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Microscopia Electrnica Pregunta # 1 1.2.

El concepto de la resolucin El concepto de resolucin est muy relacionado con la ventaja que ofrece un determinado tipo de microscopio con respecto a otro, al formar las imgenes. Se define como resolucin r de un instrumento a la capacidad que tiene de discernir entre dos objetos separados a una distancia r en la realidad. Si vistos a una cierta distancia dos objetos aparecen como uno solo, diremos que estamos debajo del lmite de resolucin. Sin embargo, si nos acercamos suficientemente, podremos distinguir que en realidad no era un solo objeto en forma de mancha difusa, sino dos diferentes; diremos entonces que pudimos resolver la imagen de estos objetos. Este mismo concepto se aplica a varios instrumentos. Por ejemplo, en un espec trgrafo que mida energa, la resolucin se referir a la mnima cantidad de energa que pudiramos separar entre dos eventos. En el caso de instrumentos pticos, la resolucin se considera como la mnima distancia de separacin entre dos objetos, en la cual aparecen todava como dos entes diferentes. Si la distancia entre estos dos objetos es menor que la resolucin, entonces los objetos aparecern como una sola mancha difusa; si, por el contrario, la distancia entre dos objetos es mayor que la resolucin, estos aparecern separados y bien definidos. La resolucin est limitada por varios factores, entre los que se encuentran la difraccin, las aberraciones y el ruido. En todo instrumento ptico el fenmeno de difraccin provoca que la imagen de un objeto puntual consista de un disco de confusin sobrepuesto al punto (figura I.4).

Este disco de confusin alrededor de la imagen del punto se llama disco de Airy y no es otra cosa que la difraccin de las lentes mismas por las dimensiones finitas que tienen y la difraccin de las aperturas pre sentes en el sistema ptico. En la ptica paraxial se utiliza la aproximacin sen = ara el estudio de las lentes delgadas ideales. Sin embargo, en la realidad las lentes presentan defectos y para introducidas en la teora de las lentes se usa la expansin del sen da por: Sen = - 3/3 + 5/5 - 7/7 +... Llegando a la teora de tercer orden, que da lugar a las aberraciones. El dimetro del disco de Airy aumenta con cada una de las aberraciones presentes en el Instrumento. Las lentes electromagnticas tambin presentan aberraciones, las cuales limitan la resolucin en varias formas. Las ms relevantes son: 1) Coma. Se produce por las diferencias en la distancia focal de los rayos que inciden en la lente a diferentes ngulos con respecto al eje ptico (figura I.5). En este caso la imagen de un punto adquirir una forma elongada muy parecida a una coma. Esta aberracin es eliminada por completo si se alinea correctamente el microscopio. 2) Curvatura de campo. Proviene de la variacin de la distancia focal de los rayos con respecto a su distancia del eje ptico (figura I.6). De esta forma los discos de confusin no son contenidos en un plano. Si no en una superficie curva, por lo que la imagen no ser enfocada en un plano completamente. Se corrige de la misma manera que la coma.

3) Astigmatismo. Es el resultado de que las lentes no sean axialmente sirnetricas. La lente presenta dos diferentes focos para los rayos paraxiales en los dos planos principales de asimetra, los cuales son perpendiculares: el plano meridional y el plano sagital (figura I.7). Para corregirla se aaden pequeos electroirnanes a las lentes, de tal forma que produzcan pequeos campos elpticos controlables independientemente. 4) Aberracin cromtica. Se presenta cuando los electrones que forman el haz no viajan a la misma velocidad y, por lo tanto, muestran diferentes longitudes de onda, por lo que al pasar por la lente se refractan de manera distinta, dando lugar a variaciones en la distancia focal (figura I.8). Se corrige escogiendo adecuadamente las aperturas del sistema, produciendo un haz altamente monocromtico, de modo que las variaciones en voltaje sean muy pequeas. 5) Aberracin esfrica. Corresponde a la dependencia de la distancia focal con la apertura para rayos no paraxiales. Los rayos marginales se desvan en su refraccin, de tal forma que sern enfocados antes del foco correspondiente a los rayos paraxiales (figura I.9). Hasta el momento no existe una forma conveniente de corregir esta aberracin, por lo que se ha convenido en el defecto ms importante de la lente objetiva. Por lo tanto, en un microscopio, la resolucin ser determinada por el mnimo disco de Airy que se produzca. El ruido se presenta en todos los tipos de microscopa, debido principalmente a vibraciones alrededor del instrumento y a que todos los procesos de generacin de la iluminacin utilizada, tales como la emisin termoinica y la emisin trmica de fotones, son procesos aleatorios, al igual que los procesos de dispersin que ocurren en la muestra. Esto afecta la resolucin, puesto que dos puntos adyacentes sern resueltos slo si la seal proveniente de estos puntos es colectada en corto tiempo, para reducir el ruido. Como ejemplo podemos calcular los valores de dos de las limitaciones ms importantes del poder de resolucin en el microscopio electrnico: La difraccin de la apertura, rd, y La aberracin esfrica, rs .El valor de rd est dada por la ecuacin: rd = 0.61 ( / ) Y el de rs por la ecuacin: rs= CS 3 Donde es la longitud de onda, C s es la constante de la aberracin esfrica (Cs = 1 mm en el microscopio electrnico de alta resolucin JEOL 4000EX) y es el semingulo que forma la trayectoria que siguen los electrones con el eje ptico al salir de la muestra. Como se puede observar en estas ecuaciones, rd decrece cuando aumenta mientras que se rs incrementa. Por lo tanto existe un valor ptimo de en el cual obtenemos la mejor resolucin. Este valor de est dado por: optimo = A Cs - De donde se encuentra que el poder de resolucin es: Las constantes A y B dependen del mtodo utilizado para combinar rd y rs pero sus valores son muy cercanos a la unidad. Considerando esto, el poder de resolucin y el semingulo ptimo para una lente objetiva con Cs = 3.3 mm y con voltaje de aceleracin de 100 KV ( = 0.037 ) son: r = 6.5 y optimo = 6 x 10-3 rad. Esto corresponde a una apertura objetiva con dimetro de 40 m. Los microscopios electrnicos con mayor poder de resolucin son capaces de dar amplificaciones de 10 6 x y resolver distancias de 1.7 . Vale la pena distinguir en estos momentos entre resolucin y amplificacin. Esta distincin fue magistralmente descrita por Antonioni en su pelcula Blow up en los aos sesenta. En dicha. pelcula., un fotgrafo retrata por accidente un crimen. Para identificar al asesino este fotgrafo empieza a amplificar cada vez ms y ms la fotografa. El problema al que se enfrenta el fotgrafo es que mientras mas amplifica ms borrosa se va haciendo la imagen hasta que al final le es imposible distinguida plenamente. Esto ilustra que cuando la imagen de un objeto tiene baja resolucin la amplifi cacin de ella tiene un lmite, es decir, podemos amplificar de ella tiene un limite. Es decir, podemos amplificar una imagen hasta cierto punto a partir del cual empezamos a perder definicin. Por lo tanto, lo importante en una imagen es. Resolucin y no la amplificacin. En microscopa electrnica, si tomamos una fotografa a baja.

