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UNIDAD 2. FUNDAMENTOS DE LAS FERMENTACIONES 2.

1 LA GAMA DE LOS PROCESOS FERMENTATIVOS Existen 5 grupos principales de fermentaciones importantes comercialmente: 1. 2. 3. 4. 5. Aquellas que producen clulas microbianas (biomasa) como producto final. Producen enzimas microbianas. Producen metabolitos microbianos Obtienen productos recombinantes Aquellas que modifican un compuesto que se aade a la fermentacin ( Transformacin).

1. Biomasa microbiana Se puede dividir en dos procesos mayores: Produccin de levadura panadera y produccin de protena unicelular (PUC). La levadura se ha producido a gran escala como alimento desde la 1 guerra mundial. PUC comenz a explotarse desde 1960 aprox. 2. Enzimas microbianas Generalmente se han producido de plantas, animales y microorganismos. Tiene la ventaja de ser producidas por tcnicas fermentativas.

Adems, la aparicin de la tecnologa de ADN recombinante ha permitido que se sinteticen enzimas de origen animal mediante microorganismos Su produccin en los M.O. est estrechamente controlada: Para mejorar su produccin, estos controles deben ser explotados o modificados.

Asimismo, el nmero de copias del gen que codifica para la enzima puede incrementarse mediante tcnicas de ADN recombinante

3. Metabolitos microbianos El crecimiento de un cultivo microbiano se puede dividir en distintas etapas: Fase lag Fase log o exponencial Fase estacionaria Fase muerte

De igual forma, el crecimiento de un cultivo puede describirse de acuerdo a los productos que se obtienen en las distintas etapas de crecimiento: Por ejemplo, durante la fase log, los compuestos producidos son esenciales para el crecimiento de las clulas, e incluyen: aminocidos, nucletidos, cidos nucleicos, lpidos, carbohidratos, etc.

Estos compuestos se conocen como metabolitos primarios, y la fase cuando se producen , se conoce como tropofase.

En la fase estacionaria, algunas cepas sintetizan compuestos que parecen no tener una funcin obvia en el metabolismo celular: Se conocen como metabolitos secundarios, y la fase como idiofase. Es importante mencionar que el metabolismo secundario puede ocurrir en cultivos continuos a bajas velocidades de crecimiento. No todos los M.O. experimentan el metabolismo secundario: Es comn en hongos y algunos gneros de bacterias esporuladas

Llega a ser difcil categorizar a un producto como primario o secundario. Muchos metabolitos secundarios tienen actividad antimicrobiana, otros son inhibidores especficos de enzimas, algunos son promotores del crecimiento y varios tienen propiedades farmacolgicas. Los metabolitos microbianos producidos por cepas silvestres, slo producen cantidades limitadas de ellos. Requieren control de las condiciones o manipulacin gentica para aumentar eficiencia.

4. Productos recombinantes La llegada de esta tecnologa ha extendido la gama de productos de fermentacin. Genes de organismos mayores pueden introducirse de tal manera que los recipientes son capaces de sintetizar protenas extranjeras. Un amplio intervalo de clulas microbianas se han usado como anfitriones: E. coli, Saccharomyces cerevisiae y otros hongos filamentosos. Algunos productos son: interferon, insulina, suero de albumina, somatostatina.

5. Procesos de transformacin Las clulas microbianas se pueden usar para convertir un compuesto en otro estructuralmente relacionado, con mayor valor comercial.

Debido a que los M.O. pueden actuar como catalizadores con alta especificidad y estereoespecificidad, los procesos microbianos son ms especficos que los procesos qumicos y permiten l adicin, remocin o modificacin de grupos funcionales en sitios especficos en una molcula compleja, sin utilizar reacciones qumicas. Las reacciones que pueden llevarse a cabo incluyen: Dehidrogenacin ,oxidacin, hidroxilacin, deshidratacin, descarboxilacin ,aminacin, deaminacin e isomerizacin.

Tiene la ventaja sobre los procesos qumicos de operar a relativamente bajas temperaturas y presiones, sin usar metales txicos como catalizadores.

