Acta Scientiae Veterinariae. 38(Supl 1): s255-s268, 2010.

ISSN 1678-0345 (Print) ISSN 1679-9216 (Online)

Importncia dos vrus nas gastroenterites em sunos Importance of viral agents in swine gastroenteric disorderes
Suelen Osmarina Paesi1

I. ROTAVRUS
1.1 Estrutura 1.2 Classificao 1.3 Transmisso 1.4 Patogenia 1.5 Genotipagem 1.6 Diagnstico 1.7 Preveno e controle

II. NOROVRUS
2.1 Estrutura 2.2 Replicao 2.3 Patogenia 2.4 Classificao 2.5 Transmisso 2.6 Diagnstico 2.7 Epidemiologia 2.9 Preveno e controle

III. SAPOVRUS
3.1 Estrutura 3.2 Patogenia 3.3 Classificao 3.4 Diagnstico

IV. CONCLUSO V. REFERNCIAS

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Laboratrio de Diagnstico Molecular, Instituto de Biotecnologia, Universidade de Caxias do Sul, Caxias do Sul, Rio Grande do Sul, Brasil Endereo: Rua Ferno Dias 467, Sagrada Famlia, 95050-270 Caxias do Sul, RS, Brasil. Phone: Home: +55-54-3222 0027 Office: +55-54-3218 2670 and +55-54-3218 2149 FAX +55-54-3218 2149 Cell: +55-54-9112.0174 E-mail: sopaesi@ucs.br

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RESUMO
A diarreia em sunos pode ser atribuda a mltiplos fatores incluindo elementos intrnseco e extrnsecos e a interao. Em paralelo, os avanos zootecnolgicos de produo intensiva, diminui ainda mais a variabilidade gentica dos hospedeiros o que promove uma seleo de patgenos ainda incentivado pelo confinamento. A responsabilidade dos surtos de gastroenterites so em grande parte atribudas aos agentes virias que promovem a morbi-mortalidade dos planteis. Os rotavrus, norovrus e sapovrus, entre outros, so os mais importantes agentes etiolgicos de surtos diarreicos em animais de todas as idades. Os vrus podem ser a causa de 90% dos surtos de gastroenterite no-bacteriana e sua rpida evoluo gentica exige um acompanhamento da flutuao das estirpes circulantes. Assim, a ampliao dos conhecimentos biolgicos destes agentes relevante para nortear aes preventivas para limitar a ameaa a sade animal. Decritores: Rotavrus, Norovrus , Astrosvrus, Sapovrus, Gastroenterite, Suno.

ABSTRACT
Diarrhea in swines can be attributed to multiple factors, including intrinsic and extrinsic elements and the interaction between them. In parallel, zootechnical advances in intensive production have diminished the genetic variability of hosts, which promotes a pathogen selection that is influenced by the feedlot. The responsibility for gastroenteritis outbreaks is attributed mainly to viral agents that cause morbid-mortality of the animals. Rotaviruses, noroviruses and sapoviruses, among others, are the most important etiological agents of outbreaks in animals of all ages. Viruses can be the cause of more than 90% of nonbacterial gastroenteritis outbreaks and their rapid genetic evolution demands attention on the fluctuation of the circulating types. It is important to amplify the biological knowledge of these agents to direct preventive measures in order to limit their threats to animal health. Key-words: Rotavirus, Norovirus , Astrosvirus, Sapovirus, Gastroenteritis, Swine.

I. ROTAVRUS
Os rotavrus foram descritos pela primeira vez em 1973 na Austrlia por Bishop et al. [10], pela identificao de partculas virais em cortes histolgicos de mucosa duodenal de crianas com diarreia aguda, identificada por microscopia eletrnica. Esses vrus so classificados como gnero Rotavrus, na famlia Reoviridae e so divididos em sete espcies designadas de Rotavrus A a G [38]. Na espcie suna, o primeiro caso a ser relatado ocorreu no ano de 1975, quando, Rodger et al. [113], realizaram a primeira identificao de rotavrus em fezes de suno. No Brasil, a primeira deteco de rotavrus foi descrita em humanos na literatura em 1977 em Belm do Par por Linhares et al. [84], pelo exame de amostras de fezes de crianas admitidas em um hospital pblico. Desde ento, uma srie de estudos tm demonstrado a importncia deste vrus com um agente causador de diarreia em humanos e animais [11,20,108,110]. 1.1 Estrutura Os rotavrus so partculas de simetria icosadrica no envelopadas, medindo cerca 100 nm de dimetro apresentando trs camadas proteicas, denominadas como capsdeo externo, capsdeo interno e core, que circundam o genoma do vrus [33]. Apresentam seu material gentico segmentado constitudo por onze segmentos de RNA fita dupla (dsRNA), sendo que o tamanho dos segmentos genmicos varia entre 3302 pares de base (pb) para o maior e o menor com 667 pb [35]. Cada fragmento do RNA viral codifica para uma das seis protenas estruturais as chamadas VP (Viral Protein) que so denominadas (VP1, VP2, VP3, VP6, VP4 e VP7), alm das protenas VP5* e VP8* oriundas da clivagem da protena VP4, e seis protenas no estruturais NSP (non structural proteins) (NSP1, NSP2, NSP3, NSP4, NSP5 e NSP6) no encontradas nas partculas virais e sintetizadas nas clulas infectadas, tendo como exceo as protenas NSP5 e NSP6 que so codificadas pela regio de sobreposio do segmento onze [33]. 1.2 Classificao Com base na variao antignica da protena VP6, os rotavrus so classificados em 7 grupos de A a G, que apresentam subdivises em subgrupos e sorotipos/gentipos. O grupo A pode ainda ser classificado em quatro subgrupos; I, II, I +II e no-I no-II [33,62,79]. As variaes para sorotipos/gentipos so determinadas pelas protenas