r= B CS

amplificacin, digamos, en un microscopio de alta resolucin, podremos amplificada bastante ms que en el caso de una fotografa convencional, pero hasta un cierto lmite. Este concepto se conoce en ptica. como "amplificacin til", es decir, la amplificacin a la cual se puede presentar una imagen dado el lmite de resolucin, La amplificacin til nos permite saber, por lo tanto, hasta que valor debemos amplificar una imagen para obtener el mejor resultado. Matemticamente la amplificacin til, Mu, est dada por la ecuacin: Mu = r/d
Donde r es la resolucin del ojo humano (0.01 cm), del papel fotogrfico (aproximadamente 0.1 cm), o de cualquier dispositivo que utilicemos para detectar la imagen, y d es el tamao real del objeto a observarse. Entonces, por ejemplo, si queremos observar un objeto cuyas dimensiones son del orden de 0.2 nm, necesitaremos una amplificacin de 5 x 105 veces para que nuestros ojos la distingan. Si en lugar de esto, la queremos imprimir en papel, necesitamos una amplificacin de 5 x 10 6 veces. Por lo tanto, si se tom la micrografa de este objeto a 500000 x slo debemos ampliada por un factor de 10x en el papel fotogrfico. Una amplificacin mayor slo producir prdida de informacin. La amplificacin til nos permite tambin conocer con anticipacin si el instrumento con el que contamos resolver el objeto de anlisis. De este modo, en el caso de un microscopio de barrido que tenga una resolucin del orden de 10 nm, la mxima amplificacin que debemos usar es de 10 000x y las micrografas aqu tomadas se debern amplificar a lo maximo 10x. Amplificaciones mayores con este instrumento no tienen sentido, a menos que se cuente con medios de deteccin ms

resolutivos.
En 1878, Ernest Abbe demostr que el poder de resolucin de un microscopio est dado aproximadamente por la mitad (ms preciso, por 0.6) de la longitud de onda, , empleada para formar la imagen. De este modo, si se usa luz verde ( =550 nm) el mximo poder de resolucin es de 250 nm. Si se usa luz ultravioleta ( =225 nm) el mximo poder de resolucin ser de 108 nm. Por lo tanto, slo se podr aumentar el poder de resolucin si se disminuye el valor de . Para el caso de los electrones, el valor de su longitud de onda depende del voltaje de aceleracin V uti lizado en el microscopio electrnico de la siguiente forma:

= 12.26 (V)- con dada en angstrons y V en volts. El cuadro I.1 muestra valores de para diferentes voltajes, el valor de la constante de la aberracin esfrica Cs y la resolucin observada en cada caso. As, en el caso de V = 1 00 KV, =0.0037 nm. Obviamente ahora es enorme la posibilidad de construir instrumentos utilizando electrones, con una resolucin muchsimo mayor que la obtenida con un microscopio ptico. Si tomamos en cuenta que los tomos tienen un radio promedio de 10 -10 m (0.1 nm), con un microscopio basado en electrones, en principio podramos ver tomos. Guiados por esta idea, muchos investigadores empezaron a construir aparatos que generaban imgenes basadas en electrones. En teora la resolucin poda ser muy alta, pero en la prctica sta siempre se ve disminuida por las aberraciones que presentan tanto las lentes de vidrio como las electromagnticas.
CUADRO I.1. , ,

Cs

y resolucin a diferentes voltajes

kV
100 200 300 400 600 1000 2000

()
0.0370 0.0251 0.0197 0.0164 0.0126 0.0087 0.0050

Cs (mm)
0.7 0.8 0.9 1.0 1.5 2.3 4.0

Resolucin ( )
3.0 2.3 2.0 1.7 1.55 1.3 0.99