agrupados por lote em um mesmo recipiente

3. Como colher
a) Suabe: usando luvas
descartveis, esfregar gaze esterilizada por toda a superfcie interna da caixa, preferencialmente sobre fezes, e coloc-la depois em recipiente adequado.

gente legislao vi Consultar a itoria ocial mon em caso de

b) Fundo da caixa: usando luvas descartveis, dobrar o fundo das caixas, de modo que o lado sujo com fezes que para dentro, e coloc-lo depois em recipiente adequado

a) gua peptonada

tamponada esterilizada

b) Nenhum

5. Meio

6. Recipiente
a) Bolsa de
amostra ou frasco esterilizado plsticos resistentes b

b) Sacos

7. Temperatura da amostra para transporte

a) Refrigerada
(+ 2C a + 8C)

b ) Ambiente

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

a e b) At 24 horas

Bacteriolgico e Micolgico
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9. Exames

Papel ou cepilho que forra a caixa de transporte de aves de 1 dia

1. Material

5. Meio
Nenhum

2. Onde colher
Caixa de transporte de aves de 1 dia

6. Recipiente
Sacos plsticos resistentes

3. Como colher
Usando luvas descartveis, transferir o material que forra a caixa para sacos plsticos resistentes

4. Quantidade

Forro de caixa de transporte de no mnimo 4 caixas, agrupados por lote em um mesmo recipiente

Consultar a legislao vigente em caso de monitoria ocial

NOTA

7. Temperatura da amostra para transporte

Ambiente

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

At 24 horas

9. Exames
Bacteriolgico e Micolgico
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1. Material
Fezes frescas

a) Bacteriolgico

b) Isolamento viral, tcnica

4. Exames

de biologia molecular

2. Onde colher
No Galpo

a) 1 pool de 100 amostras/ncleo, colocadas num mesmo recipiente

NOTA

5. Quantidade

b) 50 a 100g/lote

3. Como colher
Usando luvas descartveis e com auxlio de esptula esterilizada, recolher as amostras de fezes frescas de vrios pontos do galpo, coloc-las em uma mesma embalagem por lote

Consultar a legislao vigente em caso de monitoria ocial

6. Meio

a) Nenhum

b) Soluo salina adicionada de

antimicrobianos especcos

7. Recipiente
a) Sacos plsticos
resistentes

b) Bolsa de amostra ou
frasco esterilizado

8. Temperatura da amostra para transporte

a e b) Refrigerada (+2C a +8C)

9. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

a e b) At 24 horas
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1. Material
Mecnio

4. Quantidade
50 mL/ncleo de reprodutoras no vacinadas contra Salmonella enteritidis Mecnio de 200 pintos/ ncleo de reprodutoras vacinadas contra Salmonella enteritidis, apenas no primeiro nascimento
NOTA

2. Onde colher
No incubatrio

3. Como colher
Usando luvas descartveis, colher o mecnio diretamente em recipiente apropriado depois de a ave excret-lo sob leve presso

Consultar a legislao vigente em caso de monitoria ocial

5. Meio
Nenhum

6. Recipiente
Bolsa de amostra ou frasco esterilizado

7. Temperatura da amostra para transporte

Refrigerada (+2C a +8C)

8. Tempo crtico

para chegada ao laboratrio

At 24 horas

9. Exame
Bacteriolgico para Salmonela
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1. Material
Ovos bicados

4. Quantidade
20 ovos/ncleo de reprodutoras no vacinadas contra Salmonella enteritidis 150 ovos do primeiro nascimento/ncleo de reprodutoras vacinadas contra Salmonella enteritidis

2. Onde colher
No incubatrio

3. Como colher
Usando luvas descartveis, retirar do nascedouro ovos bicados no nascidos

5. Meio
Nenhum

6. Recipiente
Embalagens plsticas resistentes

a1) Refrigerada
(+2C a +8C);

7. Temperatura da amostra para transporte

ou

a2) Congelada (-20C)

a1) At 24 horas;

8. Tempo crtico para chegada ao laboratrio

ou a2) Acima de 24 horas, at a
entrega no laboratrio

9. Exames
Bacteriolgico
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