Cianobactérias e Saúde Pública

UNIVERSIDADE DE LISBOA FACULDADE DE CINCIAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA ANIMAL
CIANOBACTRIAS E SADE PBLICA NO BRASIL

Elo Takacy Prudente Brando MESTRADO EM BIOLOGIA HUMANA E AMBIENTE
2008
Cianobactrias e sade pblica no Brasil 2008
UNIVERSIDADE DE LISBOA FACULDADE DE CINCIAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA ANIMAL
CIANOBACTRIAS E SADE PBLICA NO BRASIL

ELO TAKACY PRUDENTE BRANDO
Dissertao apresentada Faculdade de Cincias da Universidade de Lisboa, para obteno do grau de Mestre em Biologia Humana e Ambiente.
Orientadores:
Professora Doutora Maria Jos Boavida - Universidade de Lisboa Professor Doutor Eduardo Mendes da Silva - Universidade Federal da Bahia-Brasil
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Agradecimentos Aqui expresso o meu reconhecimento e a minha imensa gratido a Escola Polivalente de Itapetinga, a Direc-14 (Diretoria Regional de Educao) e Secretaria da Eduao do Estado da Bahia pela concesso da licena para os meus estudos com a garantia dos proventos. A Universidade Federal da Bahia que foi a instituio de acolhimento no Brasil, onde obtive todo o apoio necessrio realizao da pesquisa e s pessoas sem as quais este trabalho no teria sido concretizado, em especial: Aos meus orientadores, Professora Doutora Maria Jos Boavida e Professor Doutor Eduardo Mendes da Silva, pela orientao, incentivo, boa vontade e por tudo que com eles pude aprender, ao meu pai Jorge Prudente, a Rosa Borges, a Jussandra de Almeida, por tudo que so para mim. Aos amigos de Lisboa que desde a minha chegada fizeram-se incondicionais aliados, o que tornou minha estadia em Portugal possvel para alm de prazerosa: Almiza, Adna, Antnio, Andra, Beto, Cu, Ceia, Eduardo, Erik, Felipe, Flvio, Jeferson, Jnior, Lu, Nil, Rinaldo, Rosrio, Srgio, Soraya, Thomaz, Z Alberto e Yolanda. Aos amigos da Faculdade de Cincias: Andr, Beatriz, Dr Lurdes, Leonor, Mafalda, Marta, Tiago e Z Caramujo, pelo imenso apoio. Aos professores do Instituto Ricardo Jorge e aos da Faculdade de Cincias, pelos ensinamentos. As Doutoras Sandra Azevedo e Gina Deberdt, ao Dr. Pedro Zagatto pela gentileza com que disponibilizaram-me as informaes que precisei, aos amigos que encontrei em Salvador e deram-me grandes contribuies: Carla, Ktia, Bira, Oberdan e Jlia, ao professor Doriedson pelas aulas de Limnologia e a Lcia Grcia por atender ao meus pedidos de socorro.
RESUMO
O Brasil o quinto pas do mundo em extenso territorial, reconhecido por concentrar a maior reserva hdrica do planeta. Aproximadamente 13% da gua doce do mundo est em territrio brasileiro. Nas ltimas dcadas, fatores como poluio, eutroficao, assoreamento, construo de barragens, controle do regime de cheias, pesca e introdues de espcies alctones i.e., no nativas, tm promovido uma crescente degradao destas guas ocasionando alm de prejuzos ambientais e econmicos, transtornos sade pblica decorrentes do aparecimento de inmeras patologias de veiculao hdrica e dentre estas, as intoxicaes por cianotoxinas, que so os metablitos secundrios sintetizados pelas cianobactrias, organismos integrantes naturais do fitoplncton, passveis de tornarem-se dominantes em condies de enriquecimento artificial do meio aqutico. As cianotoxinas podem ocasionar graves transtornos sade pblica, a exemplo das mortes de pacientes renais crnicos que eram submetidos a sesses de hemodilise ocorridas em Caruraru, uma cidade do interior do Estado de Pernambuco, alm de comprometimento ao sistema imunolgico e reaes alrgicas aos nveis dermatolgico ou respiratrio. Este trabalho resultado da reviso bibliogrfica de diversas fontes e contatos com pesquisadores que realizam investigaes sobre o tema no Brasil, com o objetivo de compilar dados sobre os eventos e instituies de pesquisa a respeito das floraes de cianobactrias potencialmente txicas em guas de abastecimento no Brasil, sob a perspectiva da sade pblica, que possam subsidiar polticas setoriais e projetos educativos com vistas reduo dos riscos.
Palavras-chave: cianobactrias, cianotoxinas, sade pblica.
ABSTRACT
Brazil is the fifth largest country in the world and has the largest frehswater reserve of the planet, representing ca.13% of the total water available for human consumption. Pollution, especially, nutrient input, river fragmentation, and the introduction of exotic fish species, in the last decades, have lead to a high level of degradation of this resource, thus causing environmental and economic consequences. Health public is al at risk, because the increase in the number of pathogens, like cyanobacteria, due to eutrophication (nutrient enrichment of the water), is conspicuous. An isolated episode alone, in Caruaru (Pe, Brazil) cause the intoxication and lead to death of dozens of renal chronic patients submitted to haemodialysis. This type of intoxication frequently causes damage on the immunologic system and allergic reactions on the skin or breath system are common. This work has compiled the literature on the subject of cyanobacterial blooms, using published and also grey literature, in order to assess the situation of some Brazilian aquatic systems regarding the presence of cyanobacteria, to provide information for management action or the establishment of educational measures to reduce risks.
Key words: cyanobacteria, cyanotoxins and public health.
NDICE
1. INTRODUO 1.1. Biologia das Cianobatrias 1.2. Cianobactrias e Sade Pblica 1.3. Condies favorveis s floraes de cianobactrias 1.4. Eutroficao 1.5. Histrico dos Estudos sobre floraesde Algas Nocivas no Brasil 2. CIANOTOXINAS 2.1. Cianobactrias, Problema Ambiental e de Sade Pblica 2.2. Legislao Brasileira 2.3. Floraes em Ecossistemas Epicontinentais no Brasil 2.4. Espcies mais frequentes no Brasil 3. METODOLOGIA UTILIZADA NAS INVESTIGAES 3.1. Mtodo Biolgico 3.1.1. Bioensaios 3.2. Mtodos Fsico-Qumicos 3.2.1. Cromatografia Lquida de Alta Eficincia 3.3. Mtodos Bioqumicos 3.3.1. Ensaio do Imunoadsorvente Ligado Enzima 4. CIANOTOXINAS E SADE PBLICA NO BRASIL 5. MTODOS DE REMOO DE CIANOTOXINAS EM USO NO BRASIL 6. CONSIDERAES FINAIS 7. REFERNCIAS
07 07 10 11 12 13 15 20 27 33 38 43 44 44 45 45 46 46 47 53 56 58
1. INTRODUO
1.1. Biologia das Cianobactrias As cianobactrias constituem um grupo taxonmico e filogentico nico (Round, 1983). Caracterizam-se como celulares procariontes (Calijuri et al., 2006), fotoautrficos (Azevedo,1998). Embora geralmente sejam unicelulares, comum que as cianobactrias cresam em colnias grandes o suficiente para que sejam vistas (Calijuri et al., 2006; Carmichael 1994; Costa, 2003; Wetzel, 1993;) em diversas formas: plana, com a forma de uma cartela de comprimidos (Merismopedia), esfricas slidas (Gleocapsa), esfricas ocas (Coelosphaerium), cbicas (Eucapsis) ou mesmo sem uma forma definida (Microcystis). H algumas que apresentam-se sob a forma de filamentos simples, sem ramificaes (Anabaena, Nostoc e Oscillatoria), outras com ramificaes (Hapalosiphon, Stigonema e Westiella). H espcies da ordem Stigonematales que so capazes de formar talos pseudoparenquimatosos alcanando dimenses que podem ser medidas em centmetros (Gibson e Smith, 1982). Existe alguma confuso na nomenclatura destes organismos. Embora possuam uma estrutura celular procaritica tal como as bactrias, no possuem certas estruturas membranosas como a membrana celular, ou organelas como mitocndrias ou cloroplastos, complexo de Golgi, retculo endoplasmtico ou vacolos (Wetzel, 1993). Talvez por esta razo adaptam-se mais facilmente aos meios com presso osmtica elevada (Calijuri et al., 2006). As cianobactrias diferem das bactrias heterotrficas pelo fato de conterem clorofila-a, um pigmento comum s algas eucariticas e plantas vasculares. Possuem tambm um complexo de pigmentos acessrios como as ficobilinas (ficocianina, ficoeritrina e aloficocianina), que lhes conferem a capacidade de absorver mais eficientemente a luz nos mais distintos habitats e determinam sua colorao verde-azulada (Lund, 1965). Estrutural e fisiologicamente, as 7
cianobactrias so como as bactrias, no entanto funcionalmente so semelhantes s plantas aquticas (Wetzel, 1993). H nas cianobactrias estruturas que lhes so exclusivas, e.g. os heterocistos. So cluas vegetativas diferenciadas que podem ocorrer em todas as espcies filamentosas com exceo da famlia Oscillatoriaceae (Wetzel, 1993). A sua localizao pode ser terminal ou intercalar (Round, 1993) e so clulas que apresentam uma parede espessada (Calijuri et al., 2006). A propriedade de fixar nitrognio atmosfrico atribuda presena de um complexo enzimtico especfico de nitrogenase no citoplasma que acumula cianoficina, glicognio, lipdios e carotenides destas clulas (Carrapio, 2000). Os heterocistos estabelecem ligaes com as clulas vizinhas atravs dos poros polares que ficam obliterados quando a clula da cianobactria envelhece (Bold e Mynne, 1985). Algumas espcies de cianobactrias produzem acinetos, que so clulas diferenciadas com paredes espessas (Costa, 2003; Wetzel, 1993) e toleram condies extremas (Round,1983) sendo consideradas clulas de resistncia que se desenvolvem quando as condies do meio so desfavorveis e acumulam reservas de protenas (Calijuri et al., 2006) garantindo sua sobrevivncia (Costa, 2003). Adicionalmente, os acinetos formam pseudo-vacolos ou vesculas de gs chamadas aertopos que possibilitam sua flutuao na coluna dgua (Calijuri et al., 2006). Quando o ambiente favorvel, os acinetos germinam, produzindo um tricoma ou ento hormognios (Wetzel, 1993) que so filamentos de poucas clulas (5-15) (Round,1983), os hormognios crescem e do origem a novas colnias filamentosas. Considera-se este processo um tipo de reproduo assexuada (Calijuri et al., 2006). A reproduo sexuada est ausente nas cianobactrias (Round, 1983) as quais se reproduzem assexuadamente, por fisso binria ou fisso mltipla (Calijuri et al., 2006). As cianobactrias so organismos morfologicamente simples porm fisiologicamente complexos (Costa, 2003). Os processos vitais inerentes s cianobactrias requerem somente gua, dixido de carbono e luz, sendo a fotossntese o principal modo de obteno de energia para o seu metabolismo 8
(Azevedo,1998). Estima-se que as cianobactrias tenham tido origem h 3,5 bilhes de anos, o que sugerem os nanofsseis sedimentados em estromatlitos (tapetes fossilizados de procariontes) descobertos na Austrlia (Costa, 2003). Estudos paleontolgicos do perodo Pr-Cambriano ou era Proteozica, tambm chamada Era das Cianobactrias (Calijuri et al., 2006), registraram a atuao dominante das cianobactrias nos ecossistemas mais primitivos da terra, demonstrando mudanas evolutivas extremas chamadas hypobradytelic, i.e., evoluo morfolgica lenta, porm eficaz (Costa, 2003). As cinobactrias foram, provavelmente, os primeiros produtores primrios de matria orgnica a liberarem oxignio para o ambiente primitivo (Carmichael, 1994; Yoo et al., 1995) possivelmente pelo fato de realizarem fotossntese aerbica, a qual libera oxignio como co-produto da fotossntese (Costa, 2003). Este processo teria criado uma atmosfera respirvel no planeta possibilitando a evoluo de muitos outros organismos (Roenneberg e Carpenter,1993). Uma das caractersticas marcantes das cianobactrias a sua capacidade de crescimento nos ambientes mais extremos (Brock,1972), o que provavelmente se d por sua morfologia e fisiologia que empregam diversos mecanismos de adaptao (Costa, 2003) fazendo das mesmas excelentes colonizadoras ambientais com inmeras vantagens no processo elvolutivo em relao aos demais organismos fitoplanctnicos (Calijuri et al., 2006). As cianobactrias podem ser encontradas em oceanos, tanto em regies nerticas quanto pelgicas, ecossistemas de guas salobras como mangues e esturios, ambientes continentais, que sejam poludos ou no, nos rios, lagos ou fontes termais (Whitton e Potts, 2000). Sendo capazes de suportar temperaturas acima de 50C, j foram encontradas no alto de montanhas, regies polares com temperaturas negativas e at mesmo em crateras vulcnicas (Costa, 2003). Em relao s floraes, os ambientes de gua doce so os mais favorveis. Consideram-se as cianobactrias como organismos tpicos de guas eutrficas (Vasconcelos, 1995). Observa-se frequentemente que muitas espcies apresentam um desenvolvimento mais significativo em guas de pH neutro/alcalino (6-9), com 9
