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Utilizao de bioindicadores na avaliao de impacto e no monitoramento da contaminao de rios e crregos por agrotxicos Use of bioindicators for assessing and monitoring pesticides contamination in streams and rivers

ARTIGO ARTICLE

Ana Rosa Linde Arias 1 Daniel Forsin Buss 2 Carla de Alburquerque 1 Alan Ferreira Incio 1 Marina Moreira Freire 1 Mariana Egler 2 Riccardo Mugnai 2 Darcilio Fernandes Baptista 2

Laboratrio de Toxicologia, Centro de Estudos da Sade do Trabalhador e Ecologia Humana, Fundao Oswaldo Cruz. Rua Leopoldo Bulhes 1480, Manguinhos. 21041-210 Rio de Janeiro RJ. arlinde@ensp.fiocruz.br 2 Laboratrio de Avaliao e Promoo da Sade Ambiental, Departamento de Biologia, IOC, Fiocruz.

Abstract The objective of this article is to present an analysis of the main bioindicators that are currently used to assess the environmental impact of pollution in water resources. The simple quantification of chemicals in the environment is not enough to reveal the real effects of contamination on ecosystems, making necessary the assessment of the biological effects that pollution causes at different hierarchical levels. The bioindicators used in this article on two case studies comprehend different hierarchical levels: in case study 1, three organization levels were utilized: individual, cellular and molecular, to detect the early effects of exposition to environmental pollutants in three hydrographic basins. By observing the inhibition of AChE activity in fish it was possible to assess the effects of organophosphorate and carbamate pesticides, showing the effects of agricultural activities. In case study 2, we present an assessment at the macroinvertebrate community level using the Extended Biotic Index. We discuss the advantages and limitations in the production of reliable data that could be used in the implementation of adequate actions to protect and/or recover ecosystems. Key words Impact assessment, Environmental monitoring, Agrochemicals

Resumo Este artigo tem como objetivo apresentar uma anlise dos principais bioindicadores utilizados para avaliao do impacto ambiental em recursos hdricos, j que a simples mensurao dos nveis de substncias qumicas presentes no ambiente no suficiente para revelar os reais efeitos adversos da contaminao, tornando-se necessrio a avaliao dos efeitos biolgicos da contaminao em diversos nveis hierrquicos. Os bioindicadores foram tratados neste artigo atravs de dois estudos de casos que abrangem diferentes nveis; no caso 1, foram utilizados trs nveis de organizao: individual, celular e molecular, para deteco precoce dos efeitos reais da exposio de peixes aos poluentes ambientais em trs bacias hidrogrficas. A inibio da atividade da AchE em peixes possibilitou a avaliao dos efeitos dos agrotxicos organofosforados e carbamatos, evidenciando o efeito dos cultivos agrcolas; no caso 2, apresentamos uma avaliao no nvel da comunidade de macroinvertebrados, empregando o ndice Bitico Estendido. Discutimos, as vantagens e limitaes na produo de dados confiveis que possibilitem a implementao de medidas adequadas para o diagnstico em diferentes escalas, visando a proteo e/ou recuperao dos ecossistemas. Palavras-chaves Avaliao de impacto, Monitoramento ambiental, Agrotxico

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Introduo
Nos ltimos anos, o nvel de compostos xenobiticos nos ecossistemas aquticos vem aumentado de forma alarmante como resultado da atividade antropognica sobre o meio ambiente. Tal fato tem contribuindo para a reduo da qualidade ambiental, bem como para o comprometimento da sade dos seres vivos que habitam esses ecossistemas1. A biota aqutica est constantemente exposta a um grande nmero de substncias txicas lanadas no ambiente, oriundas de diversas fontes de emisso. A descarga de lixos txicos provenientes de efluentes industriais, os processos de drenagem agrcola, os derrames acidentais de lixos qumicos e os esgotos domsticos lanados em rios e mares contribuem para a contaminao dos ecossistemas aquticos com uma ampla gama de agentes txicos como metais pesados, agrotxicos, compostos orgnicos, entre outros2. Os principais contaminantes de origem agrcola so os resduos de fertilizantes e os agrotxicos. Esses produtos, quando aplicados sobre os campos de cultivo, podem atingir os corpos dgua diretamente, atravs da gua da chuva e da irrigao, ou indiretamente atravs da percolao no solo, chegando aos lenis freticos. Outras formas de contaminao indireta podem ocorrer atravs da volatilizao dos compostos aplicados nos cultivos e pela formao de poeira do solo contaminado3 e/ou da pulverizao de pesticidas, que podem ser transportados por correntes areas e se depositarem no solo e na gua, distantes das reas onde foram originalmente usados. Tendo em vista o potencial dispersivo desses produtos, para a melhoria da qualidade da gua dos rios, se faz necessria uma abordagem que considere a bacia hidrogrfica como unidade de estudo. Os mtodos analticos tradicionais capazes de avaliar pesticidas organofosforados e carbamatos em gua so realizados por cromatografia gasosa (GC), cromatografia lquida de alta performance (HPLC) ou espectofotometria de massa (MS)4. Devido aos problemas associados ao uso indiscriminado dos agrotxicos, fundamental que o monitoramento ambiental seja realizado constantemente. No entanto, esses mtodos de anlise exigem mo-de-obra especializada e apresentam alto custo operacional, o que torna invivel sua aplicao em larga escala5. Alm disso, a poluio ambiental associada ao uso de pesticidas especialmente difcil de ser avaliada, pois os eventos de contaminao obedecem a uma

