BIOTEHNOLOGII INDUSTRIALE

PENICILINA V - proiect

ndrumtor: Asistent dr. ing. Lenua Kloetzer Student: Croitoru Mrioara-Florina Grupa: 2045 (IB)

- 2012/20131

TEMA DE PROIECTARE

Proiectarea unei instalaii industriale de obinere a Penicilinei V cu o productivitate de 23 tone/ an.

Cuprins Cap.1 Memoriu tehnic..4 Cap.2 Tehnologii de fabricaie.5 2.1 Domenii de utilizare i proprietile produsului...5 52.2Variate tehnologice...13 2.3 Alegerea variantei optime.....14 2.4 Descrierea procesului tehnologic adoptat. ......15 2.4.1 Elaborarea schemei tehnologice............15 2.4.2 Materii prime intermediare i auxiliare........30 2.4.3 Mecanismul reaciilor biochimice......44 2.4.4 Cinetica reaciilor biochimice.48 2.4.5 Termodinamica reaciilor biochimice........62 2.4.6 Bilanul de materiale............66 2.4.7 Consumuri specifice.80 Cap.3 Controlul fabricaiei...81 3.1 Controlul,reglarea i automatizarea proceselor tehnologice...81 3.2 Controlul de calitate........95 3.2.1 Metode de analiza ale materiilor prime i intermediare...95 3.2.2 Metode de analiza ale produsului finit..........104 Cap4 Utiliti................................................................................................106 Cap.5 Produse secundare, de;euri de fabricaie,epurarea apelor reziduale ...108 Cap.6 Transport,ambalare,depozitare..110 Cap.7 Norme de prevenire a muncii si PSI...114 Bibliografie..................................................................................................119

Cap.1 Memoriu tehnic

n cadrul acestui proiect s-a proiectat procesul biotehnologic de obinere a Penicilinei V. Penicilina V este un produs de biosintez produs de diferite microorganisme din clasa Penicillium chrysogenum . Penicilina V conine n structura ei un nucleu tiazolidinic. Penicilina V reprezint unul din cele mai valoaroase antibiotice de biosintez, avnd o puternic aciune bactericid i bacteriostatic. .Procesul tehnologic de obinere a penicilinei Vse realizeaz printr-un proces discontinuu de fermentaie n profunzime. Pe baza procesului tehnologic optim adoptat s-a realizat schema bloc a procesului tehnologic de obinere a Penicilinei V. Schema bloc conine fiecare etap necesar procesului de obinere a Penicilinei V. Tehnologia de obinere a Penicilinei V cuprinde urmtoarele faze: - pregtirea mediului de cultur - fermentaia - filtrarea soluiei native - separarea i purificarea. n capitolul 2 sunt prezentate materiile prime auxiliare necesare mediului de cultur.n acest proiect s-au prezentat mecanismulul reaciilor biochimice dar i cinetica i termodinamica procesului. Capitolul 3 cuprinde controlul fabricaiei cu metode de analiz ale materiilor prime i auxiliare ct i a produsului finit. n capitolul 4 sunt prezentate informaii despre utiliti, produse secundare, deeuri de fabricaie, transportul, depozitarea i ambalarea produsului finit ct i norme de protecia muncii ce trebuie respectate pe parcursul ntregului proces de fabricaie.

Cap.2 Tehnologia de fabricaie

2.1 Domenii de utilizare i proprietile produsului Antibioticele sunt substane chimice organice produse de microorganisme sau obinute prin sintez sau semisintez, care n doze mici inhib dezvoltarea microorganismelor patogene.S- a observat, dup descoperirea microbilor de ctre Pasteur, c unele specii microbiene se separ de altele prin elaborarea unor substane chimice nocive.Acest fenomen este numit antibioz, iar substanele chimice rezultate din metabolismul celulelor vii poart numele de antibiotice. n 1941 au fost introduse n practica medical antibioticele caractezizate prin eficacitate ridicat i toxicitate redus.Succesele exceptionale obinute n tratarea maladiilor infecioase cu ajutorul penicilinei G au declanat cercetri foarte minuioase i astfel ntr un interval scurt s-a descoperit i penicilina V.[ 7] . Clasificarea antibioticelor Numrul foarte mare de antibiotice cunoscute pn n prezent a pus problema clasificrii acestor produse Sau propus mai multe criterii de clasificare n funcie de originea microorganismului productor, structura chimic i aciunea antibacterian. Cu toate c fiecare metod folosit la clasificare este susceptibil la anumite critici, clasificarea antibioticelor se va face n funcie de originea microorganismelor productoare, structura chimic a antibioticelor, biogeneza i aciunea lor farmacologic a) Dup originea microorganismului productor, antibioticele se clasific n urmtoarele grupe: - antibiotice produse de bacterii: gramicidina, gramidina S, bacitracina,polimixinele etc.; -antibiotice produse de actinomicete: streptomicina, cloromicetina,tetraciclina,neomicina, kanamicina, nistatina, actinomicina etc.; - antibiotice produse din fungi: penicilina, grizeofulvina.

Clasificarea n funcie de originea microorganismului productor nu este concludent, deoarece este cunoscut faptul c acelai microorganism poate produce mai multe antibiotice diferite ca structur i proprieti fiziologice. b) Dup constituia chimic, antibioticele se clasific n urmtoarelegrupe: :- antibiotice cu structur alifatic: alicina; - antibiotice cu structur aromatic: acidul gladiolic, cloramfenicolul(cloromicetina); - antibiotice cu structur chinonic: fumigatina, ftiocolul; - antibiotice cu cicluri de furan i piran: acidul penicilic; - antibiotice heterociclice cu azot n molecul: acidul aspergilic, acidulhidroaspergilic; - antibiotice heterociclice cu azot i sulf n molecul: penicilinele; - antibiotice cu structur polipeptidic: gramicidina; - antibiotice cu structur complex: macrolidele; - antibiotice cu structur nedeterminat: viomicina Clasificarea dup structura chimic ofer posibilitatea formrii unor grupe, care elucideaz legtura dintre constituia chimic i proprietile antibacteriene. c) Dup biogenez, antibioticele se clasific n urmtoarele grupe: - antibiotice derivate din aminoacizi sau din uniti asemntoare: oxamicina,azaserina, cloramfenicolul, penicilinele, bacitracinele, actinomicinele; - antibiotice derivate din glucide simple: streptomicina, kanamicina,neomicina; - antibiotice diverse: novobiocina, vancomicina. Clasificarea dup genez permite explicarea mai uoar a mecanismului biochimic de formare a antibioticelor. d) Dup aciunea farmacologic, antibioticele se clasific n urmtoarelegrupe :- antibiotice cu aciune antibacterian; - antibiotice cu aciune antituberculoas; - antibiotice cu aciune antivirotic; - antibiotice cu aciune anticanceroas; - antibiotice cu aciune antifungic; - antibiotice cu aciune antiprotozoarian. Prin urmare, antibioticele nu exercit aceeai aciune antimicrobian asupra tuturor germenilor patogeni; ele au spectru antibacterian caracteristic,determinat de rezistena

