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A INFLUNCIA DO CONSUMO DE LCOOL DURANTE A GESTAO E A LACTAO NA APRENDIZAGEM DE FILHOTES SILVA, Liliane Maria da; ALMEIDA, Agostinha Mariana

Costa de Resumo: O presente trabalho tem como objetivo comparar o desempenho em tarefas de aprendizagem em discriminao complexa com estmulos de luz e som, de filhotes de gestantes submetidas ao uso de lcool. O mtodo utilizado ser o experimental, sendo que na 1 fase do experimento sero utilizados 8 ratos Wistar fmeas, primparas e adultas pesando em mdia 250 gramas, onde o grupo experimental receber soluo alcolica e o grupo controle somente gua. Na segunda fase do experimento sero retirados oito filhotes de cada grupo para tarefa de aprendizagem de discriminao complexa que ser realizada nas Caixas de Skinner, quando os filhotes estiverem com 90 dias de nascidos. A influncia que o lcool pode ter sobre filhotes de ratas Wistar submetidas ao uso de lcool durante o processo de gestao nestes, e amamentao sendo avaliadas dificuldades que de

aprendizagem

principalmente

em

procedimentos

envolvam

discriminao complexa. Portanto, o presente estudo faz-se necessrio em modelos animais para se investigar possveis modificaes decorrentes do uso de lcool, e sua possvel influncia no processo de aprendizagem sobre seus descendentes. Palavras - chave: aprendizagem; discriminao, ratas Wistar, filhotes e lcool. 1- Introduo O consumo abusivo de bebidas alcolicas - alcoolismo considerado um problema de sade pblica no mundo. Estima-se que quase 14% da populao preencham os critrios para dependncia ou abuso de lcool em alguma poca da vida. O uso de lcool constitui a terceira causa de mortalidade que poderia ser prevenida. O hbito de beber um dos costumes mais antigos da humanidade, datando desde 6.000 A.C. e que apesar de todos os males que esse vcio provoca permanece at hoje no campo social. O etanol um componente comum das bebidas alcolicas e est disposio da populao humana para ser consumido. Mulheres grvidas, muitas vezes, no se abstm do uso dessa droga, o que causar consequncias para o desenvolvimento embrionrio e fetal como prematuridade e natimortalidade. O

etanol causa danos nos rgos em geral e nos neurnios adultos ou em desenvolvimento e induz importantes efeitos neurotxicos no desenvolvimento do crebro (Ferreira & Silva, 2005). Segundo Surkan et al. (2012) o consumo de lcool um importante fator de risco para a doena nos pases desenvolvidos. Alm de suscetibilidade gentica, o consumo de lcool moldado pelo ambiente social e familiar. A qualidade das relaes parentais pode ser um dado importante para o abuso de lcool. De acordo com Santos et al. (2010), o alcoolismo definido como uma sndrome multifatorial com comprometimento fsico, mental e social. Estima-se que mais de dois teros das pessoas em pases ocidentais bebem alm do que apenas ocasionalmente. Estudos apontam que nos Estados Unidos aproximadamente 10% das mulheres e 20% dos homens preenchem critrios diagnsticos para abuso do lcool, e 3% a 5% das mulheres e 10% dos homens preenchem critrios para dependncia ao longo da vida. Segundo Santos et al. (2010), o alcoolismo um problema que afeta de 1 a 2% das mulheres em idade frtil. O consumo de lcool, tanto moderado como alto, durante o incio da gravidez, pode ocasionar alteraes do crescimento e do desenvolvimento morfolgico do feto, sendo considerado, atualmente, como um problema de sade pblica. Apesar de gerar um grande custo social, ainda h carncia de estudos epidemiolgicos sobre efeitos do lcool sobre o feto no Brasil. A metabolizao do etanol feita principalmente no fgado e se inicia imediatamente aps a ingesto.