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estruturais VP4 e VP7 do capsdeo externo ou seus respectivos genes [33]. A protena VP7 define os chamados sorotipo/gentipo G, denominada assim por ser uma glicoprotena. Para glicoprotena VP7, a nomenclatura de classificao sempre G, independentemente de sorotipo e gentipo. J a VP4 classifica os rotavrus do grupo A em sorotipos/gentipos P, assim denominada por ser sensvel a proteases [33]. Utilizando mtodos sorolgicos tm sido identificados os sorotipos P e por mtodos moleculares identificam-se os gentipos P, os quais nem sempre so coincidentes [33]. A nomenclatura dos sorotipos e gentipos P utiliza letra P seguida de nmero quando se referir a sorotipo e com nmero dentro do colchete quando se referir a gentipo. Em relao a VP4 12 sorotipos e 27 gentipos P foram isolados de humanos e animais, embora pelo menos os quatro tipos (P1[8], P1[4], P2[6] e P8[11]) ocorram mais em humanos e P[6] e P[7] so gentipos mais comuns em sunos [33,47,88]. Os rotavrus tambm tm sido classificados de acordo com o peso molecular e velocidade de migrao de cada segmento genmico atravs da tcnica de eletroforese em gel de poliacrilamida (EGPA), apresentando um perfil eletrofortico tpico para este vrus [50]. Os padres de migrao das bandas dez e onze no gel de poliacrilamida foram definidos para os rotavrus do grupo A para determinar a classificao de trs perfis de migrao: longo, onde o segmento dez e onze tem uma migrao mais rpida, curto, ao qual o segmento onze apresenta migrao mais lenta; ficando posicionado antes do dez e o super-curto, onde os segmentos 10 e 11 ficam muito prximos um dos outros o que dificulta a sua visualizao [29,104]. Quando no observado o perfil de migrao tpico dos rotavrus do grupo A, a cepa que est sendo estudada pode pertencer a outro grupo de rotavrus, a uma cepa de rotavrus avirio ou ento, a uma cepa de rotavrus que sofreu um rearranjo entre os segmentos genmicos [33]. Os fenmenos de recombinaes so descritos como um processo no qual molculas de DNA so clivadas e os fragmentos religados em novas combinaes [126]. A ocorrncia deste fenmeno poderia explicar os perfis super-curto, curto e longo no segmento 11. Os rotavrus do grupo A podem ainda sofrer uma reestruturao, no qual h troca de segmentos gnicos entre cepas diferentes que infectam uma mesma clula ocorre durante uma infeco mista [33]. 1.3 Transmisso A transmisso dos rotavrus se d pela via fecal-oral e pela ingesto de alimentos ou gua contaminados pelo vrus, apesar de ter sido descrita na literatura tambm a contaminao eventual por via respiratria [31,60,83]. A veiculao atravs da gua tem sido evidenciada durante todas as estaes, porm com uma maior frequncia durante o inverno, resultado da ingesto de gua contaminada por descargas de esgoto [14,42,49,70,85,92,93]. O contato dos leites com a matria fecal o fator mais importante para o surgimento da infeco e para a sua difuso na granja. Tanto animais domsticos, roedores e tambm o homem podem ser portadores e atuar como fontes de transmisso do vrus [120]. Durante o perodo de infeco ocorre uma elevada excreo de partculas virais nas fezes chegando a um trilho de partculas/ml de fezes, e a carga infectante para que ocorra a transmisso do rotavrus de uma a 100 partculas virais, o que demonstra a elevada infectividade deste vrus [130,136]. Alm disso, os vrions so resistentes a inativao fsica e promovem altas taxas de infeces nosocomiais o que reforam a contaminao ambiental como uma importante fonte de infeco [3,122]. Os rotavrus possuem tropismo celular por entercitos maduros das vilosidades do intestino delgado, particularmente da mucosa do jejuno [8]. A entrada na clula hospedeira envolve as etapas do reconhecimento de receptores e co-receptores celulares e tambm a clivagem proteoltica da protena viral [94]. A ligao do rotavrus clula determinada pela protena VP4, aps a clivagem pela tripsina pancretica em VP5* e VP8* [86]. 1.4 Patogenia Ao infectar entercitos maduros nas pores mdias e altas das vilosidades do intestino delgado de animais e humanos, os rotavrus causam diarreia aquosa e abundante, ocorrendo morte e descamao destas clulas, que so substitudas por clulas imaturas que possuem capacidade de absoro reduzida [129]. Durante a ocorrncia da diarreia acaba ocorrendo uma diminuio na digesto de acares e na absoro de sais minerais e gua, aumentando a gravidade da doena [70]. Outro fator importante que est relacionado gravidade da infeco pelo rotavrus a presena da protena no estrutural NSP4 que possui uma atividade semelhante enterotoxinas bacterianas. Ela interage provavelmente na mediao da diarreia, afetando locais do intestino ainda no infectados pelo vrus que resulta na alterao da permeabilidade celular [111]. Outro mecanismo que tambm usado para explicar a secreo de fludos e eletrlitos que ocorrem durante a infeco est baseada na capacidade de ativar o sistema nervoso entrico no qual a presena do vrus ou a ao de NSP4 levam as clulas infectadas a liberar citocinas, prostaglandinas e xido ntrico que ativam este sistema que atua aumentando a secreo [87]. A ligao