specific a microorganismelor patogene Substanele antimicrobiene sunt mprite n ase mari categorii: betalactamine; nlocuitori ai betalactaminelor (n sensibilizare i rezisten); aminoglicozide i polipeptide; antibiotice clasice cu spectru larg; chimioterapice sistemice i urinare; tuberculostatice.[ 4] - Betalactaminele Betalactaminele, cu nucleu betalactam, grupul de antibiotice cel mai important i cu membrii cei mai numeroi, reunesc patru familii principale: peniciline naturale i semisintetice (7 generaii); carbapeneme; monobactami; cefalosporine (3 generaii). - Penicilinele Peniciline naturale Penicilinele naturale se obin din ciupercile genului Penicillium (notatum, chrysogenum, crustosum); ele au un nucleu betalactamic biciclic (acidul 6 aminopenicilanic). Generaia I cuprinde peste 20 de tipuri de peniciline biosintetice, naturale (penicilinele: G, X, F, K, V etc). Penicilinele costituie un grup de antibiotice , obinute prin biosintez sau semisintez, caracterizate print-un larg spectru bacteriostatic i bactericid n faza de multiplicare logaritmic a germenilor patogeni.Deoarece majoritatea penicilinelor, mai ales cele naturale, sunt inactivate depenicilinaz i acilaz, se impune gsirea unor peniciline cu rezisten i aciune ridicat.Penicilinele ideale ar trebui s posede un larg spectru antibacterian, s posede stabilitate n mediul acid, rezisten la penicilinaz,absorbie rapid i s nu produc hipersensibilitate la administrare.Cu toate c nu se cunosc deocamdat, peniciline care s satisfac toate exigenele, acestea dein totui supremaia n practica medical, datorit proprietilor terapeutice nsoite de toxicitate redus, ct i apariiei penicilinelor de semisintez.[ 6] Penicilinele conin n structura lor un nucleu tiazolic condensat cu unul tetragonal diferind ntre ele prin natura radicalului R.

O R C NH CH
CH

S CH3 C CH3 C O COOH N CH3

Structura general a penicilinei

Tabel 2.1 Denumirea penicilinei Structura radicalului Denumirea Radicalului 1 Penicilina F Penicilina dihidro F 2 CH3-CH2-CH=CH-CH2 CH3-(CH2)4 3 2-pentenil 2-pentil Activitate [UI/mg] 4 1500 1670

Penicilina G Penicilina X Penicilina K Penicilina V Penicilina O Penicilina S

C6H5-CH2HO-C6H4-CH2 CH3-(CH2)5-CH2 C6H5-O-CH2CH2=CH-CH2-S-CH2 CH3-C=CH-CH2-S-CH2 Cl

Benzil p-hidroxi-benzil n-heptil Fenoximetil Alilmercoptometil 3-clor-2-butenil-tiometil

1667 900 2300 1630 -

Proprietile produsului n practica terapeutic penicilina V a fost introdus sub form de acid liber sau sare de Na i K. Se administreaz oral, are toleran bun i se prezint sub form de comprimate. Este indicat n infecii uoare, faringite, otite mai ales la copii. Denumirea comercial: Penicilina V Ospen Oracilin Denumire chimic: Fenoximetilpenicilina Formul brut: C16H18O5N2S Masa molecular: Mm= 350,4 moli/ g Formula structural:
O C6H5 O
CH2

C NH CH CH

S C

CH3 CH3

C O

CH

COOH

Penicilina V

Proprieti fizice Penicilina V este o substan alb, cristalin, fr miros ,cu gust amar, utilizat sub form de acid liber, avnd punct de topire 118-120C, insolubil n ap, solubil n solveni precum alcooli i glicerin + alcooli. n mediul bazic viteza de inactivare a Penicilinei V este de 2.2 ori mai mare dect viteza de inactivare a Peniciliei G. Aceste date sunt luate n consideratie atunci cnd se trateaz problema separrii penicilinelor apoase obinute de la fermentaie. Proprieti chimice

Penicilinele sunt instabile n prezena acizilor, alcoolilor, ozidanilor, metalelor grele i la temperaturi ridicate.Penicilinele i pierd proprietile n soluii cu pH acid mai mic de 5 sau bazic mai mare de 8.n soluii apoase prezint pH = 5,5 7,5. Produsul iniial rezultat pri hidroliza nucleofil (prezent lactamazelo, a penicilinazelor sau ionolor metalici) a penicilinei este acidul peniciloic,biologic inactiv, acesta prin acidulare pierde o molecul de CO2 trecnd n acid peniloic.
O R C
N S C

O CH3 R C
N

ac.peniciloic H C H
C S C

H C

H
C

CH3 + H+ -CO2

CH3

lactamaza Cu2+

C O

CH COOH O ac.peniloic
S C

CH3

C O

HN

CH COOH

OH

C H
N

CH3

CH2

CH3 HN

CH COOH

Sub aciunea cloruri mercurice acidul peniloic se degradeaz la aldehid penilic i penicil amin.

10

O R C H
N S C CH3 HN

CH3 +HgCl2

H R
C N CH2 CH O

C H2

H3C C H C SH NH2 COOH

CH

C HO O

H3C

Penicilinele reacioneaz nucleofil cu hidroxiamina formnd acizi hidroxiaminici:

O R C
N

O CH3 H C H
C S C

R NH2-OH
CH3

C
N

H CH COOH O

H C

H
C

S C

CH3

CH3

C O

HN

CH COOH

HON

n reacia cu alcoolii formeaz esteri:

11

O R C
N S C

O CH3 R C
N S C CH3

CH3

H C

H
C

R1-OH
CH3

H C
N

H C

H
C

CH COOH O

HN

CH COOH

OR1

n prezen de alchilamine penicilinele formeaz alchilamide:

O R C
N S C

O CH3 R C
N S C CH3

CH3

H C

H
C

R1-NH2
CH3

H C
N

H C

H
C

CH COOH O

HN

CH COOH

R1HN

[1]

Proprieti biologice n studiul aciunii biologice a antibioticelor se urmrete stabilirea relaiei dintre structura chimic a medicamentului i aciunea sa farmacologic pe de o parte, iar pe de alt parte se caut determinarea naturii i structurii chimice a receptorilor i modul de interaciune

