FACULTA DE INGENIERIA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES

CURSO: Microbiologa general PROFESOR: Juan Jar Chumpitaz ALUMNA: Preparacin de mdios de cultivo Cultivo de microrganismos Morfologia bacteriana INFORME: Preparacin de medios de cultivo LABORATORIO: 93G

Ciclo:

NORMAS DEL LABORATORIO

Venir repasando la gua para tener conocimientos previos antes de cada clase Ser puntual en la asistencia Ingresar con el mandil puesto Guardar nuestras cosas fuera de la mesa de trabajo Ser puntual y responsable en la entrega de informes Estar atento a las instrucciones y recomendaciones que da le profesor. Antes de iniciar la experiencia, verificar que los materiales estn limpios y esterilizados para evitar que se contaminen la muestra. Realizar la experiencia con sumo cuidado en la manipulacin de materiales y reactivos. Tomar apuntes de las observaciones que se realizan durante la experiencia. Al concluir la experiencia dejar limpio y ordenado la mesa de trabajo. Apagar los celulares antes de ingresar al laboratorio. Comprometerse con el trabajo.

En el siguiente informe aprenderemos desde la parte inicial hasta la final, a preparar medios cultivos, haciendo uso de las placas Petri y de los agares; a su posteridad, podremos sembrar los cultivos, en los cuales se habrn formados colonias de microorganismo, y las cuales identificaremos segn su morfologa, y realizaremos una tincin Gram, para poder diferenciarlas.

Reconocer las caractersticas de los principales medios de cultivo usados en el estudio de microorganismos de importancia ambiental. Aprender la metodologa de utilizacin de los medios de cultivo para el aislamiento y cultivo de microorganismos de importancia ambiental.

Aislamiento de bacterias aerobias en placas Petri por los mtodos de estriado y aislamiento. Manejar los procedimientos de recoleccin, el procesamiento de las muestras y los mtodos de aislamiento.

Reconocer los diversos parmetros que se toman en cuenta para describir una colonia bacteriana. Relacionar la morfologa colonial con la capacidad tintorial.

MEDIOS DE CULTIVO1

Es una solucin liquida o gelatinosa que contiene los nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos. Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento2 Clasificacin de los medios de cultivo Por su consistencia: a) Lquidos: Tambin se llaman caldos de cultivo, no contienen agar y se preparan en matraces pequeos. b) Semislidos: contienen 0.5% de agar y se preparan en matraces pequeos. c) Solidos: contienen de 1.5% a 2% de agar y se preparan en cajas Petri( placa) o en tubos de ensayo. De acuerdo a su composicin: Definidos Complejos De acuerdo a su funcin: Medios selectivos: Medios diferenciales: Medios de enriquecimiento Medios enriquecidos: Preparacin de medios de cultivo La base de su elaboracin es un medio deshidratado, un medio que est en polvo al cual hay que disolver en agua y esterilizar.
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Fuente blog: http://www.slideshare.net/guest5e31b0e1/medios-de-cultivo Fuente pdf: http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClaseProcariontes /Alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20Medios%20de%20cultivo.pdf

CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Tienen un uso creciente en la Biotecnologa y la proteccin medioambiental, por lo que es una necesidad de mantenerlos de manera que las propiedades que los hacen importantes permanezcan estables.3 Un cultivo es el crecimiento de poblaciones microbianas de forma controlada en un medio artificial.
MORFOLOGA DE COLONIAS4

El crecimiento bacteriano en una superficie slida presenta caractersticas de cultivo llamadas: morfologa colonial. Una colonia se define como una masa visible de microorganismos, todos originados de una slo clula madre, de manera que una colonia constituye clones de bacterias, todas genticamente similares. Los siguientes adjetivos pueden usarse para describir la morfologa colonial o caractersticas de cultivo: 1) Tamao: medido en milmetros; menos de 1mm = puntiforme 2) Forma: Circula, Irregular, Filamentosa, Rhizoide y Ondulada 3) Margen: (la forma del contorno de la colonia): Entero, Ondulada, Lobada, Irregular, Concntrica, Arrugado, Circular irradiado, Filamentoso (filiforme), Ciliado. 4) Propiedades pticas: Opaca, Translcida y Transparente y Brillante (mucoide). 5) Elevacin: Elevada, Convexa, Plana, Gotiforme (forma de gota), Umbonada, Crateriforme. 6) Textura: Suave, Granular, Tenaz, Mucoide. 7) Pigmento: Hialino a colores blanquesinos, y de amarillos a rojos.

fuente: http://www.ecured.cu/index.php/Cultivo_de_microorganismos 4 Fuente: http://www.mitecnologico.com/lb/Main/MorfologiaColonialYMicroscopica

AGAR:5

Los medios de agar selectivos son utilizados para aplicar una presin selectiva a los organismos que crecen en ellos, por ejemplo para seleccionar solamente bacterias gram-negativas se usa elAgar McConkey, que a su vez tiene un colorante que indica si la bacteria es fermentadora de lactosa o no.