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de NSP4 perturba a via de transduo de sinais promovendo uma alterao do retculo endoplasmtico rugoso (RER), que desencadeia a liberao de ons Ca2+ do RER para o citoplasma, acarretando a ativao de enzimas intracelulares, que acarreta a ruptura do citoesqueleto das vilosidades [68]. Ela causa ainda a diminuio da sntese de enzimas digestivas pelas clulas apicais que acarretam a uma baixa na sntese de dissacardeos que tambm promovem a inibio do transporte de ons Na+ e de outros solutos, que contribuem para a reduo da capacidade de absoro do epitlio [96,111]. Em sunos, a ocorrncia das leses macroscpicas associadas infeco pelo rotavrus tem sido relatada como o adelgamento de parede do intestino, e as leses microscpicas incluem o encurtamento e atrofia das vilosidades intestinais ocorrendo converso do epitlio normal em epitlio cuboidal. Os rotavrus de sunos tm mostrado diferir dos rotavrus bovinos, at certo grau, na habilidade de causar lees histopatolgicas [25]. As alteraes morfolgicas resultantes da ao do rotavrus se traduzem por metaplasia epitelial das vilosidades, hiperplasia das criptas, rarefao das microvilosiades e moderada infiltrao mononuclear da lmina prpria e presena de microvilosidades esparsas e irregulares [10,12,97]. 1.5 Genotipagem A diversidade genotpica de cada vrus tem grande importncia na resposta imunolgica intrncica ou produzida pela vacina. E, a flutuante circulao de gentipos de rotavrus em diferentes continentes podem influir sobre a estratgia de vacinao. A anlise atravs de PCR (polymerase chain reaction reao em cadeia pela polimerase), sequenciamento, ensaios de neutralizao e hibridizao permitiu identificar at o momento 15 sorotipos/ gentipos G e 28 P, dez destes G isolados em humanos com predominncia de G1-G4, e para sunos os mais comuns isolados foram G3, G4, G5 e G11 [33,55,57]. O predomnio de determinados gentipos podem alterar-se com o tempo e alguns rotavrus podem ressurgir nas populaes. Estes vrus so ditos emergentes pois j foram descritos anteriormente. Em paralelo a recombinao de fragmentos de diferentes vrus podem dar origem a vrus novos. Em amostras humanas os gentipos mais encontrados so G1, G4, G8, G9 e G12 e em animais so G5, G6, G10 e G11.. Em sunos os gentipos mais frequentemente encontrados so G5 e G11 e G6. J G6, G8, G10 e G15 so relacionados gastroenterites em bovinos enquanto G13 e G14 foram identificados exclusivamente em equinos e o G7 somente em amostras de rotavrus de aves [99]. No Brasil, estudos de caracterizao de rotavrus em amostras sunas mostram a presena de G5, G6, G10 e misturas como G5 e G10. No so raros os casos em que gentipos humanos so identificados em amostras suna e viceversa como no estudo de caracterizao molecular de rotavirus em sunos no Paran e so Paulo com amostras G3, G4 G5 e o vrus emergente G9 [110]. Alm dos rotavrus do grupo A, outros rotavirus j foram identificados em humano e em animais [127]. Recentemente Mdici et al, [91] descreveram pela primeira vez rotavrus do grupo B identificado como agente causador de diarreia em suno no Brasil. O rotavirus do grupo C tambm foi identificado produzindo gastroenterite em todas as idades em humano e suno na sia, nos Estados Unidos e Europa [75]. 1.6 Diagnstico As rotaviroses se caracterizam por apresentar uma grande quantidade de partculas virais nas fezes o que permitiu o desenvolvimento vrios mtodos de deteco, dentre eles a primeira tcnica a ser utilizada foi a microscopia eletrnica que tem sido usada para a identificao direta do vrus nas fezes, porm ela requerida para resolver discrepncias de resultados obtidos por outras tcnicas, j que permite a deteco do vrus em 80% a 90% das amostras positivas [10,15,38,81]. Entretanto, sua utilizao torna-se invivel quando se trata de um grande nmero de amostras e tambm os custos elevados do equipamento e a necessidade de pessoal treinado para a leitura so fatores que limitam o uso desta tcnica [30]. A imunomicroscopia eletrnica que utiliza anticorpos para agregao das partculas virais possui as mesmas caractersticas da microscopia eletrnica, mas tem uma maior especificidade por utilizar anticorpos especficos anti rotavrus. Porm, a sua utilizao questionada porque a morfologia dos rotavrus caracterstica, podendo ser feita sem a utilizao de um soro imune [32,102,121]. A metodologia de escolha empregada para deteco do antgeno viral o ensaio imunoenzimtico, que detecta antgenos virais nas fezes, e disponvel comercialmente para o diagnstico de rotavrus com base na utilizao de anticorpos policlonais a utilizao de kits comerciais torna tal tcnica acessvel a laboratrios de rotina e que permite testar vrias amostras simultaneamente [30,108,140]. Outra tcnica importante no diagnstico dos rotavrus a aglutinao com partculas de ltex, envolvendo microesferas sensibilizadas com anticorpos anti rotavrus. Esta metodologia tem por prncipio a deteco de antgenos virais nas fezes, possudo uma sensibilidade compatvel a tcnica de ensaio imunoenzimtico (EIE) apresentando resultados rpidos e por este motivo recomendado para o uso de clnico