temperaturas que podem variar entre 15C e 30C e alta concentrao de nutrientes, nomeadamente nitrognio e fsforo (Yunes, 2000). Segundo
Chorus e Bartram (1999) concentraes de fsforo superiores a 10ug/L, estabilidade da coluna dgua
e populaes preexistentes contendo vesculas que permitem a flutuao das clulas constituem ambiente favorvel proliferao de cianobactrias. Este tipo de ambiente aqutico o resultado da crescente eutroficao desencadeada pelas aes humanas, como descargas de esgotos domsticos e industriais dos centros urbanos e regies de agroindstria, que tm se desenvolvido intensamente nos ltimos anos (Azevedo, 1998) e produzido alteraes negativas aos mananciais, dentre estas o aumento das floraes de cianobactrias txicas com consequncias danosas sade pblica.
1.2. Cianobactrias e Sade Pblica antigo o conhecimento de que toxinas de cianobactrias causam problemas sade humana (Carmichael, 1981; Falconer, 1996; Pizzoln, 1996). H registros de alteraes gastrointestinais do incio do sculo XX (Tisdale, 1933) quando florescimentos de Microcistis nos rios Ohio e Potomac, nos EUA, afetaram entre 5000 a 8000 pessoas que consumiram gua potvel procedente daquelas guas. O tratamento mediante precipitao, filtrao e clorao no foi suficiente para remover as toxinas (Tisdale, 1931). J foram descritos outros episdios de intoxicaes em pases como Austrlia, Inglaterra, China e frica do Sul (Falconer et al.,1994). No Brasil, tem sido confirmada a ocorrncia de cepas txicas de cianobactrias em reservatrios de abastecimento pblico, lagoas salobras e rios na maioria dos Estados e os bioensaios de toxicidade recomendados pela OMS, tm demonstrado que aproximadamente 75% das cepas isoladas apresentam-se txicas (Azevedo, 1998). Em 1988, uma epidemia de gastroenterite no recm-inaugurado reservatrio de Itaparica (Bahia) resultou na morte de 88 pessoas. Dados clnicos dos pacientes e anlises da gua apontaram para cianobactrias como responsveis (Teixeira et 10
al., 1988). Em 1996 um surto de insuficincia heptica ocorrido em pacientes renais crnicos submetidos hemodilise numa clnica na cidade de Caruaru (Pernambuco) foi o caso mais marcante no pas - dos 131 pacientes, 76 faleceram. As anlises comprovaram a presena de microcistinas e ciindrospermopsina, nos filtros de carvo ativado da clnica, no soro sanguneo e no tecido heptico dos pacientes (Carmichael et al., 2001).
1.3. Condies favorveis s floraes de cianobactrias O conhecimento das causas das floraes txicas de cianobactrias
condio essencial ao seu manejo e preveno (Yunes, 2000). No Brasil o crescimento da agricultura intensiva moderna, baseada no uso indiscriminado de fertilizantes nos ltimos 30 anos, tem feito desta atividade a principal depositria de efluentes qumicos e orgnicos sobre os corpos dgua (Martins, 2004). Por esta via so depositadas cargas substanciais de nutrientes nitrogenados e fosfatados nas guas. Sendo N-nitrato, N-amonium e P-ortofosfatos (e estas so as formas principais destes elementos utilizados na agricultura em solos adjacentes aos mananciais) os trs elementos mais determinantes ao desenvolvimento das cianobactrias (Yunes, 2002). A taxa de urbanizao que cresce rpida e desordenadamente promove um incremento significativo da descarga de esgotos no tratados (Azevedo, 1998) ou indevidamente tratados, o que leva um aporte substancial de matria orgnica aos ecossistemas aquticos, com reflexos negativos no balano de oxignio dissolvido, condio favorvel predominncia das cianobactrias (Yunes, 2002). Estes processos em larga escala so, na atualidade, as principais causas da eutroficao artificial de rios, lagos e reservatrios em muitas regies brasileiras, nomeadamente nas mais prximas aos grandes aglomerados urbanos (Azevedo, 1998).
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1.4. Eutroficao Wetzel (1993) define a eutroficao como um dos estados da sucesso dos lagos, pois com o passar do tempo os nutrientes vo se acumulando e paulatinamente vai acontecendo um desenvolvimento das populaes de fitoplncton, sendo comum que apaream floraes de algas. Quando ocorre naturalmente, este um processo gradual e lento, que pode levar muitos anos a estabelecer-se e no h nada de errado com a eutroficao em si (Boavida, 2001). O problema est na velocidade com que isto tem ocorrido nos ltimos anos, gerando uma desordem na produo de biomassa, impossibilitando que sua incorporao pelo sistema aqutico seja compatvel com o tempo da produo, causando um desequilbrio ecolgico, ao que se denomina eutroficao artificial ou cultural (Souza, 1993). O termo eutroficao artificial ou cultural utilizado para diferenciar a eutroficao que ocorre pela ao antrpica da eutroficao que ocorre pela evoluo natural dos ambientes aquticos (Rivera, 2003). A eutroficao artificial constitui-se numa forma perniciosa de degradao das guas (Azevedo 1998; Brando e Domingos, 2006; Da Silva, 2006), configurando-se como um processo que promove mudanas negativas aos ecossistemas aquticos, tais como reduo da taxa oxignio dissolvido (Boavida, 2001), diminuio da transparncia da gua, alterao das concentraes inicas, aumento da condutividade eltrica, acmulo de fsforo nos sedimentos e na coluna dgua (Debertd et al., 2004; Tundisi, 2003), mortandade de peixes e perda da biodiversidade (Azevedo, 1994; Boavida, 2001). Todas estas alteraes predispem os manaciais s elevadas taxas de desenvolvimento de macrfitas aquticas, a comunidade fitoplanctnica apresenta respostas rpidas e o mais danoso no que se refere sade humana: o aumento da incidncia das floraes de cianobactrias txicas (Azevedo et al., 1994). Em razo da eutroficao artificial, inmeros reservatrios no mundo j perderam sua capacidade de abastecimento de populaes, de manuteno da vida
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aqutica e de recreao. Alguns estudos demonstram a gravidade do problema (Vollenweider, 1976; Pinto-Coelho et al., 2005; ANA, 2005). Apesar da imensa capacidade de adaptao que tm as cianobactrias para desenvolverem-se nos mais diversos ambientes (Azevedo, 1998), nos mananciais eutroficados onde ocorrem as floraes de importncia sade pblica (Vasconcelos,1995). Uma vez que em condies naturais, sem alteraes antrpicas, as cianobactrias vivem em equilbrio como os demais grupos de algas (Deberdt et al., 2004). Algumas variveis naturais podem favorecer as floraes, e.g., temperaturas entre 15-30C, pH neutro alcalino e baixa incidncia de ventos (Da Silva, 2007). Em casos de reservatrios, o elevado tempo de residncia da gua tambm um fator predisponente (Calijuri et al., 2006). De acordo com Wetzel (1993), eutroficao um termo multifacetado, geralmente associado ao aumento da produtividade, a simplificao estrutural dos componentes biticos e a reduo da habilidade metablica que tm os organismos para adaptarem-se as alteraes impostas. Aliadas s vantagens biolgicas das cianobactrias, no meio eutroficado que esto reunidas as condies ambientais favorveis sua dominncia, destacando-se: pH elevado, alta temperatura, baixa presso de herbivoria, reduzida intensidade luminosa e altas concentraes de nitrognio e fsforo (Reynolds, 1984).
1.5. Histrico dos Estudos Sobre Floraes de Algas Nocivas no Brasil Segundo Senna (1987), at o final da dcada de 80, apenas 190 trabalhos sobre cianobactrias haviam sido publicados no Brasil. Destes, 42% descreviam taxonomia, 37%, ecologia, 16,5%, hidrobiologia, 2,5%, levantamentos bibliogrficos e somente 2%, versavam sobre fisiologia. Nenhum destes trabalhos abordou o problema de produo de toxinas por cianobactrias. O primeiro trabalho confirmando a produo de toxinas por cianobactrias isoladas no Brasil foi publicado em 1994, por Azevedo e colaboradores. O estudo descreve uma contaminao por microcistinas em guas de abastecimento, na Lagoa das Garas 13
no Estado de So Paulo, onde foi isolada uma colnia de Mycrocystis aeruginosa na fase exponencial. Foi realizada a extrao da toxina seguida de bioensaios em camundongos. O isolamento, a purificao e a caracterizao da toxina foram obtidos por HPLC. Neste experimento as principais toxinas encontradas foram a microcistina-LR e microcistina-LF, uma variante da primeira (Azevedo et al.,1994). Um levantamento dos estudos brasileiros sobre cianobactrias evidencia que as floraes com potencial de toxicidade tm aumentado significativamente em todo pas (Azevedo e Jardim, 2006). Entretanto, o nmero mais expressivo das pesquisas parece estar restrito s regies Sudeste e Sul, provavelmente em razo da maior concentrao de pesquisadores nestas localidades, embora o episdio mais marcante envolvendo intoxicao em populao humana por cianotoxinas tenha ocorrido na regio Nordeste e seja esta a regio do Brasil que mais apresenta condies favorveis contaminao da populao por toxinas de cianobactrias (Tsukamoto e Takahashi, 2007). Nesta regio, o clima sempre quente, os mananciais constitudos por audes e pequenos corpos dgua sem renovao de gua, e com baixos nveis de gua na seca (que facilita a aspirao da escuma de cianobactrias), a gua com pH alcalino, a falta de saneamento, nveis de pobreza e educao problemticos. E mais, a falta de controle da sade pelo poder pblico, so fatores que, associados, j produziram tragdias (Senna, 1987) nos Estados de Pernambuco (Azevedo,1988) e Bahia (Teixeira et al., 2003).
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2. CIANOTOXINAS Segundo Ferreira (1974), o termo toxina utilizado para designar qualquer substncia venenosa segregada por seres vivos e capaz de, quando injetada no animal, provocar formao de antitoxina. Cianotoxinas so, portanto, toxinas sintetizadas por determindadas espcies de cianobactrias que formam floraes em corpos dgua (Carmichael, 1992). H aproximadamente 40 espcies de cianobactrias potencialmente produtoras de toxinas dentre as 2000 que so atualmente conhecidas (Costa, 2003). As causas da produo das cianotoxinas ainda no esto muito bem esclarecidas. Acredita-se que esses compostos tenham funo protetora contra a herbivoria (Yunes, 2002) dos seus predadores primrios (zooplancton), tal qual ocorre com algumas plantas vasculares ao produzirem determinados metablitos como esterides, alcalides, taninos ou fenis (Carmichael,1992; Calijuri et al., 2006). As cianotoxinas so geralmente agrupadas de acordo com o mecanismo de toxicidade (Carmichael 1992, Campinas et al., 2002; Chorus e Bartram, 1999), com a origem e a forma de disperso no ambiente e ainda de acordo com a estrutura qumica (Calijuri et al., 2006). Assim so descritos efeitos hepatotxicos que constituem os efeitos mais frequentes de intoxicao envolvendo cianobactrias (Costa, 2003) ocasionados por hepatotoxinas que, segundo Chorus e Bartram (1999), so as que apresentam os registros mais significativos em todos os continentes. As hepatotoxinas tm ao lenta, em relao s neurotoxinas, podendo causar a morte num intervalo de poucas horas a poucos dias por hemorragia intraheptica e choque hipovolmico (Azevedo,1998) decorrente da destruio da estrutura interna do fgado, pelo fato de promoverem a decomposio dos filamentos intermedirios e microfilamentos (polmeros proteicos) que mantm a forma dos hepatcitos (Vasconcelos, 1995). Segundo Falconer (1991), essas hepatotoxinas chegam aos hepatcitos por meio dos receptores dos cidos biliares, desencadeando uma desorganizao do citoesqueleto destas clulas. A partir de 15