12

ntre receptor i medicament.Proprietile biologice a penicilinei sunt date de structura chimic, proprietile fizice i chimice, conformaia spaial, natura interaciunilor cu receptorul, viteza de metabolizare. Penicilinele au ca mecanism de aciune, impiedicarea formrii peretelui celular, prin legarea transversal a lanurilor aparinnd unui polimer peptidoglicanic,format dintr-un lan de uniti N-acetilglucozamin-acid Nacetilmuramic, cu lanuri depentapeptidentaglicin, ataate perpendicular. Legtura dintre glicina terminal a pentaglicinei i Dalanin o realizeaz transpeptidaza membranar. Penicilinele se cupleaz cu transpeptidaza, o blocheaz, mpiedicnd astfel formarea legturilor transversale , care asigur existena peretelui bacterian. Celulele microbiene, lipsite de perete, sunt expuse tensiunilor osmotice i mor. Bacteriile care nu au perete celular nu sunt sensibile la aciunea penicilinelor.[9] Penicilinele pot aciona asupra funciei enzimatice a proteinelor, ducnd la autoliza unora dintre bacterii, sau la inhibarea creterii. Administrarea penicilinei se face intramuscular, intravenos sau intrarahidian, la iintervalede 6 ore. Eliminarea se produce pe cale renal, n form nemodificat Domenii de utilizare Penicilina V are urmtoarele domenii de utilizare: - n terapeutic - obinerea acidului 6- aminopenicilanic - obinerea clorurii acide sau a esterului sare; - condensarea acidului 6-AP cu clorura acid sau anhidrida mixt i separarea penicilinei obinute 2.2 Variante tehnologice Penicilina V se poate obine prin urmatoarele variante tehnologice de fabricaie: biosintez semisintez

Factorul principal care intervine n obinerea tehnologic a unui antibiotic l reprezint calitatea suei.Tulpina productoare, precum i compoziia mediului de cultur pe care se dezvolt sunt hotrtoare pentu obinerea unui tip de antibiotic.n general

13

microorganismele productoare de antibiotice se pstrez sub form de culturi pure, n general mediu de gelatin sau agar-agar, la temperaturi sczute n condiii deosebite de sterilitate i securitate. Procesul biologic de dezvoltare a microorganismului productor de peniciline impune o anumit ordine a etapelor de fabricaie industrial. Astfel, iniial, microorganismul se dezvoltla nivel de eprubet din cultura pur, iar dup atingerea unui anumit stadiu de dezvoltare morfologic se trece la un nivel de ordinul litrilor (preinocul), de ordinul sutelor de litri(inoculul) i apoi de ordinal miilor de litri (intermediar).Toate fazele premergtoare etapei finale au scop obinerea de biomas capabil de a produce antibiotic.n obinerea biotehnologic a penicilinelor se disting urmtoarele faze: prepararea i sterilizarea mediului nutritiv; fermentaia; separarea produselor de fermentaie cu obinere de penicilin brut; purificarea, concentrarea i cristalizarea soluiei native n vederea obinerii penicilinei

pure [6] 2.3.Alegerea variantei optime Varianta optim aleas este procedeul discontinuu de fermentaie n profunzime. Fermentaia n profunzime se utilizeaz la majoritatea proceselor de cretere a microorganismelor.Fermentaia care procesul se reia. Avantajele procedeului discontinuu de fermentaie sunt urmtoarele: costul de investiie redus flexibilitate ridicat conversia ridicat a substratului pericol redus de infectare al culturii volumul de reactor relativ mare se obin culturi omogene se obin randamente ridicate puritatea produsului ca i activitatea biologic sunt ridicate discontinu se caracterizeaz prin faptul c microorganismele parcurg ntr- un singur bioreactor toate etapele de dezvoltare, dup

14

2.4. Descrierea procesului tehnologic adoptat 2.41.Elaborarea schemei tehnologice Obinerea penicilinei V s-a efectuat dup urmtoarea schem bloc:

15

Hidrati de carbon Extract de porumb Saruri minerale Pregatirea mediului de cultura Abur Penicillium crysogenum Fermentatie Acid fenoxiacetic Filtrare Acetat de butil Sol.NaCO3 HCl Butanol Extractie Reextractie Distilare azeotropa Filtrare/Spalare Uscare Penicilina V Masa moleculara Fara apoasa Aer steril Sterilizare aer Sterilizare m.c. Condens Aer nesteril

Tehnologia de obinere a penicilinei V cuprinde urmtoarele faze: 1) Pregtirea mediului de cultur i sterilizarea sa 2) Fermentaia 3) Filtrarea soluiei native 4) Separarea i purificarea Mediul de cultur reprezint substratul nutritive care conine toate substanele nutritive necesare pentru creterea i multiplicarea microorganismelor n condiii artificiale.

16

Pregtirea mediilor de cultur const n dizolvarea n ap a componenilor acestuia conform reetei pentru fiecare faz a procesului de fermentaie.n mediul de cultur trebuie s se gseasc hidrai de carbon, sruri minerale,surse de azot organic sau anorganic, precursori i ap.Deoarece sterilizarea mediului de cultut se face cu abur direct, cantitatea de ap ce se adaug la prepararea mediului este mai mic cu o cantitate egal cu cea a aburului care condenseaz n timpul sterilizrii. Pregtirea mediilor de cultur se face n aparate destinate acestui scop, prevzute cu agitatoare, conducte pentru abur, serpentine de ncalzire i de rcire.Conform reetei n aparate se adaug ap ce se nclzete la 60-70 C, se adaug extrasul de porumb i se fierbe 30-60 minute.Dup aceasta este necesar rcirea soluiei la 50-60 C i se adaug restul componentelor mediului respectnd urmtoarea ordine:CaCO3, NH4NO3, NaSO4, MgSO4, MnSO4, KH2PO4, ZnSO4, lactoz, glucoz. Mediul de cultur pentru penicilina V conine urmtoarele surse de carbon:lactoz i glucoz. glucoza (dextroz) reprezint o excelent surs de carbon i energie, utilizat pent ru producerea de antibiotic. Lactoza, dizaharid reductor (4--D-galactozido-D-glucoza) se folosete n stare p ur doar n procesul de biosintez al antibioticelor pentru obinerea penicilinelor. Surse de azot Azotul necesar mediului de cultur este asigurat de sursele organice i anorganice de azot Microorganismele sunt capabile, n mod obinuit, s biosintetizeze toate tipurile de molec ule de azot ( aminoacizi, proteine),plecnd de la ionul amoniu n funcie de energia existe nt i timp.Viteza de cretere a microorganismelor atinge valori ridicate numai dac medi ul conine surse de azot.Necesarul de azot n culturile folosite la obinerea penicilinei V e ste aigurat de extractul de porumb i de faina de soia.Acestea sunt surse naturale bogate n proteine i aminoacizi, coninnd acizi nucleici, vitamine, lipide, zaharuri,compui cu s ulf i fosfor. Componenii mediului de cultur Tabel 1