La produccin de cido actico es el ms conocido, aunque tambin se producen esteroides, antibiticos y prostaglandinas. Una desventaja de stos es que se requiere gran cantidad de biomasa para catalizar una reaccin simple. Por lo que algunos procesos han realizado la inmovilizacin de la biomasa o de las enzimas que catalizan las reacciones, sobre un soporte inerte. Estos pueden ser reutilizados varias veces.

2.2 LOS COMPONENTES DE UN PROCESO DE FERMENTACIN Qu se requiere para llevar a cabo una fermentacin? Independientemente del tipo de fermentacin (bajo algunas excepciones en las transformaciones), los procesos de fermentacin se pueden dividir en 6 componentes bsicos: Formulacin del medio para el desarrollo del inoculo y la produccin en el fermentador. Esterilizacin del medio, fermentador y equipos auxiliares. Produccin de un cultivo activo y puro en cantidad suficiente para inocular el recipiente de fermentacin. Crecimento del M.O. en el fermentador bajo condiciones ptimas para la obtencin del producto Extraccin del producto y su purificacin.

1) 2) 3) 4) 5)

Disposicin de los efluentes producidos en el proceso.

Sin embargo, se debe tomar en cuenta tambin el programa de desarrollo e investigacin diseado para mejorar gradualmente la eficiencia de la fermentacin: Antes que el proceso se establezca, se debe aislar y/o modificar al M.O. para que produzca el compuesto deseado en cantidades comerciales. Se deben determinar sus requerimientos de crecimiento. Y disear adecuadamente el proceso.

El programa de desarrollo debe involucrar el mejoramiento continuo del M.O., del medio de cultivo y del proceso de extraccin, entre otros factores.

2.3 DISEO Y PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO Vale la pena tener en cuenta antes de comenzar a discutir la forma en que crecen las cepas seleccionadas en biorreactores (y conseguir que produzcan los compuestos de inters) que la mayora de los microorganismos no son cultivables por las tcnicas convencionales. Aquellos M.O. cultivados en laboratorio estn adaptados a un rpido crecimiento, por lo general en medios ricos en nutrientes, a temperaturas cercanas a 37 C.

Los medios normales de operacin en un fermentador (biorreactor) consisten en la inoculacin con un cultivo puro, y el mantenimiento de condiciones monospticas durante todo el proceso.

De nuevo, esto no es representativo de la condicin natural de la mayora de la microbiota.

Microorganismos, clulas vegetales, insectos y otros animales, cuando se cultivan en un laboratorio o medio ambiente industrial, crecen en soluciones de nutrientes que contienen todo lo que necesitan con el fin de crecer y producir cualquier producto primario o secundario para los cuales las clulas han sido diseadas. Este tipo de soluciones de nutrientes se llaman medios de cultivo. Es imperativo que se utilice el medio de cultivo correcto, tanto en investigacin como en aplicaciones industriales, si se quiere desarrollar correctamente la cepa para los objetivos planteados. La eleccin del medio correcto es una parte crtica para el crecimiento de la cepa, tanto en investigacin como en aplicaciones industriales. Diseo del medio debe ser un proceso relativamente simple, pero a menudo se complica por factores como el costo, la disponibilidad de sustratos, la fiabilidad del suministro de sustrato, la manipulacin, facilidad de preparacin y almacenamiento, el transporte de los componentes; por no hablar de consideraciones de seguridad y salud, que son cada vez ms importante en hoy en da. A menudo es fcil olvidar que la principal consideracin es bastante simple: abastecer a los microorganismos o clulas con una fuente de nutrientes necesarios en una forma fcilmente utilizable. En un mundo ideal todos los componentes del medio deben disolverse fcilmente en el agua con el fin de estar a disposicin de la clula. Muchos medios, especialmente a escala industrial, se desvan de la idealidad, ya que contienen slidos en suspensin y fases aceitosas que se suman a su complejidad de esterilizacin y funcionamiento fermentador.