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[16,43,107]. A tcnica de eletroforese em gel de polacrilamida (EGPA) configura-se como recurso para a deteco do genoma viral apresentando sensibilidade e especificidade elevadas, que possibilitam a deteco de perfis genmicos, mesmo daqueles rotavrus atpicos (B,C,D,E e F) [123]. Com o emprego da biologia molecular a tcnica de Reao em Cadeia pela Polimerase com Transcrio Reversa (RT-PCR) fundamentada na amplificao enzimtica dos genes 7, 8 ou 9 (tipo G) e 4 (tipo P), utilizando iniciadores consensuais especficos apresentando altas sensibilidade e especificidade [26,45,51]. O desenvolvimento da tcnica de RT-PCR em tempo real permitiu uma variao desta tcnica que se apresenta mais sensvel e permite quantificar a carga viral durante uma infeco [69]. Com a utilizao do sequenciamento genmico, possvel o estudo evolutivo dos rotavrus circulantes em cada regio, contribuindo e ampliando dados epidemiolgicos sobre este vrus completando e certificando resultados obtidos por outras tcnicas [1,44,89]. Os rotavrus tambm podem ser identificados atravs do isolamento em cultura com a utilizao de linhagem MA104 (originrias de rim de macaco) e CaCo-2 (originrias de clulas de carcinoma de crvice uterina). Entretanto, a propagao do vrus muito lenta limitando-se investigao cientfica [71,119,135,141]. 1.7 Preveno e controle A vacina trplice PORCILIS 2*4*3 produzida pela empresa (Intervet/Schering-Plough Animal Health) foi desenvolvida para proteger leites contra os principais agentes causadores de diarreia. Ela formada pelas fmbrias da E. coli K88, K99, 987P F41, Toxoide do C. perfringens tipo C e sorotipos do grupo A de Rotavrus (Vivos liofilizados) , G5 e G4, sendo indicada para auxiliar no controle da Colibacilose Neonatal, causada pelas cepas ETEC da E. coli, da Enterotoxemia causada pelo C. perfringens tipo C e da Rotavirose causada pelos Rotavrus G5 (A1) e G4 (A2) [65]. Devido diversidade antignica dos rotavrus e a possibilidade de ocorrer mutaes em seu genoma, muito importante se fazer um monitoramento das cepas circulantes para que se possa implantar e desenvolver novas vacinas e ainda estabelecer mudanas importantes no padro epidemiolgico deste vrus [17,46,115].