ento o fgado perde sua arquitetura e desenvolve leses internas graves (Vasconcelos, 1995). Segundo Calijuri et al., (2006) muitas hepatotoxinas no tm qualquer ateno especial pelo tecido heptico, porm como o fgado concentra toxinas na tentativa de degrad-las, acaba por tornar-se o alvo principal. Seu mecanismo de ao se d por inibio da sntese proteica. Tm sido observados severos danos tambm em clulas renais, pulmonares e cardcas dos animais testados (Oliveira, 2005). Microcistinas so as cianotoxinas mais comuns (Carmichael, 1995), tendo recebido o nome do primeiro organismo do qual foram inicialmente isoladas (Sivonen e Jones, 1998). O primeiro caso descrito de intoxicao por hepatotoxina foi atribudo florao de Microcystis aeruginosa (Carmichael, 1991). No entanto, h outras espcies que tambm a sintetizam, como Anabaena, Nodularia, Oscillatoria, Nostoc, Cylindrospermopsis, Hapalosiphon e Anabaenopsis (Bourrely,1985; Branco,1959; Chorus e Bartram, 1999; Esteves,1988). A nomenclatura foi proposta por Carmichael et al., (1988) que inicialmente usou apenas as variaes qualitativas evidenciadas em seus dois L-aminocidos para designar as diferentes microcistinas, e.g. microcistina-LR (leucina-arginina);-RR (arginina-arginina);-YA (tirosina-alanina). Quanto toxicidade, segundo Carmichael (1994), quase todas apresentam DL50 (dose letal 50% da populao em teste) (i.p. intra-peritoneal) 60 e 70g/Kg de peso corpreo e sintomatologia semelhante de um envenenamento. A microcistina uma toxina inibidora da fosfatase proteica tipo 1 e 2 A (Chorus e Bartram, 1999) podendo ser cem vezes mais potente que o cianureto (Pizzoln,1996). Alm das complicaes hepticas, s microcistinas so atribudos outros problemas como gastroenterite, reaes alrgicas ou irritativas e tambm problemas relacionados neurotoxicidade (Leal e Soares, 2004). Nodularinas so pentapeptdeos que inicialmente foram identificados na espcie Nodularia spumigena (Sivonen et al., 1989). Atualmente j so conhecidas oito nodularinas diferentes, caracterizadas conforme as variaes no grau de metilao, composio e isomerizao dos seus aminocidos (Rinehart, et al., 1994; 16
Roset et al., 2001). Quanto a toxicidade, a DL50 (i.p.) em camundongos varia entre 50 a 200 g/kg de peso corporal. Alguns estudos tm demonstrado que tanto microcistinas como nodularinas so potentes inibidores de protenas fosfatases tipo 1 e 2A de clulas eucariontes. Estas toxinas so consideradas potentes promotores de tumores hepticos (Falconer, 1991; Fujiki, 1992; Nishiwaki-Matsuhima et al., 1992). Cilindrospermopsina uma hepatotoxina tambm peptdica classificada como alcalide guandico cclico. J foi isolada em trs espcies de cianobactrias: Cylindrospermopsis raciborskii (Ohtani et al., 1992), Umezakia natans (Harada et al., 1994) e Aphanizomenon ovalisporum (Banker et al., 1997; Shaw et al., 1999). Seu mecanismo de ao tal qual o das outras hepatotoxinas: inibio da sntese proteica provocando sintomatologias semelhantes (Brando e Domingos, 2006), podendo tambm afetar os rins (Calijuri et al., 2006). Efeitos neurotxicos so produzidos por neurotoxinas de atuao especfica no sistema nervoso, mesmo em pequenas concentraes (Sivonem et al., 1989; Calijuri et al., 2006). As neurotoxinas so alcalides ou organofosforados que agem na transmisso de impulsos nervosos, inibindo-os em decorrncia de bloqueio aos canais de sdio, afetando a permeabilidade ao potssio ou a resistncia das membranas. A DL50 (i.p.) em camundongos de 10g/Kg de peso corporal (Azevedo,1998). Podem causar morte em curto tempo de exposio (2-30 minutos) (Chorus e Bartram, 1999). So descritos trs grupos de neurotoxinas: Anatoxina-a foi a primeira cianotoxina a ser definida funcional e quimicamente (Azevedo,1998). Trata-se de uma amina secundria (Devlin et al., 1977, Roset et al., 2001). Seu nome deriva da Anabaena flos-aquae, a primeira cianobactria na qual verificou-se a sntese desta toxina (Calijuri et al., 2006). Anatoxina-a tambm sintetizada por Anabaena sp (flos-aquae-lemmermannii), Anabaena planktonica, Oscillatoria sp., Aphanizomenon sp. e Cylindrospermum sp. (Chorus e Bartram, 1999; Sivonem e Jones, 1998).Esta toxina um alcalide potente bloqueador neuromuscular pssinptico de receptores nicotnicos e colinrgicos. Este mecanismo ocorre pela ligao irreversvel da toxina aos receptores da acetilcolina, j que esta no 17
degradada pela acetilcolinesterase (Azevedo, 1988). Em animais selvagens ou domsticos, os sintomas de intoxicao por anatoxina-a incluem superestimulao muscular, respirao ofegante, convulses, cianose, seguida de paralisia que pode ser fatal quando chega aos msculos respiratrios (Molica 1996). Anatoxina-a-(S) uma neurotoxina com um mecanismo de ao semelhante ao da anatoxina-a, sintomas acrescidos de uma intensa salivao, da a denominao. Inibe igualmente a ao da acetilcolinesterase impedindo assim a degradao da acetilcolina ligada aos receptores. Estruturalmente classificada como uma N-hidroxiguanidina fosfato de metila (Azevedo, 1988). Chega a ser dez vezes mais potente que a anatoxina-a (Carmichael, 1992). Saxitoxina e Neosaxitoxina so os nomes genricos que se tm adotado para um grupo de neurotoxinas tambm conhecidas como PSP- Paralitic Shelfish Poison, em portugus: Veneno Paralisante de Marisco. So alcalides neurotxicos inicialmente encontrados na cianobactria Aphanizomenon flos-aquae, por isso a PSP tambm chamada afanotoxina (Witton e Potts, 2000). Sua ao se d por meio da inibio da comunicao nervosa entre neurnios e clulas musculares (Brando e Domingos, 2006) decorrente do bloqueio dos canais de sdio, o que influencia a permeabilidade ao potssio ou a resistncia das membranas dos axnios (Vasconcelos 1995), assim o impulso nervoso no se propaga (Costa, 2003). Estas toxinas so sintetizadas por Anabaena sp., Aphanizomenon sp., Lyngbia sp. e Cylindrospermopsis sp (Carmichael, 1994). A intoxicao com estas substncias desencadeia sintomas como tontura, adormecimento da boca e extremindades, taquicardia, fraqueza muscular, nusea, vmito e sede (Azevedo, 1998). A toxicidade deste grupo de alcalides varivel, sendo a saxitoxina a mais potente, mais at do que a anatoxina-a e anatoxina-a (s) (Sivonem e Jones, 1999). Apesar da OMS (Organizao Mundial da Sade) considerar que no existam ainda dados suficientes para determinao de um limite de concentrao mximo aceitvel para as saxitoxinas em gua potvel, uma anlise dos dados de intoxicaes humanas demonstra que a maioria dos casos esteve associada ao consumo aproximado de 200 g de saxitoxinas por pessoa. Assim, com base nestes dados e 18
considerando 60 kg como peso corpreo, um consumo dirio de gua de 2L e fatores de incerteza para variaes entre diferentes espcies e entre organismos da mesma espcie, foi proposto um limite de 3 g/L como aceitvel em gua para consumo humano (Fitzgerald et al., 1999). No Brasil tambm este o limite recomendado pela Portaria 518, de 25 de Maro de 2004, do Ministrio da Sade (Brasil, 2004). Tem sido observado em muitos mananciais de abastecimento, da regio Nordeste regio Sul do pas, um aumento da ocorrncia de cepas de Cylindrospermosis. J foi observada dominncia deste gnero em reservatrios recm construdos, atingindo um nmero de clulas acima dos limites recomendados pela portaria 518 do Ministrio da Sade e pela OMS, ou seja de 20.000 clulas/mL (Santanna e Azevedo, 2000). Homoanatoxina-a constitui-se num composto anlogo da Anatoxina-a, sendo ligeiramente menos txico que esta, sintetizado por Oscillatoria rubescens (Vasconcelos, 1995). Homoanatoxina-a foi isolada pela primeira vez a partir de uma cultura de Planktothrix (Oscillatoria) formosa (Rodrguez et al., 2006). Seu mecanismo de toxicidade semelhante ao da Anatoxina-a, ou seja, age como um potente agente bloqueador neuromuscular que induz a paralisia corporal, convulses e morte por parada respiratria entre 7 e 12 min (Calijuri et al., 2006). Efeitos dermatotxicos so produzidos pelas cianotoxinas irritantes ao contato dermal, tambm denominadas dermatotoxinas (LPS), que so sintetizadas por todos os gneros de cianobactrias (Calijuri, et al., 2006). Entretanto, Gorham e Carmichael (1988) apontam como principais produtores envolvidos nestas intoxicaes Lyngbya, Anabaena, Aphanizomenon, Nodularia, Oscillatoria, Gloeotrichia e Schizothrix. De acordo com a origem e forma de disperso no ambiente classificam-se as cianotoxinas como endotoxinas, cuja toxicidade decorre da produo de toxinas que so geralmente liberadas quando ocorre a lise das clulas durante a senescncia ou morte das cianobactrias, e contaminam as guas (Costa, 2003). So substncias componentes da parede celular de muitas bactrias e cianobactrias. Tm em sua composio polissacardeos e lipdeo A, que o responsvel por sua toxicidade. 19
So toxinas fracas, no entanto letais em doses elevadas (Calijuri et al., 2006). Exotoxinas so protenas altamente especficas e com potente ao txica, secretadas em baixas concentraes por quase todos os organismos gram-positivos e gram-negativos. No h ainda comprovaes de que as cianobactrias eliminem suas toxinas para o ambiente, o que se tem evidenciado o aumento da concentrao da toxina na gua associado diminuio das floraes, decorrentes de variaes ambientais ou do tratamento qumico da gua com algicidas, o que provoca a lise das clulas (Calijuri et al., 2006). De acordo com a estrutrura qumica, as cianotoxinas so classificadas como alcalides que se constituem em molculas cclicas e contm nitrognio na forma de amina ou raramente na forma de amida (Larcher, 2000). No que se refere s cianotoxinas, os alcalides podem ser neurotxicos (saxitoxinas e anatoxinas), citotxicos (cilindrospemopsinas) ou dermatotxicos (aplisiatoxina e lingbiatoxina) (Chorus e Bartram,1999). Peptdeos cclicos hepatotxicos constituem-se em biomolculas que podem conter de dois a dezenas de aminocidos unidos entre si por ligaes peptdicas (Calijuri et al., 2006). So sintetizados pelos gneros Microcystis sp., Nodularia sp., Nostoc sp., e Cylindrospermopsis sp. Lipopolissacardeos (LPS) so endotoxinas pirognicas comuns tambm s bactrias, cujos estudos disponveis ainda so poucos mas indicam serem menos txicos.
2.1 - Cianobactrias, Problema Ambiental e de Sade Pblica As floraes de cianobactrias so o resultado da superdiviso das clulas em quantidades acima de 10000 clulas/mL (Yunes, 2002), em mananciais de abastecimento ou de recreio. Isto representa riscos sade humana devido s potentes toxinas que so sintetizadas e liberadas ao meio quando ocorre a lise celular (Comte, 2000; Vasconcelos, 1995; Yunes, 2000), o que pode ocorrer devido ao uso de algicidas, ao estresse celular ou senescncia (Alves, 2005). Estas 20
floraes causam diversos transtornos, comprometem o aspecto esttico do manancial (Len, 2007) j que a gua por vezes adquire aparncia de sopa, alm dos transtornos s estaes de tratamento como entupimento nos filtros, corroso das tubulaes. E mais, interferem na floculao (Azevedo, 2007), promovem alteraes importantes s caractersticas organolpticas como cor, sabor e odor da gua decorrentes da produo das substncias geosmina e 2-metil-isobomeol (Len,2007), bastante citadas na literatura como fontes dos odores de terra e mofo presentes nas guas contaminadas por cianobactrias (Sirtori, 2006).
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Na tabela a seguir esto as cianotoxinas, alvo primrio e gneros responsveis pela produo. Tabela 1 Grupo da toxina Alvo primrio em mamferos Gneros de cianobactrias