17

Componentii mediului Inoculator de cultur Extract de porumb Fin de soia Sruri minerale 2 -

Intermediar 2-3 -

Regim 2,5-2,8 0,3

Surse ce conin sruri minerale in biosintez sunt folosite ca: - elemente constitutive ale produselor: Na2SO4, ZnSO4, MnSO4 - elemente costitutive ale biomasei: CaCO3, KH2PO4, NH4NO3 - modificatori ai presiunii osmotice i a permeabilitii membranelor celulare CaCO3 - ageni de complexare i precipitare:Na2SO4, MgSO4 Precursori Precursorii sunt compui organic sau anorganici care atunci cand sunt adugai n mediul de cultur intervin ca molecule intermediare n biosintez sau orienteaz biosinteza ctre un anumit process. Acidul fenoxiacetic dirijeaz procesul de biosintez a penicilinelor spre obinerea de penicilin V, folosind ca microorganism productor Penicillium chrysogenum.Precursorii sunt considerai indispensabili mediului de cultur, iar pentru a evita efectele inhibitorii acetia se vor aduga treptat,meninndu-se o concentraie constant. Sterilizarea este procesul prin care are loc distrugerea sau ndeprtarea microorganismelor patogene sau apatogene din substane preparate, spaii nchise,obiecte. Procesele de biosintez impun, n marea majoritate, absena total a sporilor de microorganisme strine, provenite din aer, ap sau materii prime, care s-ar putea dezvolta n faza de fermentaie, infectnd cultura unic a microorganismului util.[1] n industria de biosintez, unde se obin culturi microbiene pure, procesul de sterilizare poate fi realizat prin: a)Metode termice - sterilizarea cu aer cald la 140-200C - sterilizarea cu vapori de ap sub presiune la 120-140C - sterilizarea pri nclziri repetate la 70-100C b)Metode fizice - filtrri prin umpluturi fibroase

18

- filtrri pri materiale poroase - filtrare prin membrane - utilizarea radiaiilor UV,IR, raze X c)Metode chimice - utilizarea agenilor chimici oxid de etilen,formaldehid,fenol, ozon Sterilizarea mediilor de cultur se poate realiza prin metode mecanice( filtrri,centrifugri),pe cale termic, cu ageni chimici sau cu unde electromagnetice.S-a ales ca posibilitate de sterilizare a mediului de cultur sterilizarea cu abur. Sterilizarea cu abur este un procedeu foarte simplu i permite obinerea unui grad nalt de sterilitate.Procedeul de sterilizare termic a mediului de cultur poate fi realizat prin procedeul continuu sau discontinuu,utiliznd drept surs de nclzire aburul sau energia electric.Deoarece sterilizarea direct n fermentator prin procedeul discontinuu la 120C necesit un timp mare i degradarea mediului este mai avansat,se alege procedeul de sterilizare a mediului de cultur n instalaia continu.Acest procedeu prezint urmatoarele avantaje: -conservarea mai bun a proprietilor nutritive ale mediului -controlul superior al calitii -utilizarea raional a consmului de abur -eficacitatea i productivitatea sporit -control automat Realizarea n condiii optime a procesului impune un control al spumrii mediului i a vscozitii acestuia.Pentru sterilizarea continu a mediilor de cultur se folosesc instalaii industriale care lucreaz la 120-125C (fig.2).

19

1-coloana de distilare 2-menintor 3-rcitor Fig.nr 2. Instalaia continu de sterilizare la 120 125C Instalaia de sterilizare continu la 120-125C este alctuit din coloana de sterilizare (1),menintorul (2) i rcitorul (3).Coloana de sterilizare este conceput din dou evi concentrice prin eava interioar fiind introdus aburul,mediul de cultur circulnd prin spaiul dintre cele dou evi.nclzirea mediului se face prin barbotarea aburului de 5 ata prin intermediul fantelor practicate pe eava interioar, acesta fiind dirijat tangenial i uniform cu ajutorul unui snec montat pe exteriorul evii.Mediul staioneaz n coloan 46 secunde, dup care ptrunde n menintor, unde rmne 15-20 minute pentru perfectarea procesului de sterilizare.n final mediul este rcit printr-un schimbtor de cldur tip eav n eav,la 35-40C.

20

Fig.nr 3 Diagrama timp-temperatur pentru sterilizarea continu la 100-125sC.

Din diagrama timp-temperatur, prezentat n figura nr.3, se observ c, n aceasta instalaie, contribuia fazei de nclzire i rcire la performana procesului de sterilizare este de 5 6%, astfel ncat se poate considera c sterilizarea se realizeaz aproape n totalitate n faza de meninere.[3] Sterilizarea aerului Procesele industriale de fermentaie sunt, aproape n totalitae , procesele aerobe i n marea lor majoritate, aseptitce.Aceste procese necesit n general un debit de are barbotat de 1-2 maer/m mediu de cultur pe minut.Aerul conine cel mai mare numr i cea mai mare varietate de microorganisme dintre toate mediile.Aceste microorganisme sunt n general sub form de spori de aceea sunt rezistente la factorii de mediu din aceste motive sterilizarea aerului nu se poate face prin procedee similare cu procedeele de sterilizare a mediilor.

Figura 5.Schema de purificare i sterilizare a aerului.

21

1-filtru 2-compresor 3-rcitor 4-separator de picturi 5-filtru general 6-filtru individual Schema de principiu a liniei de purificare i sterilizare a aerului prin filtarare pe material fibros este redat n figura 5.Conform schemei aerului nesteril se filtreaz pe filtru(1) de impuriti mecanice, apoi aerul filtrate introduce n compresorul(2) unde este comprimat la 3 atmosfere,prin comprimarea aerului temperatura sa crete pn la 180200C.Aerul fierbinte se rceste n rcitorul(3) cu ajutorul apei rcite care circul printr-o serpentin interioar iar umiditatea din aer se separ n separatorul de picturi(4).Acest separator este o incint cu rafturi pe care se depun picturile de ap din aer.Aerul steril prin filtrare trece prin filtrul general (5) apoi prin cel individual (6) dup care ptrunde in fermentator. n general pentru sterilizarea aerului se mbin procedeele termice cu filtrarea.Aceasta se realizeaz cu ajutorul filtrelor cu material fibros, cu membran semipermeabil i cu filtre tip lumnare.Unul din filtrele cu material fibros folosit este cu fibr de sticl.