Para la esterilizacin de materiales: Papel kraf Algodn Placa Petri Erlenmeyer Pipeta Equipo: horno esterilizador Para medios de cultivo: Agares: Macconkey, Baird Parker. Agua destilada. Plancha. Para cultivo de microorganismos: Asa de siembra Los medios de cultivo ya preparados y paqueados anteriormente. Mechero Plumn indeleble, para poder escribir en las placas Petri el tipo de cultivo que es. Para el cultivo de microorganismos se usaran muestras de agua de charco y de sopa. Para la morfologa bacteriana: se usara los tintes de la coloracin gram. asa de siembra, mechero, agua destilada. equipo: microscopio.
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Fuente: http://es.wikipedia.org/wiki/Agar-agar

Esterilizacin de los materiales, previamente se envolver con papel kraff, las placas Petri, los Erlenmeyer y las pipetas. Primero comenzamos con la pipeta:

Se

colocara

una

torunda de algodn compacta

Para la placa Petri:

Para el Erlenmeyer: Hacer el corcho de algodn primero:

De hi llevar todo al horno esterilizador:

1. Primero pesar los medios de cultivo, en el caso de los agar que usaremos: En el Macconkey se pesara 5.155gr, ya que se disolver en 100ml

En el Bard Parker se pesara 6.18gr y se disolver en 100ml. As como tambin se pesara de Agar Plate. 2. Colocar el medio de cultivo en polvo en un matraz Erlenmeyer el cual previamente haba sido esterilizado y agregar agua destilada. 3. Calentar en la parrilla de agitacin hasta que el medio este totalmente cristalino. 4. Retirar de la parrilla y colocar un tapn hecho con algodn envuelto en gasas. El tapo debe quedar fijo pero no apretado.

5. Colocar el medio en la autoclave y esterilizar a 121C durante 20 minutos. 6. Pasado los 20 minutos sacar el medio de cultivo y dejar enfriar solo un poco. Luego de haber preparado el medio de cultivo, los medios de cultivo preparados se procedern a autoclavar para esterilizar.
Sean los agares

En nuestro caso el autoclave se malogro entonces los que hicimos es hacerlo en un olla presin.

Luego de haber esterilizado, esperar a que enfren, los Erlenmeyer, para luego ser llevados al laboratorio especial, donde se le dar otro tratamiento.

Antes de realizar la siembra, se debe plaquear los medios de cultivo, preparados durante el desarrollo de las prcticas anteriores. El procedimiento se realizara en asepsia, para evitar la contaminacin. El procedimiento para plaquear es el siguiente:

Primero con sumo cuidado, destapamos el medio de cultivo del agar.

Todo cerca al fuego, y cuando estoy trabajando no puedo hablar y debo estar a cierta distancia para no poder contaminar.

Primero se calentaran los medios de cultivo y esperar a que se vuelvan al estado lquido, en el bao mara a 90C. Se tomara cada placa Petri estril y delante del mechero se le adicionara un volumen de 15ml del medio de cultivo enfriado 55C. Se sellara la placa y se esperara a que solidifique el medio para proceder a invertir la placa e incubar.

Sean los medios de cultivo

Agar parker

Agar platea

Agar macconkey

Antes de realizar el cultivo, tenemos que lavarnos bien las manos. Por aislamiento por el mtodo de estriado, se realizara lo siguiente: a) Quemar el asa de siembra al rojo, y destapar el frasco o recipiente en el cual se encuentra la muestra.

b) Coger con el asa de siembra con el aro de esta el inoculo del cultivo, si es que se est trabajando con un frasco previamente se debe esterilizar la boca del tubo, despus de extraer tambin.

