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1. OBJETIVOS. Determinar el contenido de carbohidratos totales en una muestra de alimentos. Conocer las tcnicas visibles como mtodo de anlisis qumica de alimentos, as como la preparacin de curvas de calibracin.
2. MATERIALES. Equipo para reflujo Bureta 25 ml Pipeta 1 de ml Pipeta de 2 ml Pera de succin Matraz volumtrico de 250 ml Tubos ensayo (10) Beaker 100 ml Beaker 50 ml Espectrmetro Muestra de jugo procesado (incoloro)
3. REACTIVOS. Solucin stock glucosa (100 g/ml) Fenol al 5% cido clorhdrico concentrado. cido sulfrico concentrado. Hidrxido de Sodio 6N.
Llevar al equipo de destilacion por reflujo durante 90 min y, luego, dejar enfriar.
Colocar desde 0 a 1.0 ml de la solucin de glucosa (100 g/ml) en 10 tubos de ensayo respectivamente
DATOS EXPERIMENTALES.
Tabla 1. Descripcin de la bebida de muestra. NOMBRE DE LA PESO DE LA INFORMACIN NUTRICIONAL MUESTRA MUESTRA (g) Tamao de la porcin. 350 ml Quatro 4,0256 g Carbohidratos totales. 13,13% Azcares 38,50g. Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ.
Tabla 2. Lectura de la Absorbancia en la solucin estndar de glucosa. Concentracin Absorbancia Absorbancia Absorbancia Absorbancia Tubo de Glucosa, A3 promedio A1 A2 mg/ml 1 0,0 0,000 0,000 0,000 0,000 0,053 0,053 2 5,0 0,053 0,053 3 10,0 0,164 0,161 0,161 0,162 4 20,0 0,280 0,286 0,281 0,282 5 30,0 0,421 0,424 0,426 0,423 6 40,0 0,484 0,483 0,478 0,481 7 50,0 0,702 0,698 0,700 0,700 8 60,0 0,846 0,847 0,847 0,846 9 70,0 0,982 0,840 0,985 0,935 10 80 1,115 1,118 1,120 1,117.6 Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ.
Tabla 3. Lectura de la Absorbancia en la muestra de quatro Volumen de la muestra en la Absorbancia Tubo Absorbancia Absorbancia disolucin 3 No. A1 A2 (quatro) A2 M1 1 0,5 ml 0,4650 0,4710 0,4700 2 0,8 ml 1,0420 1,0520 1,0550 Fuente:ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ.
CALCULOS. PREPARACION DE LA CURVA DE CALIBRACIN PARA LA SOLUCION STOCK DE GLUCOSA ( TABLA 4: Clculos de concentracin glucosa. Tubo Volumen inicial Volumen final Concentracin. Vi Vf 1 0,0 ml 2,00 ml
0,1 ml
2,00 ml
3 4 5 6 7 8 9 10 11
2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml 2,00 ml Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ.
Tomamos once muestras, para nuestro anlisis se abarcaron solo 10 ya que la ltima se sale de la curva de calibracin.
CONCENTRACIN DE CARBOHIDRATOS DE LA MUESTRA DE QUATRO. Para hallar la concentracin de carbohidratos se utiliza la ecuacin obtenida de la recta de la curva de calibracin realiza en Excel. Donde Y= absorbancia medida de la muestra a 490 nm. a= es la ordenada en el origen. b= la pendiente de y x= la concentracin. Y despejando x de la ecuacin de regresin lineal se obtiene la siguiente formula.
CLCULOS PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIN DE CARBOHIDRATOS MUESTRA 1 Tubo ensayo: (0,5 ml) A1
% carbohidratos=
A2
% carbohidratos=
A3
% carbohidratos=
Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ DETERMINACION DEL PORCENTAJE DE CARBOHIDRATOS QUE PRESENTA LA MUESTRA TABLA 6: Muestra 1 A Promedio de carbohidratos de la muestra 8,49 % 8,61 % 8,59 % 8,56 %
A1 A2 A3 Total promedio
Por lo tanto el contenido de carbohidratos en la gaseosa Quatro es de 8,56 % TABLA 7: DATOS PARA CALCULAR DESVIACION ESTANDAR, COEFICIENTE VARIACION Y ERROR RELATIVO. Muestra 1 136,8 138 1,44 2 138,8 138 0,64 3 138,4 138 0,16 0,7466 Total Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ
DESVIACION ESTANDAR
= 0,2880
COEFICIENTE DE VARIACIN.
X 100%.