dinmica espacialmente difusa e temporalmente varivel. O resultado um quadro de contaminao baixa e contnua, que nem sempre captado pelos mtodos de screening qumicos, pois esses registram apenas o instante exato em que foram coletadas as amostras e no acompanham a variao temporal e espacial da contaminao. Desde a dcada de 1970, pesquisadores e gestores de recursos hdricos da Europa Ocidental e Amrica do Norte6 argumentam que as metodologias tradicionais de classificao de guas, baseadas em caractersticas fsicas, qumicas e bacteriolgicas, no so suficientes para atender aos usos mltiplos da gua, sendo particularmente deficientes na avaliao da qualidade esttica, de recreao e ecolgica do ambiente. Outra desvantagem que, se as medies qumicas forem feitas longe da fonte poluente, no sero capazes de detectar perturbaes sutis sobre o ecossistema7. Para a realizao de avaliaes eficientes, de fundamental importncia a aplicao de anlises integradas da qualidade da gua, unindo as repostas das metodologias tradicionais de avaliao aos aspectos biolgicos do sistema7,8,9. Quando lanadas no ambiente aqutico, as substncias oriundas das atividades agrcolas so capazes de interagir com o organismo vivo, causando mltiplas alteraes que podem gerar graves desequilbrios ecolgicos, dependendo do grau de contaminao e do tempo de exposio. Tradicionalmente, as tcnicas para a avaliao destes impactos utilizando bioindicadores vm sendo divididas em duas abordagens principais: aquelas associadas aos nveis superiores de organizao, tais como populaes, comunidades e ecossistemas ou no nvel individual que trata de alteraes comportamentais, malformaes, mudanas nas taxas de crescimento, reproduo, alimentao, alteraes bioqumica e fisiolgica que inclui alteraes na integridade da membrana celular, no transporte de ons, no metabolismo celular e em atividades enzimticas. Os componentes dessa ltima abordagem so tambm chamados de bioindicadores, e so definidos como componentes biolgicos, clulas, processos bioqumicos, estruturas e funes biolgicas, alteradas quando em contato com compostos xenobiticos7. Indicadores em diferentes nveis de organizao biolgica fornecem informaes complementares, necessrias para a anlise de risco ecolgico. Os impactos da contaminao por agrotxicos em peixes e nos macroinvertebrados variam de acordo com os tipos de substncias empregadas, com a sua toxicidade e com a estabilidade nos ambientes aquticos. Os efeitos sobre a fauna incluem

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desde alteraes fisiolgicas em alguns organismos, at a morte macia de populaes, afetando toda a estrutura da comunidade10. Em geral, quanto maior a concentrao de pesticidas e mais longo o tempo de exposio, maiores as chances dos impactos negativos atingirem nveis superiores de organizao biolgica, como comunidades e ecossistemas. Se um estresse dura tempo suficiente para levar morte uma populao de organismos, afetando as taxas de crescimento e de reproduo e impedindo o recrutamento de novas espcies, ela ento capaz de alterar a estrutura da comunidade6 (Figura 1). Os efeitos dos contaminantes em nveis de organizao biolgica mais baixos (p. ex., respostas moleculares e bioqumicas) ocorrem mais rapidamente, alm do que a especificidade das respostas e nossa compreenso sobre os efeitos dos contaminantes so geralmente maiores nos nveis mais baixos de organizao. Geralmente, os efeitos em tais nveis podem ser diretamente ligados exposio aos agentes contaminantes. Por exemplo, a presena de resduos qumicos e metablitos um in-

dicador direto da disponibilidade de contaminantes para os organismos. Neste trabalho, so apresentadas as aplicaes de ferramentas de biomonitoramento aos efeitos do uso de pesticidas em dois nveis de organizao biolgica: organismo e comunidade. Neste contexto, o objetivo deste estudo investigar as possibilidades de definir e utilizar uma abordagem integrada para avaliar o efeito txico de substncias poluentes em ecossistemas aquticos, atravs do desenvolvimento e aplicao de uma bateria de bioindicadores com quatro nveis de complexidade (comunidade, individual, celular e molecular), e assim determinar o grau de impacto causado no ecossistema de uma determinada rea, utilizando peixes e macroinvertebrados como indicadores de efeitos biolgicos. Os conhecimentos delineados neste projeto sero essenciais para desenhar estratgias eficazes que permitam reparar ou recuperar a biodiversidade dos ecossistemas. A incorporao dos bioindicadores nos programas de vigilncia e controle da contaminao ambiental do meio aqutico proporcionar um conhecimento mais preciso da qualidade ambiental.