Sea la muestra de agua de charco

c) Tomar con la mano izquierda la placa Petri con agar, el dedo ndice acta como bisagra y levantar con el pulgar, la tapa de la placa. Realizar todo ello altura del mechero.

d) Descargar el inoculo en un punto de la capa superficial de la placa Petri y con el asa misma, describir las estras hasta el margen apuesto de la placa, cuidando de no romper el medio. e) Dejar caer suavemente la tapa de la placa con el control de los dedos pulgar e ndice. f) Rotular los datos sobre el dorso de la placa Petri, escribiendo el nombre del grupo, tipo de siembra y fecha. g) Luego por ltimo se envolver con el papel Kraf.

h) Incubar 37C durante 2 horas a 48 horas, colocando las placas en la estufa en posicin invertida.
Este mismo procedimiento se realiza para los tres agares

MORFOLOGIA DE COLONIAS 1. Primero ingresamos al laboratorio de microbiologa general, usando nuestro mandil. 2. Luego nos distribuimos en las mesas de trabajo, dejando solamente sobre la mesa los materiales a usarse en la experiencia. 3. El profesor, nos indicara como se realizara la experiencia, en este caso nos ense, unas diapositivas, en las cuales se vea la morfologa de las bacterias. 4. A base de un ejemplo con una placa, ya cultivada, nos ense el procedimiento, de cmo se debe extraer una muestra de un cultivo, para realizar una tincin gram en ella, y recin ver que microorganismos son los que estn presentes en las colonias.
PROCEDIMIENTO

1. El primer paso es agarrar una de las placas, que hemos cultivado, ya sea de la de agar Mac Conkey, de Platae o la Bard Parker, y ahora identificaremos el tipo de colonia que se ha formado.

2. Ahora haciendo uso de nuestra gua de laboratorio, y de una imagen que nos present el profesor, podremos identificar la morfologa de la colonia formada.

3. Luego de haber identificado cada colonia del tipo de cultivo realizado en los agares, lo que hacemos es extraer una muestra de cada colonia, con ayuda de la asa de siembra, previamente esterilizada, con sumo cuidado, luego de haber obtenido la muestra, en el momento de colocar en la lmina portaobjeto, se le debe disolver en una gota de agua formando un coloide.

4. Luego de haber hecho este mismo procedimiento para los tres tipos de agares cultivados, realizamos tincin gram para cada uno. OBSERVACIONES Las muestras que si resultaron fueron en mi mesa de trabajo fueron la de Bard Parker y de Macconkey. En el medio Bard Parker( charco), se observ lo siguiente:

Se observan bacilos alargados, gram +

En el medio Macconkey:

Bacilos Gram -

En otra mesa de trabajo pude observar cmo es que se vea los microorganismos de la colonia cultiva en Agar Platae, lo que vi se mostrara a continuacin:

Se lleg a cultivar, en los agares las muestras, que se haban trado para la clase.

Se pudo identificar la morfologa de cada colonia, que se form en los agares, cultivados.
MacConkey (CHARCO)

Platae(sopa)

Parker

Macconkey(
charco)

Caractersticas Forma Tamao Borde Elevacin Textura Consistencia Transparencia Cromogenesis

Colonia 1 Irregular Mediana undulada Umbilical Rugosa Seco Opaca crema

Colonia 2 Circular Pequeo Entero Plana Lisa Seco Opaca Blanco

Colonia 3 circular Mediano

Colonia 4 Circular Mediano

Colonia 5

Colonia 6

Irregular circular Extendido Mediano en velo Ondulado Ondulado ondulada Ondulado Convexo Liso Mucoide Opaca Rojo Convexo Lisa Mucoide Opaco rojo umbilical Rugosa Viscosa Opaca crema Convexo Lisa Mucoide Opaca Roja

Atraves de la tincin gram pudimos, identificar qu tipos de microorganismos se encontraban en cada colonia, si eran del tipo gram + o -. Mediante como aprendimos a clasificar las colonias segn, su morfologa, podemos diferenciar, las colonias. Se realiz la tincin gram, para los tres tipos de agares.

Aprendimos a reconocer los diversos parmetros que se toman en cuenta para describir una colonia bacteriana. Se puede comprobar la morfologa colonial, a travs d la tincin gram

Al momento de extraer una pequea muestra con el asa de siembra, procurar, que este esterilizada, pero no debe estar demasiado caliente, ya que puede quemar la colonia. Disolver mi muestra en una gota de agua en la misma placa portaobjetos, para que se pueda formara un coloide ms uniforme. En el momento que extraemos la muestra cerca la fuego, tener cuidado, que nos podramos quemar. En la tincin gram tener cuidado en la etapa de fijacin, con el mechero, ya que la lmina posta objeto debe ser sujeta con la ayuda de unas pinzas, y que la lmina se deber atravesar a travs del fuego.