Por dnde comenzar? El punto de partida obvio: considerar lo que ha sido publicado en la literatura cientfica y, si es base industrial, tener en cuenta los registros histricos disponibles. Una vez que los medios se han identificado en la literatura, es importante que un anlisis crtico se lleve a cabo. Tambin es importante que ha pesar de que se encuentren los medios en la literatura, no necesariamente significa que sean correctos o que puedan funcionar en todos los casos. En la bsqueda de un medio adecuado para el cultivo de clulas, se pueden encontrar medios que se utilizan simplemente porque es lo que todos los dems usan. Es raro encontrarse con el medio perfecto para el cultivo cepas especficas, ya que hay muchos que pueden ser adecuados. En consecuencia, se deben responder una serie de preguntas, por ejemplo: cul es la composicin elemental de la cepa a utilizar? qu fuente de energa requiere el m.o.? cul es el objetivo del bioproceso: biomasa, compuesto, ambos? impactar la formulacin del medio en el producto? Por ejemplo, el pH puede tener efectos significativos en productos de naturaleza protenica

Ser el proceso tipo batch, continuo o semi-continuo?se requerirn diferentes medios en las etapas del proceso? Impactar la seleccin del medio otras etapas del proceso (filtracin, centrifugacin, purificacin, etc.)?

Se cuenta con equipo para realizar el mtodo adecuado de esterilizacin? (sustratos sensibles al calor, lquidos muy viscosos, materia particulada etc.)

Muchos cientficos utilizan mtodos matmatico-estadsticos para formular y optimizar formulaciones en medios de cultivo (metodologa de superficie de respuesta, diseo Placket-Burman, etc.) Lo cual conlleva a mejora de medios de cultivo. Sin embargo, un simple clculo de cunta biomasa se requiere y cunto producto se necesita, y aplicando simple cintica microbiana, pueden ayudar a determinar los niveles ptimos de sustratos aadidos al proceso. El punto clave es conocer la fisiologa celular, y algunas aproximaciones cuantitativas relacionadas con el punto anterior, para formular un medio adecuado en la mayora de las fermentaciones.

TIPOS DE MEDIOS Slido, semislido o lquido. La mayora de las fermentaciones se llevan a cabo en medio lquido. Se pueden clasificar segn su composicin: sintticos, semi-sintticos y complejos.

Sintticos Totalmente definidos qumicamente. Se conocen todos sus componentes, as como sus concentraciones. Son relativamente simples: contienen fuentes de C y N, as como una gama de sales. Algunos pueden presentar muchos compuestos, dependiendo de las clulas a crecer en l.

son tiles en investigacin, donde la precisin es de suma importancia ya que la interpretacin de datos debe ser clara. Ms costosos, sobre todo si los componentes especficos como las vitaminas y factores de crecimiento son necesarias, ya que estos ingredientes suelen ser muy caros cuando se suministra en forma pura. son por lo general completamente solubles y proporciona el menor nmero de problemas de procesamiento en etapas finales del proceso.

Semi-sintticos Definidos qumicamente casi por completo. Incluyen uno o ms componentes poco especificados, como el extracto de levadura, que lo usan cepas que requieren una gama de vitaminas tipo B.

son tiles en investigacin, donde un organismo en particular tenga un requerimiento de un sustrato que sera demasiado caro para suministrar en forma pura, de manera continua. Son tiles tambin cuando no se conocen del todo las necesidades nutricionales del organismo, y una fuente rica en nutrientes acta como proveedor de varios nutrientes.

Complejos Compuestos por sustancias de origen animal o vegetal, de composicin variable.