22

Figura 4.Filtru cu fibre de sticl pentru sterilizarea aerului

Filtrul cu fibre de sticl, prezentat in figura 4., este alctuit dintr-un strat de material filtrant fixat ntre dou site, susinute de dou plci perforate (diametrul perforaiilor este de 0,7 0,8 cm). Filtrul este prevzut cu manta de nclzire, care permite uscarea materilului filtrant sterilizat cu abur direct. Acest tip de filtru, indicat pentru industria de biosintez, ofera posibilitatea sterilizarii unor debite ridicate de aer, realizarea unui grad avansat de purificare i durata ndelungata de funcionare. Dezavantajele filtrului cu fibre sunt ;operaii complicate la schimbarea fibrelor de sticl (durata 2,5 3 ore), manipularea neplacut a fibrelor de sticl i anularea efectului de sterilizare dup umezirea materialului filtrant fibros.

23

Figura perpendiculare a

6.Modelul

curgerii

aerului pe fibra

Sterilizarea pe material fibros poate fi descris printr-un model de curgere prin ocolire, fenomen care impune absena total a umiditii din filtru.Din aceste motive rcirea aerului din rcitorul (3) se face pn la absena condensului iar dup separarea acestuia, aerul saturat se prenclzete cu aer fierbinte pn cnd temperatura de ieire din filtrul individual (6 ) depete cu cel puin 12-15C temperatura punctului de rou.Stabilirea parametrilor de funcionare ai instalaiei de sterilizare se face numai n funcie de parametrii temodinamici ai aerului. Reinerea microorganismelor pe filtre de sticl, n procesul de filtrare a aerului, se realizeaz ca efect al urmtoarelor fenomene: impact inerial,fore de atracie elecrostatic i de difuzie.[3] Fermentaia Fermentaia este faza fundamental a procesului de biosintez i se realizeaz n 3 etape:inoculator, intermediar, regim.Aceste trei trepte corespund anumitor stadii de dezvoltare a microorganismelor. n inoculator se petrece procesul de aclimatizare a microorganismelor la noile condiii de dzvoltare.n intermediar ncepe creterea penicilinei. exponenial a numrului de microorganisme, iar n regim se realizeaz procesul de cretere a acestora i elaborarea

24

Procesul de fermentaie a penicilinelor cuprinde trei faze metabolice distincte:faza de cretere, faza de producere i faza analitic. Faza de cretere se caracterizeaz prin acumulare de mas micelian i utilizarea intensiv a componentelor mediului de cultur.Glucoza este asimilat foarte rapid att pentru formarea materialului celular, ct i pentru furnizarea energiei necesare.Cerinele de oxigen sunt maxime n aceast perioad,iar activitatea respiratorie caracterizat prin degajarea de CO2,este ridicat. Faza de producere se caracterizeaz prin ncetinirea creterii miceliului, fie datorit epuizrii constituienilor uor asimilabili,fie altor condiii existente, scderea consumului de oxigen,meninerea pH-ului la 6,8- 7,5 i acumularea penicilinei.n aceast faz lactoza este folosit lent de miceliu i furnizeaz energia necesar procesului de biosintez. Faza analitic corespunde stadiului n care microorganismul se epuizeaz ca urmare a activitii metabolice prelungite iar sursele de carbon din mediu sunt epuizate.Coninutul n azot al miceliului crete considerabil i ncepe procesul de autoliz al acestuia cu eliberare de amoniac i crete pH-ul peste 8.Producerea penicilinelor nceteaz i apare un proces de hidroliz alcalin a penicilinelor formate.n practica industrial nu este permis prelungirea fermentaiei pn la apariia autolizei. Pentru faza de cretere a masei celulare pH-ul optim este de 4,5- 5, iar pentru faza de producere a penicilinelor este de 7- 7,5.Pentru procesele discontinui pH-ul este cuprins ntre 6,4 7. Regimul optic de temperatur este de 25 1C, iar necesarul de aer,deoarece procesul este aerob, este de 1 1,5 l aer/ l mediu min,la o turaie a agitatorului elicoidal de 110 140 rot / min. Dirijarea procesului de biosintez ctre penicilina V se realizeaz cu ajutorul unui precursor care este acidul fenoxiacetic. Procesul de fermentaie se realizeaz n fermentatoare cilindrice verticale costruite din oel inoxidabil, echipate cu agitator cu elice sau turbin, serpentin pentru rcire,conduct pentru aerare, dispozitive sparge-val, filtru individual de aer i rezervor cu antispumant. [10]

25

Parametrii procesului de fermentaie a penicilinei V

Tabel 2 Etapa fermentaie Inoculator Intermediar Regim 261 261 261 de tC Agitare rot/min 270 170 120 Debit de aer l/l mediu min 1 1 1,2 0,6- 1 Presiunea ata 1,2 1,3 1,2 - 1,3 1,2 1,3 Durata procesului h 30 - 40 20 40 90 - 120

Controlul procesului de fermentaie se realizeaz prin determinerea sterilitii mediului, a gradului de dezvoltare morfologic a ciupercii,a pH-ului mediului, a activitii lichidului de ccultur si a consumului de zahr. Concentraia penicilinelor in soluia nativ la terminarea procesului de fermentaie este cuprins ntre 1 i 1,8 %.Valoarea exact depinde de potena suei folosite i de condiiile de realizare a procesului de fermentaie. Filtrarea soluiilor native Alegerea utilajului pentru filtrare se face n funcie de umtoarele aspecte: caracterul suspensiei productivitate materialul de construcie al suparafeei filtrante gradul de recuperare Pentru filtrarea lichidelor ce conin mas celular cu caracter fibros se recomand filtrele rotative cu vid. Filtrul rotativ cu vid este construit dintr-un tambur rotativ compus din doi cilindri orizontali coaxiali. Cilindrul exterior este perforat i acoperit cu material filtrant iar 26

spaiul dintre cei doi cilindri este mprit n 10-12 celule etane, fiecare celul funcionnd succesiv, independent ca filtru nuce. Legtura dintre aceste celule i conductele de vid, cu aer comprimat se realizeaz prin intermediul capului de distribuie,iar ndeprtarea miceliului de pe tambur se face cu ajutorul unui cuit rzuitor. Suprafaa tamburului este mprit n mai multe zone n care se realizeaz operaiile de filtrare, uscare i ndeprtare a stratului de miceliu depus. n timpul unei rotaii fiecare celul trece prin toate aceste zone. Tamburul filtrului rotativ cu vid are un grad diferit de scufundare n suspensia ce se filtreaz. Stabilirea adncimii de scufundare se face funcie de caracterul stratului filtrant i a necesitilor de splare i uscare. n producia de antibiotice se utilizeaz filtre cu adncime de scufundare a tamburului de 50%.