II. NOROVRUS
O gnero Norovrus so calicivrus pertencentes famlia Caliciviridae que juntamente com o gnero Saporovrus infectam humanos e animais. A famlia apresenta ainda dois gneros Vesivrus e Lagovrus que infectam outros animais [53]. Em 1968, ocorreu um surto de gastroenterite aguda entre estudantes e professores em uma escola em Norwalk, Ohio, EUA [2]. A doena foi caracterizada por nusea e vmito em mais de 90% e diarreia em 38% dos indivduos afetados. A durao da doena foi de 12 a 24 horas. Estudos realizados por microscopia eletrnica sugeriram que o agente causal da doena era um vrus pequeno, com dimetro menor que 36 nm, no envelopado e relativamente estvel ao calor [13]. Recentemente um novo nome foi proposto para o gnero no qual se inclui o vrus Norwalk, sendo aprovado em 2002 pelo International Committee on the Taxonomy of Viruses (ICTV) (Vrus databases online) [41], e os vrus previamente chamados de Norwalk-like vrus ou SRSVs passaram a fazer parte do gnero Norovrus [27]. O primeiro relato da deteco de calicivrus em humanos no Brasil, ocorreu em 1990 por Kisielius et al. [76], atravs da tcnica de microscopia eletrnica direta em amostras fecais de pacientes com quadro de gastroenterites enviadas ao Instituto Adolfo Lutz em So Paulo, no perodo de 1987 a 1990. 2.1 Estrutura Os norovrus so partculas pequenas, no envelopadas, compostas por um capsdeo proteico constitudo por 90 dmeros de uma protena estrutural principal denominada de protena viral 1 (VP1), que se polimerizam formando uma estrutura tridimensional de simetria icosadrica. Apresentam um dimetro variado de 27 a 40nm, e uma fita nica de RNA de aproximadamente 7,6Kb. O nome calicivrus derivado do latim calix, que significa clice e refere-se a depresses em forma de clice, visveis na superfcie do vrus, ao microscpio eletrnico [5]. A nica fita de RNA presente no genoma viral dos norovrus contm trs regies de leitura denominadas ORF (open reading frame): ORF1, ORF2 e ORF3 [48]. A primeira ORF na extremidade 5' representa aproximadamente 60% do genoma viral e codifica uma poliprotena de 1789 aminocidos, com peso molecular de 193,5 KDa, codificando um precursor de protenas no estruturais, envolvidas na transcrio e replicao viral [9]. A ORF2 codifica uma protena de 530 aminocidos, com peso molecular de 56,6 KDa, que constitui a maior protena do cpside, denominada VP1 [48]. Na extremidade 3', encontra-se a ORF3 que codifica uma protena pequena de 212 aminocidos, com peso molecular de 22,5 KDa, embora sua funo continue desconhecida bem provvel que seja a menor protena estrutural do capsdeo, conhecida como protena viral 2 (VP2), que interage com o RNA genmico quando ocorre a formao do vrion [48].

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2.2 Replicao Um sistema de cultivo celular em norovrus ainda no foi descrito; portanto, a estratgia de replicao desses vrus continua desconhecida. A replicao do norovrus ocorre no citoplasma das clulas infectadas e a principal caracterstica dos calicivrus em animais a produo de pelo menos uma espcie principal de RNA subgenmico pequeno, que abrange a extremidade 3' do genoma no gene do cpside [95].Tambm tem sido mostrados atravs dos calicivrus animais que o RNA subgenmico empacotado na partcula viral. Alm disso, o RNA empacotado separadamente do virion contendo o genoma, visto que ambos podem ser separados por um gradiente de centrifugao [124]. 2.3 Patogenia Os norovrus causam cerca de 90% das gastroenterites epidmicas no bacterianas no mundo inteiro, em humanos, mas a patogenia das infeces por norovrus ainda pouco entendida, uma vez que esses vrus no se multiplicam em um sistema celular e no existe um modelo de animal [73]. A limitao dos norovrus pode ser devido a uma restrio em algum passo no ciclo de replicao do vrus, tais como penetrao da partcula viral aps ligao ao receptor celular, desnudamento da partcula viral necessrio para liberao do RNA viral para o citoplasma, ou um passo mais tardio envolvido na replicao do genoma ou na montagem da partcula viral [4]. A transmisso dos norovrus ocorre atravs da via fecal-oral [70], e o vrus consegue atravessar o estmago por ser estvel acidez [21]. Estudos realizados com voluntrios saudveis infectados com o norovrus revelaram que a infeco primria ocorre na poro proximal do intestino delgado com expanso das criptas e encurtamento das microvilosidades [137]. Segundo Greenberg & Matsui [56] a diarreia causada pelos calicivrus humanos semelhante s infeces causadas por rotavrus. Os entercitos maduros sofrem a infeco e posteriormente se descamam gerando uma m absoro de nutrientes levando a uma perda de lquidos por parte da mucosa devido a uma diarreia osmtica. O local de replicao do norovrus ainda no foi detectado por observao do vrus ou antgeno viral em clulas intestinais, mas o vrus liberado nas fezes e tem sido detectado em vmito [70]. Hutson et al. [64] descreveram que em intestino de humanos, a capacidade de replicao dos norovrus dependente tanto das caractersticas de desenvolvimento e diferenciao nica dos receptores celulares quanto da exclusividade da interao vrus-receptor. 2.4 Classificao O esquema de classificao morfolgica em que os calicivrus tpicos esto diferenciados tem sido extremamente til para analisar amostras fecais de pacientes com gastroenterites por microscopia eletrnica [22]. Entretanto, a classificao final dos calicivrus humanos requereu clonagem de genoma viral, porque no existe um sistema de cultura de clulas ou um modelo animal vivel para esses vrus [131]. Assim, em 1990, o genoma do norovrus foi clonado e sequenciado e, apesar da falta de caractersticas na superfcie da estrutura, esses vrus foram classificados dentro da famlia Caliciviridae com base na organizao do seu genoma [66]. Norovrus tm grande diversidade gentica e a anlise de protenas do capsdeo dividiram esse grupo 29 gentipos distribudos em cinco genogrupos (GI a GV). Os gentipos mais frequentes em amostras humanas so GI e GII. O genogrupo GI inclui oito gentipos, GII emgloba 19 gentipos humano e de sunos. O GII contm gentipos de amostras bovinas, o GIV inclui um nico vrus, o GV genogrupo de norovrus de camundongo [99]. Estudos mostram que norovrus so identificados exclusivamente em sunos adultos e assintomtico sendo possivelmente reservatrio biolgico do vrus. Recentemente, foi identificado em sunos GII /11, GII /18 e GII /19 na Inglaterra e GII /3 no Mxico [133]. 2.5 Transmisso A via primria de transmisso dos norovrus fecal-oral ou pela formao de aerossois aps o processo de vmito [85], embora existam indcios de transmisso aergena, a importncia dessa via no est clara [77]. Os norovrus esto presentes nas fezes e vmitos de pessoas infectadas e estima-se que pelo vmito podem ser liberadas cerca de 30 milhes de partculas virais [61]. A transmisso primria se d pela ingesto de gua e alimentos contaminados [34]. A transmisso secundria ocorre com o contato via hospedeiros, superfcies contaminadas e por manipuladores de alimentos infectados [36]. A transmisso terciria ocorre atravs de surtos causados por distribuio de alimentos em restaurantes e comedouros, onde nenhum manipulador de alimento est envolvido, sugerindo ento que o alimento foi contaminado antes da chegada na cozinha [28]. A transmisso muito eficiente em funo de certas caractersticas dos norovrus que aumentam sua habilidade de disseminar durante o surto. O vrus altamente contagioso, sendo sua dose infecciosa de 10 a 100

