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1 Aula Prtica de citologia

Identificao de protenas e glicdios


O amido quando tratado com Lugol, modifica sua colorao, pois o amido reage com o iodo na presena de iodeto, formando um complexo de cor azul intensa, sendo visivel em concentraoes minimas de iodo. Aps o tratamento com Lugol, pode-se observar os granulos do amido no microscpio ptico, para a deteco se existe uma alterao no alimento composto de amido, deve-se verificar os granulos e compar-los, se estiverem diferentes, existe grande possibilidade de adio de outros compostos. O amido uma mistura de dois polissacardeos estruturalmente diferentes: amilose e amilopectina. A composio do amido -amilose, uma cadeia linear de resduos de glicose unidos por ligaes glicosdicas -1,4 (que conferem a molcula uma estrutura helicoidal) e de amilopectina (protena menos hidrossolvel que a amilose), de cadeia principal idntica a amilose, alm disso contm ramificaes formadas, como no glicognio, por ligaes glicosidicas -1,6. Na amilopectina estas ramificaes ocorrem a cada 30 ou 20 resduos de glicose, enquanto no glicognio , a freqncia , em mdia, de uma ramificao a cada 10 resduos. MATERIAIS Acar; Farinha; Maizena; Arroz; Leite em p; gua destilada; Lugol; Tubos de ensaio; Pistilo e gral; Basto de vidro;

Pipeta pasteur; Lminas; Microscpio ptico; Estante. PROCEDIMENTO Colocou-se em cada tubo, um alimento diferente, menos o arroz, estes alimentos foram dissolvidos em gua destilada e anotada a colorao inicial. O arroz foi colocado no gral e amassado, com gua destilada e o lquido encontrado colocou-se em outro tubo de ensaio. Em cada tubo de ensaio adicionou-se 2 gotas de lugol e foi homogenizado e novamente anotou-se a colorao.

5 RESULTADOS Acar: Colorao inicial: transparente; Colorao final: amarelo. Farinha: Colorao inicial: branco translcido; Colorao final: roxo escuro. Maizena: Colorao inicial: branco opaco; Colorao final: roxo claro. Arroz: Colorao inicial: branco leitoso; Colorao final: roxo claro.

Leite em p: Colorao inicial: branco; Colorao final: amarelo. gua destilada: Colorao inicial: transparente; Colorao final: amarelo ctrico. Colorao final: roxo claro. Leite em p: Colorao inicial: branco; Colorao final: amarelo. gua destilada: Colorao inicial: transparente; Colorao final: amarelo ctrico.

6 CONCLUSO Atravs deste experimento conclumos que apenas a maizena, o arroz e a farinha so amido, no final do mesmo, podemos encontrar estes grnulos no microscpio

Propriedades gerais das protenas

Objetivos
gua reconhecer as protenas como molculas eletricamente carregadas analisar a influncia do pH sobre essas cargas reconhecer os grupamentos responsveis pela solubilidade das protenas em identificar os agentes que podem alterar essa solubilidade

Introduo
Vimos no experimento anterior que a solubilidade das protenas em meio aquoso deve-se, em grande parte, distribuio das cargas eltricas ao longo da molcula. Nesse sentido, se a interao protena-protena grande e a interao protena - gua pequena, a protena tender a ser insolvel. Uma das maneiras de promover a precipitao de uma protena atingir seu ponto isoeltrico. Porm, existem outros fatores que influem de maneira importante nessa propriedade fsica das protenas, como a ao de cidos, bases, sais e solventes orgnicos. Alm disso, podemos incluir a temperatura como um agente que pode ser utilizado para diminuir a solubilidade de uma protena. Vamos l:

