BIOQUIMICA ENG. QUIMICA PROF.

VINICIUS MOREIRA Aula Prtica 02 IDENTIFICAO DE CARBOIDRATOS

a) REAGENTES: - Solues padres de glcides (ver relatrio) - Solues de 3 glcides desconhecidos - Soluo de lugol: 0,5g iodo metlico, 1,0g iodeto de potssio, dissolvidos em 100mL de gua - Reagente de Benedict: 17,3g sulfato de cobre, 173,0g citrato de sdio, 100g Na 2CO3 anidro dissolvidos em 1000mL de gua - Reagente de Seliwanoff: 0,05g resorcinol dissolvidas em 100mL HCl + 6 mol/L - Reativo de Molisch dissoluo de 5 g de -naftol em 100 mL de etanol) - H2SO4 concentrado b) PROCEDIMENTOS: Para esta unidade prtica o estudante dever preparar, antes de comear a mesma, o quadro geral de reaes de glcides que consta no Relatrio. Quando houver dvida num resultado de reao, deve-se realizar o mesmo teste empregando a soluo do glcide padro suposto. No h necessidade de se medir com pipetas os reagentes fornecidos. Usar gotas, considerando que 1mL = 20gotas. Para as solues de glcides desconhecidos, tomar volumes aproximados. 1 ) TESTE DE IODO 1. Colocar em um tubo de ensaio + 1mL de soluo do glcide a ser identificado. 2. Adicionar 2 gotas da soluo de lugol. O aparecimento de colorao azul indica reao positiva. 3. Ler a interpretao. 2 ) TESTE DE BENEDICT 1. Colocar em um tubo de ensaio + 0,5mL da soluo do glcide a ser identificado. 2. Adicionar 1mL do Reagente de Benedict e misturar. 3. Aquecer com agitao e diretamente na chama. Deixar em ebulio por + 1 minuto. 4. Observar a soluo. A mudana de colorao (azul para verde at vermelho tijolo) e/ou formao de precipitado (cor de tijolo) indica reao positiva. 5. Ler interpretao. 3 ) TESTE DE SELIWANOFF 1. Colocar em um tubo de ensaio + 0,5mL da soluo do glcide a ser identificado. (D = Desconhecido) 2. Colocar em outro tubo de ensaio + 0,5mL da soluo de frutose. (C = Controle) 3. Acrescentar a cada um dos tubos 1mL de Reagente de Seliwanoff e misturar. 4. Colocar os tubos em um banho de gua em ebulio. 5. Observar periodicamente. No momento em que a colorao do tubo C ficar vermelha retira-se os dois tubos do banho. 6. Comparar o tubo D com o controle. O aparecimento da cor vermelha indica reao positiva. 7. Ler a interpretao.

4 ) TESTE DE MOLISH 1. Colocar em um tubo de ensaio seco + 1mL da soluo do glcide a ser identificado. 2. Acrescentar 3 gotas da soluo alcolica de -naftol e misturar. 3. Gotejar + 2mL de H2SO4(concentrado) pela parede do tubo inclinado de modo que os dois lquidos no se misturem. Voltar cuidadosamente, o tubo posio vertical. 4. Deixar em repouso. O aparecimento de estrias ou de anel roxo na superfcie de separao dos dois lquidos indica reao positiva. 5. Ler a interpretao.

c) INTERPRETAES: O procedimento acima pode servir de modelo para caracterizao dos constituintes de material biolgico por meio de um conjunto de reaes qualitativas. Pelo sistema de identificao e eliminao progressiva pode-se dizer ao final do trabalho prtico, quais foram os glcides fornecidos dentre os seguintes: glicerose, glicose, frutose, sacarose e amido, por exemplo. 1 ) TESTE DE IODO O Teste de iodo serve para diferenciar homopolissacardeos dos outros glcides. Os homopolissacardeos do tipo amido formam com o iodo um complexo (produto de absoro) colorido. Pela colorao resultante pode-se identificar, por exemplo: azul-amido; averrmelhadoglicognio; roxo avermelhado-dextrinas, dependendo da estrutura e extenso molecular; incolor insulina. 2 ) TESTE DE BENEDICT O Teste de Benedict serve para diferenciar glcides redutores dos no redutores. Os ons cpricos, estabilizados em soluo por agentes complexantes (azul) so reduzidos a quentes pelos grupos carbonilas livres ou potenciais das aldoses e cetoses formando-se o xido cuproso vermelho-tijolo. A colorao da soluo final e/ou precipitado (verde a marron) dependero apenas da concentrao do glcide presente na soluo. 3 ) TESTE DE SELIWANOFF O Teste de Seliwanoff serve para diferenciar cetoses e aldoses. A sacarose por conter frutose, tambm d reao positiva, devido a presena de cido no Reagente de Seliwanoff. Esta hidrlise o dissacride em questo, libera a cetose, que por sua vez forma o composto colorido. As solues concentradas de aldoses do tambm reao positiva neste teste, embora mais demorada; por isso imprescindvel correr um padro contendo cetose (frutose, por exemplo), para haver o controle de tempo de formao. 4 ) TESTE DE MOLISH O Teste de Molish serve para diferenciar glcides de 5 ou mais tomos de carbono de menor nmero de tomos de carbono. Os glcides sofrem ao desidratante do H 2SO4 e reagem com naftol dando origem a um composto de cor rosa.

d) RELATRIO: Preencher a tabela abaixo marcando os testes positivos com (+) e os negativos com (-) . Glicerose Glicose Frutose Sacarose Amido Desconhecido A B C e) CONCLUSO: A B C Iodo + Benedict + + + Seliwanoff + + Molish + + + +