Deteccin de agentes antibacterianos en ovas de trucha Arcoiris

Jos Miguel Torres*, Juan Lus Concepcin**, Jos Ramn Vielma**

*INIA-Mrida, C. Exp. Truchcola La Mucuy, Mrida, Venezuela **Universidad de Los Andes, Facultad de Ciencias, Laboratorio de Enzimologa de Parsitos. Mrida, Venezuela jmtorresg@inia.gob.ve; concepci@ula.ve Revisores: Karen Graterol (kgraterol@inia.gob.ve) Glenn Hernndez (ghernandez@inia.gob.ve) SUMARIO: Introduccin Por qu la mortalidad de las ovas de trucha? La lisozima como factor de resistencia a enfermedades y su utilidad Qu se ha hecho y cules son los alcances potenciales? Agradecimiento Palabras clave: Trucha Arcoiris; Oncorhynchus mykiss; Bacteriosis; Lisozima; Micosis; Ovas; Reproduccin; Virosis; Mrida.

Introduccin La trucha Arcoiris, Oncorhynchus mykiss, es un salmnido extico introducido en 1935, que forma parte de los rubros explotados en las pisciculturas de Los Andes venezolanos (Figura 1). En el cultivo de trucha, la obtencin de alevines es una de las fases del ciclo de produccin de este salmnido, y el tiempo requerido, desde que se fertiliza la ova hasta que aparece la larva, est entre veinte y treinta das, de acuerdo con la

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temperatura del agua donde se incuban. Para obtener alevines se necesitan reproductores en condiciones adecuadas de maduracin sexual. Los productos sexuales (ovas y semen) de estos reproductores son los insumos que, al unirse bajo condiciones adecuadas, permitirn obtener las ovas fertilizadas que se incubarn hasta desarrollarse en ovas embrionadas. Estas ovas embrionadas a su vez contendrn las larvas, que despus se transformarn en alevines.

Figura 1. Ejemplar de trucha arcoiris (Oncorhynchus mykiss).

Por qu la mortalidad de las ovas de trucha? La mortalidad de ovas de trucha (Figura 2) despus de su fertilizacin, puede llegar a ser hasta de un ciento por ciento en los criaderos si no se controlan algunos parmetros, afectando drsticamente el proceso de produccin de ovas embrionadas y alevines.

a)

b)

Figura 2. Ovas de trucha arcoiris: a) Ovas muertas (blancas), ovas fertilizadas (amarillas) y ovas embrionadas, en sus respectivos coladores; b) Acercamiento ovas no embrionadas.

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Este problema se presenta por diversas causas, entre ellas: sobremaduracin e infertilidad de las ovas, calidad del semen empleado en la fertilizacin, manejo en el proceso de la fertilizacin e incubacin, variaciones de parmetros fsico-qumicos ambientales en la incubacin, y patologas debido a bacterias oportunistas y/o letales (Pseudomonas aeruginosa, P. fluorescens, Renibacterium salmoninarum, Vibrio harveyi, Aeromonas hydrophila, Plesiomonas shigelloides, Yersinia ruckeri entre otras), Oomicetos saprofitos (Saprolegnia sp, Achlya sp) o virus (necrosis pancretica infecciosa, necrosis hematopoytica infecciosa y septicemia hemorrgica viral). Las enfermedades generadas por estos patgenos, crean infecciones que afectan a las ovas embrionadas y a los peces en sus distintas etapas de vida. Sin embargo, se ha comprobado existencia de una resistencia natural en los peces y sus bioproductos de excrecin, lo cual constituye una alternativa viable para prevenir las infecciones por patgenos, sin necesidad de recurrir a mtodos artificiales de control de elevado costo (antibiticos, antifngicos, vacunas y descartes selectivos, entre otros). La lisozima como factor de resistencia a enfermedades y su utilidad Como consecuencia de la respuesta inmunitaria, todo organismo vivo se defiende de forma eficaz mediante mecanismos especficos naturales o adquiridos. En los salmnidos, la resistencia natural a enfermedades tiene que ver con los diversos grados de susceptibilidad a las infecciones, relacionada con barreras inmunolgicas de primera lnea, tanto de tipo histolgico como humoral. Entre los componentes humorales identificados se encuentran protenas de tipo enzimtico, como las lisozimas, capaces de romper enlaces moleculares de paredes celulares de bacterias de algunos oomicetales. Generalmente, estas enzimas se han conseguido en las claras de huevos de aves, secreciones de tejidos mucosos, y en peces como la trucha, particularmente en algunas partes del cuerpo como la mucosidad de la piel, hgado, agallas y otras zonas susceptibles a entrada de agentes patgenos. La lisozima actualmente se perfila como un marcador molecular de resistencia a infecciones bacterianas de inters para la seleccin de lneas de progenitores de utilidad pecuaria, especficamente en la produccin de ovas embrionadas y alevines para los truchicultores. Qu se ha hecho y cules son los alcances potenciales? Actualmente el trabajo concertado entre el laboratorio de Enzimologa de los parsitos de la ULA y la Estacin Truchcola La Mocuy del INIAMrida ha permitido identificar un tipo de lisozima en extractos de ovas de trucha arcoiris por la tcnica de Western blot (Figura 3). Esta tcnica consiste en la transferencia electrofortica de protenas separadas de un gel a una membrana de nitrocelulosa que se revela en presencia de un anticuerpo 3 ______________________________________________________________________________
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marcado.