Figura 1 Representao esquemtica da ordem seqencial de respostas a poluentes dentro de um sistema biolgico.

DANO: Ecossistema Comunidade Populao EXPOSIO AO POLUENTE Organismo Sistmico (rgo) Tecido Celular Sub-celular (organela) Molecular

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Estudo de caso 1: utilizando bioindicadores

No nvel de organizao biolgica do organismo, as ferramentas de anlise so chamadas de bioindicadores11. Bioindicadores so definidos como qualquer resposta a um contaminante ambiental ao nvel individual, medidos no organismo ou matriz biolgica, indicando um desvio do status normal que no pode ser detectado no organismo intacto. Ou seja, so medidas de fluidos corporais, clulas, tecidos ou medidas realizadas sobre o organismo completo, que indicam, em termos bioqumicos, celulares, fisiolgicos, compartimentais ou energticos, a presena de substncias contaminantes ou a magnitude da resposta do organismo alvo12. Existem bioindicadores moleculares, celulares e ao nvel do animal completo. As duas caractersticas mais importantes dos bioindicadores so: a) permitem identificar as interaes que ocorrem entre os contaminantes e os organismos vivos; b) possibilitam a mensurao de efeitos sub-letais. Esta ltima caracterstica permite pr em prtica aes remediadoras ou, melhor ainda, aes preventivas. Da a importncia e o interesse atual de incorporao da anlise de bioindicadores em programas de avaliao da contaminao ambiental. Os aspectos comuns entre organismos diferentes se acentuam principalmente ao nvel molecular e, por isso, muitos bioindicadores moleculares possuem a vantagem de poderem ser aplicados a uma ampla variedade de organismos vivos13. Este tipo de bioindicador de grande importncia como sinalizador inicial da exposio aos contaminantes e de seus efeitos. Como exemplo deste tipo de bioindicador podemos citar a enzima acetilcolinesterase (AChE) que pode ser utilizada na avaliao da contaminao ambiental por agentes anticolinestersicos, pois estes compostos se ligam enzima gerando propagao contnua do impulso nervoso e inibem sua atividade. Vrios so os agentes anticolinestersicos conhecidos, sendo os mais importantes os organofosforados e carbamantos14, pesticidas largamente utilizados em atividades agrcolas e campanhas de sade pblica como mata-mosquitos. Ao nvel celular, pode ser utilizado o teste do microncleo como bioindicador de genotoxicidade, uma vez que associaes positivas entre exposio a misturas de pesticidas e a presena de microncleos tem sido observada em diversos estudos realizados com estes compostos15. Os microncleos so massas de cromatina citoplas-

mtica com o aspecto de pequenos ncleos, constitudos principalmente por fragmentos cromossmicos ou por cromossomos retardados durante a migrao anafsica, que se detectam em clulas interfsicas mediante tcnicas simples de colorao, aparecendo no citoplasma como pequenos fragmentos basfilos. Os microncleos podem aparecer por vrias causas, entre elas por falha mittica, tanto de fragmentos acntricos de cromossomos, gerados por ruptura (clastogenicidade), quanto de cromossomos completos (aneuploidia), como conseqncia, geralmente, de enfermidades genticas. Ao nvel individual, os parmetros mais comuns a serem levados em conta quando se estudam populaes de peixes so o tamanho e o peso dos peixes, j que podem fornecer um indicativo da condio geral dos mesmos. O fator de condio um ndice que relaciona peso e tamanho de peixes sendo, desta forma, til para estimar o estado geral de sade do peixe. A anlise cuidadosa de todos os parmetros anteriormente citados possibilita avaliar se os animais esto ou no em suas condies fisiolgicas normais em um especfico ecossistema. Desta forma, objetivou-se com este estudo avaliar o efeito da poluio aqutica causada por agrotxicos em peixes atravs do uso de bioindicadores em trs nveis de organizao.