ERROR RELATIVO
Er =
x 100 = 34,73 %
TABLA 8: CALCULOS GENERALES REALIZADOS PARA LA MUESTRA 1. A A1 A2 A3 CONCENTRACION X 34,2 34,7 34,6 CONCENTRACION CC 1,368 1,388 1,384 CONCENTRACION Cd 136,8 138,8 138,4 %. 8,49 % 8,61 % 8,59 %
CARBOHIDRATOS EN GRAMOS CONTENIDO DE CARBOHIDRATOS EN LA GASEOSA QUATRO: 8,56 % DESVIACIN ESTNDAR: 0,2880 COEFICIENTE DE VARIACIN: 0,2086 % ERROR ABSOLUTO:4,56% ERROR RELATIVO:34.73% Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ
Absorbancia vs Concentracin.
1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 20 40 60 80 y = 0.0135x + 0.0023 R = 0.9927
concentracion
Fuente: ANA ROMERO, FERNANDO CESPEDES, KAREN GOMEZ
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DISCUSIN. Tamao de la porcin. La muestra que se utiliz para el anlisis del contenido de carbohidratos fue gaseosa QUATRO, con un peso inicial de 4,0256 g se obtiene 0,345 g de carbohidratos esto es el 8,57 %, lo cual se aproxima al de la muestra original 13,13% obteniendo un error relativo de 34,73%y un error absoluto de 4,56 Se realiz la curva de calibracin en Excel, tomando a X como la concentracin y a Y como la absorbancia en base a la ecuacin que da la curva se realizan los clculos luego se despeja a x para hallar la concentracin y se determina las concentraciones diluidas y concentrada de las absorbancias A1,A2, A3, y por ltimo se halla el porcentaje en cada absorbancia y se promedia. En esta prctica se han tomado como base a analizar dos muestras, M1:0,5 ml y M2: 0,8 ml de glucosa, la muestra uno presento un valor promedio de 0,4686 nm y la muestra 2 presento un promedio de 1,0496 nm lo que indica que la muestra dos tuvo que ser descartada para nuestros anlisis qumicos ya que se sale de los parmetros establecidos en la curva de calibracin, es decir que no se calcul las absorbancias para la muestra dos. Como la masa se encontraba en microgramos se hizo la conversin a gramos (ver tabla 5). Como los volmenes y las masas nunca se promedian, en este caso se ha promediado el porcentaje de carbohidratos de la muestra uno, ya que la muestra dos ha sido descartada por que presento un intervalo superior a uno. (ver tabla 6) para calcular la desviacin estndar, coeficiente variacin y error relativo se tom la concentracin de 250 ml.(ver tabla 7) el coeficiente de variacin se encuentra en un porcentaje de 0,2086 % lo que indica que los valores se encuentran sujetos bajo un nivel confiabe ya que el relacin de porcentaje no sobre pasa el 5 % ( ver tabla 8).
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CONCLUSION Para muestras donde el espectrmetro marca una absorbancia superior a uno, la muestra queda totalmente descartada para anlisis qumicos ya que se encuentra fuera de los parmetros establecidos. Por lo tanto se debe enfocar en un resultado inferior a uno ya que este si presenta el intervalo indicado para la determinacin de clculos. La curva de calibracin se observa que los espectros de absorcin no varan al aumentar la concentracin, como se observa en la curva al aumentar los valores que toma la variable independiente(x) tambin aumenta la dependiente (Y) lo que hace que se presente una lnea recta. La absorbancia es una cantidad adimensional, ya que es un Log 10 de una relacin de intensidades de la luz incidente y la luz transmitida. (Extrado del libro Qumica analtica, autor Samus P. J. Higson, capitulo 6 pagina 157.) La ecuacin que se obtiene en la curva de calibracin es muy importante ya que ella es la que nos correlaciona si los datos que se han obtenido en el laboratorio sirven para el anlisis. El coeficiente de correlacin no afecta los datos de la grfica, en algunas ocasiones la constante R se deja con exponente uno debido a esto sus intervalos se encuentran en un rango de (-1 a 1) por lo general siempre va a ir al cuadrado ya que cancela trminos negativos. Nuestra curva de calibracin presenta un buen rendimiento ya que el coeficiente de correlacin no pasa del intervalo uno. El Mtodo de cido sulfrico fenol sirve para hallar el contenido de carbohidratos y este presenta caractersticas de sensibilidad por diferentes factores como: altas temperaturas, cidos entre otros, los cuales bajos estas circunstancias una cadena de reacciones complejas da inicio a una deshidratacin simple, y si continua elevando la temperatura y interactan enzimas catalticas se producen varios derivados del furano los cuales se condensan entre sus mismos compuestos, la condensacin ms frecuente se da con fenol. Se logr determinar el porcentaje de carbohidratos totales en la muestra por el mtodo de cido sulfrico fenol y a la vez se adquiri destreza en la tcnica de espectrometra visible y en la preparacin e interpretacin de la curva de calibracin.
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