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partculas virais [116]. So excretadas grandes quantidades de partculas virais durante o estgio inicial da doena [77]. Os vrus so relativamente estveis no ambiente, pois so resistentes a baixas temperaturas, ao calor de at 60C, pH extremo e exposio ao cloro e outros desinfetantes comuns [125], sendo inativados a 100C. O vrus infeccioso pode ser transmitido no somente durante o perodo da doena, mas tambm durante o perodo de incubao e aps a recuperao do indivduo, com 30% dos casos excretando vrus por at trs semanas aps a infeco [77]. Assim, pessoas infectadas continuam sendo fontes de infeco aps recuperao da doena. 2.6 Diagnstico As manifestaes clnicas da doena, em humanos, causada pelo norovrus no so suficientes para permitir o diagnstico, porm, podem ser aceitas quando em caso de surto de gastroenterite, obedecendo alguns critrios, como: ausncia de patgenos bacterianos e parasitrios; vmito em mais de 50% dos casos; durao da doena de 12 a 60 horas e um perodo de incubao de 24 a 48 horas [72]. A microscopia eletrnica um teste muito utilizado para examinar a presena de norovrus, porm, essa tcnica no permite a diferenciao de cepas de norovrus [54]. Kits comerciais do tipo ELISA, detectam o antgeno de norovrus em amostras de fezes, contudo ainda no possuem todas as caractersticas requeridas para substituir o mtodo de RT-PCR [19]. A tcnica de RTPCR foi estabelecida por ser mais sensvel do que a microscopia eletrnica para a deteco dos norovrus em amostras de fezes, pois possibilita a identificao do vrus, mesmo que as amostras apresentem um nmero pequeno de partculas virais [109] e capaz de detectar o vrus semanas aps o desaparecimento dos sintomas clnicos [138]. Uma variao na PCR, do tipo nested RT-PCR, tem sido usada para aumentar a sensibilidade nessas amostras. Assim, esta tcnica pode ser aplicada em amostras ambientais, gua e alimentos [52]. O sucesso da tcnica de RT-PCR depende da escolha dos primers, devido diversidade gentica entre cepas circulantes de norovrus [67]. Outros mtodos para confirmao dos resultados obtidos por RT-PCR so os testes de hibridizao onde uma sonda vrus-especfica marcada hibridizada com o produto de PCR. Uma aplicao desse princpio de hibridizao a reverse line blot (RLB), um mtodo descrito por Vinj et al. [131] como rpido, barato e simples para a deteco e genotipagem simultneas de norovrus. Hohne & Schreier [63] utilizaram a tcnica de Real Time RTPCR Multiplex para deteco simultnea e quantificao de norovrus do GI e GII. O mtodo se mostrou rpido, sensvel e um custo eficaz para deteco de infeco por norovrus em surtos e casos espordicos e pode ser aplicado tambm para amostras de gua e alimentos. O uso de mtodos moleculares aumentou significativamente o reconhecimento dos norovrus como causa de gastroenterites associadas a surtos e casos espordicos, e esses mtodos tm fornecido novas informaes acerca da epidemiologia desses vrus. 2.7 Epidemiologia Os norovrus so considerados como o agente etiolgico viral mais comum de gastroenterites epidmicas ocorridas a partir de gua e alimentos contaminados [18]. A cada ano, aproximadamente 23 milhes de casos de gastroenterites causadas por norovrus ocorrem nos EUA [125]. O potencial de transmisso de origem alimentar da doena causada pelos norovrus foi primeiramente reconhecido em um grande surto de gastroenterite que ocorreu na Austrlia em junho de 1978, afetando no mnimo 2.000 pessoas [100]. O alimento implicado nesse surto, ostras, bem como outros frutos do mar, foram subsequentemente reconhecidos como via de transmisso por norovrus e so implicados em vrios surtos no mundo inteiro [58,82,98,103,118,128]. Alm de frutos do mar, surtos associados com outros alimentos tambm foram relatados, como alimentos congelados [78,80]. Segundo Koopmans & Duizer [77] o monitoramento de amostras de esgotos tem confirmado que uma grande quantidade de norovrus circula na populao geral. Recentemente, com o avano das tcnicas moleculares, estudos epidemiolgicos de casos espordicos de indivduos infectados com norovrus tm sido realizados em vrios pases. Alguns desses estudos tm sugerido tambm que os norovrus so patgenos importantes em doenas endmicas, sendo responsveis por 10-20% de todos os casos de gastroenterite endmica e que indivduos dentro de uma ampla faixa etria podem ser susceptveis a infeco [37,77,105]. 2.8 Preveno e controle Sem mtodos adequados para a preveno e controle, o desenvolvimento de uma vacina contra os norovrus pode ser a melhor preveno para doenas infecciosas causadas por esse vrus. Porm existem inmeros desafios, tais como: a existncia de mltiplos gentipos; a imunidade no est ainda definitivamente clara; o vrus no cultivvel e no existe modelo animal de laboratrio [34]. Uma vacina segura e efetiva poder reduzir a