Estudo de caso 1: material e mtodos

Para avaliar o grau de impacto, foi utilizada uma bateria de bioindicadores baseados em trs nveis distintos de organizao: individual, celular e molecular. Foram determinados os seguintes parmetros: - Ao nvel individual: foi determinado o fator de condio como indicador da condio geral da sade dos indivduos de acordo com a frmula: peso (g) / (comprimento padro (cm)) 3 x 100; - Ao nvel celular: foi realizada a contagem de microncleos por cada mil eritrcitos. Foi utilizada a colorao de May Grunwald Giemsa para posterior visualizao em microscpio ptico; - Ao nvel molecular: a atividade da AChE, um indicador do efeito da contaminao por pesticidas organofosforados e carbamatos, foi determinada segundo a metodologia descrita por Silva16, modificada por Albuquerque17. O local escolhido para implementar o presente estudo foi a bacia do rio Paraba do Sul devido a sua importncia em um contexto ecolgico, econmico e de Sade Pblica. Esta bate-

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ria de biondicadores foi estudada em acars (Geophagus brasiliensis) e em tilpias (Oreochromis niloticus). Essas espcies foram utilizadas como bioindicadores, pois apresentam uma ampla distribuio geogrfica e caractersticas ecolgicas e fisiolgicas similares, conhecidas e favorveis neste tipo de estudo. A tilpia uma espcie extica invasora enquanto o acar autctona destes ecossistemas, o que torna interessante comparar estas espcies na avaliao do impacto da poluio. Entre as diferentes regies desta bacia, foi escolhido o municpio de Barra Mansa (22 32 S, 44 10 W), que apresenta caractersticas que contribuem para a contaminao das guas fluviais por efluentes industriais. A regio de Paty do Alferes (22 25 S, 43 25 W), com caractersticas agrcolas, foi estudada com o objetivo de avaliar o efeito da contaminao ambiental por pesticidas sobre a biota do ecossistema. O rio Guandu (22 48 S, 43 37 W) foi escolhido como controle e devido a sua importncia por ser a fonte de abastecimento de gua do municpio do Rio de Janeiro.

Tabela 1 Mdia do fator de condio em acars, Geophagus brasiliensis, procedentes das regies de amostragem. (N, nmero de indivduos). N Guandu Barra Mansa 29 31 Fator de condio 3,60 2,77 3,09 Desviopadro 0,76 0,94 1,04

Paty do Alferes 14

Tabela 2 Mdia do fator de condio em tilpias, Oreochromis niloticus, procedentes das regies de amostragem. (N, nmero de indivduos) N Guandu Barra Mansa Paty do Alferes 65 17 6 Fator de condio 2,73 2,43 2,97 Desviopadro 1,11 0,76 0,23

Estudo de caso 1: resultados

Espcimes de acar e tilpia foram coletadas nos locais selecionados objetivando efetuar-se uma anlise integral utilizando a bateria de bioindicadores proposta. Mediante esta abordagem, foi possvel observar a diferena nas respostas dos animais poluio aqutica em diferentes nveis de organizao. Seguiro abaixo as descries dos resultados especficos de cada bioindicador utilizado. Nvel individual O fator de condio (Tabela I) foi utilizado buscando evidenciar modificaes macroscpicas. Tanto em acars como em tilpias foram verificadas diferenas significativas (p<0,05) entre Guandu e Barra Mansa. Os acars e as tilpias de Barra Mansa possuem o menor valor para fator de condio, demonstrando desta forma a condio geral destes peixes na rea estudada. (Tabela 1 e 2). Nvel celular Os microncleos e os ncleos bilobados foram analisados buscando os danos genotxicos ocasionados por poluentes. Entre todas as localidades, no foram observadas diferenas significativas (p<0,05) na quantidade encontrada. Nvel molecular A atividade da enzima AChE no msculo dos acars e tilpias foi avaliada buscando analisar sua inibio pelos agrotxicos organofosforados e carbamatos. Paty do Alferes e Barra Mansa apresentaram as menores atividades (p<0,05) tanto para acars como para tilpias (Figuras 2 e 3).

Estudo de caso 1: discusso

Acars e tilpias demonstraram ser espcies adequadas para o estudo do efeito da poluio nos ecossistemas aquticos dulciaqucolas avaliados. Ao aplicar a bateria de bioindicadores, o ndice que foi utilizado para avaliar o nvel mais elevado (individual), ou seja, o fator de condio, j indicou uma diferena entre o estado de sade dos peixes nos diferentes pontos. Os peixes com o estado mais saudvel esto na regio supostamente mais limpa, que utilizamos como controle. Porm, o fator de condio nos indica apenas o efeito geral da condio dos peixes, no

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Figura 2 Grfico representando mdia da atividade da enzima AChE de Geophagus brasiliensis, acar, procedente das reas de amostragem.