Peptdeos cclicos Microcystis sp., Anabaena sp., Planktotrix sp., Oscillatoria sp., Nostoc sp., Hapalosiphon sp., Anabaenopsis sp. Nodularia sp. Alcalides Anatoxina-a Aplisiotoxina Cilindrospermopsina Lyngbiatoxina Saxitoxina Nervo sinptico pele Fgado Pele, trato gastrointestinal Nervo axnico Anabaena sp.,Planktotrix sp., Oscillatoria sp., Nostoc sp., Aphanizomenon sp. Lyngbya sp., Schizothrix sp., Planktotrix sp, Oscillatoria sp. Cylindrospermopsis sp., Aphanizomenon sp., Umezakia sp. Lyngbya sp. Anabaena sp., Aphanizomenon sp., Lyngbya sp., Cylindrospermopsis sp.
Microcistina Nodularina
Fgado Fgado
Lipopolissacardeos LPS
Fonte: Calijuri et al., 2006.
Qualquer contato potencial irritante
Todos
Alguns autores referem-se ao potencial toxicolgico das cianotoxinas como causadoras de tumores hepticos (Azevedo, 1998; Carmichael, 1992), distrbios neurolgicos, constituindo-se em patologias bastante complexas, alm das complicaes alrgicas, dermatolgicas ou respiratrias (Azevedo, 1998) que manifestam-se com vertigens, gastroenterites agudas, irritaes da mucosa ocular, 22
pneumonias atpicas, cefalias, clicas abdominais, vmitos e diarria (Chorus et al., 2000; Fleming et al., 2002; Leal e Soares, 2004; Ueno et al., 1996) e ainda comprometimento do sistema imunolgico (Arajo, 2003; Gonalves, 2004; Kujbida 2005). As infestaes so caracterizadas como agudas ou crnicas a depender do tempo de exposio s substncias e da quantidade ingerida (Vasconcelos,1995). Os estudos evidenciam diversas formas pelas quais estas infestaes podem ocorrer. De um modo geral os relatos clnicos dos danos sade pblica envolvem o consumo oral de toxinas, em consequncia de acidentes, desconhecimento ou deficincia na operao dos sistemas de tratamento de gua (Azevedo e Jardim, 2006), sendo cada uma responsvel por um rol de sintomas caractersticos: ingesto acidental, por via oral ou intravenosa (durante os tratamentos por hemodilise) (Matsuzaki et al., 2004), de guas com doses elevadas de cianotoxinas podem provocar intoxicaes agudas caracterizadas por aparecimento de gastroenterite com diarrias, vmitos, nuseas, clicas abdominais e febre ou um quadro de hepatite com anorexia, astenia e tambm vmitos, podendo evoluir para bito (Dillenberg e Dehnel, 1960). A ingesto de baixas doses de toxinas continuadamente tambm oferece grandes riscos, promovendo o desenvolvimento de enfermidades hepticas crnicas a mdio e longo prazo e a curto prazo costumam ocasionar mal estar digestivo e heptico (Ueno et al., 1996; Yu, 1994). Este modo de contaminao pode ocorrer por ingesto de gua potvel com tratamento insuficiente para eliminar as toxinas ou ainda via pescado contaminado, j que algumas das toxinas so bioacumulativas (Prado, 2007). Os moluscos, por serem filtradores, acumulam nos seus tecidos doses no letais de toxinas que so repassadas ao longo das cadeias alimentares cujo elo final poder ser o homem (Lee, 1999; Len, 2007; Reis, 2007). Os primeiros efeitos deste tipo intoxicao podem aparecer imediatamente ou at 24 horas aps o consumo e so sintomas caractersticos: dormncia na boca, perturbaes gastrointestinais, diarria, fraqueza, paralisia respiratria ou cardiovascular e a dependender da quantidade de toxinas ingeridas, morte (Silva, 2006). As hortalias podem tambm servir de via de contaminao quando irrigadas com guas 23
contaminadas (Portes, 2004); no
so comuns referncias sobre este modo de
contaminao. Outra forma por inalao de cianobactrias e seus esporos, o que pode acontecer acidentalmente ou durante a prtica de desportos aquticos e gerar sintomas como rinite, conjuntivite, dispnia, bronquite aguda, asma, dermatite ou queimaduras na pele (Reis, 2007). Contudo, a ingesto de gua contaminada parece ser a principal via de contaminao (Vasconcelos, 1995) e os estudos epidemiolgicos dos danos causados pela presena de cianotoxinas em seres humanos indicam que a maior freqncia ocorre quando a contaminao se d na gua potvel, j que nmero de ocorrncias de problemas de sade decorrentes do contato primrio com gua do mar relativamente desprezvel (Prado, 2007). Os riscos por contato com guas de recreao so maiores para os nadadores do que para banhistas comuns (Chorus & Bartram, 1999; Falconer, 1999). Nestes casos as infestaes so traduzidas em irritaes drmicas e ou sintomas gastrointestinais como nuseas e vmitos, quando os casos mais graves requerem internamentos e assistncia especializada (Len, 2007). H frequentes registros de intoxicaes por meio do consumo de moluscos com saxitoxina (SXT), uma neurotoxina da classe das PSP que pode ter origem marinha ou dulceaqucola (Chorus & Bartram, 1999). H tambm referncias dos lipopolissacardeos, que podem provocar alergias ou molstias menores em humanos, todavia so poucas informaes sobre seus efeitos crnicos ou agudos (Len, 2007). A possibilidade de bioacumulao e transferncia de cianotoxinas por meio da ingesto de peixes e moluscos que tenham se alimentado continuamente de cianobactrias acumulando as toxinas em seus tecidos determina srios riscos sade humana (Matsuzaki et al., 2004). Alguns animais no resistem aos ambientes eutrficos quando provocados por cianobactrias, podendo morrer devido ao das microcistinas. Porm nos casos de toxicidade sub-letal, os animais (moluscos, peixes e lagostas) conseguem sobreviver tempo suficiente para acumular as toxinas e transferi-las ao longo da cadeia alimentar, oferecendo risco ao consumo humano. Alguns estudos tm demonstrado a bioacumulao e a toxicidade destas 24
substncias em moluscos (Whittle, 2000). Magalhes et al., (2001), realizaram um estudo sobre a bioacumulao de microcistinas em tilpias (Tilapia rendalli) que se alimentaram continuamente de cianofceas txicas em um lago no sudeste do Brasil. Os peixes (T. rendalli) foram coletados a cada duas semanas entre agosto de 1996 e novembro de 1999. As microcistinas do fitoplncton foram analisadas por HPLC, enquanto fgado e tecido muscular dos peixes foram analisados por um KIT ELISA. Nas amostras do fitoplncton foram confirmadas a dominncia do gnero Microcystis e nas amostras de fgado e tecido muscular dos peixes confirmou-se a presena de microcistinas em concentraes perto ou acima do limite recomendado, pela OMS, para consumo humano (0,04 /kg-dia) durante todo o perodo do estudo, incluindo os tempos de baixa densidade da florao. Os resultados confirmaram a acumulao e persistncia das microcistinas nos tecidos musculares, mostrando o alto risco no consumo destes peixes. Vale salientar que a introduo de tilpias em inmeros reservatrios brasileiros foi realizada com o objetivo de melhorar o contedo proteico das dietas para as populaes de baixa renda. Outro estudo realizado tambm no Rio de Janeiro, na Baa de Sepetiba, importante zona pesqueira, demonstrou a acumulao de microcistinas em tecido muscular de peixes e camares das guas desta baa. O estudo foi realizado durante onze meses, as anlises de microcistinas detectaram valores de at 103,3 g/kg em tecido muscular de caranguejos (Magalhes et al., 2001). Foi realizado um estudo com a carpa prateada como modelo de peixe filtrador oriundo de piscicultura, com o objetivo de analisar-se a incorporao de microcistinas pelos peixes. Para isto, os peixes foram colocados em aqurios de vidro e tratados com cianobactrias txicas e no txicas com diferentes nmeros celulares, que variaram de 195.000 e 1.350.000 clulas de Microcystis/mL. A anlise da presena da toxina nos tecidos dos peixes foi realizada aps extrao por meio do imunoensaio especifico para microcistinas ELISA. Os experimentos indicaram valores de toxinas no msculo do peixe entre 0 e 0,015 g / g de peso seco do msculo. A variao das concentraes de toxinas encontradas no msculo no foram lineares com as concentraes de toxinas presentes na gua, que chegaram a ultrapassar 27 g / L. Assim, apesar de 25
no ter-se encontrado no msculo dos peixes valores superiores a 0,015 g / g de peso seco, pode-se considerar que o consumo da carpa prateada, assim como de outros peixes filtradores de gua doce, salobra ou marinha, apresenta risco sade humana, quando em contato com cianobacterias txicas, e portanto os peixes devem ser monitorados (Giordano, 2007). Atualmente os valores aceitveis para alimentos contaminados com microcistinas so, segundo a OMS, expressos atravs da Tolerncia Diria Ingerida (TDI) = 0,04 g/kg de microcistinas (Falconer et al., 1994). Segundo Carmichael (1992), Nishiwaki-Matsushima et al. (1992), Yu (1989), Fujiki e Suganuma (1993), h evidncias de que populaes abastecidas por reservatrios que apresentam extensas floraes e estejam expostas a baixos nveis de toxinas por longos perodos, demonstram desenvolvimento de carcinoma heptico em um nmero significativo de pessoas. Alm da hepatotoxicidade da microcistina, tm sido realizados no Brasil alguns estudos sobre imunotoxicidade (Arajo, 2003; Gonalves, 2004; Kujbida, 2005). O trabalho de Arajo (2003) considera que a microcistina (MCLR) interiorizada por meio do sistema de transporte de cidos biliares e liga-se fortemente s fosfatases 1 e 2A. A inibio destas atividades enzimticas tem efeito txico direto contra os hepatcitos mas no contra macrfagos (clulas de defesa que migram do sangue para os tecidos). Assim, foram produzidos em coelhos anticorpos contra a MCLR e verificou-se que o anticorpo previne o efeito hepatotxico. Esta observao sugeriu a possiblidade do uso do anticorpo especfico como antdoto que, administrado at trinta minutos aps a injeo da toxina, protegeu camundongos contra a dose letal da MCLR e preveniu a leso heptica que foi encontrada apenas nos animais que receberam a toxina sem o antdoto. Este, segundo a autora, o primeiro estudo a demonstar o efeito protetor de anticorpos produzidos contra a morte de animais inoculados com uma dose letal da toxina. Em concluso, a detoxificao dos efeitos de MCLR com anticorpos protetores especficos parece ser uma tarefa exequivel. Gonalves (2004) refere-se microcistina como uma toxina com efeito imunomodulatrio (exerce ao sobre o sistema imunolgico). Assim, foi avaliado o efeito da microcistina na funo dos leuccitos (clulas de defesa), considerando-se 26
que pacientes portadores de doena renal crnica em hemodilise possam estar expostos a variveis concentraes de microcistinas e que estes pacientes por vezes apresentam sinais de supresso da imunidade associada inflamao. O estudo foi realizado isolando-se leuccitos de voluntrios saudveis e de pacientes em hemodilise. Os leuccitos foram incubados com microcistina por vinte e quatro horas para determinao do efeito dose-resposta. Foi observado que, embora no tenha havido inlamao, houve reduo na funo dos leuccitos de ambos os grupos avaliados. A ao de microcistinas sobre neutrfilos humanos (leuccitos envolvidos na defesa contra infeco bacteriana e outros pequenos processos inflamatrios - o tipo mais abundante no sangue humano), foi avaliada por Kujbida (2005). Neste trabalho, isolaram-se as microcistinas (MC-LR) produzidas pela cianobactria Microcistis panniformis sobre neutrfilos humanos in vitro, observou-se que estas substncias tm capacidade quimiotxica (locomoo de clulas em direo a um gradiente qumico), uma vez que houve aumento da migrao dos neutrfilos e aumento da fagocitose. Os resultados indicaram que microcistinas em concentraes menores que o limite mximo sugerido pela (OMS) 1g/L, tm efeito sobre funes de neutrfilos humanos in vitro, podendo contribuir para a toxicidade destas microcistinas.