3. Princpios tericos e procedimento experimental


a) Precipitao de protenas por adio de sais neutros (efeito da fora inica) Quando adicionamos sais neutros a uma soluo, ocorre um aumento da fora inica do sistema. Assim, quando adicionamos pequenas quantidades de sal a uma soluo contendo protenas, as cargas provenientes da dissociao do sal passam a interagir com as molculas proticas, diminuindo a interao entre elas. Conseqentemente, temos um aumento da solubilidade da protena no meio aquoso. as interaes protena - protena, favorecendo a solubilidade das mesmas. A esse fenmeno d-se o nome de "salting-in". Esse efeito, porm, no se estende indefinidamente. Em condies de elevada fora inica, decorrente da adio de grandes quantidades de sal, temos o efeito contrrio. O que acontece? Imagine uma soluo aquosa de protena qual foi adicionada uma certa quantidade de sal neutro. A gua, que apresenta um grande poder de solvatao, passa a interagir com as duas espcies: as protenas e os ons provenientes da dissociao do sal. Porm, as molculas de gua apresentam maior tendncia de solvatao de partculas menores (nesse caso, os ons). As molculas de gua, ocupadas em sua interao com os ons, "abandonam" a estrutura protica. Como conseqncia, temos: maior interao protena-protena, diminuio da solubilidade em meio aquoso e, conseqentemente, precipitao da protena. A esse fenmeno de insolubilizao da protena em decorrncia de um considervel aumento da fora inica do meio d-se o nome de "salting-out". A precipitao de protenas pela alta concentrao de sais um processo muito importante para a separao de misturas complexas de protenas, uma vez que a concentrao de sal necessria para precipitao diferente para cada protena. a.1. Material

a) Reagentes e solues
- soluo de clara de ovo (pode ser utilizada outra soluo de protena)* - soluo saturada de sulfato de amnio [(NH4)2SO4]** - soluo de NaCl - gua destilada

b) Vidraria e instrumental
- 01 tubo de ensaio - pipetas (vidro ou plstica)

* Preparo da soluo de clara de ovo: 1 volume de clara + 4 volumes de NaCl


1%

** Preparo da soluo saturada de (NH4)2SO4:7,7g do sal em 10 ml de gua destilada a.2. Procedimento 1. Em um tubo de ensaio, colocar 2 ml da soluo de protenas; 2. adicionar, deixando escorrer pelas paredes do tubo, 2 ml da soluo de sulfato de amnio; 3. observe. 4. Misture o contedo do tubo (por inverso) e anote os resultados. 5. Repita as etapas anteriores usando NaCl ao invs de (NH4)2SO4. O que voc observou?

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b) Precipitao por sais de metais pesados e por cidos fortes Os ctions de metais pesados como Hg2+, Pb2+, Cu2+, Fe2+, Cd2+ e Zn2+ formam precipitados insolveis de protenas, denominados de acordo com o elemento formador (exemplo: proteinato de mercrio, proteinato de chumbo, etc.). Essa precipitao mais intensa quando o pH est acima do ponto isoeltrico (pI). Isso porque, acima do pI, a carga lquida sobre a protena negativa (ver determinao do ponto isoeltrico da casena), favorecendo a interao com os ctions provenientes do sal. Ento no possvel promover a precipitao de uma protena abaixo do ponto isoeltrico? A resposta correta seria: no com sais... A precipitao abaixo do ponto isoeltrico pode ser feita, sim, mas atravs da adio de cidos fortes. Comparando com o mecanismo anterior: quando a protena est abaixo do seu pI, a carga lquida total da molcula positiva. Isso facilita a interao da molcula com os nions provenientes de cidos como o tungustico, o fosfotungustico e prico. Nas duas situaes o precipitado pode ser ressolubilizado atravs de alteraes do pH. b.1. Material

a) Reagentes e solues
soluo de protenas preparada acima soluo de (CH3COO)2Pb.3H2O (acetato de chumbo) a 20% soluo de cido tricloroactico (CCl 3COOH) 10% gua destilada b.2. Procedimento

b) Vidraria e instrumental
- 01 tubo de ensaio - pipetas (vidro ou plsticas)

a) Precipitao por sais de metais pesados


1. Em um tubo de ensaio, colocar 1ml da soluo de protenas;

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2. adicionar 0,5 ml da soluo de acetato de chumbo 3. adicionar 5 ml de gua destilada; 4. observe e interprete os resultados.