Figura 7. Schema filtrului rotativ cu vid 1- tambur;2- capul distribuitorului;3- cuit rzuitor;4- buncar;5- cuva;6- conduct de apa pentru splare;7- celule filtrante;8- strat depus;I- zona filtrrii;II si IV- zonele uscrii;IIIzona de splare;V- zona de ndeprtare a sratului depus. Dac produsul se gseste numai n soluia nativ, splarea masei celulare dup filtrare este uoar. Totui, aici pot avea loc pierderi mari, pentru prevenirea lor trebuie ales cu grij locul de amplasare a jeturilor cu apa i debitul apei de splare, pentru a nu dilua prea mult filtratul. Filtrele rotative cu vid pot fi construite din oel carbon, oel inoxidabil, oel cptuit cu cauciuc,sau epoxid, aliaje. [10]

27

Separarea i purificarea penicilinei V Datorit diluiilor mari, separarea penicilinei V se poate face, rentabil, numai prin extracii repetate cu solveni.Fluxul general al separrii penicilinelor cuprinde urmtoarele etape: -filtararea lichidului de fermentaie n scopul separrii biomasei -extracia penicilinei din filtrul cu solvent organic n dou sau mai multe stadii, n funcie de concentraia sa n soluie -reextracia penicilinelor din solventul organic cu o soluie de carbonat de sodiu -distilare azeotop Extracia i reextracia Extracia reprezint operaia de separare a componenilor unui amestec lichid sau solid pe baza diferenei de solubilitate a acestora ntr-unul sau mai muli solveni.Dac amestecul este supus separrii este lichid operaia este extracie lichid-lichid. Extracia lichid-lichid cuprinde 4 etape: -contactarea soluiei iniiale cu solventul -solubilizarea celor dou faze rezultate -recuperarea solventului att din extract,ct i din rafinat Viteza extraciei depinde de 3 factori: aria interfacial de contact dintre cele 2 faze lichide, fora motrice a transferului de mas al solutului ntre soluia iniial i solvent, coeficienii de transfer de mas ai solutului n fiecare faz. Fluxul general al separrii penicilinei V este alctuit din patru etape: - filtrarea lichidului de fermentaie cu ajutorul filtrelor rotative cu vid,n scopul separrii biomasei de lichid care conine penicilina V - extracia penicilinei V din filtrat cu un solvent organic n dou sau mai multe etape n funcie de concentraia sa n soluie - reextracia penicilinei din solventul organic cu o soluie de carbonat de sodiu - distilarea azeotrop Extracia penicilinei V folosete ca mediu supus extaciei fizice, lichidul de fermentaie filtrat, iar ca solvent organic acetatul de butil la pH 2.

28

Figura 8. Schema de operaii la separarea prin extracie fizic a penicilinelor Pentru extracia penicilinei V se folosete extractorul Podbielniak. Acesta este construit dintr-o foaie metalic nfurat n spiral n jurul unui arbore care se rotete cu 2000 5000 rot/min.Rotorul are forma unei spirale cu un numr variabil de spire a cror seciune formeaz canale paralele.

. 1 ansamblu rotr ax 2-carcas 3- lagre 4- curea de transmisie 5-foaie metalic spiralat perforat 6-conducte de distribuie a fazelor

Figura 8 Extractorul Podbielniak

7- conducte pentru lichide pentru splare i curare 8- tuuri pentru alimentare i evacuare

29

Distilarea azeotrop Pentru separarea srurilor penicilinei V din soluie apoas rezultat dup reextracia n carbonat de sodiu, se folosete pocedeul antrenrii azeotrope a apei cu acid clorhidric, la vid astfel nct dup ndeprtarea apei are loc cristalizarea srii apoi se filtreaz i se spal cu butanol. Uscarea Este operaia de ndeprtare a umiditii din gaze lichide sau solide.Apa din cauza reactivitii sale poate produce o serie de reacii secundare nedorite de hidroliz sau hidratare. Usctoarele se pot clasifica n funcie de mai multe criterii: 1) dup regimul de funcionare continue discontinue 2) dup presiunea de lucru la presiune atmosferic la vid 3) dup procedeul de uscare cu agent termic gazos cu nclzirea materialului 4)dup sensul de circulaie a solidului i a gazului - echicurent - contracurent - curent mixt 5) din punct de vedere constructiv - usctoare cu strat fix - cu strat mobil - cu strat fluidizat - cu pulverizare - de contact

30

Penicilina V se filtreaz i se usuc n usctoare dulap la 35 - 45C sub vid, timp de 16-20 ore.[10] 2.4.2 Materii prime intermediare si auxuliare Microorganismul productor este Penicillium Crysogenium i face parte din categoria fungilor. Fungii sunt organisme filamentoase saprofite (care cresc pe suprafaa substanelor intrate n putrefacie i nu produc boli). Ei se produc pe cale asexuat (fr participarea unor gamei de sexe diferite). Sunt organisme cu o mare capacitate de adaptare la condiiile variate, nefavorabile ale mediului n care i desfoar activitatea. Ele cresc n condiii extrem de acide, presiune osmotic, uscciune. Are structura celulara de tip eucariot: Aparatul lor vegetal (formele de crestere i dezvoltare) este diferit de la o specie la alta. El poate fi: a).- un gimnoplast sau un plasmodiu b).- dermatoplast c).- sifonoplast d).- talc tipic a).- Plasmodiu este forma de existenta a fungilor cu organizarea cea mai inferioara. El este alctuit dintr-o mas citoplasmatic multinucleat lipsit de peretele celular rigid. Este caracteristic fungilor primitivi. b).- Dermatoplastul este aparatul vegetativ ntalnit la cele mai multe levuri. El este format dintr-o singur celul cu perete celular rezistent. Citoplasma i nucleu tipic eucariotelor. c).- Sifonoplastul este aparatul vegetativ ntalnit la multe ciuperci filamentoase. El este alctuit din numeroase filamente subiri cunoscute sub numele hife a cror mpletire d un miceliu. Hifele miceliene au form tubular, sunt rigide, prezetnd diametre relativ egale pe toat lungimea lor. La exterior sunt delimitate de peretele hifal, rigid iar n interiorul hifei se afl citoplasma n care sunt nglobai nucle. La aceste ciuperci numrul nucleelor este variabil. Hifa are lungimi diferite i nu prezint septuri intracitoplasmatice . d).- Talul este aparatul vegetativ ntalnit la ciupercile superioare. El este format din numeroase hife care se mpletesc i formeaz un miceliu cunoscut sub numele de tal. Hifele talului pot fi septate complet sau incomplet prezentnd mpletituri mai mult sau