Su composicin vara de lote a lote. Su composicin est influenciada por la poca del ao, lugar de origen y variaciones en los mtodos de produccin. Su disponibilidad temporal puede variar significativamente. Por lo general son relativamente baratos, pueden ser suministrados a granel y la fuente suele ser confiable. Melazas de remolacha y caa de azcar, licor de maz, soya, suero en polvo, almidn hidrolizado, entre varios otros. Se utilizan para muchos procesos biotecnolgicos, especialmente a gran escala de produccin y para productos de bajo valor. Cumplen normalmente ms de un requisito de la clula, como el suministro de carbono y nitrgeno, adems de suministrar vitaminas y otras necesidades elementales de la clula. A nivel de investigacin es raro utilizarlos, a menos que se tenga que replicar un proceso industrial de manera exacta en el laboratorio. El sustrato puede variar en composicin. Ejemplo: melazas de remolacha y de caa. Hacen que la recuperacin del producto y de tratamiento de efluentes ms problemtica, porque no todos los componentes de un medio complejo sern consumidos por el organismo. Todos los microorganismos necesitan agua, fuentes de energa, carbono, nitrgeno, elementos minerales, y, posiblemente, vitaminas y oxgeno si aerbico. En pequea escala, es relativamente sencillo disear un medio que contiene compuestos puros, pero el medio resultante, aunque promueva un crecimiento satisfactorio, puede ser inadecuado para su uso en un proceso a gran escala. A gran escala se deben utilizar fuentes de nutrientes para crear un medio que rena en mayor medida los siguientes criterios: 1. Producir el mximo rendimiento del producto o biomasa por gramo de sustrato utilizado. 2. Producir la concentracin mxima de producto o la biomasa. 3. Permitir tasa mxima de formacin de producto. 4. Provocar un rendimiento mnimo de los productos no deseados. 5. Ser de una calidad constante y fcilmente disponible durante todo el ao. 6. Minimizar problemas durante su preparacin y esterilizacin. 7. Causar un mnimo de problemas en otros aspectos del proceso de produccin, particularmente de aireacin y agitacin, extraccin, purificacin y tratamiento de residuos.

No hay que olvidar que el medio seleccionado afectar el diseo del fermentador. Por ejemplo, la decisin de utilizar metanol y amonaco en el proceso de produccin de PUC por la compaa ICI requiri de un fermentador de diseo novedoso. La oxidacin microbiana de hidrocarburos es un proceso altamente aerbico y exotrmico.

Por lo tanto, requiri de un fermentador con gran capacidad de transferencia de oxgeno, as como excelentes accesorios de enfriamiento.

Tambin el tipo de fermentador usado puede alterar la composicin del medio! Rhodes et al. (2005) observaron que la produccin de griseofulvina se vea afectada por el tipo de fermentador usado.

Tambin debe considerarse el problema de desarrollar un proceso desde el laboratorio hasta la escala piloto, y posteriormente a la escala industrial. Un medio de laboratorio puede no ser ideal en un fermentador grande con un patrn pobre de transferencia de gas. Un medio con alta viscosidad requerir mayor potencia de entrada para una agitacin efectiva.

Adems de cumplir con los requisitos para el crecimiento y formacin del producto, el medio tambin puede influir en el pH, la formacin de espuma, el potencial redox y morfologa del organismo. Tambin puede ser necesario proporcionar precursores o inhibidores metablicos. El medio tambin afectar la recuperacin del producto y el tratamiento de efluentes.

Los componentes de un medio deben satisfacer los requerimientos elementales para la produccin de biomasa y sus metabolitos, y deben ser un suplemento adecuado de energa para la biosntesis y el mantenimiento de las clulas. El primer paso a considerar es una ecuacin basada en la estequiometria del crecimiento y la formacin de productos; por lo tanto, para una fermentacin anaerbica:

Esta ecuacin debe ser expresada en trminos cuantitativos, lo cual es importante en el diseo econmico del medio si se requiere que el desperdicio de los componentes sea mnimo. Por lo tanto, debe ser posible calcular las cantidades mnimas de nutrientes que se necesitan para producir una cantidad especfica de biomasa. Sabiendo que una cierta cantidad de biomasa es necesaria para producir una cantidad determinada de producto, debera ser posible calcular las concentraciones en el sustrato necesarias para producir los rendimientos requeridos de producto.

