Verde Brillante Bilis 2% Caldo.

Este medio est recomendado para el recuento de coliformes totales y fecales, por la tcnica del nmero ms probable. Fundamento En el medio de cultivo, la peptona aporta los nutrientes necesarios para el adecuado desarrollo bacteriano, la bilis y el verde brillante son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas y Gram negativas a excepcin de coliformes, y la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Es una propiedad del grupo coliforme, la fermentacin de la lactosa con produccin de cido y gas. Frmula (en gramos por litro) Bilis de deshidratada Lactosa Peptona Verde brillante pH final: 7.2 0.2 Siembra a.- Para el anlisis de coliformes totales en muestras fluidas, sembrar por triplicado: 10 ml en caldo doble concentracin y 1ml y 0,1 ml en caldo simple concentracin. Nmero de tubos 3 3 3 Volumen Volumen Concentracin de la de medio del medio muestra 10 ml 1 ml 0.1 ml 10 ml 10 ml 10 ml Doble Simple Simple buey 20.0 Instrucciones

Suspender 40 g del polvo deshidratado por litro de agua destilada. Disolver y distribuir 10 10.0 ml por tubo con campanita de 10.0 Durham. Preparar adems, el medio a doble concentracin. 0.0133 Esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos.

b.- Para el anlisis de coliformes totales en muestras slidas (alimentos, cosmticos, frmacos), efectuar diluciones seriadas 10-1, 10-2 y 10-3 y sembrar cada dilucin por triplicado en medio de cultivo simple concentracin. Nmero de tubos 3 3 3 Dilucin dela muestra 10-1 10
-2

Volumen Volumen Concentracin de la de medio del medio muestra 1 ml 1 ml 1 ml 10 ml 10 ml 10 ml Simple Simple Simple

10-3

c.- Para anlisis de coliformes fecales, a partir de cada tubo positivo en el test presuntivo de coliformes totales (proveniente de Verde Brillante y Bilis 2% Caldo Mac Conkey Caldo Lauril Sulfato, utilizando la tcnica del NMP), o a partir de colonias presentes en diferentes medios, que se presume sean coliformes, transferir una ansada a un tubo con Verde Brillante y Bilis al 2% caldo fresco, incubando a 45 +/- 0.5 C y otra en Agua Triptona con incubacin a 35-37 C, para detectar la produccin de indol. Incubacin a- Para de coliformes totales: a 35-37 C durante b- Para coliformes (fecales): a 44.5-45.5 C durante 24 horas.

24

horas.

Resultados -Positivo: presencia de gas. Con el nmero de tubos positivos, calcular el nmero mas probable. El resultado se expresa por gramos 100 ml de producto -Negativo: ausencia de gas. Microorganismos Escherichia coli ATCC 25922 Enterobacter spp. Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Salmonella typhimurium ATCC 14028 Staphylococcus aureus ATCC 25923 Crecimiento + + + + Gas +* + +* Indol# +* -* -* Variable -

Bacterias no fermentadores de lactosa +

+* -* 10-25% # a partir de Agua Triptona

de

cepas

negativas

positivas

Caractersticas del Medio preparado: verde esmeralda, transparente Almacenamiento: Medio deshidratado: Medio preparado: a 2-8 C. Presentacin x 100g :Cdigo: B02-107- x 500g :Cdigo: B02-10705 06

medio

10-35

C.