Gestao com lcool Santos et al. (2010) afirmam que devido a seu pequeno tamanho e suas propriedades de dissociao e polarizao, o lcool solvel em gua e relativamente solvel em solventes no polares. Por esta razo, pode atravessar as membranas celulares e se difundir por todos os lquidos e tecidos do organismo. Dessa forma, atravessa livremente a barreira placentria e se distribui pelo lquido amnitico, atingindo os tecidos do feto. Os nveis sanguneos materno e fetal so aproximadamente iguais aps a ingesto materna de lcool. A difuso passiva do

lcool ocorre por gradiente de concentrao de tal maneira que os nveis materno e fetal so similares at que todo o etanol seja metabolizado. De acordo com Santos et al. (2010), os efeitos teratognicos do lcool vm desde a antiguidade, e no decorrer da histria, houve um evidente aumento da incidncia de abortos, natimortos e malformaes congnitas em recm-nascidos de mes alcoolistas. H uma associao bem documentada entre a ingesto materna de lcool e o desenvolvimento da Sndrome Alcolica Fetal (SAF), que caracterizada por dficit de crescimento, dismorfismo facial e evidncia de anormalidades do sistema nervoso central. Ainda de acordo com o autor, no Brasil, h poucos dados sobre efeitos teratognicos do lcool. Estima-se a incidncia de alcoolismo materno em 6/1.000 gestantes e a incidncia de SAF em 1/1.000 recm-nascidos (RNs). No entanto, calcula-se que um quarto das grvidas deste pas faa uso espordico de bebida alcolica. H diversos estudos mostrando os efeitos do etanol em descendentes de ratas nas quais foi administrado lcool durante a gestao, claramente demonstrando a associao entre alcoolismo na gravidez e defeitos teratognicos encontrados nos fetos. A comparao entre os achados em descendentes humanos expostos ao etanol durante a vida uterina bastante consistente e justifica a escolha de roedores para os estudos animais. De acordo com Santos et al. (2010), o estudo dos efeitos do lcool em condies controladas torna-se importante para se reconhecer os diferentes efeitos dessa substncia sobre o organismo. No entanto, sabe-se que a suscetibilidade fetal ao lcool modulada por quantidade ingerida, poca da exposio, estado nutricional e capacidade de metabolizao materna e fetal. Segundo Guerri e Sanchis (1985) o etanol atravessa livremente a barreira da placenta, mas existe um gradiente de concentrao de acetaldedo entre me e feto que varia com a idade de gestao.

De acordo com Travis et al. (1995) o consumo crnico de lcool em ratas grvidas produziu um acmulo de etanol elevado em fluidos fetais e alteraes na atividade do fgado (ADH), dependendo da situao fisiolgica (gravidez, desenvolvimento, estado virgem).

Discriminao Complexa Segundo Bueno et al. (2007), vrios estudos envolvendo condicionamento Pavloviano e operante, em procedimentos de discriminao condicional, tm sido utilizados com o objetivo de melhor se entender os processos envolvidos no estabelecimento das associaes entre seus elementos primrios: estmulo, resposta e reforo. Em outras palavras, Pavlov descobriu que estmulos podem controlar respostas reflexas quando h pareamento e associaes entre um estmulo neutro e o estmulo incondicionado (US), e com isso, o estmulo neutro adquire a propriedade de estmulo condicionado (CS). O estmulo CS capaz de ativar a representao do US. Ainda segundo o autor a distribuio de respostas durante as prticas sugere que apesar de o animal poder estar sob controle do tempo total de durao da prtica, seu repertrio comportamental modulado pelos estmulos presentes no decorrer da prtica: acelerao positiva de respostas condicionadas em prticas de discriminao condicional positiva. Segundo Feliciano apud Skinner (2006) diferentemente de uma situao de discriminao simples definida como aprendizagens que derivam de processos de controle de estmulos mais simples, em que se estabelece uma relao constante entre um estmulo antecedente e uma resposta, nas discriminaes condicionais essa relao muda de acordo com o contexto, isto , o papel de um estmulo depende de outros que forneam o contexto para ele (CATANIA, 1999, p. 163). Em uma discriminao condicional deve-se reforar uma resposta a um determinado estmulo especfico apenas na presena de outro estmulo. Ainda segundo o autor, outros autores descrevem esses tipos mais complexos de discriminao como se um estmulo (o condicional) funcionasse como um seletor de discriminaes, mais do que seletor de respostas individuais. Respostas a um estmulo discriminativo especfico (SD1) e no outro (SD2) seriam seguidas de reforo apenas se estiver presente um estmulo condicional especfico (SC1). Alm disso, para Cumming e Berryman (1965), o estmulo condicional teria uma funo seletiva que momentaneamente fortalece uma discriminao especfica.