Por desgracia, no siempre es fcil cuantificar todos los factores de forma muy precisa. El conocimiento de la composicin elemental de un microorganismo es necesaria para la solucin de la ecuacin de equilibrio elemental. Esta informacin puede no estar disponible. Los datos en las siguientes tablas pueden servir como una gua para las cantidades mnimas absolutas de N, S, P, Mg y K, para incluirlas en una primera receta del medio. Oligoelementos (Fe, Zn, Cu, Mn, Co, Mo, B) tambin pueden ser necesarios en pequeas cantidades.

Los requerimientos de carbono para la produccin de biomasa bajo condiciones aerobias se puede estimar a partir del coeficiente de rendimiento celular (Y), el cual se define como:

distintos Algunos valores de Y para bacterias en sustratos se dan en la siguiente tabla: =

Por lo tanto, para bacterias con una Y por glucosa de 0.5, es decir: 0.5 g de clulas/g glucosa, Cul ser la concentracin necesaria de glucosa para obtener 30 g/L de clulas? Tambin requerir tener N, P, K, S and Mg en diferentes cantidades.

AGUA

El agua es el componente principal de todos los medios de fermentacin, y es necesario en muchos de los servicios auxiliares, tales como calefaccin, refrigeracin y limpieza. Se requiere entonces de agua limpia, de composicin constante, en grandes cantidades a partir de fuentes confiables y permanentes. Al evaluar la idoneidad de un suministro de agua es importante tener en cuenta el pH, sales disueltas y su contaminacin. Por ejemplo, el contenido mineral del agua es muy importante en la elaboracin de la cerveza, particularmente en el proceso de maceracin, ya que incluso histricamente a influido en la ubicacin de las fbricas y los tipos de cerveza producida. Aguas duras, con alto contenido de CaSO4, son mejores para cervezas amargas, mientras que las aguas con un alto contenido de carbonato son mejores para las cervezas ms oscuras.

Aunque hoy en da, el agua puede ser tratada por deionizacin u otras tcnicas y sales aadidas, o ajustar el pH, a favor de cervezas diferentes, para que las cerveceras no sean tan dependientes de la fuente de agua local. El reuso o uso eficiente del agua es de alta prioridad. Cuando se desarroll el proceso de produccin de PUC, se dieron cuenta que se requeran 27000 x 10 L//ao aprox.
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Pruebas de lab, demostraron que el M.O. poda crecer adecuadamente con un 86% de reciclado del sobrenadante, aadiendo nutrientes agotados. FUENTES DE ENERGA La Energa para el crecimiento proviene ya sea de la oxidacin de los componentes del medio o de la luz. La mayora de los M.O. industriales son quimio- organotrofos, por lo tanto, su fuente ms comn de energa sern fuentes de carbono, tales como carbohidratos, lpidos y protenas. Algunos microorganismos pueden tambin utilizar hidrocarburos como metanol, metano, etc.

FUENTES DE CARBONO Factores que influyen en su seleccin Se sabe que la velocidad a la cual se metaboliza la fuente de carbono a menudo puede influir en la formacin de la biomasa o la produccin de metabolitos primarios o secundarios. El rpido crecimiento debido a altas concentraciones de azcares metabolizadas rpidamente, se asocia a menudo con la baja productividad de metabolitos secundarios.

Por lo tanto, el producto principal de un proceso de fermentacin a menudo determina la eleccin de la fuente de carbono. Factores que influyen en su seleccin En fermentaciones tales como etanol o produccin de PUC, donde las materias primas son el 60 a 77% del costo de produccin, el precio de venta del producto se determinar en gran parte por el costo de la fuente de carbono. Por ello casi siempre se prueban varias fuentes de carbono para desarrollar un proceso fermentativo.

La pureza de la fuente de carbono tambin puede afectar a la eleccin del sustrato. Por ejemplo, los iones metlicos deben removerse de las fuentes de carbono utilizadas en algunos procesos de obtencin de cido ctrico.

