TCNICA DE MICROSCOPIA PARA ANLISE DE MATERIAIS

Uma das tcnicas mais simples e eficazes para a caracterizao de materiais a anlise microestrutural, tanto por meio de microscopia ptica, como por meio de microscopia eletrnica de varredura. Quando necessrio, tcnicas adicionais tais como anlises qumicas, difrao de raios-x e micro anlises so tambm utilizadas para esse fim. Os aos inoxidveis altamente ligados, no estado bruto de fundio ou envelhecidos aps o tratamento trmico de solubilizao e resfriamento em gua, apresentam grandes quantidades de fases cristalinas precipitadas no estado slido e que influenciam significativamente nas suas propriedades, tais como: resistncia corroso, caractersticas mecnicas, qumicas, trmicas, eltricas e pticas. Assim, para evitar a presena de fases indesejveis, que normalmente fragilizam e comprometem a resistncia corroso, preciso conhecer o seu processo de formao, bem como as temperaturas de dissoluo e a maneira de evitar a re-precipitao das mesmas. A preocupao principal dos engenheiros de materiais e metalurgistas o projeto da microestrutura final dos materiais metlicos, de tal forma que proporcionem desempenhos otimizados, a um custo relativamente baixo, para manter a competitividade num mercado altamente exigente. Nessa linha de raciocnio o objetivo deste trabalho ressaltar conceitos sobre as microestruturas, comentar os aspectos da caracterizao microestrutural, bem como exibir algumas micrografias de aos inoxidveis, em diferentes condies de processamento e preparao, para ilustrar a tcnica de anlise microestrutural. crescente o interesse pela rea de anlise e caracterizao de materiais devido necessidade de seleo adequada do material baseado no desempenho do sistema em estudo. Dependendo das solicitaes a que este material ou sistema ser submetido, a caracterizao poder abranger a avaliao de propriedades mecnicas, eltricas, bioatividade, imunogenicidade, eletrnicas, magnticas, pticas, qumicas, trmicas e at mesmos a combinao de duas ou mais destas propriedades. Esta caracterizao de propriedades visa principalmente estimar o desempenho no perodo de vida til do material, minimizando a possibilidade de degradao e falhas indesejveis durante a utilizao do produto. A caracterizao descreve os aspectos de composio e estrutura (incluindo defeitos) dos materiais, dentro de um contexto de relevncia para um processo, produto ou propriedade em particular. No procedimento de caracterizao de materiais, podemos definir os seguintes aspectos importantes, a serem avaliados, no necessariamente na seqncia apresentada: - Composio qumica - Tamanho, forma e distribuio - Fases e estruturas (cristalino, amorfo, etc) - Microestrutura - Superfcies, interfaces e recobrimentos

- Defeitos No desenvolvimento de biomateriais ns devemos estar atentos s diversas solicitaes dos sistemas vivos. Esses biomateriais estaro em contato direto, seja atravs de funes estruturais de sustentao, seja atravs de respostas complexas bioqumicas e fsico-qumicas, tais como resposta imunolgica, trombogenicidade, adsoro de macromolculas, resposta inflamatria, histocompatibilidade,

osteoconduo, dentre outras. Em ambiente biolgico, um grande nmero de reaes bioqumicas ocorrem, muitas vezes simultaneamente, com a presena de catalisadores, inibidores, o que requer um processo de caracterizao da superfcie do biomaterial de extrema relevncia no entendimento do seu comportamento nos organismos vivos. Portanto, a caracterizao adequada das interaes do sistema biomaterial-tecido, requer as avaliaes das quatro entidades distintas: superfcie, recobrimento, interface e volume. Estas quatro entidades compem o sistema de biomaterial-tecido, com condies termodinmicas de energia particular de cada uma, associadas disposio tridimensional dos tomos e molculas e ao nmero de ligaes qumicas. Como conseqncia imediata, os comportamentos de reatividade, tais como a bioatividade e a biocompatibilidade, sero diferentes para a superfcie, recobrimentos e para o volume do slido. Em sntese, as tcnicas de caracterizao devero ser selecionadas de modo a alcanar a avaliao completa do sistema biomaterial-organismo vivo.