31

mai puin compacte. La ciupercile din clasa Dasidiomycetes hifele se mpletesc compact formnd un tal maxim. La toate ciupercile la care aparatul vegetativ este un miceliu, se constat n mod obligatoriu 2 pri: 1. o poriune format din hife fine bogat ramificate care ptrund complet n substrat, ele formnd miceliu de substrat. Aceste hife sunt cunoscute sub numele de rizoizi i formeaz sistemul rezoidal al miceliului. 2. o poriune aeriana alctuit din hife lungi, mai puin ramificate i mai rezistente. Ele formeaz miceliul aerian. Structura intern dei este tipic eucariotelor, exist totui i unele deosebiri de la o form la alta de mucegaiuri. Deosebirile ce pot apre se refer la prezena sau absena septului sau peretelui hifal. n general n structura unor hife se pot distinge urmtoarele formaiuni structurale tipice celor mai multe eucariote: peretele celular (hifal), membrana plasmatic, citoplasmatic i constituienii citoplasmatici i nucleu. - Perete celular Hifa este delimitat la exterior de un perete rigid n structura creia intr chitina, celuloza, polizaharide i unii acizi grai. Peretele hifal acoper membrana plasmatic i tot el este cel care particip la formarea septului hifal. - Membrana plasmatic Are o structur tristratificat i se presupune ca ar avea un rol important n formarea aparatului Golgi. Are totodat importante roluri n transportul unor substane din mediu n celula i din celula n mediu. - Citoplasma Se prezint sub form de mas granulat, n care suspectate vacuole ,picturi de grsimi, numeroase granule de incluziuni i particule. n citoplasma se gsesc de asemenea, reticulul endoplasmatic rugos bine dezvoltat, aparatul Golgi, mitocondrii, ribozomi liberi sau fixai de reticolul endoplasmaic i lizozomi, formaiuni structurale cu rol n liza unor substane.[9] Mediul de cultur are n componen urmtorii constitueni: 32

1.Lactoza Generaliti: Formul brut C12H22O11 Mas molecular 360,30 g/mol Prezint o uoar solubilitate n ap i este insolubil n alcool etilic, eter etilic i chloroform. .Zerul i materialele auxiliare folosite la fabricarea lactozei trebuie s corespund documentelor tehnice normative ale produselor respective i s respecte dispoziiile s respecte dispoziiile legale sanitare i sanitar-veterinare n vigoare. Tabel 2.2 Denumirea Condiii de admisibilitate Tipul caracteristicii Lactoz rafinat Lactoz telenic Calitate 1 Aspect pulbere critalin Culoare alb alb-glbuie Gust miros slab dulceag fr miros strin Aspectul soluiei apoase incolor limpede galben deschis Puterea rotaiei specific +52- +53 +51- +52 Pierderi prin uscare -la 130C % max 55 0,4 2 -la 100C % max Aciditatea exprimat

Calitate 2 galben galben +47- +51

a acidului lactic % max 0,05 0,07 1 Cloruri % max 0,004 Sulfai %max 0,002 Calciu lips n condiiile de mediu Metale grele Pb lips n condiiile de mediu Arsen % max 0,01 Fier lips n condiiile de mediu 2.Glucoza SR 13359-7 Generaliti

- -

Obiect i domeniu de aplicare: prezentul standar d se refera la glucoza obtinut din cartofi si porumb.

33

Destinat pentru consum i scopuri industrial: Tipuri de glucoz: -glucoz lichid -glucoz solid - aromatizat- nearomatizat Glucoza aromatizat poate fi fabricat cu diferite adaosuri: esene, aromatizanii i colorani alimentari avizai din punct de vedere sanitar, miez de nuc i miez de floareasoarelui conform acordului ntre productor i beneficiar. Condiii tehnice de calitate: Pentru glucoza de cartofi i de porumb, materiile prime i auxiliare trebuie s corespund standardelor i normelor sanitare n vigoare. Proprieti organoleptice Tabel 2.4 Condiii de admisibilitate Tip de glucoz Lichid Solid Aromatizat Nearomatizat Metod verificare de

Caracteristici

Aspect Culoare

Lichid vscos Incolor pn la galben Lips Dulce, specific

Miros Gust Corpuri strine

Mas solid,sub Mas solid form de tabele Crem pn la Crem pna la galben galben sau specific colorantului adugat SR 13359-1 Caracteristic Lips aromei adugate Dulceag uor amrui Lips

Proprieti fizico-chimice

Tabel 2.5 Condiii de admisibilitate Tip de glucoz Lichid Solid Aromatizat Nearomatizat

Caracteristici

Metoda de verificare

34

Umiditate,% max RBU,max ml iod, soluie 0,1n/100ml,max Densitate 20/20C,g/ml,min Indicele de refracie la 20C Aciditate,grade,max Acizi minerali liberi % pH la o soluie 20g/100 ml Coninut de n produs nealbit SO2,ml/100g,max n produs albit Coninut de cenu conductometric,raportat la s.u., %,max Coninutul de dextroz raportat la s.u.(DE),% Culoare

20 200 1,5 1,42 1,49 2,5 Lips 4,5...5,5 4 40 0,6 32...49

21 2,8

SR13359-2 SR13359-3

SR13359-4 SR13359-5 SR13359-6 SR13359-7 SR110-12 SR EN1185 SR110-2 SR13359-8 sau SR133599 sau SR ISO5377

15 min.75

3. Extract de porumb STAS-1445/88 Extractul de porumb are urmatoarele caracteristici: Aspect: lichid cremos de culoare galben nchis. Miros: caracteristic unei fermenttii lactice. Sedimentare: dup 24 de ore ntr-un cilindru de 100 ml de 100%. Aspect microscopic: n frotiu colorat prezint o masa bacterian tipic bacteriilor lactice, n proporie de peste 90. Substana uscat: minim 50%. pH=3,5-4. Coninutul n acid lactic: minim 20g la 100g substan uscat Zahr total: maxim 2,5%

Constituienti g/100g extract de porumb Substanta uscata Cenusa

Tabel 2.6 Domenii de valori 46-49,6 8,04-10,43

35

N total Zahar total (exprimat x g glucoza) Acid lactic Aciditate (ml sol.NaOH 0,1N/100g extract de porumb) Fe P Ca Zn K SO2 Sedimente solide