2.2. Legislao Brasileira A legislao federal sobre recursos hdricos no Brasil remonta dcada de 30 do sculo XX, quando entrou em vigor o Cdigo de guas (Decreto n 24.643, de 1934) (Ramos, 2007), o primeiro instrumento legal a disciplinar, em linhas gerais, o aproveitamento industrial das guas e, de modo especial, o aproveitamento e explorao da energia hidrulica (Freiria, 2007). Estruturalmente esta lei dividida em duas partes, a primeira trata das guas em geral e de seu domnio, a segunda trata do aproveitamento dos potenciais hidrulicos e estabelece uma disciplina legal para gerao, transmisso e distribuio de energia eltrica (Milar, 2005). Numa leitura do cdigo das guas encontra-se um pequeno trecho, nas consideraes, 27
referindo-se discretamente ao uso racional da energia hidrulica, sem qualquer relao entre gua e ecossistema ou sade pblica. Na altura da elaborao desta lei parecia haver uma tendncia de se dispor as guas brasileiras unicamente gerao de energia, o gerenciamento das guas era realizado pelo setor eltrico, ou seja, o mesmo rgo que dava as concesses controlava a energia eltrica e era responsvel pelo gerenciamento da gua (Moreira, 2001). Apesar de ser um texto legal antigo, esta uma lei ainda vigente, embora muito alterada e revogada por leis posteriores (Freiria, 2007). Atualmente, abaixo da Constituio Federal que define os princpios gerais para a regulamentao dos recursos hdricos, a lei 9433/97 publicada Em 08 de janeiro de 1997 a mais importante norma legal do pas relativa proteo dos recursos hdricos, a lei que institui a Poltica Nacional de Recursos Hdricos e cria o Sistema Nacional de Gerenciamento de Recursos Hdricos. Est assim descrito o seu primeiro captulo: Art. 1 - A Poltica Nacional dos Recursos Hdricos baseia-se nos seguintes fundamentos: I - A gua um bem de domnio pblico; II - A gua um recurso natural limitado, dotado de valor econmico; III - Em situaes de escassez, o uso prioritrio dos recursos hdricos o consumo humano e a dessedentao de animais; IV - A gesto dos recursos hdricos deve sempre proporcionar o uso mltiplo das guas; V - A bacia hidrogrfica a unidade territorial para implementao da Poltica Nacional de Gerenciamento de Recursos Hdricos; VI A gesto dos recursos hdricos deve ser descentralizada e contar com a participao do poder pblico, dos usurios e das comunidades. Entretanto quando se l a Directiva Europia, percebe-se uma abordagem bastante distinta: A gua no um produto como outro qualquer, mas um patrimnio que deve ser protegido, defendido e tratado como tal (Directiva 28
2000/60/CE do Parlamento Europeu e do Conselho de 23 de Outubro de 2000 que estabelece um quadro de ao comunitria no domnio da poltica da gua). A legislao brasileira estabelece que A bacia hidrogrfica a unidade territorial para implementao da poltica Nacional de Recursos Hdricos e atuao do Sistema Nacional de Gerenciamento de Recursos Hdricos (Cap. I, Art.1, Inciso V), Isto demonstra como a lei fragmenta a bacia ao ter um outro plano e uma outra lei para as regies estuarinas e costeiras. Outro aspecto chama ateno na legislao brasileira, tudo no texto da lei refere-se apenas a gua que direta ou indiretamente utilizvel pelo ser humano como se as outras guas que assim no o so, no pudessem ser consideradas recursos hdricos: at mesmo a denominao, a lei no se refere ao termo gua, algo inteligvel a qualquer cidado, e sim recurso hdrico, o que parece ser algo indefinido ao entendimento de todos, como se fora mesmo necessrio complicar. A Constituio brasileira de 1988 a principal referncia legal do pas e assim estabelece no seu artigo 225: Todos tm direito ao meio ambiente ecologicamente equilibrado, bem de uso comum do povo e essencial sadia qualidade de vida, impondo-se ao Poder Pblico e coletividade o dever de defend-lo e preserv-lo para as presentes e futuras geraes. No entanto, dados do IBGE (2000) (Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica) demonstram o quo distante a realidade social do pas do que preconizam as leis. Considerando o territrio brasileiro, 47,8% dos seus municpios no dispem de rede de esgoto, 80% do esgoto coletado no tratado (Baltar, 1997). Apesar de ser este pas a 6 economia do mundo (Folha, 2008) e ocupar atualmente a 15 posio no ranking de produo cientfica mundial, sendo as reas mdicas as que apresentam o maior desenvolvimento dentre as reas avaliadas (SBPC, 2008), o Brasil ainda figura na 63 posio do ndice de desenvolvimento humano (PNUD, 2008). E mais, 24% da populao brasileira no tem acesso a gua 29
tratada (PNUD, 2005). Isto se reflete nos ndices de internamentos por doenas de veiculao hdrica, 80% das consultas peditricas em centros de sade da rede pblica so decorrentes destas doenas (Neto, 2004), o que parece ser resultado da histria de uma poltica de saneamento fragmentada e vinculada apenas ao desenvolvimento institucional do Estado (Mendes et al., 2000). O prprio IBGE cita nas concluses do ltimo senso Esgotamento sanitrio o servio com menor cobertura nos municpios brasileiros (IBGE, 2000). No que se refere s cianobactrias, a legislao brasileira determina limites para densidade destes organismos e concentrao de cianotoxinas em norma nacional, com fora de lei (Deberdt et al., 2004). Isto se deu depois da conhecida Tragdia de Caruaru. Em razo deste acontecimento, no ano 2000 entrou em vigor a Portaria 1469 de 20/12/2000 do Ministrio da Sade que passou a determinar procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilncia da qualidade da gua para consumo humano, alm dos padres de potabilidade. Pela primeira vez no Brasil foi inserida em norma legal a obrigatoriedade do monitoramento de cianobactrias na zona de captao em manancial superficial. O captulo II, artigo 4, trata a portaria da definio de cianobactria e cianotoxina: X. Cianobactrias: Microorganismos procariticos fotoautrficos, tambm denominados como cianofceas (algas azuis), capazes de ocorrer em qualquer manancial superficial, especialmente aqueles com elevados nveis de nutrientes (nitrognio e fsforo), podendo produzir toxinas com efeitos adversos sade; e XI. Cianotoxinas - Toxinas produzidas por cianobactrias que apresentam efeitos adversos sade por ingesto oral, incluindo: a) Microcistinas - Hepatotoxinas heptapeptdicas cclicas produzidas por cianobactrias, com efeito potente de inibio de protenas fosfatases dos tipos 1 e 2 A e promotoras de tumores; b) Cilindrospermopsina Alcalide guanidnico cclico produzido por cianobactrias, inibidor de sntese proteica, predominantemente hepatotxico,
30
apresentando tambm efeitos citotxicos nos rins, bao, corao e outros rgos; e c) Saxitoxinas - Grupo de alcalides carbamatos neurotxicos produzidos por cianobactrias, no sulfatados (saxitoxinas) ou sulfatados (goniautoxinas e Ctoxinas) e derivados decarbamil, apresentando efeitos de inibio da conduo nervosa por bloqueios dos canais de sdio . A portaria estabelecia os seguintes limites mximos aceitveis para toxinas de cianobactrias: Microcistinas: 1 g/L (corresponde a 5000 cel. de Microcystis) (Watanabe et al., 1996) Cilindrospermopsinas: 15 g/L Saxitoxinas: 3 g/L
A dosagem de microcistinas, como substncias que representam risco sade humana parte integrante do padro de potabilidade (Chorus e Bartram, 1999), Entretanto, no h referncia ou padro estabelecido para neurotoxinas, como anatoxina-a e anatoxina-a (s), apesar do potencial de risco que representam sade humana, talvez pelo fato de no haver qualquer registro de ocorrncia com estas substncias e no se conhecer o grau de risco para toxicidade crnica para humanos (Azevedo, 1998, Chorus e Bartram, 1999). At o momento, todos os casos de incidentes toxicolgicos relacionados com a Anatoxina-a e que levaram morte em poucos minutos envolveram apenas animais (Rodriguez et al., 2006). No texto da Portaria tambm no so encontradas referncias sobre outras formas em que a contaminao possa ocorrer que no a via oral. So recomendadas anlises de cilindrospermopsina e saxitoxinas (STX), observando os limites de 15,0 e 3,0 g/L de equivalentes STX/L, respectivamente. Sempre que a quantidade de cianobactrias no manancial exceder 20.000 clulas/mL, ser exigida anlise de cianotoxinas ou comprovao de toxicidade na gua bruta por meio da realizao de bioensaios em camundongos, o que a comunidade cientfica j v com reservas em razo dos aspectos ticos que envolvem tal prtica (Amorim, 1994). 31
vedado o uso de algicidas para o controle do desenvolvimento de cianobactrias ou qualquer interveno no manancial que provoque a lise das clulas destes organismos, quando a densidade das cianobactrias exceder 20.000 clulas/mL, sob pena de comprometimento da avaliao de riscos sade associados s cianotoxinas ( Art.19, 2). Esta portaria, 1469 de 20/12/2000, vigorou at 2004 quando foi revogada e substituda pela Portaria 518 de 25 de Maro de 2004, exatamente igual, com as mesmas lacunas da Portaria 1469, porm com um prazo maior para adequao. Vale ressaltar que, conceitualmente, a legislao brasileira adota o entendimento preconizado pela OMS: o controle de qualidade da gua uma atribuio (obrigatria) dos responsveis pelo abastecimento de gua, enquanto a vigilncia da qualidade da gua exercida, de forma independente, pelas autoridades de sade pblica (Pinto et al., 2005) Assim, estas portarias foram implementadas pelo Ministrio da Sade que pe a cargo do prprio Ministrio o dever de promover e acompanhar a vigilncia da qualidade da gua em articulao com as secretarias de sade dos Estados e do Distrito Federal. Com a descentralizao do Sistema nico de Sade (SUS) a responsabilidade de execuo das atividades cotidianas de vigilncia da qualidade da gua municipal (MS, 2005). Entretanto no h nas secretarias de sade dos Estados brasileiros, muito menos dos municpios, equipe tcnica com formao para exercer tal funo. Entre agosto de 2005 e agosto de 2006 um trabalho de Jardim e Azevedo sobre Cianobactrias em guas para Abastecimento Pblico referente ao Cumprimento da Legislao Brasileira, foi realizado em 23 empresas de tratamento de gua distribudas em 14 estados brasileiros. Os autores descrevem a ocorrncia de cianobactrias txicas em todas as amostras. Em 90% das amostras havia Microcystis. O trabalho tambm relata a falta de especialistas em taxonomia e a indisponibilidade de tcnicas moleculares na maioria dos laboratrios das companhias onde as anlises so realizadas, ou mesmo em laboratrios de terceiros contratados por estas, o que sugere a necessidade de investimentos em recursos humanos e infra-estrutura para que se efetue o cumprimento da Portaria n 518 do Ministrio da Sade (Alves, 2005). 32
2.3. Floraes em Ecossistemas Epicontinentais no Brasil
Nos ltimos anos, tem aumentado consideravelmente o nmero de registros de floraes de cianobactrias txicas em importantes reservatrios brasileiros, assim como a criao de programas de monitoramento. As mortes em Caruaru, ocasionadas por cianobactrias, despertaram a ateno para o perigo que esses organismos podem representar (Jochimsen et al., 1998; Pouria, 1998), levando um nmero maior de pesquisadores a se dedicar ao seu estudo em alguns Estados do pas, nomeadamente os Estados das Regies Sul e Sudeste, como demonstra a tabela a seguir:
Tabela 2
Localidade Lagoa das GarasSo Paulo Caractersticas Lago urbano, eutrfico, localizado em Ano 1994 Gnero Mycrocistis aeruginosa Referncia Azevedo et al., 1994 Investigao Epidemiolgica No houve
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Cianobactrias e sade pblica no Brasil 2008 rea de preservao ambiental Represa de GuarapirangaSo Paulo Abastece 3 milhes de habitantes 1994 2002 Anabaena, Aphanocapsa, Mycrocystis, Planktotrix, Cylidrospermopsis Anabaena, Aphanocapsa, Mycrocystis, Planktotrix, Cylidrospermopsis Microcystis Zagatto e Arago (1994) Programa AGUAAN (2003) Programa AGUAAN (2003) Zagatto e Arago, 1994 Zagatto e Arago, 1994 Zagatto e Arago, 1994
No houve
Represa BillingsSo Paulo Represa Praia AzulSo Paulo Reservatrio JundiaSo Paulo Represa Salto GrandeSo Paulo