CULTIVO DE MICROORGANISMOS Cul es la finalidad de aislamiento de organismos? El aislamiento de una bacterias es para obtener una cepa pura y poder utilizarla en algn experimento o alguna prueba es para tener solo un tipo de microorganismo y que no haya de varios, as se pueden estudiar ms fcilmente y en base al microorganismo aislado poder sacar conclusiones de las pruebas o experimentos realizados. Explique los mtodos para el aislamiento y cultivo de bacterias anaerobias.
METODOS DE CULTIVO DE BACTERIAS ANAEROBICAS

Luego de sembrar la muestra en un medio de cultivo adecuado, la incubacin en anaerobiosis se consigue por medio de alguno de los siguientes sistemas: jarras anaerbicas, bolsas de anaerobiosis y la cmara de anaerobiosis o cmara de guantes Jarras de anaerobiosis Es el sistema ms utilizado para generar una atmsfera anaerbica. Consiste en una jarra de plstico con una tapa que cierra hermticamente. La atmsfera anaerobia puede lograrse por dos mtodos diferentes.

El ms sencillo utiliza un sobre comercial generador de hidrgeno y CO2 que es activado, ya sea mediante la adicin de agua o por la humedad de las placas de agar. El H2 se combina con el O2 del aire para formar agua generando la anaerobiosis. Esta reaccin es catalizada por granallas de zinc recubiertas de paladio que se encuentran depositadas en una canastilla fija a la tapa de la jarra Bolsas de anaerobiosis Consiste en una bolsa plstica transparente, gas impermeable, un indicador de anaerobiosis (azul de metileno o resarzurina) y un sobre generador de anaerobiosis igual al utilizado para las jarras. Una o dos placas de Petri pueden introducirse antes de sellar la bolsa. Este sistema tiene las ventajas de su economa y practicidad, adems de poder observar directamente si existe crecimiento en las placas de Petri sin abrir el sistema; tambin se puede utilizar para los sistemas de identificacin tipo API-20A. Estas bolsas sirven adems para el transporte de muestras como habamos visto anteriormente.

MORFOLOGIA BACTERIANA

1. Qu importancia tienen la produccin de pigmentos, microbianos en la naturaleza? Los pigmentos pueden definirse como aquellas sustancias qumicas que imparten color a otros materiales por el efecto ptico de la refraccin de la luz del sol, o bien como una sustancia en polvo que al mezclarse con un lquido vehculo imparte color a una superficie (Wani et al., 2004). An cuando los pigmentos extrados de plantas, animales y minerales han sido utilizados a lo largo de la historia, a nivel industrial poseen desventajas econmicas relacionadas con su obtencin y procesamiento. Es por ello que el uso de pigmentos sintetizados qumicamente se extendi en los ltimos aos gracias a su fcil produccin, bajo costo y bajas cantidades requeridas debido a sus excelentes propiedades de coloracin. La creciente utilizacin de estos materiales para mejorar las caractersticas organolpticas de productos alimenticios trajo consigo alteraciones toxicolgicas que llevaron al desarrollo de normas regulatorias para el uso de estos aditivos. Ante esta problemtica, actualmente se han desarrollado bioprocesos para la obtencin de compuestos de inters industrial (en especfico pigmentos), con altos rendimientos, bajo costo y sin implicaciones toxicolgicas. Es as

como se ha logrado el desarrollo de diversos pigmentos naturales a partir de microorganismos, incluyendo hongos filamentosos, levaduras y algunas microalgas. Estos tipos de pigmentos son sustancias coloridas sintetizadas, acumuladas o excretadas a partir de clulas, la cuales pueden ser empleadas para colorear los alimentos, evitando las desventajas toxicolgicas de los pigmentos sintetizados qumicamente. Esta nueva forma de produccin de colores nos lleva a pensar en un mundo microscpico como la solucin, en donde a partir de microorganismos se obtienen metabolitos secundarios con tonalidades especficas, sin efectos nocivos para la salud y con mltiples ventajas econmicas a nivel industrial.

http://www.postgradoeinvestigacion.uadec.mx/CienciaCierta/CC19/CC19pigm entosmicrobianos.html http://es.wikipedia.org/wiki/Agar-agar http://www.ecured.cu/index.php/Cultivo_de_microorganismos http://www.mitecnologico.com/lb/Main/MorfologiaColonialYMicroscopica http://www.slideshare.net/guest5e31b0e1/medios-de-cultivo http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/Cl aseProcariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20Medios%20de%20cultivo .pdf