El mtodo de preparacin del medio, particularmente la esterilizacin, puede afectar a la idoneidad de los carbohidratos para la fermentacin individual. A menudo es mejor esterilizar los azcares por separado, ya que pueden reaccionar con los iones de amonio y aminocidos para formar compuestos nitrogenados que inhiben parcialmente el crecimiento de muchos microorganismos.

El almidn tiene la desventaja de que cuando se calienta en la esterilizacin se gelatiniza, dando lugar a lquidos muy viscosos, por lo que slo las concentraciones de hasta un 2% puede ser utilizado sin modificaciones. La eleccin de la fuente de carbono tambin puede estar influenciada por la legislacin gubernamental.

En la CE, se promueve el uso de azcar de remolacha y melazas para mantener condiciones econmicas favorables. Algunas veces se instalan empresas de fermentacin fuera del a EC para poder usar otros sustratos.

En otros casos se prohbe el uso de otros sustratos que no sean malta, azcar y lpulo en la fabricacin de cerveza. Whisky escocs slo podr realizarse a partir de malta de cebada, agua y levadura. En Francia, muchos vinos pueden ser llamados por un nombre determinado slo si el viedo est dentro de una zona geogrfica limitada.

Fuentes de carbono ms comunes Carbohidratos El ms ampliamente disponible es el almidn de maz en grano. Tambin se obtiene a partir de otros cereales, papas y yuca.

Los granos de cebada pueden ser parcialmente germinados y tratados con calor para dar el material conocido como malta, que contiene una variedad de azcares, adems de almidn Sacarosa se obtiene de la caa de azcar y remolacha. Se utiliza comnmente en los medios de fermentacin en una forma muy impura como la melaza de remolacha o de caa.

La melaza se utiliza en la produccin de grandes volmenes de productos de bajo valor, como el etanol, SCP, cidos orgnicos y aminocidos y algunas gomas microbianas.

Tambin puede ser utilizada para obtener productos de mayor valor y poco volumen, tales como antibiticos, enzimas, vacunas y compuestos qumicos de alta pureza. El costo de la melaza es competitivo en comparacin con los carbohidratos puros. Sin embargo, la melaza contiene muchas impurezas y a menudo se necesita un proceso de extraccin-purificacin ms caro y complicado para eliminar las impurezas El tratamiento de efluentes ser ms costoso debido a residuos no utilizados que an estn presentes.

El licor de maz es un subproducto de la extraccin del almidn de maz. Aunque principalmente se utiliza como fuente de nitrgeno, contiene cido lctico, pequeas cantidades de azcares reductores y polisacridos complejos. Ciertos materiales de origen vegetal, por lo general usadas como fuentes de nitrgeno, tales como harina de soya, contienen cantidades pequeas pero significativas de carbohidratos.

Grasas y aceites Los aceites se usaron por primera vez como portadores de antiespumantes en los procesos de antibiticos.

Aceites vegetales (oliva, maz, semillas de algodn, lino, soya, etc.) tambin pueden ser utilizados como sustratos de carbono, sobre todo por su contenido de cidos grasos, oleico, cido linoleico y linolnico, ya que sus costos son competitivos con los de los carbohidratos. Bader et al. (1984) discutieron los factores que favorecen el uso de aceites en lugar de carbohidratos: Un aceite tpico contiene aproximadamente 2.4 veces la energa de la glucosa en funcin del peso. Los aceites tambin tienen una ventaja respecto al volumen de medio, ya que 1,24 dm de aceite de soya 3 pueden aadir 10 kcal de energa a un fermentador, mientras que se requieren 5 dm para la glucosa.
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Los aceites tambin tienen propiedades anti-espuma que puede aguas abajo el procesamiento ms simple, pero normalmente no se utilizan nicamente para este propsito. Trioleato de glicerol (triolena) es conocido por ser utilizado en algunas fermentaciones como sustrato donde la pureza es una consideracin importante. Oleato de metilo ha sido utilizado como el nico sustrato de carbono en la produccin de cefalosporina.

