Disciplina: Microbiologia (CBI e CBN) PERODO: 2 semestre de 2012 HORRIO: 08h00-12h00 19h00-23h00

UNESP/Rio Claro DURAO: 60 h 5 crditos

Aula Prtica N3 MICROSCOPIA: observao macroscpica e microscpica de micro-organimos Professores: Fernando Carlos Pagnocca (Turma 1) Lara Dures Sette (Turma 2) Introduo O microscpio tico um instrumento (Figura 1) amplamente utilizado em laboratrios de Microbiologia. Existem vrios tipos (campo claro, campo escuro, contraste de fase, fluorescncia) e cada um tem finalidades especficas. Utilizando um sistema de lentes e fonte de iluminao, os microscpios ticos comuns (campo claro) podem ampliar um pouco mais de 1.000X o tamanho original do espcime. Esta limitao est relacionada com princpios fsicos (abertura numrica das lentes, comprimento de onda da luz visvel, dentre outros parmetros). Embora o primeiro objeto que se deseje observar seja o micro-organismo inteiro, utilizando preparaes especficas e com o auxlio adicional de corantes e de iluminao, podemos visualizar estruturas internas como membranas, ncleo (em eucariotas) e endsporos (de bactrias) e tambm estruturas externas, como cpsula e flagelos.

1 Base ou p 2 Fonte de luz 3 Parafuso de foco (micrometro) 4 Brao ou haste 5 Condensador 6 Platina 7 Charriot 8 Objetivas 9 Revlver 10 - Canho
Figura 1. Modelo esquemtico de um microscpio tico

OBJETIVO: Conhecer o microscpio e aprender a tcnica de preparo de lminas a fresco para visualizao das clulas microbianas. Caracterizao macroscpica das culturas de bactrias, leveduras e fungos filamentosos 1. Caracterizao macroscpica A partir das placas contendo culturas microbianas, selecione 4 culturas e descreva as principais caractersticas das colnias que permitem sua diferenciao.

Avaliao Forma Elevao Borda Pigmentao/cor Aspecto Consistncia

Culturas 1 2 3 4

2. Caracterizao microscpica Preparo de lmina a fresco 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) Utilizar as 4 colonias selecionadas para a caracterizao macroscpica. Colocar uma gota de gua estril no centro da lmina de vidro utilizando uma Flambar a ala. Esfri-la na tampa da placa de Petri, ou no meio slido, numa regio sem colnia. Tocar levemente na colnia, retirando uma pequena quantidade. Homogeneizar este material com a gota de gua, cuidando para obter uma Cobrir com lamnula para examinar ao microscpio.

pipeta Pasteur ou conta-gotas.

suspenso pouco densa e sem grumos.

8)

Flambar sempre a ala de inoculao ao trmino do contato com micro-

organismos. Deixar a mesma repousando sobre a poro lateral do bico de Bunsen. Observe ao microscpio utilizando a objetiva com 40X de aumento. Anote as caractersticas na tabela abaixo e desenhe o que observar. CULTURA Micro-organismo 1 Micro-organismo 2 Micro-organismo 3 Micro-organismo 4 FORMA ARRANJO/TAMANHO

Micro-organismo 1

Micro-organismo 2

Micro-organismo 3

Micro-organismo 4

Obs: tente observar se h motilidade. (no confundir com movimento browniano).