b) Precipitao por cidos


Repita o procedimento anterior, substituindo a soluo de acetato de chumbo pela soluo de cido tricloroactico a 10%. c) Precipitao por ao do calor (desnaturao) As protenas possuem uma estrutura tridimensional (conformao) bem definida, da qual dependem fundamentalmente suas propriedades fsicas, qumicas e biolgicas. Essa estrutura relativamente sensvel ao do calor, que causa desorganizao das cadeias peptdicas, com conseqente alterao conformacional. Esse fenmeno recebe o nome de desnaturao, e altera as estruturas quaternria, terciria e secundria da protena sem afetar sua estrutura primria. A desnaturao promove alteraes que diminuem a solubilidade da protena, levando sua precipitao. Essa precipitao mxima no ponto isoeltrico da protena e pode sofrer alteraes pela adio de sais. c.1. Material

a) Reagentes e solues
- soluo de protenas c.2. Procedimento 1. Colocar 5 ml da soluo de protenas em um tubo de ensaio; 2. deixar o tubo em banho-maria fervente por 5 minutos (o tubo tambm pode ser aquecido direto na chama de um bico de Bunsen); 3. retire o tubo do banho, observe e anote os resultados. d) Precipitao das protenas por solventes orgnicos

b) Vidraria e instrumental
- 01 tubos de ensaio - pipeta (vidro ou plstica)

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A solubilidade das protenas em solventes orgnicos menor do que em gua. Isso acontece porque a capacidade de interao com as partculas de soluto diferente para cada solvente. A grandeza que mede a capacidade de interao do solvente com o soluto denominada constante dieltrica. A gua apresenta constante dieltrica bastante elevada (aproximadamente 80). Mas o que isso quer dizer? Vamos utilizar novamente a imaginao. Numa soluo contendo, exclusivamente, gua e molculas proticas temos: interao gua - protena e interao protena-protena. Nesse caso, podemos afirmar com certeza que o primeiro tipo de interao prevalecer sobre o segundo porque a gua possui

grande capacidade de separao das partculas do soluto (constante dieltrica elevada). Para os solventes orgnicos a situao um pouco diferente... Como esse tipo de solvente apresenta valor de constante dieltrica bem inferior da gua, a interao protena-protena "vence" o poder de solvatao da gua (interao gua-protena). A protena precipita. A precipitao por solventes orgnicos depende muito da temperatura. Os solventes orgnicos, quando utilizados a temperaturas baixas, so bastante teis na separao de misturas de protenas. A temperaturas mais elevadas esses solventes podem levar desnaturao por rompimento das pontes de hidrognio e estabelecimento de interaes apolares, importantes na manuteno da conformao protica. c.1. Material

a) Reagentes e solues
soluo de protenas etanol (CH3CH2OH) 95% gelado acetona (CH3COCH3) gelada cloreto de sdio (NaCl) slido gua destilada c.2. Procedimento OBS: trabalhar a baixa temperatura 1. Tome dois tubos de ensaio e coloque, em cada um, 2 ml da soluo de protenas; 2. adicionar 4 ml de etanol gelado a cada tubo; 3. agite; 4. em um dos tubos, coloque uma pequena quantidade de NaCl slido, sob agitao; 5. observe e responda: qual o efeito do lcool sobre a protena na presena e na ausncia do eletrlito? 6. Adicione 6 ml de gua destilada e observe. 7. Repita as etapas anteriores substituindo o etanol pela acetona; 8. compare os resultados.

b) Vidraria e instrumental
- 04 tubos de ensaio - pipetas (vidro ou plsticas)

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