Abastece 4,5 milhes de habitantes Local para pesca e esportes nuticos Abastece parte da regio metropolitana de So Paulo Abastece a cidade de Americana de gua e energia, 199000 habitantes Gerao de energia, pesca e esportes nuticos 212.956 habitantes Abastece populao de 300 mil habitantes Local de prtica de esportes nuticos 60 mil habitantes Maior complexo lagunar da Amrica do Sul. Abastece 3 milhes de habitantes
1998 2000 2001
No houve Deteco de cianotoxinas por HPLC Teste de toxicidade em camundongos Teste de toxicidade em camundongos Teste de toxicidade em camundongos
1994
1994
Microcystis, Anabaena
1994
Microcystis,
Represa de BroaSo Paulo Represa do FaxinalRio Grande do Sul Represa de So MiguelRio Grande do Sul Rio CaRio Grande do Sul
1994
Anabaena Nostoc
Costa e Azevedo, 1994
No houve
Abril a Dezembro de 2002 Todo o ano de 2002, mesmo no inverno 2003
Anabaena sp.
Programa AGUAAN Programa AGUAAN
No houve
Anabaena sp.
No houve Bioensaios em camundongos detectaram a presena de neurotoxinas Deteco de microcistinas por bioensaios. Bioensaios em caranguejos.
Cylidrospermopsis rabciborskii
Yunes et al.,2003 Yunes et al., 1996. Rosa et al., 2003. Dewes et al., 2005.
Lagoa dos PatosRio Grande do Sul
1994 a 1998 2003 2005
Microcystis aeruginosa Anabaena sp. Microcystis aeruginosa
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Rio GuabaRio Grande do Sul Barragem Armando Ribeiro GonalvesRio Grande do Norte
1,5 milho de habitantes
2007
Planktothrix Anabaena sp., Aphanizomenon, Cylindrospermosis, Raphidopsis, Microcystis sp., Lyngbia, Planktotrix
Tsukamoto e Takahashi 2007
No houve
Abastece 400 mil habitantes
2000-2002
Costa, 2003
Determinao de cianotoxinas por HPLC e ELISA Bioensaios em camundongos, detectaram neurotoxicidade. Anlise por HPLC detectaram microcistina na gua bruta e no carvo ativado do sistema de tratamento de uma clnica de hemodilise da cidade Instituto Estadual de Florestas (IEF), recomendou suspenso da pesca, exames detectaram microcistina no pescado
Represa de FurnasMinas Gerais
Abastece 34 municpios de Minas Gerais
Outubro1998
Cylindrospermopsis raciborski, Microcystis viridis
Jardim et al., 1999
Vrzea da PalmaMinas Gerais
31 mil habitantes
2007
Microcystis
UFMG, Projeto Manuelzo 2007
Represa de Utinga Par
Principal manancial de gua potvel da cidade de Belm, 1.408.847 habitantes (IBGE,2007)
1999-2000
Aphanizomenon, Aphanocapsa, Aphanothece, Arthrospira, Blennothrix, Coelomoron, Leptolyngbya, Merismopedia, Microcystis, Nostoc, Oscillatoria, Planktothrix, Pseudanabaena, Radiocystis e Rhabdoderma Microcystis aeruginosa, Anabaena spiroides, Oscillatoria e Cylidrospermopsis
Vieira, 2002
Anlises por CLAE e ELISA, detectaram microcistinas.
Complexo lagunar MundaManguaba Alagoas
Abastece de peixes e mariscos em torno de 260 mil habitantes
1999
Porfrio, (2000)
Deteco de toxinas por bioensaios em camundongos
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Cianobactrias e sade pblica no Brasil 2008 Cylidrospermopsis raciborskii, Aphanocapsa incerta, Planktollyngbya subtillis, Oscillatoria sp Oscillatoria sp Cylindrospermopsis Morte de pacientes renais (Caruaru) Deteco de toxinas por bioensaios No houve No houve
Aude TabocasPernambuco
Abastecimento de 200 mil habitantes Pesca e esportes nuticos 2 milhes de habitantes Hidreltrica binacional, maior do mundo. Abastece de gua potvel 320 mil habitantes da cidade de Foz do Iguau Abastece populao de 270 mil habitantes 12 milhes de habitantes
1996 - 1998
Molica et al., (1999)
Lagoa Parano Braslia Lago Parano Braslia- Distrito Federal
1994 2007
Costa e Azevedo, 1994 Tsukamoto e Takahashi 2007
Lago de Itaipu Paran
2000
Microcystis
Kamogae et al., 2000
Deteco de microcistinas por ensaio imunoenzimtico IC-ELISA
Represa de Alagados-Paran Rio Paraba do Sul So Paulo/Rio de Janeiro
2001-2002
Cilindospermopsi racirboskii
Programa AGUAAN
No houve
2007
Microcystis
Barbosa, 2007 h
No houve
Represa do FunilRio de Janeiro
Localizada entre Rio de Janeiro e So Paulo, gera energia. rea de pesca e esportes nuticos
1994 2001
Pseudanabaena Microcystis e Anabaena
Costa e Azevedo, 1994 Soares et al., 2005
No houve Imunoensaios por ELISA, E Bioensaios em camundongos detectaram microcystinas na gua utilizada em clnica de hemodilise.
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Na tabela a seguir esto listados os Estados brasileiros onde tem havido programas de monitoramento de cianobactrias e as respectivas instituies envolvidas.
Tabela 3
Estado
Rio Grande do Sul Santa Catarina
Instituio Responsvel
Fundao Universidade do Rio Grande (FURG) Unidade de Pesquisa de Cianobactria Universidade do Vale do Itaja (UNIVALI), Centro de Cincias Tecnolgicas da Terra e do Mar Universidade Estadual de Londrina (UEL) Departamento de Tecnologia de Alimentos Universidade de So Paulo (USP) Departamento de Fisiologia, do Instituto de Biocincias Companhia de Tecnologia e Saneamento Ambiental (CETESB) Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ); Ncleo de Pesquisas de Produtos Naturais (NPPN) COPASA Companhia de Saneamento de Minas Gerais Universidade Federal de Alagoas Instituto Tecnolgico do Estado de Pernambuco
Paran
So Paulo
Rio de Janeiro Minas Gerais Alagoas Pernambuco
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2.4. Espcies mais frequentes no Brasil Segundo SantAnna e Azevedo (2000), Anabaena, Microcystis, Planktothrix, Aphanizomenon e Cylindrospermopsis so os gneros de cianobactrias potencialmente produtores de toxinas que ocorrem com maior freqncia no Brasil. Suas espcies, quase todas produtoras de toxinas, so as mais comuns em floraes de lagos e reservatrios eutroficados de todo o pas. A Anabaena tem sido o gnero com maior nmero de espcies potencialmente txicas: A. spiroides, A circinalis, A. flosaquae, A. planctonica, A. solitria. Segundo Azevedo (2000) e Reynolds (1984) o gnero Microcystis dominante em 51,6% dos eventos nos diversos ecossistemas continentais brasileiros, sendo Microcystis aeruginosa a espcie que apresenta distribuio mais ampla e predominante, segundo Zagatto (1997) o gnero Microcystis tambm responsvel por 65% dos relatos de intoxicao no Brasil. A Cilindrospermopsis raciborskii vem se tornando uma das espcies de grande interesse dos pesquisadores em razo do seu potencial de produzir floraes e pelo aumento da ocorrncia de suas floraes. No Brasil, h registros desta espcie em onze Estados e no Distrito Federal. A grande maioria das cepas txicas isoladas demonstram produzir saxitoxinas (Jardim et al., 2005). Os registros brasileiros das floraes de cianobactrias indicam que os eventos de floraes de espcies txicas so significativamente maiores do que as floraes de cepas no txicas (Azevedo, 2000). Como est demonstrado na figura a seguir:
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Relao percentual das cepas de cianobactrias txicas e no txicas
18,40% Cepas No Txicas Cepas Txicas 81,60%
Fonte: Azevedo (2000)
Relao percentual entre os gneros de cianobactrias txicas
9,70% 3,20% 6,50% 6,50% 51,60%
Microcystis Picoplncton Synechocystis Leptolyngbya Synechococcus Cylindrospermopsis
22,60%
Fonte: Azevedo (2000)
No ano 2000, foi executado pela secretaria do Meio Ambiente do Estado de So Paulo um projeto de catalogao de espcies potencialmente txicas de cianobactrias. No decorrer das pesquisas foram descobertas trs espcies de cianobactrias at ento desconhecidas do meio cientfico, Coelosphaerium 39
evidenter-marginatum, Microcystis panniformis e Sphaerocavum brasiliensis. Esta ltima foi catalogada em um novo gnero, denominado Sphaerocavum, o que significa esfera oca; foi escolhido este nome em razo das clulas destas cianobactrias apresentarem forma esfrica e estarem dispostas na periferia da colnia a Sphaerocavum brasiliensis apresenta aertopos (vesculas conjugadas gasosas) que ajudam em sua flutuao na gua. J a Coelosphaerium evidentermarginatum no apresenta este tipo de vescula, e a organizao de suas clulas se d na margem da colnia. Vista ao microscpio, a colnia destas cianobactrias assemelha-se a um colar de prolas. As revises demonstram que a maioria das pesquisas sobre cianotoxinas esto voltadas para as microcistinas em razo serem estas as cianotoxinas mais comuns nas floraes dos mananciais brasileiros.
Duas das novas cianobactrias descobertas no Brasil
A: Coelosphaerium evidenter-marginatum B: Sphaerocavum brasiliensis Fonte: Cincia hoje on-line (2000)
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Cianobactrias txicas mais frequentes em floraes no Brasil
C
A A
A: Anabaena flosaquae; Fonte: cyanosite.bio.purdue.edu/images/images.html B: Anabaena spiroides; Fonte: cyanosite.bio.purdue.edu/images/images.html C: Anabaena planctonica; Fonte: www.fytoplankton.cz D: Anabaena circinalis;Fonte: www.nies.go.jp E: Anabaena solitaria;Fonte:www.dr-ralf-wagner.de F: Microcystis aeruginos. Fonte:cyanosite.bio.purdue.edu/images/images.html
41
C 10 micra
A: Planktotrix B: Aphanizomenon C: Cilindrospermopsi raciborskii Fonte:http://www-cyanosite.bio.purdue.edu/images/images.html
42
3. METODOLOGIA UTILIZADA NAS INVESTIGAES A identificao e a quantificao de cianobactrias e cianotoxinas nos mananciais o principal componente dos programas de vigilncia e podem proporcionar precocemente um efetivo sistema de alerta a respeito do desenvolvimento de floraes potencialmente txicas (Chorus e Bartram, 1999). No Brasil tm sido registradas ocorrncias de floraes de cianobactrias nas diversas regies (Azevedo,1994; Lagos et al.,1999; Magalhes et al., 2001; Porfrio et al., 1999; Tsukamoto e Takahashi 2007; Yunes, 1996), e a preocupao tem aumentado significamente aps o caso de Caruaru. Para anlises quantitativas e qualitativas das amostras fitoplanctnicas so necessrias rotinas laboratoriais, que tm incio desde a coleta, estocagem, sedimentao e identificao das espcies ao microscpio. Em cmaras de sedimentao apropriadas possvel contar e identificar os organismos em questo. O volume celular estimado por meio de formas geomtricas, correspondentes s dimenses celulares dos organismos. O carbono orgnico e os pigmentos fotossintetizantes, principalmente a clorofila-a, fornecem indicao da biomassa fitoplanctnica (Alves, 2005). Alguns mtodos laboratoriais, como bioensaios, HPLC, CG, ELISA, Inibio de Fosfatase e Inibio de Acetilcolinesterase tm sido de grande auxlio na determinao das cianotoxinas, o que possibilita s empresas de abastecimento de gua tomarem as providncias quanto ao cumprimento da Portaria 518, de 24 de maro de 2004 (Alves, 2005), que determina a realizao mensal do monitoramento de cianobactrias na gua do manancial, no ponto de captao, quando o nmero de cianobactrias no exceder 10.000 clulas/mL e semanal quando exceder este valor. Sempre que o nmero de cianobactrias na gua do manancial, no ponto de captao, exceder 20.000 clulas/mL, diz a portaria, ser exigida a anlise semanal de cianotoxinas na gua na sada do tratamento e nas entradas das clnicas de hemodilise e indstrias de injetveis, o que pode ser dispensado quando No houver comprovao de toxicidade na gua bruta por meio da realizao semanal de bioensaios em camundongos de acordo com a metodologia proposta pela OMS (Brasil, 2004). Esta 43