Segundo Bueno (1997), o fator temporal pode afetar os processos associativos subjacentes ao comportamento do animal, dependendo das variaes com que ele ocorre, ou seja, o animal parece ser capaz de armazenar em sua memria uma representao temporal dos estmulos, e utiliz-la como estratgia de soluo para os problemas que seu meio coloca. Esta possibilidade se estende a procedimentos de aprendizagem complexa, incluindo a representao da durao do tempo no imaginrio animal. O presente trabalho foi delineado a partir de um piloto para dar direo para a futura pesquisa a ser desenvolvida. 2- Objetivos: Comparar o grau de dificuldade de aprendizagem de animais, filhotes de mes submetidas ao uso de lcool durante a gestao e amamentao. 3 - Justificativa e Relevncia do tema O presente trabalho prope-se a investigar se existe relao entre exposio pr-natal ao lcool e problemas de aprendizagem, assim como tambm problemas de memria, para esta investigao o feto ser exposto ao lcool, ingerido pela me, durante toda a gestao, fmea esta que mesmo antes da gravidez j ingeria lcool, para que deste modo possamos entender se h problemas de aprendizagem causados pela exposio ao lcool intra-tero. Para a verificao de possveis problemas de aprendizagem utilizamos como mtodo o modelo de discriminao complexa positiva, com estmulos de luz e som. 4 Metodologia 1 fase 4.1 - Materiais e mtodos 4.1.1 - Sujeitos: Os sujeitos utilizados nesta fase do experimento sero 8 ratos Wistar fmeas, mantidos no Biotrio Central, das Faculdades Adamantinenses Integradas, em uma temperatura ambiente de 21 C, com idade de 90 dias e peso aproximado de 250 Kg.

4.1.2 - Mtodo O mtodo utilizado ser o experimental, onde o grupo experimental receber soluo alcolica e o grupo controle somente gua. 4.1.3 - Materiais necessrios: lcool (etanol) gua 4.1.4 - Procedimento Os sujeitos sero divididos em dois grupos, controle e experimental, ambos com quatro fmeas cada, mantidas em dupla por caixa, onde a troca da maravalha ser feita trs vezes por semana, e em cada troca haver a pesagem dos sujeitos (sendo que a manipulao dos sujeitos ter durao de 10 minutos). Os sujeitos sero identificados por C1 e C2 do grupo controle e E1 e E2 do grupo experimental. Esses sujeitos sero submetidos a uma dieta diferenciada, onde o grupo controle receber gua e rao, disponibilizando 500 ml de gua todos os dias para cada dupla de ratas durante todo o experimento e o grupo experimental recebero rao e soluo de gua e lcool 70%, disponibilizando 500 ml de soluo para cada caixa, sendo que a proporo de lcool em soluo com gua ser aumentada gradativamente de 2% a 10% nos 15 primeiros dias, onde ser estabilizada a proporo de lcool em 10% at o fim do experimento. De acordo com tabela abaixo: Protocolo de Pesquisa lcool 2012 Qtde de dias 2 dias Protocolo Experimental = incio etanol 2% (v/v) Controle = gua 6 dias Experimental = incio etanol 4% (v/v) Controle = gua 7 dias Experimental = incio etanol 8% (v/v) 9 ao 15 3 ao 8 Dia 1 ao 2

Controle = gua At o final da 1 fase Experimental = incio etanol 10% (v/v) 16 at o final Controle = gua