0,7
AchE moles. min-1. mg de ptn-1

0,6 0,5 0,4 0,3 0,2 0,1 0

dados. Isto , no foram encontrados dados que representem danos genotxicos nos espcimens analisados, nem foram encontradas diferenas entre os pontos de amostragem. Ao utilizarmos os indicadores mais especficos (moleculares), pde-se ver, atravs da inibio da atividade da AChE, que possibilita a avaliao do efeito dos agrotxicos organofosforados e carbamatos na biota, que Barra Mansa e Paty do Alferes so as regies onde os peixes esto sendo mais afetados por estes poluentes, evidenciando principalmente o efeito dos cultivos agrcolas em Paty do Alferes e mostrando que Barra Mansa, apesar de ser uma regio fundamentalmente industrial, tambm sofre com efeitos de agrotxicos.

Guandu

Barra Mansa

Paty

Estudo de caso 2: utilizando comunidades como bioindicadores

Os indicadores biolgicos so muito teis devido a sua especificidade a certos tipos de impacto, j que inmeras espcies so comprovadamente sensveis a um tipo de poluente, mas tolerantes a outros18. Assim, ndices podem ser criados especificamente para detectar lanamento de pesticidas, considerando as respostas de diversas espcies da comunidade de macroinvertebrados. Os ndices que tm as comunidades como unidade de estudo so eficientes para o monitoramento rpido de grandes reas, apresentando relativo baixo custo19. Sua metodologia baseia-se em pesquisas de campo, analisando as alteraes estruturais e funcionais das comunidades nos sistemas ecolgicos. Uma vez definido o objetivo do monitoramento, deve-se pensar em selecionar qual o indicador apropriado para atingi-lo. Cairns et al.20, argumenta que basically, everything is an indicator of something but nothing is an indicator of everything. Assim, fundamental consideramos uma srie de questes antes de definirmos a estratgia a ser utilizada. Podemos comear pela escolha do grupo biolgico a ser adotado. Dentre os vrios grupos biolgicos potencialmente teis, temos: macrfitas, algas, peixes e macroinvertebrados, sendo estes dois ltimos os mais testados em avaliaes de campo7. A primeira abordagem visando a determinao de indicadores biolgicos da qualidade das guas, com bases cientficas, foi feita com bactrias, fungos e protozorios na Alemanha por Kolkwitz & Marsson21. Esse mtodo ficou conhecido como ndice de saprobidade e enfatizava que

Figura 3 Grfico representando mdia atividade da enzima AChE de Oreochromis niloticus, tilpias, procedentes das reas de amostragem.

0,4 0,35 0,3

AchE moles. min-1. mg de ptn-1

0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0 Guandu Barra Mansa Paty

apontando como ou em que nvel os peixes estariam sendo afetados pela poluio. Descendo um nvel de organizao (celular), observando o bioindicador utilizado, ou seja, a presena de microncleos e/ou ncleos bilobados, no foram encontrados resultados que forneam informaes na avaliao dos locais estu-

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a abundncia de organismos nas reas poludas ocorria por caractersticas fisiolgicas e comportamentais que os permitia tolerar estas condies. Assim, localidades onde eram encontrados nmeros elevados desses organismos eram classificadas como poludas. No final da dcada de 1960, iniciaram-se esforos conjuntos na Europa para testar a aplicabilidade do ndice de saprobidade. Atualmente, muitos pases europeus ainda utilizam metodologias baseadas na mesma filosofia, sendo chamadas de ndices biticos. Esses ndices consistem em atribuir uma pontuao para cada grupo taxonmico, baseada em sua tolerncia ao impacto e o somatrio desses valores determina a qualidade da gua do local. Diversos ndices biticos surgiram e foram testados6,8 desde ento. O objetivo deste estudo testar a aplicao de um dos ndices biticos que vem sendo utilizados na Europa, o ndice Bitico Estendido (IBE)22, para avaliar os efeitos da contaminao por agrotxicos sobre a fauna de macroinvertebrados bentnicos.