Norma exige apenas a anlise de microcistinas, estabelecendo o valor de 1 g/Lpara a microcistina-LR total (conjunto da intracelular e extracelular) na gua para consumo humano, embora a prpria OMS considere inexistente uma base fivel para estimativa de exposio s cianotoxinas (Chorus e Bartram, 1999). As microcistinas so as toxinas que tm mtodos de deteco e quantificao mais desenvolvidos. Valores para outro tipo de cianotoxinas no foram estabelecidos devido insuficincia de dados (Falconer et al. 1999). A identificao de cianobactrias amplamente recomendada e tem sido utilizada, tomando-se por base suas caractersticas morfolgicas (BittencourtOliveira et al., 2001; Sivonem e Jones, 1999). No entanto, apenas a identificao no suficiente em razo da grande diversidade fenotpica de algumas espcies (Calijuri et al., 2006). Portanto, outros mtodos para deteco e quantificao de cianotoxinas devem ser utilizados. Os mtodos em uso atualmente compreendem os biolgicos realizados por bioensaios, os mtodos bioqumicos e os fsico-qumicos; os primeiros so indicados para aferir os efeitos das toxinas e os ltimos para quantific-las (Lorenzi, 2004). Aqui sero suscintamente descritos os mtodos integrantes da rotina de monitoramento das guas de consumo humano no Brasil.
3.1. Mtodo Biolgico
3.1.1. Bioensaios A utilizao de camundongos tem sido o teste padro para avaliao de toxicidade de cianobactrias, no que se refere sade pblica. econmico, pode ser facilmente utilizado em laboratrios por no exigir equipamentos sofisticados e fornece uma resposta dentro de poucas horas (Azevedo e Chassin, 2003). Entretanto, esta uma prtica que tem implicaes ticas, h uma crescente oposio ao uso e sacrifcio de animais nos testes de toxicidade e ocorre que nem sempre as companhias de abastecimento tm condies de obter e manter os animais-teste (Calijuri et al, 2006). Segundo Chorus e Bartram (1999), os bioensaios 44
so recomendados em algumas situaes: quando No houver disponibilidade de equipamentos, mtodos analticos ou pessoal capacitado para realizao de anlises qumicas, quando a toxicidade de uma florao for diferente das que j ocorrem habitualmente em reservatrios destinados ao abastecimento pblico ou quando for necessria a confirmao dos resultados de anlises qumicas, especialmente para confirmao de bioatividade da toxina.
3.2. Mtodos Fsico-Qumicos
3.2.1. Cromatografia Lquida de Alta Eficincia Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) ou High Performance Liquid Chromatography (HPLC) em ingls, um mtodo largamente utilizado no Brasil. Trata-se de um mtodo fsico-qumico para separao de componentes de uma mesma mistura (De S, 1994). A CLAE tem sido amplamente utilizada para detectar, quantificar, purificar e isolar algumas cianotoxinas (Meriluoto et al., 2000; Dahlmann et al., 2001). Nesta tcnica faz-se passar a amostra por uma coluna de slica C18 (fase reversa), com um gradiente de acetonitrilo e gua, ambos com cido trifluoractico (fase mvel). De acordo com a polaridade, as microcistinas vo sendo retidas durante mais ou menos tempo, ao que denomina-se (tempo de reteno) neste sistema. sada da coluna est um detector fotododo (PDA) que capta a absoro pelas substncias que por a passam. As microcistinas caracterizam-se por ter um espectro de absoro mximo a 238 nm (banda UV) devido ao resduo ADDA. Embora seja uma metodologia semi-selectiva e com um grau de deteco bastante bom, na ordem dos nanogramas (James et al., 1998; Dahlmann et al., 2001), requer instrumentao especializada, cuidados na preparao das amostras e a comparao com padres de toxina (existem apenas 3 padres no mercado: microcistina-LR, -YR e RR) (Rivasseau et al., 1999).
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3.3. Mtodos Bioqumicos
3.3.1. Ensaio do Imunoadsorvente Ligado Enzima Ensaio do Imunoadsorvente Ligado Enzima ou ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay) em ingls, um mtodo que utiliza anticorpos que foram desenvolvidos contra a microcistina-LR (Chu et al., 1989). Quando os anticorpos so fixados s toxinas, as enzimas podem ser usadas para produzir uma reao promovendo uma alterao de cor; esta a base do ELISA. Segundo Pearson (1990) este mtodo tem se mostrado mais sensvel que o bioensaio com camundongos. Apresenta as vantagens de ser altamente sensvel e, adicionalmente, possibilitar a anlise de grande quantidade de amostras num nico dia, o que reduz custos por anlise. Como desvantagens pode-se dizer que h alguma dificuldade de obteno de anticorpos especficos para microcistinas e podem ocorrer interferncias de outros componentes da amostra, possibilitando falsos positivos e falsos negativos, alm do custo dos kits e do leitor de placas (Calijuri et al., 2006).
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4. CIANOTOXINAS E SADE PBLICA NO BRASIL Nos ltimos 20 anos as cianobactrias passaram a fazer parte da lista dos chamados "patgenos emergentes" (Jardim e Viana, 2003). Aps o episdio de Caruaru, foi implementado entre os anos de 1999 e 2001 um projeto de mesmo nome com a finalidade de desenvolver um prottipo de KIT ELISA a ser produzido e comercializado no pas para a deteco de hepatotoxinas de cianobactrias em mananciais cujas guas fossem destinadas ao abastecimento pblico e aos centros de hemodilise. No mbito do Projeto Caruaru foi realizado um monitoramento em nvel nacional incluindo analises de amostras de guas bruta e tratada dos mananciais e quando detectada ocorrncia de microcistina havia notificao das companhias de saneamento quanto a qualidade de sua gua (Silver et al., 2001). E assim, enquanto era desenvolvido este trabalho, na primeira semana de novembro de 2001, no Rio Janeiro, segunda maior cidade do pais com 6.093.472 habitantes (IBGE, 2007), houve uma queixa por parte da populao a respeito de sabor e odor na gua potvel distribuda. Realizaram-se anlises do fitoplncton do reservatrio de Funil e do Rio Guandu, que abastecem a regio. J na primeira amostragem confirmou-se a predominncia de dois gneros de cianobactrias responsveis pelo sabor e odor na gua tratada: Anabaena e Microcystis. O nmero de clulas de cianobactrias neste reservatrio atingira 2.000.000/mL. Amostras subsequentes do Rio Guandu revelariam uma total dominncia de Microcystis. Os bioensaios realizados em camundongos utilizando-se amostras das cianobactrias retiradas deste reservatrio em 27 de novembro de 2001 revelaram sinais de intoxicao tpicos de hepatotoxicose. Nesta altura 45 centros de hemodilise estavam em funcionamento na cidade do Rio de Janeiro para o tratamento de aproximadamente 4000 pacientes renais crnicos. A secretaria Estadual de Sade solicitou ento que fossem realizadas anlises da gua das clnicas de hemodilise antes e depois do tratamento por osmose reversa, j que a primeira anlise de microcistinas realizada em 3 de dezembro de 2001 apenas sobre o carvo activado na coluna de gua tratada (o que significa antes do tratamento da gua por osmose reversa) teria 47
detectado a presena de microcistina. Assim, foram realizadas anlises para microcistinas em amostras duplas de gua de todas as 45 clnicas de hemodilise da cidade do Rio de Janeiro utilizando-se o KIT ELISA, durante o todo o ms de dezembro de 2001. Detectaram-se microcistinas na gua aps o tratamento por osmose reversa em quatro clnicas. A partir da foi realizada uma pesquisa de microcistinas no soro dos pacientes da hemodilise do HUCFF-UFRJ (Hospital Universitrio Clementino Fraga Filho da Universidade Federal do Rio de Janeiro) um dos quatro centros onde foi detectada a presena da cianotoxina. Acreditava-se que um total de 44 pacientes que ali eram submetidos hemodilise estariam expostos. Isto se confirmou, as anlises Iniciais por ELISA detectaram a presena de microcistina em 90% das amostras de soro coletadas dos pacientes. Doze destes pacientes foram selecionados para continuar o acompanhamento durante o perodo dos dois meses subsequentes. As concentraes de microcistina no soro variaram de 0,16 a 0,96 ng/mL. O estudo revelou que as microcistinas permaneceram continuamente no soro destes pacientes at 57 dias aps a exposio, quando foi realizada a ltima amostragem. Os resultados indicaram que estes pacientes foram expostos a doses subletais de microcistinas durante a dilise renal. No ficou totalmente esclarecido o porqu desta contaminao, j que havia na clnica um sistema de osmose reversa, novo, e que operava de acordo com as recomendaes do fabricante. Entretanto um aspecto chamava ateno, aquele sistema fora projetado para funcionar em temperatura ambiente de 20C, porm a temperatura ambiente na altura do estudo chegava a 40C, era vero no Brasil. Esta poderia ser uma explicao ao fato de que a membrana projetada para ser uma barreira s molculas muito pequenas tivesse permitido a passagem das microcistinas para a gua da dilise. No foi investigado qualquer outro fator que pudesse ter contribudo para tal situao e nem aspectos relativos sade dos pacientes em questo. Como foi descrito inicialmente, outras trs clnicas de dilise no Rio de Janeiro apresentaram resultados positivos na gua aps tratamento por osmose reversa na mesma altura. Contudo, segundo os autores, no foi possvel desenvolver um estudo com os soros dos seus pacientes. O estudo revelou que mtodos de 48
tratamento de gua (i.e., osmose reversa), que so concebidos para produzir um determinado nvel de qualidade gua, precisam ser testados para avaliar a sua verdadeira capacidade (Soares et al., 2004). Foi no Nordeste brasileiro o primeiro episdio documentado de mortes humanas ocasionadas por cianotoxinas, em Caruaru (Jochimsen et al.,1998) uma cidade com 217.430 habitantes (IBGE, 2007) situada a 135 Km de Recife, capital do Estado de Pernambuco. Caruaru est localizada numa regio de clima semi-rido, com temperaturas que variam entre 20 e 38 C ao longo do ano, a gua escassa e o fornecimento irregular (Coelho, 1998b). Em meados de fevereiro de 1996, uma epidemia de origem desconhecida, at ento, surgiu numa clnica de hemodilise conveniada com o Sistema nico de Sade (SUS), o Instituto de Doenas Renais (IDR), que funcionava havia 10 anos e na altura mantinha cerca de 130 pacientes renais crnicos sob tratamento dialtico (Coelho, 1998a). Um paciente morreu repentinamente em 20 de fevereiro na clnica (Carmichael et al., 2001). No dia 6 de maro de 1996, a Secretaria Estadual de Sade foi informada do aparecimento de sintomas como cefalia, tontura, distrbios visuais e astenia em cerca de trinta pacientes daquele servio. No dia 7 de Maro, iniciou-se a investigao epidemiolgica. Verificou-se ento que antes mesmo do dia 6 de maro j teriam ocorrido dez bitos no notificados. Alm dos sintomas informados os pacientes apresentavam confuso mental, convulso, nuseas e vmitos. Com o passar do tempo, comearam a exibir um quadro clnico compatvel com hepatite txica: ictercia, ascite, hepatomegalia dolorosa e alteraes significativas nas transaminases, bilirrubinas, tempo de protrombina e triglicerdeos (Filho et al., 1999). A gua fornecida para a clnica era retirada do tanque de decantao da estao de tratamento, antes de receber qualquer tratamento, levada ao caminho que abasteceria a clnica onde era clorada pelos prprios motoristas e no havia na clnica sistema de tratamento por osmose reversa (Carmichael et al., 2001). Estes fatos levaram a equipe mdica a formular a primeira hiptese de diagnstico: intoxicao por cloraminas, visto que a gua deveria conter uma quantidade elevada de material orgnico por ocasio da clorao (Coelho, 1998b). Alm da intoxicao 49