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incidncia de gastroenterite viral endmica. Entretanto, estudos ainda so necessrios para responder algumas perguntas, como por exemplo, se necessrio proteger contra vrios sorotipos, quem poder receber a vacina e com que idade, e qual ser a proporo risco/benefcio para o desenvolvimento dessa vacina. Assim, vacinas candidatas vm sendo testadas para uso na preveno da doena causada pelos norovrus e tambm progresso vm sendo realizado para determinar a localizao e a estrutura do local de ligao entre carboidratos de superfcie celular do norovrus. Esses estudos podero ajudar no desenvolvimento de terapias para reduzir a doena e a transmisso dos norovrus [64].

III. SAPOVRUS
Outros vrus tambm esto implicados na gastroenterite em sunos como o sapovrus e coronavirus entre outros inmeros vrus ainda no confirmados em sunos. O gnero Sapovirus um grupo de vrus no envelopado de simples fita senso positiva de RNA 27 a 35 nm de dimetro e com genoma de 7,2 Kb [132]. Anteriormente foi denominado Sapporo-like virus, descrito em um surto de gastroenterite. Sua primeira descrio foi feita em um orfanato na cidade de Sapporo no Japo em outubro de 1977. 3.1 Estrutura Esses vrus apresentam-se com a configurao de estrela de seis pontas, microscopia eletrnica e pertence famlia Caliciviridae. Em seres humanos a infeco ocorre, principalmente, em crianas e a doena normalmente se manifesta como uma diarreia moderada, embora infeces assintomticas tambm possam ocorrer como em todos os vrus aqui descritos. A excreo viral pode perdurar por at 20 dias maior nos primeiros cinco dias ps-infeco [132]. O genoma organizado em duas ORFs sendo que na primeira codificada uma poliprotena cujos produtos da clivagem geram protenas no-estruturais e a protena principal do capsdeo (VP1). Essa poliprotena formada por 2.254 aminocidos que daro origem a 2C helicase, 3C-like protease, 3D RNA polimerase RNA dependente e a protena estrutural de 544 aminocidos, podendo a clivagem acontecer durante ou aps a traduo. 3.2 Patogenia Com a tcnica de RT-PCR, o sapovrus j foi detectado no Brasil [7], Coreia [74], Estados Unidos [133], Hungria [112], Japo [139] e Venezuela [90] demonstrando uma condio cosmopolita. No Brasil, o vrus foi detectado em crianas com sinais clnicos de diarreia [101]. Tambm no h um modelo experimental animal descrito para saporovrus conhecendo-se, portanto, pouco sobre as estratgias de replicao, a patogenia e a resposta imunolgica do hospedeiro. O principal aspecto para o agrupamento dos calicivrus em um determinado gnero a anlise filogentica. Com base nas caractersticas moleculares da protena principal do capsdeo, os sapovrus so classificados filogeneticamente em cinco genogrupos [7]. Embora no seja utilizado como padro, essa mesma classificao se manteve nas anlises moleculares realizadas em regies dos genes da RNA polimerase RNA dependente (RpRd), ORF2, protena principal de capsdeo e da regio 3 no-traduzida (UTR) [117]. 3.3 Classificao Os representantes de cada genogrupo compartilham aspectos comuns da organizao do genoma e o nmero de regies abertas de leitura [53]. No genogrupo I (GI) o prottipo a estirpe Sapporo/92. Esse genogrupo dividido em trs genotipos ou clusters, e as estirpes, embora com caractersticas filogenticas bastante semelhantes, induzem respostas imunolgicas distintas. A organizao do genoma ocorre em duas ORFs, sendo que na primeira so codifcadas as protenas no-estruturais e a VP1 e na segunda a protena estrutural VP2. Assim como nos genogrupos IV e V, no GI h uma terceira ORF sobreposta regio 5 do gene da protena principal do capsdeo que codifca uma protena de massa molecular semelhante VP2. O genogrupo II (GII) constitudo de trs gentipos, sendo este o nico genogrupo humano em que no h a terceira ORF sobreposta [24]. As estirpes de sapovrus de origem suna so classificadas no genogrupo III (GIII) que tem como prottipo a estirpe Cowden, descrita pela primeira vez em 1980, nos Estados Unidos, por meio de microscopia eletrnica do contedo intestinal de um leito de 27 dias de idade com sintomatologia de diarreia [6,114]. Entre testes genotpicos e imunolgicos, como ocorre no sapovrus humano, a existncia de mais de um genogrupo com estirpes sunas j foi proposta. Esses genogrupos so denominados GVI e GVII e tem como prottipos as estirpes JJ681 e K7/JP, respectivamente [134,139]. Em leites experimentalmente infectados a estirpe selvagem Cowden, ou seja, no adaptada em cultivo celular, ocasionou