A soluo com lcool ser preparada diariamente e oferecida aos animais no mesmo horrio. Ser anotada a quantidade ingerida e calculado a ingesto mdia diria. Aps 30 dias do incio do experimento, onde as fmeas do grupo experimental j se encontraro alcoolistas, sero postas pra cruzar, com um macho para cada duas fmeas. Uma semana aps o incio do cruzamento as fmeas sero separadas, sendo colocada uma em cada caixa. Lembrando que durante o cruzamento, a gestao e a amamentao, as fmeas continuaro recebendo a soluo com lcool. O desmame ser feito 21 dias aps o nascimento, onde as fmeas mes e as fmeas que nascerem sero sacrificadas com dixido de carbono. Assim restaro 16 ratos Wistar machos. 2 fase 4.2 Materiais e Mtodos 4.2.1 Sujeitos Os sujeitos utilizados nesta fase sero 16 ratos Wistar machos remanescentes da prole das fmeas da primeira fase, com idade de 90 dias e uma mdia de peso de 250 kg. 4.2.2. Materiais O material utilizado ser uma Caixa de Skinner, contendo uma barra e um bebedouro, sendo esta uma caixa de madeira com sistema de ventilao contendo uma cmara de acrlico internamente onde se encontram a barra e o bebedouro: gua como estmulo reforador e luz 25% e som como estmulos condicionados.

4.2.3 Procedimentos Os sujeitos sero divididos em grupos experimental e controle e mantidos em duplas por caixa, no Biotrio Central, das Faculdades Adamantinenses Integradas, em uma temperatura ambiente de 21 C com uma dieta padro de gua e rao. Inicialmente, os sujeitos sero submetidos s sees de manipulao at que cheguem idade de 90 dias e ao peso ideal. Com a idade de 90 dias, os sujeitos sero levados para o biotrio do Laboratrio de Psicologia Experimental, onde se iniciar o processo de modelagem, treino ao bebedouro, onde o sujeito ser retirado do biotrio com privao de 48 horas, que ser realizado em 7 sesses de 40 minutos, com todos os sujeitos, depois de modelados os sujeitos sero submetidos a uma tarefa de discriminao condicional complexa, com dois estmulos discriminativos, luz sendo x e som sendo y, esta tarefa ser realizada em 16 sesses. Antes de iniciar o procedimento de discriminao com o animal, o mesmo ser retirado do biotrio do Laboratrio de Psicologia Experimental, das Faculdades Adamantinenses Integradas com privao de 48 horas. Verificaremos ento o funcionamento da caixa de Skinner e colocaremos o animal na mesma. Ento iniciaremos o procedimento de discriminao condicional complexa, o bebedouro ficar na posio manual e o sujeito, ainda sem estmulo, ficar sem reforo, logo depois sero apresentados dois estmulos para ele (xy) e a chave do bebedouro colocada em posio automtica, reforando as suas respostas, depois retiraremos um dos estmulos e colocaremos novamente a chave em posio manual e assim sucessivamente. 4.3 Tarefa Na tarefa de discriminao condicional complexa, o sujeito ter que discriminar entre dois estmulos luz (x) e som (y), sendo que ele receber o estmulo reforador gua - somente quando os dois estmulos (xy) forem apresentados juntos, quando apenas um estmulo discriminativo for apresentado (x) ele no receber o reforo. A resposta esperada do animal a presso barra da Caixa de Skinner, apenas quando os estmulos forem apresentados juntos (xy).

Sujeito desenvolvendo tarefa na Caixa de Skinner

6 Resultados Esperados

O presente trabalho tem como resultado esperado comprovar que o uso de lcool durante o perodo intra-tero pode causar danos aprendizagem de filhotes de ratas submetidas ao uso contnuo de lcool.

7 - Formas de anlise dos resultados

Se baseando nos resultados obtidos, ser feito o uso da estatstica (mdia, desvio padro e coeficiente de varincia) para verificar se os resultados dos grupos controle e experimental possuem uma diferena significativa, confirmando ou no a hiptese levantada no objetivo deste trabalho.

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