pelo cloro, outras hipteses foram levantadas: intoxicao por metais pesados ou agrotxicos, infeco por bactrias e vrus (Filho et al.,1999). Ao final do ms de maro foi levantada a hiptese de que a sintomatologia dos pacientes era conseqncia de sua exposio, durante o procedimento de hemodilise, s toxinas de cianobactrias contidas na gua at porque j havia o conhecimento de que avaliaes do fitoplncton do reservatrio que abastecia a cidade realizadas em anos anteriores detectaram que cianobactrias eram dominantes durante os meses de vero, desde 1990. Novas anlises do fitoplncton do reservatrio foram realizadas e detectaram-se dois grupos de cianobactrias: Microcystis e Cilindrospemopsis. As anlises para cianotoxinas detectaram presena de microcistinas em concentrao de 19,5g/L. A Organizao Mundial de Sade estabelece 1 g/L como limite desta substncia para gua potvel. A pesquisa de microcistina no sangue e no tecido heptico dos pacientes fora positiva para microcistinas -YR, -LR, e-AR, em concentraes mdias de 2,2 ng / mL (Azevedo et al., 2002). No perodo de fevereiro de 1996 a dezembro de 1997 j se contabilizavam 52 bitos. At outubro de 1997, quando foram concludos os estudos, um total de 76 bitos foram registrados: a causa mortis foi hepatite ps-exposio a toxinas de cianobactrias (Carmichael et al., 2001). Os grupos de maior risco de morte foram os homens na faixa etria acima de sessenta anos de idade (Filho et al., 1998). A partir dos relatrios deste caso um padro de doena foi descrito e atualmente referido como Sndrome de Caruaru cujos sintomas so os que aqueles pacientes apresentaram. Outro episdio tambm no Nordeste brasileiro envolvendo mortes humanas, possivelmente por cianobactrias, ocorreu no ano de 1988 na regio de Paulo Afonso (212500 habitantes - IBGE, 2007) Estado da Bahia, por ocasio do enchimento do recm construdo reservatrio de Itaparica. Num perodo de 42 dias foram registrados cerca de 2000 casos de gastroenterite com 88 bitos. No decorrer da epidemia foi realizado o levantamento do nmero de atendimentos dirios dos casos, de internamentos e bitos, estes dois ltimos dados foram comparados com os de igual perodo em anos anteriores. Foram realizados exames bacteriolgicos, 50
virolgicos e toxicolgicos do sangue e fezes dos pacientes e anlises hidrobiolgicas, bacteriolgicas e ainda pesquisa de metais pesados na gua de consumo. Os resultados revelaram que a fonte de infeco teria sido a gua captada na rea de influncia da barragem onde, de acordo com o resultado das anlises, havia naquela altura uma florao de dois gneros de cianobactrias txicas: Anabaena e Microcystis apresentando densidades significativamente maiores do que o habitual em razo da degradao da biomassa na rea de influncia da barragem, o que poderia explicar a ocorrncia da epidemia (Teixeira et al., 1993). Tem crescido significativamente no Brasil o interesse cientfico pelas ocorrncias de floraes txicas de cianobactrias. So inmeros trabalhos cientficos a abordarem os mais distintos aspectos, como dinmica de populaes, tcnicas de remoo de cianotoxinas em guas de abastecimento, efeitos de acumulao em organismos guticos, efeitos reguladores de dominncia, avaliao de risco. As leituras do conta disto: Costa (2003); Azevedo et al. (1994); Bobeda e Azevedo (1993); Brasil (2004); Bressan (2001); Domingos (2001); Kamogae (2000); Jardim et al. (1999); Jardim e Azevedo (2005); Molica (1996); Nobre (1997); Oliveira (1997); Porfrio (1999); Silva (2005); Sirtori (2006); Zagatto (1992,1994,1995); Yunes (2003). H tambm estudos sobre ocorrncia de microcistinas em mananciais utilizados para o abastecimento pblico e centros de hemodilise (Cieslinski 2003; Soares et al.,2004). Entretanto, apesar de os diversos estudos demonstrarem a relevncia deste assunto sade pblica, ainda reduzido o nmero de casos documentados de sintomas relacionados com cianotoxinas. Estes, aqui descritos, tm sido os nicos estudos de casos de intoxicaes humanas por cianobactrias disponveis na literatura brasileira. No se encontram no pas outros estudos sobre os efeitos das exposies humanas nos stios de busca da CAPES-Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior www.capes.gov.br, ou nos diversos peridicos e teses ali disponibilizados, onde esto reunidos os trabalhos cientficos de relevncia no pas. Tambm no h investigao epidemiolgica (Azevedo, 2008. com. pess.) mesmo com todos os eventos de floraes e bioacumulao nos mais distintos organismos, citados como riscos potenciais sade pblica por Bressan 51
(2001); Costa (2005); Silva (2005); Tsukamoto e Takahashi (2007); Vieira (2002); Zagatto (1992); Yunes (2000), talvez pelo fato de os sintomas de intoxicaes crnicas ou subletais por cianobactrias serem confundidos com os de outras doenas provocadas por outros agentes patognicos, como acontece com efeitos provocados por microcistinas ao nvel da insuficincia heptica, e que so confundidos com cirroses ou hepatites (Kuiper-Goodman et al., 1999). Alm disto, os valores limite para cianotoxinas em gua e alimentos que foram estabelecidos pela legislao brasileira, aps o episdio de Caruaru, tm em considerao apenas os efeitos agudos da microcistina e no contemplam os efeitos crnicos ou carcinognicos. A sua determinao baseou-se, essencialmente, nos efeitos de toxicidade aguda em animais (Kuiper-Goodman et al.,1999).
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5. MTODOS DE REMOO DE CIANOTOXINAS EM USO NO BRASIL Segundo Brando (2005), a remoo de cianobactrias e cianotoxinas em gua para consumo humano tema de pesquisa novo no Brasil e no exterior. Os primeiros trabalhos que avaliam a remoo destes organismos e suas toxinas em gua para abastecimento datam da dcada de 80. Dois processos tm sido considerados efetivos na remoo de cianotoxinas: a adsoro em carvo ativado (Zagatto, 1995) e a ps-oxidao, ou seja, a oxidao realizada aps a remoo das clulas viveis de cianobactrias j que a seqncia convencional de tratamento, que consiste na coagulao, floculao, sedimentao e filtrao rpida, no eficaz na remoo de cianotoxinas (Yunes, 2002). Segundo Zagatto (1995) o tratamento da gua por carvo ativado permite a retirada da toxina presente na gua, aumentando a segurana quanto toxicidade para as guas de abastecimento pblico. Um estudo de bancada demonstrou que na fase de floculao so necessrios 15 mg de carvo para reter neuro e hepatotoxinas equivalentes produo de 5 mg de algas (peso seco). A relao de retirada carvo/alga de 3:1. As concentraes de carvo necessrias para reteno destas toxinas na gua utilizada para hemodilise no so conhecidas. Outros estudos brasileiros tm demonstrado a eficincia do carvo ativado na remoo de microcistinas e saxitoxinas (Brando, 2005; Ferreira, 2004; Kuroda, 2006; Silva, 2005). De acordo com o relatrio da Fundao Nacional de Sade (FUNASA, 2003), a ps-ozonizao pode apresentar eficincia de remoo de toxinas muito elevadas, chegando completa destruio destes compostos. A dosagem necessria depender da concentrao, do tipo de cianotoxina e da presena de outros compostos orgnicos. Para remoo de clulas de cianobactrias, um experimento realizado por Jardim e Viana, (2003) demonstrou a flotao como sendo uma das formas mais eficientes de remoo de clulas intactas de cianobactrias. No caso estudado foi a Cilindrospermopsis raciborskii, potencialmente produtora de saxitoxina. Os processos de tratamento mais comumente utilizados no Brasil, na sua vasta maioria baseados em seqncia de tratamento envolvendo a coagulao 53
qumica, com particular predominncia do tratamento convencional, no so eficientes na remoo de cianotoxinas, e para serem eficientes na remoo de clulas viveis de cianobatrias necessitam de bom controle operacional. Os processos mais efetivos para remoo de cianotoxinas no so comuns na maioria dos municpios brasileiros e so tambm bastante exigentes com relao ao controle operacional.
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Resumo de processos de tratamento de gua e remoo de cianobactrias e/ou cianotoxinas, segundo Chorus e Bartram (1999).
Tabela 4 Tcnicas de tratamento Coagulao / filtrao Precipitao / sedimentao Filtrao rpida Absoro por carvo ativado em p Absoro Por carvo ativado gralular Oxidao Oznio Oxidao Permanganato de potssio Oxidao Perxido de hidrognio Tratamento biolgico Filtrao por membranas Observaes de remoo
Clulas Dissolvidas na gua Ou filamentos
Observaes
Remove mais clulas e conseqentemente suas toxinas Remove mais clulas e conseqentemente suas toxinas Remove as clulas Dosagem acima de 20mg/L-1 demonstrou ser efetiva para remoo de toxinas e odor Absoro efetiva na remoo de toxinas. Pode ser saturado com a matria orgnica natural Extremamente rpido e eficiente Eficiente na remoo de toxinas dissolvidas na gua, mas na ausncia de clulas No efetivo Alguns sinais de remoo, mas ainda no h pesquisas concludas No h muitos estudos
> 80% > 90% > 60%
< 10% < 10% >10%
> 85%
> 60% _
> 80% > 98%
> 95%
Possvel Possvel > 99% Incerto
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6. CONSIDERAES FINAIS Os estudos sobre as floraes de cianobactrias potencialmente txicas em reservatrios brasileiros demonstram que populaes de diversas localidades esto expostas a nveis subletais de cianotoxinas, entretanto ainda falho e pouco abrangente o controle dos fatores que regulam a dominncia destes organismos, apesar de haver no pas legislao especfica sobre o tema. E mais, no so encontradas referncias de estudos epidemiolgicos ou de padres de doenas resultantes do efeito destas toxinas sobre as populaes expostas. O conhecimento sobre etapas importantes para remoo de microcistina, uma das toxinas mais comuns em reservatrios e por isso a mais estudada, durante o tratamento da gua e sobre seus possveis efeitos em doses no letais aos pacientes renais crnicos, tambm vago apesar da Sociedade Brasileira de Nefrologia (SBN) considerar que qualquer concentrao mensurvel de cianotoxina em guas de unidades de hemodilise representa um risco potencial aos pacientes durante o procedimento e recomendar que a concentrao de cianotoxinas em gua destinada a este fim seja igual a zero. Uma vez que ocorrem intoxicaes por cianotoxinas no h antdotos para neutralizar seus efeitos e nem existem tratamentos para estas intoxicaes. H situaes em que as cianobactrias txicas desaparecem do reservatrio antes mesmo que as autoridades de sade pblica confirmem uma florao com o possvel risco, pois sendo geralmente desconhecedoras dos danos, arrogam que os processos de tratamento da gua rotineiros so capazes de delir qualquer problema. No entanto, as pesquisas tm demonstrado que as cianotoxinas em soluo no so removidas por meio dos processos convencionais de tratamento, sendo inclusive resistentes fervura. necessrio o entendimento de que um padro de potabilidade verdadeiramente seguro sade pblica no poder ser concretizado apenas numa E.T.A. e sim partir de um programa eficiente de saneamento bsico fundamentado num controle que seja rigoroso com o destino dos efluentes domsticos, agrcolas e 56
industriais, o que supostamente dificultaria a entrada de nutrientes que predispem os mananciais aos processos de eutroficao artificial e consequentemente a um de seus efeitos mais danosos sade pblica: as floraes de cianobactrias txicas.
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Qualquer contato potencial irritante

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contaminadas (Portes, 2004); no

so comuns referncias sobre este modo de

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2.3. Floraes em Ecossistemas Epicontinentais no Brasil

1998 2000 2001

Costa e Azevedo, 1994

Abril a Dezembro de 2002 Todo o ano de 2002, mesmo no inverno 2003

Programa AGUAAN Programa AGUAAN

Lagoa dos PatosRio Grande do Sul

1994 a 1998 2003 2005

Microcystis aeruginosa Anabaena sp. Microcystis aeruginosa

Cianobactrias e sade pblica no Brasil 2008

1,5 milho de habitantes

Tsukamoto e Takahashi 2007

Abastece 400 mil habitantes

Represa de FurnasMinas Gerais

Abastece 34 municpios de Minas Gerais

Cylindrospermopsis raciborski, Microcystis viridis

Jardim et al., 1999

Vrzea da PalmaMinas Gerais

UFMG, Projeto Manuelzo 2007

Represa de Utinga Par

Principal manancial de gua potvel da cidade de Belm, 1.408.847 habitantes (IBGE,2007)

Anlises por CLAE e ELISA, detectaram microcistinas.

Complexo lagunar MundaManguaba Alagoas