Figura 3. Membrana de nitrocelulosa mostrando el revelado con anticuerpo marcando la presencia de lisozima de: a) huevo de gallina y b) ovas de trucha Arcoiris.

La presencia de esta protena en las ovas de trucha arcoiris ofrece una base para el estudio y la seleccin de lneas de truchas con mayor contenido de lisozima, permitiendo identificar individuos de esta especie acucola menos susceptibles a patologas por bacterias, hongos y virus. Ello redundara en beneficio de la salud del cardumen y el criadero y permitira la produccin de protena animal con menor esfuerzo, evitando prdidas econmicas y fuentes de propagacin de infecciones que podran afectar, no solo a especies acuticas, sino tambin a los seres humanos. De esta forma se ampliara la produccin de protena animal con la producida en los cultivos truchculas, ampliando la disponibilidad proteica para la alimentacin de la poblacin venezolana Dentro del contexto planteado, se podran extender estos estudios a otras especies acucolas de inters comercial para el pas, como cachama (Colossoma macropomum), morocoto (Piaractus brachypomum), bagre rayado (Pseudoplatystoma fasciatum), coporo (Prochilodus mariae) y curito (Hoplosternum littorale). Es muy probable que estas especies sean sensibles a patologas microbianas, lo que se traduce en prdidas econmicas para los acuicultores y en posibles fuentes de propagacin de infecciones en otras poblaciones de peces. La presencia de lisozima en el tracto digestivo de la trucha arcoiris se conoca desde hace tiempo; sin embargo, se ha estudiado poco en las ovas de truchas. Lo mismo sucede para otros marcadores moleculares de resistencia a enfermedades microbianas, como la lactoferrina y algunos otros 4 ______________________________________________________________________________
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tipos de ppticos de bajo peso molecular. La tcnica de Western blot utilizada en estas determinaciones de protenas es de fcil manejo, econmica y permite identificar agentes antibacterianos como la lisozima en ovas de trucha y adems diferenciarla de la lisozima de huevo de gallina. En prximos estudios se cuantificar y estudiar la presencia y concentracin de lisozima en ovas durante el proceso de incubacin, as como su presencia en los distintos tejidos de la trucha arcoiris, con la finalidad de profundizar el conocimiento sobre esta propiedad natural de la especie y aplicarla en la seleccin de los reproductores del plantel de cra. Agradecimiento Se agradece al personal tcnico del Campo Experimental Truchcola La Mucuy por la ayuda prestada para conseguir parte del material biolgico. As como tambin, al Laboratorio de Bioqumica y Enzimologa de Parsitos de la ULA en el desarrollo de las electroforesis.

Citacin correcta: Torres, J. M.; J. L. Concepcin y J. R. Vielma. 2008. Deteccin de agentes bacterianos en ovas de trucha Arcoiris. Revista Digital INIA HOY N 2, mayo-agosto 2008. URL: pegue aqu direccin electrnica de la pgina del artculo (Consultado el XX/XX/XX).

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