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quadro clnico de diarreia profusa e anorexia. A histopatologia revelou atrofia das vilosidades do epitlio do intestino delgado proximal e o vrus foi detectado por imunofuorescncia direta [39]. A estirpe Cowden do sapovrus j foi adaptada a cultivo celular tanto em clulas primrias quanto linhagens celulares contnuas originadas de rim de sunos (LLC-PK) cultivadas em meio suplementado com contedos intestinais, provenientes de leites gnobiticos no infectados [7,40,106]. Em sunos os sapovrus so identificados com agentes causadores de diarreia em todas as idades e sua prevalncia pode chegar a 62% especialmente em sunos estressados ou doentes como no estudo de trs anos, nos Estados Unidos, onde mostrou que esse vrus pode apresentar-se associado a norovrus [132]. A principal forma de contaminao fecal-oral e a veiculao hdrica ainda no est bem estabelecida. A imunidade humoral j foi detectada por at trs meses ps-infeco. Porm, ainda no est estabelecido se os anticorpos realmente conferem proteo efetiva ou se esse aumento apenas refere infeco gastrointestinal [23]. 3.4 Diagnstico O sapovrus podem ser detectados diretamente nas fezes por microscopia eletrnica, imunomicroscopia eletrnica ou RT-PCR. Com a tcnica de RT-PCR, o sapovrus j foi detectado no Brasil [7], Coreia [74], Estados Unidos [133], Hungria [112], Japo [139] e Venezuela [132]. No Brasil, apenas recentemente foi descrita a presena o sapovrus em amostras de fezes de leites incluindo estirpes que, com base em um fragmento do gene pRd viral, no apresentaram alta identidade com outras estirpes j descritas [6]. O diagnstico de vrus novos est estritamente ligada as eficincias das ferramentas de investigao, isto , grandes variabilidades genticas produzem falsos negativos nas populaes sunas com o sem quadro clnico. A idade provavelmente est mais relacionada a fatores extrnsecos, como estresse ps-desmame e queda na imunidade passiva, do que a fatores intrnsecos do animal [90,133]. Kim et al. [74] correlacionaram a infeco pelo sapovrus com a presena de sinais clnicos de diarreia, assim como ocorreu em leites experimentalmente infectados com a vrus padro Cowden [59]. Porm, nos trabalhos conduzidos em outros pases essa associao no foi observada [90,112,133,139]. A alta similaridade gentica com o vrus padro Cowden foi observada em pelo menos uma estirpe viral de cada pas em que o sapovrus foi detectado nas fezes de sunos. Contudo, nem todos os isolados apresentaram identidade suficiente para serem classificados no mesmo gentipo do prottipo Cowden, sugerindo que, assim como nos sapovrus originados de seres humanos, existam mais de um gentipo do vrus suno no GIII, ou at mais de um genogrupo de sapovrus suno [74,96,112,133,134,139].

IV. CONCLUSO
Por ser a gastrenterite suna uma patologia multifatorial, muito se tm a esclarecer do papel dos vrus nessas doenas isso agravado pelo fato que alguns agentes virais esto presentes no trato intestinal de animais assintomticos. Contudo, a ampliao destes conhecimentos tanto, favorecem a manuteno da produo zootecnolgica bem como a compreenso das transferncia de agentes etiolgicos entre espcies. Uma grande parcela dos agentes etiolgicos das gastroenterites em sunos est para ser esclarecida baseada na investigao da gastroenterite viral humana que incluem: Coronavrus, Picornavrus, Bocavrus etc. E, entre eles, os vrus descobertos mediante as tcnicas de metagenmica como Salivrus, Achivrus Klassivrus entre outros.

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