aquticos. Os pontos L1, L2, L3 e L4, localizados na bacia do rio So Loureno, e os pontos V1 e V2, na bacia do rio Varginha. Os pontos L1 e V1 foram escolhidos para representar reas de referncia em cada uma das bacias. Os pontos L2 e V2 referiam-se a reas sem cobertura vegetal, ocupada por casas e pasto. Os pontos L3 e L4 localizavam-se ambos no rio So Loureno, e representavam reas de agricultura intensiva, com plantaes estendendo-se at as margens dos pontos de coleta. Estes locais foram escolhidos com base nos trabalhos de Moreira et al.23 e Alves5, que avaliaram a presena de pesticidas anticolinestersicos em diversos trechos do rio So Loureno, tendo encontrado maiores concentraes de equivalentes de metil-paration nos dois pontos. Amostragem dos macroinvertebrados aquticos Foi feita uma amostragem quantitativa dos macroinvertebrados aquticos com o auxlio de um amostrador do tipo Surber com malha de 125m. Trs pseudo-rplicas de quatro diferentes tipos de substratos (sedimento, pedras, folhas retidas em reas de corenteza e folhas depositadas no fundo) foram coletadas formando um conjunto de doze amostras individuais para ser ento agrupadas e compor uma amostra para cada rio estudado. As amostragens foram feitas em trs estaes do ano. No inverno (agosto, 2000); no vero (fevereiro, 2001), e no outono (maio 2001). A metodologia proposta envolveu o ndice Bitico Estendido IBE (adaptado para a regio da Serrana do Estado do Rio de Janeiro) entre localidades de referncia e localidades impactadas por agricultura e desmatamento. ndice Bitico Estendido adaptado IBEIOC O IBE avalia a qualidade biolgica de um corpo de gua baseando-se na sensibilidade de alguns grupos biolgicos em relao a diversas fontes poluentes e na estimativa da riqueza total da comunidade de macroinvertebrados. O ndice Bitico Estendido foi adaptado para a regio Serrana do Estado de Rio de Janeiro, utilizando um banco de dados relativo a amostragens no perodo entre 1999 e 2004, em trs bacias hidrogrficas (Guapimirim, Grande e Maca), com coletas realizadas em 34 pontos amostrais, quase todos coletados em trs diferentes estaes do ano 24, 25.

Estudo de caso 2: material e mtodos

Algumas consideraes acerca da dinmica de produo agrcola nortearam a elaborao do estudo. Na regio estudada, tal qual outras bacias agriculturveis do Estado do Rio de Janeiro, os problemas advindos da agricultura apresentam dois componentes significativos no que diz respeito ao estado de preservao dos rios: a poluio da gua pelo uso de pesticidas e fertilizantes e a transformao da paisagem pelo desmatamento e aumento dos processos de eroso e assoreamento dos rios. Sabendo que estes dois fatores agem sinergicamente sobre a biota aqutica, o desenho experimental foi desenvolvido com o objetivo de diferenciar a resposta da comunidade presente em reas impactadas apenas pelo desmatamento, daquela presente em reas impactadas pelo uso de agrotxicos. Desta forma, duas pequenas bacias hidrogrficas localizadas na mesma provncia fisiogrfica foram selecionadas para fazer parte do estudo, a microbacia do rio So Loureno (22 20 S, 42 40 W), representando uma rea de agricultura intensiva, e a microbacia do rio Varginha (42 53 S, 22 25 W), representando uma rea ocupada por pastagens e casas de veraneio. Seis trechos de rios foram selecionados para amostragens da comunidade de invertebrados

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Tabela 3 Tabela de clculo do ndice Bitico Estendido adaptado para a Serra dos rgos no Estado do Rio de Janeiro (IBE-IOC). US Unidades Sistemticas. 1-10 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 36-40 41-45 46 PLECOPTERA, exceo de Paragripopteyx e Anacroneuria >1 US 1 US 8 7 7 6 9 8 8 7 10 9 9 8 11 10 10 9 12 11 11 10 13 12 12 11 14 13

Paragripopteyx e >1 US EPHEMEROPTERA, exceo de Baetidae, Leptohyphidae, Hylister e 1 US Farrodes Anacroneuria e TRICHOPTERA, > 1 US exceo de Calamoceratidae, 1 US Glossosomatidae, Helicopsychidae, Hydroptilidae, Hydropsychidae, Leptoceridae ISOPODA, AMPHIPODA, Hylister e Farrodes OLIGOCHAETA, Chironomidae, Baetidae, Calamoceratidae, Glossosomatidae, Helicopsychidae, Hydroptilidae, Hydropsychidae e Leptoceridae OUTRO

5 4

6 5

7 6

8 7

9 8

10 9

11 10

3 1

4 3

5 4

6 5

Tabela 4 Tabela de converso dos valores IBE-IOC para definio das classes de qualidade da gua. Valor IBESORJ >10 89 67 45 <3 Classe de qualidade I II III IV V Avaliao Ambiente no poludo ou no alterado em maneira sensvel Ambiente no qual so aparecem alguns efeitos da poluio Ambiente poludo Ambiente muito poludo Ambiente fortemente poludo Cor de referncia Azul Verde Amarelo Laranja Vermelho

Estudo de caso 2: resultados

A aplicao do ndice IBE separou as localidades em trs classes de qualidade ambiental (Tabela 5). As reas L1 e L2 ficaram no limiar entre a classe de referncia e uma condio de impacto inicial. As reas L3 e L4 se enquadraram em classes pobres e eram representativas de reas de agricultura intensiva, com plantaes estendendo-se at as margens dos pontos de coleta e no apresentavam qualquer contaminao por esgotos

domsticos provenientes das casas dos lavradores, pois eram localizadas distantes das reas de cultivos. Alm disso, nestes locais Moreira et al.23 e Alves5 encontraram as maiores concentraes de equivalentes de metil-paration. As reas V1 e V2 foram as que apresentaram melhores classes de qualidade da gua atravs da anlise biolgica. A fauna presente nas reas de cultivo foi bastante afetada. Houve uma reduo significativa na ocorrncia de espcies e na densidade de in-