1) INTRODUO

Microscopia A necessidade histrica do homem de observao da natureza e dos materiais, possibilitou o aparecimento de equipamentos para auxiliar a viso humana ao longo de mais de 10 sculos. Os campos de observao dos objetos com ampliaes de algumas dezenas at milhes de vezes foi possvel com o desenvolvimento de equipamentos extremamente sofisticados, que utilizam feixes de radiao eletromagntica ou feixes de eltrons na construo das imagens. Um aspecto fundamental na obteno das imagens reside na capacidade de resolver dimenses bastante reduzidas, em elevadas ampliaes.

Microscopia ptica A Microscopia ptica, tambm denominada microscopia de luz, consiste em uma tcnica de observao de objetos e sistemas com ampliaes de algumas dezenas at milhares de vezes das dimenses fsicas, tipicamente 10X a 1500X. Os equipamentos de anlise de microscopia ptica, foram desenvolvidos h mais de 5 sculos, com evoluo histrica. O microscpio ptico mais simples consiste de duas lentes, uma objetiva e outra ocular, montadas em uma estrutura, com um suporte para anteparo do material a ser observado, denominada porta-amostra. A distncia entre as lentes e a amostras pode ser alterada atravs de um sistema de engrenagem, permitindo o ajuste do foco pelo observador. O equipamento conta ainda com um sistema de iluminao, filtros, colimadores, e outras partes, no sentido de otimizar a qualidade da imagem obtida.

A ampliao final de um microscpio ptico ser o resultado do produto obtido pela ampliao da lente ocular pela objetiva. As ampliaes das lentes objetivas situam-se na faixa de 4X a 100X. As lentes oculares geralmente oferecem aumentos de 8X a12X, sendo 10X as mais comuns. Portanto, ampliaes tpicas de microscopia ptica situam-se na faixa de ~40X a ~1000X. Os princpios fsicos fundamentais da ptica de radiaes eletromagnticas regem os processos de construo das imagens. A microscopia ptica utiliza as propriedades ondulatrias da radiao eletromagntica, principalmente na faixa de energia da luz visvel. As ondas eletromagnticas tm caractersticas prprias com alguns parmetros importantes, tais como comprimento de onda, freqncia, amplitude de oscilao, velocidade de propagao dentre outros. Alguns fenmenos de interao da radiao com a matria so importantes, tais como:

a) Absoro Quando a radiao atravessa um objeto sua intensidade atenuada. Este fenmeno decorre da absoro desta radiao provocada por transies energticas no material, sejam estas nucleares, eletrnicas, vibracionais ou rotacionais.

b) Refrao Alterao na direo de propagao de um feixe incidente ao passar de um meio de densidade ptica para outro de densidade diferente. Este desvio da direo de propagao depende da diferenas de ndice de refrao dos meios e do comprimento de onda da radiao.

c) Difrao Mudana na direo de propagao de um feixe de radiao incidente decorrente da presena de obstculo no caminho ptico. Esta mudana de direo depende das dimenses fsicas do obstculo, do comprimento de onda da radiao incidente e do ngulo de incidncia. Este fenmeno promove a formao de interferncias construtivas e destrutivas. A anlise por microscopia requer o controle de parmetros fundamentais da ampliao do objeto observado, no sentido de atribuir qualidade a imagem construda. Os aspectos mais importantes de serem abordados so: resoluo, contraste, profundidade de campo e distoro. Resoluo definida como capacidade de perceber os detalhes do objeto observado, com ou sem ampliao. Todo sistema ptico tem um limite finito de resoluo, a partir do qual, uma ampliao alm deste limite perder a capacidade de definir os detalhes do objeto. Tipicamente, a resoluo expressa em uma dimenso linear. Para microscopia ptica