Hidrocarburos y sus derivados Existe un inters considerable en el uso de hidrocarburos. Se ha desarrollado el uso de n-alcanos para la produccin de cidos orgnicos, aminocidos, vitaminas y cofactores, cidos nucleicos, antibiticos, enzimas y protenas. Metano, metanol y n-alcanos, se han usado para la produccin de PUC. Se han discutido las ventajas y desventajas del uso de estos compuestos como sustratos: En base al peso, los n-alcanos tienen aproximadamente el doble de carbono y tres veces el contenido de energa que el azcar. Aunque suelen ser inicialmente impuros, se pueden refinar para obtener productos de mayor pureza en grandes cantidades, lo cual reducira la cantidad de tratamiento de efluentes y procesos posteriores.

Su principal desventaja es el costo. Otra desventaja es la posible generacin de compuestos txicos en el producto final; sobre todo en lo referente a la produccin de PUC.

Por ello, se ha considerado que los hidrocarburos y sus derivados podran usarse como materia prima en la produccin microbiana de productos de mayor valor como farmacuticos, qumicos de alta pureza y productos qumicos agrcolas. Fuentes de nitrgeno La cantidad de nitrgeno en cualquier medio determina la cantidad de biomasa que se lograr de cada cepa, teniendo en cuenta que existe carbono suficiente y todos los nutrientes necesarios estn presentes. El nitrgeno es necesario para el crecimiento y la sntesis de, por ejemplo, protenas y cidos nucleicos. La mayora de los M.O. industriales pueden utilizar fuentes de nitrgeno orgnicas o inorgnicas. El inorgnico puede ser suministrado como amoniaco (g), sales de amonio o nitratos. Ventajas: disuelve fcilmente y es barato
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Las sales de amonio pueden generar condiciones cidas, debido a la liberacin de iones H .

Los nitratos pueden generar una desviacin alcalina, cuando son metabolizados. Se puede utilizar nitrato de amonio y se podrn observar los dos efectos.

El nitrgeno orgnico se puede suministrar como aminocidos, protena o urea. En muchos casos el crecimiento ser ms rpido con una fuente de nitrgeno orgnico. Son pocos los M.O. que requieren indispensablemente aminocidos. Los aminocidos son ms comnmente aadidos a partir de fuentes complejas de nitrgeno orgnico, que no son homogneas, ms baratas y fcilmente disponibles. Entre ellas: extracto de levadura, licor de maz, harina de soya, etc.

Puntos a considerar en la eleccin de la fuente de N2: Qu se quiere lograr con el proceso?......producir biomasa o metabolitos, o ambos? Queremos que el N2 se agote en algn momento del proceso?.....Por ejemplo, si se requiere producir un metabolito secundario (antibitico), es necesario formular el medio para que el N2 sea limitante. Cmo se va a controlar el pH?......en algunos casos la adicin de sales puede afectar este parmetro, como se menciono anteriormente.

Elementos Varios elementos son esenciales para el crecimiento. Cada uno debe ser provisto, generalmente por medio de una sal inorgnica, a fin que la clula crezca y funcione correctamente. Calcio: es necesario para estabilizar las paredes celulares, y es especialmente importante si las clulas forman endosporas (que contienen una alta concentracin dipicolinato de calcio ). Magnesio: a menudo acta como un cofactor para la actividad de las enzimas, puede desempear un papel importante en la estructura y funcin de la membrana. Fsforo: Es necesario para la produccin de fosfolpidos, cidos nucleicos y la generacin de energa (ATP, ADP). Potasio: Est involucrado en muchas reacciones dentro de las clulas y es requerido por todas ellas. Sodio: Algunas especies tienen un requisito absoluto para el sodio, por ejemplo, las especies marinas y halfilas. Muchas clulas sin embargo, no tienen ningn requisito obligado para este elemento. Azufre: Se requiere para la sntesis de aminocidos (cistena, cistina y metionina), para la produccin de algunas vitaminas, por ejemplo, biotina, y para la funcin de coenzima en muchas clulas. Una vez ms, si se usan medios complejos, puede no ser necesario el suministro de estos elementos por separado, o en menor cantidad.

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