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Tabela 5 Classes de qualidade da gua definidas pelo ndice Bitico Estendido - IBE para as localidades L1, L2, L3, L4 na bacia do Rio So Loureno e localidades V1 e V2 na bacia do rio Varginha. LOCALIDADE L1 L2 L3 L4 V1 V2 OUTONO I I IV V I I 11/10 10 4/3 3 11 10 INVERNO I I V V I I 11 11/12 1 1 10 11 VERO I I V V I I 12/11 13/12 3 3 10 11

divduos. Alguns txons desapareceram como Plecoptera e Leptophlebiidae, enquanto outras ordens de insetos aquticos foram muito reduzidas como Trichoptera, Coleoptera e Odonata. Nas reas impactadas L3 e L4, cinco txons responderam por 92 % dos indivduos presentes, onde os grupos dominantes foram Chironomidae, Simuliidae, Nectopsyche (Trichoptera), Americabaetis (Ephemeroptera) e Oligochaeta. Os gneros Americabaetis e Nectopsyche ocorreram em alta densidade nos extensos bancos de algas que se desenvolveram nos locais, indicando a influncia da entrada de fertilizantes. Com relao aos locais L1 e L2, montante da rea cultivada, a fauna foi constituda por grupos sensveis como Plecoptera, Trichoptera e Ephemeroptera. Entretanto, estes ocorreram em menor densidade relativa que nas reas V1 e V2. Foram registrados tambm os maiores valores de abundncia de indivduos da ordem de Diptera (25% em L1 e 30% em L2). A diversidade de espcies, quando aplicado o ndice de Shannon Weaver, tambm foi relativamente baixa (H=1,69 em L1, e H=1,55), confirmando os resultados do IBE. Os locais V1 e V2, na bacia do rio Varginha, apresentaram os maiores valores quando analisados pelo IBE, sendo ambos os locais classificados como de alta integridade ambiental. Em relao biota, estes dois pontos apresentaram a maior abundncia de indivduos da ordem Plecoptera (52% em V1 e 30 % em V2), da famlia Leptophlebiidae (55% e 21%, respectivamente). Especificamente no local V1, foram registrados os maiores nmeros de indivduos da ordem Coleoptera (60%) e da ordem Trichoptera (36%), o que influenciou positivamente os resultados dos ndices. A diversidade de espcies nos locais V1 e V2 foi mais alta quando comparada com L1 e L2,

sendo que o ponto V1 apresentou o maior valor entre todos os locais avaliados (H= 2,97 em V1 e H=1,93 em V2).

Estudo de caso 2: discusso

Os resultados revelam que o ndice IBE foi sensvel para diferenciar as localidades quanto qualidade da gua e sua influncia sobre a biota. As reas de agricultura foram claramente separadas dos outros locais de coleta, ao passo que o ndice tambm foi capaz de discriminar entre condies preservadas e reas com alguma perturbao. A pontuao aferida aos grupos taxonmicos selecionados para comporem o ndice IBE se revelaram sensveis para identificar sinais discretos de perturbao na comunidade, que no foram percebidas pela avaliao da fisiogrfica da paisagem e uso do solo. Embora os locais L1 e V1 e L2 e V2 parecessem ser semelhantes enquanto reas de referncia e reas de pasto, a aplicao do ndice indicou que, nos locais L1 e L2, as populaes estavam mais comprometidas que na bacia do rio Varginha. A explicao para esse fato parece estar na influncia da ocupao agrcola intensiva na bacia do rio So Loureno. O uso de agrotxicos um risco para os invertebrados que vivem nos ambientes dulciaqucolas adjacentes as reas de cultivo, uma vez que eles tem sistemas biolgicos similares aos dos organismos alvos, podendo ser diretamente afetados pela ao inespecfica destes compostos26. O pool de espcies na bacia do rio So Loureno parece estar sofrendo o impacto da aplicao de pesticidas na rea da bacia, refletido na diversidade e dinmica das populaes nas reas L1 e L2. A reduo na densidade de populaes pode ser tanto um efeito direto da