As lentes trazem escritos os valores de N.A. medidos pelos seus fabricantes. Quanto maior o valor de N.A. da lente, melhor sua qualidade, e melhor ser a resoluo obtida para uma mesma ampliao. Outro parmetro fundamental na qualidade da imagem obtida por microscopia o contraste. O contraste o nmero de tons presentes em uma imagem. Uma imagem de

alto contraste apresenta poucos tons, geralmente 2 tons, branco e preto. Ou seja, quanto maior o nmero de tons percebidos em uma imagem menor o contraste. Pode ser definido como a diferena entre o ponto mais claro e o mais escuro da imagem observada. Contraste considerado em termos da relao claro e escuro do objeto observado, isto , um contraste de 100 refere-se a uma relao de 100 vezes do ponto brilhante para o ponto escuro da imagem. Geralmente as amostras biolgicas apresentam um baixo contraste, requerendo portanto uma preparao adequada utilizando agentes corantes, para visualizao em microscopia ptica. Um aspecto importante a ser considerado nas anlises por microscopia refere-se a profundidade de campo. A profundidade de campo definida como a dimenso linear observado (pf ou plano focal). Um exemplo de profundidade de campo seria a obteno de uma fotografia de uma pessoa muito prxima da cmera fotogrfica, geralmente provoca o fundo da imagem fora de foco (close-up).

O que a metalografia? Metalografia o estudo da estrutura interna dos metais. Ela inclui as tcnicas usadas para preparao das amostras, o exame microscpico e a interpretao das microestruturas. A preparao dos corpos de prova uma parte importante do processo, pois assegura a correta observao e interpretao das estruturas internas. Entende-se por preparao, as etapas de seleo da parte de um componente a ser observada, o seccionamento ou corte, o lixamento numa seqncia de lixas adequadas, o polimento com partculas abrasivas (alumina ou diamante) e finalmente o ataque com reagente qumico apropriado, que deve ser escolhido em funo do microconstituinte a ser revelado. Cuidados devem ser tomados durante a preparao para que no se induza a concluses equivocadas, fato muito comum quando o processo de lixamento e/ou polimento produz encruamento, devido s tenses cisalhantes, na superfcie a ser observada. Muitas vezes, torna-se necessrio observar determinadas estruturas antes do ataque qumico, principalmente em materiais cujos microconstituintes apresentam grandes diferenas na refletividade da luz, ou quando existe uma diferena significativa nas durezas desses microconstituintes, onde possvel observar estruturas em relevo. O exame metalogrfico com o corpo de prova na condio polido e sem ataque qumico, muito utilizado para anlise de partculas inclusionrias e microporosidades causadas pela contrao volumtrica, durante a mudana de estado no processo de solidificao, ou para a observao da grafita em ferros fundidos. Por outro lado, muitos materiais precisam ser atacados para revelar suas respectivas microestruturas. O ataque um processo de corroso controlado, ocorrendo a dissoluo seletiva da estrutura, produzindo uma superfcie topogrfica que reflete diferencialmente a luz e formando assim a imagem.

2) EQUIPAMENTOS UTILIZADOS

- Microscpio ptico Biolgico Binocular - Bioval

Descrio: *Oculares: campo amplo de 10X de aumento *Lentes objetivas (rotacionais): componente funcional baixo do sistema tico.Disponvel em 4X, 10X, 40X e 100X (para imerso em leo) *Cabeote: gira 360. Pode ser binocular ou trinocular *Revlver invertido: fornece mais espao de trabalho na frente da platina *Botes coaxiais de focalizao *Parafuso do condensador (micromtrico) *Diafragma (da ris) *Iluminador (iluminao Koehler) *Platina mecnica *Rack de segurana *Lente coletora *Suporte do filtro *Parafuso para lmpada *Ajuste da intensidade da luz *Entrada de alimentao *Base, corpo e limitador de foco

- Microscpio Metalogrfico - Kontrol

Descrio: *Sada para cmera *Lentes oculares 10X de aumento *Platina com movimento *Diafragma de ris *Fonte de iluminao *Boto macromtrico *Sistema para movimentar X/Y (Charriot) *Chave liga/desliga *Boto para aumento de intensidade luminosa *Revlver para 4 lentes objetivas *Boto micromtrico (ajuste grosso e fino) *Mesa, coluna e canho *Lmpada de halognio

- Cmera fotogrfica - Sony

- Computador (para melhor visualizao da micro-estrutura das amostras metlicas)

3) MATERIAIS ANALISADOS - Material biolgico analisado amostra de sangue

(Aumento 10 x 10 + 4 zoom)

O dimetro de um glbulo vermelho prximo de 7microns (7e-6m). Se voc colocar uma gota de sangue em uma lmina histolgica e levar para observao ao microscpio, ver uma grande quantidade de hemcias. So clulas grandes e com hemoglobina, pigmento vermelho que permite o destaque desse tipo celular.

- Material metlico analisado Ao Inox

(Aumento de 20 X 10)

Alta resistncia corroso Resistncia mecnica adequada Facilidade de limpeza/Baixa rugosidade superficial Aparncia higinica Material inerte Facilidade de conformao Facilidade de unio Resistncia a altas temperaturas Resistncia a temperaturas criognicas (abaixo de 0 C) Resistncia s variaes bruscas de temperatura Acabamentos superficiais e formas variadas Forte apelo visual (modernidade, leveza e prestgio) Relao custo/benefcio favorvel Baixo custo de manuteno Material reciclvel De boa fabricao Densidade mdia = 8000 kg/m

4) PROCEDIMENTOS DE ANLISE

1 Procedimento amostra de sangue

Colocou-se esse fragmento (amostra de sangue) sobre a lmina. Cobriu-se o fragmento com a lamela, primeira fazendo um ngulo de 45, e depois, baixando a lamela vagarosamente, at que esta estivesse a cobrir o fragmento. Posteriormente, colocou-se a lmina na platina, de modo a que se procedesse sua observao microscpica.

Utilizou-se, primeiramente, uma objetiva de poder ampliador 10x. Realizou-se o esquema do que se observou na ocular do microscpio. Dado que a ocular possua um poder ampliador de 10x, a ampliao total foi de 100x. Em seguida, utilizou-se a objetiva de ampliao 40x, sendo a sua ampliao total de 400x, respectivamente. Por fim, foram fotografadas as imagens vistas no microscpio, com seus respectivos tamanhos e mais a adio de 4x no zoom.

2 Procedimento amostra de ao inox

Colocou-se a amostra de ao inox, j cortada no tamanho correto para a lmina, em cima da platina. Ajustou-se a posio correta (atravs do charriot e do parafuso) e a intensidade da luz, sendo previamente controlado atravs das imagens que o microscpio enviava ao computador.

5) RESULTADOS OBTIDOS

PARA A AMOSTRA DE SANGUE Primeira verificao: aumento de 100x mais 4 de zoom

(10 x 10)

(10 x10)

Segunda verificao: aumento de 400x mais 4 de zoom

(40 x 10)

O sangue formado por diversos tipos de clulas, que constituem a parte "slida" do sangue, cada tipo com anatomia e funes prprias; essas imersas em uma parte lquida chamada plasma. As clulas sanguneas so classificadas em trs grupos bsicos: os leuccitos ou glbulos brancos, que so clulas de defesa integrantes do sistema imunitrio; os eritrcitos, glbulos vermelhos ou hemcias, responsveis pelo transporte de oxignio; e plaquetas, responsveis pela coagulao sangunea. Percebe-se ainda pela anlise microscpica sua organizao celular.

PARA A AMOSTRA DE AO INOX

Primeira verificao: aumento de 40x

(4X10)

Segunda verificao: aumento de 100x

(10X10)

Terceira verificao: aumento de 200x

(20x10)

O contorno do gro importante devido a descontinuidade estrutural no reticulado cristalino. O efeito do ataque se faz sentir, mais acentuadamente, por causa das impurezas depositadas na interface. A superfcie dos gros reflete a luz incidente em ngulos diferentes em funo dos produtos da reao ou da superfcie atacada. A revelao das deslocaes depende da rea da tenso das diferentes distncias entre os tomos. A figurao dos gros aparece nas regies onde os deslocamentos cortam a superfcie. A pelcula que se origina durante o ataque retrai-se quando submetida secagem, formando-se estrias orientadas sobre a superfcie dos gros. As regies eutticas tornam-se visveis, especialmente quando contm segregaes. A estrutura diverge da formao primria aps deformao mecnica ou tratamento trmico. Revelao do campo de deformao prxima s regies no deformada.

6) REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

VAN VLACK, L. H. Princpio de cincia dos materiais. Edgar Blucher, 1984. http://www.spectru.com.br/ensaio_metal.pdf. Acesso em: 02/11/2012 as 14:42.56.