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contaminao da gua, quanto um resultado indireto relacionado s mudanas nas interaes entre espcies, reduo das taxas de emergncia e reproduo, e menor capacidade de disperso e colonizao na bacia. Os resultados encontrados na bacia do rio Varginha revelaram ainda que o ndice bitico aplicado foi adequado para avaliao da qualidade da gua em escala de bacia. Os dois locais tinham condies ambientais bastante distintas, com o local V2, apresentando um maior comprometimento dos habitats aquticos pelo grave assoreamento do leito e perda da vegetao marginal. Entretanto, sem o comprometimento da qualidade da gua, o pool de espcies presentes foi mais diverso e eqitativo, aumentando a performance biolgica dos ndices. O ndice IBE demonstrou sua aplicabilidade na avaliao da qualidade da gua em reas afetadas pela agricultura, principalmente quanto sua sensibilidade em distinguir reas intermedirias daquelas mais preservadas. A aplicao do IBE em outras reas e em situaes distintas de uso do solo e produo agrcola um prximo passo para a proposio e difuso da metodologia biolgica avaliada no diagnstico ambiental de bacias agrcolas.

Utilizao de bioindicadores em rios e crregos

Atualmente, o objetivo dos estudos relacionados avaliao dos impactos em reas agriculturveis o desenvolvimento e aperfeioamento de metodologias e ferramentas que permitam determinar de forma realista e exeqvel a condio ambiental. Alm disso, deve considerar a importncia do tratamento e transmisso da informao a diferentes pblicos, muitas vezes leigos. Portanto, um dos desafios tornar os dados cientficos mais facilmente utilizveis por tcnicos, gestores, cientistas, polticos, grupos de interesse (associaes no governamentais, cooperativas) e pelo pblico em geral. O emprego de uma bateria de bioindicadores abrangendo distintos nveis de organizao biolgica possibilita o conhecimento sobre a que nvel o poluente interage com o organismo, e a que nvel este mais suscetvel ao daquele. Os resultados de trabalhos como este so essenciais para desenhar estratgias eficazes que per-

mitam recuperar a biodiversidade dos ecossistemas aquticos. A incorporao de Programas de Vigilncia e Controle da contaminao ambiental do meio aqutico atravs de uma bateria de bioindicadores proporcionar um conhecimento mais preciso da qualidade ambiental do mesmo (uma vez que permitir estabelecer o efeito txico real que a contaminao exerce sobre as populaes). Isto permitir avaliar e caracterizar o estado de sade ambiental dos ecossistemas aquticos, produzindo dados confiveis que possibilitaro a implementao de medidas adequadas para sua proteo e/ou recuperao, alm de permitir a avaliao dos riscos que tais contaminaes conferem Sade Pblica e na biodiversidade desses ecossistemas. Uma vez que improvvel que respostas em um nico nvel de organizao biolgica satisfaam os critrios de especificidade, os mecanismos de compreenso e a relevncia ecolgica, uma abordagem alternativa estudar respostas em diferentes nveis de organizao simultaneamente, integrando os efeitos dos contaminantes atravs dos diferentes nveis de organizao; portanto, necessrio promover pesquisas interdisciplinares. Conclumos que a utilizao desta bateria de bioindicadores nos permitiu avaliar e formular um retrato detalhado dos diferentes efeitos das diferentes formas de poluio nos organismos aquticos, sendo possvel diferenciar o efeito dos agrotxicos. Os ecossistemas aquticos de rios, em funo de sua grande heterogeneidade fsica, que incluem de pequenos a grandes rios, variao no regime de vazo, geomorfologia do canal entre outras caractersticas do habitat. Assim, consideramos, por exemplo, que o uso da bateria de bioindicadores utilizando a comunidade de peixes seja uma metodologia mais adequada para grandes rios, pois estes apresentam, em geral, misturas complexas de poluentes; portanto, a alta especificidade de respostas dos bioindicadores torna-se mais eficiente. Alm disso, a coleta de macroinvertebrados em grandes rios muito trabalhosa e pouco eficiente. J em rios de pequena dimenso, a fauna de macroinvertebrados pode ser extremamente rica, enquanto que a fauna de peixes pode no ser suportada, e em geral seus representantes so de pequeno porte, o que dificulta os testes com os bioindicadores disponveis.

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Cincia & Sade Coletiva, 12(1):61-72, 2007

Colaboradores
AR Linde-Arias e DF Baptista participaram no levantamento e anlise dos dados de campo, na concepo terica, elaborao, reviso e redao final do texto. DF Buss, C Alburquerque, AF Incio, MM Freire, M Egler e R Mugnai participaram do levantamento e anlise dos dados de campo.

Agradecimentos
Este trabalho recebeu apoio dos programas Papes III (VPPDT/FIOCRUZ) e Programa Institucional de Pesquisa em Sade e Ambiente da FIOCRUZ (VPSRA/FIOCRUZ).

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Artigo apresentado em 20/01/2006 Aprovado em 16/06/2006 Verso final apresentada em 31/08/2006