3,33-3,67 4,00-4,70 0,74-4,39 11,6-19,3 0,009-0,02 1,5-1,9 0,02-0,07 0,05-0,012 2,0-2,5 0,22 38,4-52,9

5.Fin de soia Generaliti: Faina de soia este o surs de azot naturala, bogat n proteine, aminoacizi coninnd i acizi nucleici, vitamine, oligoelemente, lipide, zaharuri, compui cu sulf i fosfor dup cum urmeaz: Tabel 2.7 Proteine Materii grase Metionina Cisteina Lizina Calciu Sodiu Potasiu Magneziu Sulf Fosfor 34 % 3,5 % 0,54 % 1,1 % 2,4 % 0,2 % 0,287 % 1,7 % 0,21 % 0,32 % 0,6 %

6.Butanolul STAS-903-62 Identificare: - formul chimica C4H10O - mas moleculara74,12 Proprieti fizice: p.f.= 98oC indice de refracie 1,3975

36

aciditate exprimat n CH3COOH, % max= 0,02 aspect: lichid limpede, incolor miros: caracteristic 7.Acetatul de butil

Identificare : Formula chimic CH3CO(CH2)3CH3 Masa molecular 116,16 Proprieti fizice : - aspect : lichid limpede, fr substane n suspensie, inflamabil. Se fabric n trei tipuri funcie de coninutul de eter. tipul 98 pentru industria antibioticelor (interval distilare 123-127oC) tipul 92 tipul 88

- miros caracteristic - d= 0,878g/cm3 8.CaCO 3 Carbonatul de calciu STAS 1083-76 Prezentul standard se refer microcristalin. Formula chimic:CaCO3 Masa moleculara relativ: 100,09 g/mol Carbonatul de calciu precipitat, tehnic se livreaz n patru tipuri: - tipul I destinat, n special, la fabricarea pastei de dinti; - tipul A destinat, n special, industriei de produse cosmetice, industriei de antibiotice si industriei electrotehnice; - tipul B destinat, n special, industriei de material plastic i industriei cauciucului; - tipul C pentru alte utilizri Condiii tehnice de calitate a carbonatului de calciu la carbonatul de calciu precipitat,tehinic, obinut prin tratarea soluiei de var cu bioxid de carbon.Produsul se prepar sub form de pulbere

Tabel 2.8

37

Tipul Grad de alb, % min Finee: -rest pe sita cu estur de srm 0063 STAS 10077-67,%

1*) 97 0,1

A 92 1

B 92 1

C -

-rest pe sit cu estur de srm 009 STAS0,05 10077-67 % max Densitatea n grmad n stare0,45

0,5 0,45 91 0,4 0,2 0,5 99 0,008

0,5 0,45 90 0,6 0,2 0,5 98,5 0,10 0,001 0,003 lips

1 0,47 90 0,6 0,2 0,5 97 0,15 -

tasat,g/cm,max Cifr de sedimentare,cm,min 95 Umiditate,%, max 0,4 Substane insolubile in acid clorhidric,%,0,1 max Oxizi de fier i aluminiu, %,max 0,5 Carbonat de calciu, %,min 99 Alcalinitate, %, max 0,008 Limite de pH la un adaos de 1... 30cm acid5,5...6,0 clorhidric n -pH-ul suspensiei 2% n ap,max Cuprul, %,max Mangan, %,max Arsen 9.Acidul clorhidric HCl STAS 339-80 Generaliti Formul chimic HCl Mas molecular 36,46 Tipuri i sorturi 9 0,001 0,003 lips

10 0,001 0,003 lips

Dup modul de fabricare, acidul clorhidric se clasific n dou tipuri: -acid clorhidric de sintez -acidul clorhidric rezultat din cloruri organice, care dup provenien se fabric i se livreaz n trei sorturi: A,B,C Caliti: Acidul clorhidric de sintez se livreaz n 3 calitai l,ll,lll Acidul clorhidric rezultat din clorurri organice se livreaz n urmtoarele condiii -sortul A,n trei caliti l,ll,lll 38

-sortul B in patru caliti l,ll,lll,lV Domeniul de aplicare Produsul se utilizeaz n principal n industria chimic. Condiii tehnice de calitate Tabel 2.9 Calitate Aspect Culoare Acid clorhidric,%,min Acid sulfuric,%,max Fier,%,max Dioxid de sulf,%,max Arsen Clor ll lll Lichid transparent Incolor pna laGalben-verzui pnGalben-verzui pn la galben-verzui la galben 32 31 0,04 0,2 0,005 0,008 0,05 0,07 Lips lips Lips lips galben portocaliu 28 0,5 0,05 0,1 L

10. Fosfat monopotasic STAS 10497-76 Generaliti Prezentul standard se refer la fosfatul monopotasic ethnic utilizat, n principiu mediul de cultur la fabricarea antibioticelor. Formula chimic KH2PO4 Masa molecular 136,09 g/mol Condiii tehnice de calitate Tabel 2.9 Aspect i culoare Umiditate ,%,max Fosfat monopotasic,%,min Cloruri ,%,max Fier,%,max Metale grele(Pb),%,max Substane insolubile n ap,%,max Observaii: Cristale albe 0.3 96 0,25 0,003 0.1 0,5

39

-caracteristicele din table,cu excepia umiditii, se refer la fosfatul monopotasic uscat la 105 2 -cu acordul beneficiarilor se poate livra 0,05% fier 11. Azotat de amoniu STAS 405-30 Generaliti Standardul cu nr. 450- 30 la ayotatul de amoniu tehnic,granulat obinut prin neutralizarea acidului azotic cu amoniac utilizat la fabricarea explozivilor i n alte scopuri industrial. .Formula chimic: NH4NO3 Masa molecular relativ: 80.04 g/molAzotatul de amoniu tehnic granulat, se livreaz n dou tipuri: -tip I folosit la fabricarea explozivilor -tip II folosit n alte scopuri industrial Condiii tehnice de calitate Tabel 2.10 Tip Aspect Culoare Granulaie ntre 13mm,%,min Granule sub 1 i peste 3 mm,% max Umiditate,%,max Aciditate liber,%,max Azotat de amoniu %,min Azotat de magneziu, %,min Azotat total,%,min Reziduu de calcinare, %,min Observaie Coninutul de azotat de amoniu,azotat de magneziu si azotat total este raportat la produsul uscat Precursor n obinerea Penicilinei V 40 L Granule neaglomerabile Alb 95 5 0,2 0,02 0,02 98.8 34,6 0,2 Ll Garanule neaglomerabile alb-roz 95 5 0,3 0,02 99,4 34,8 -

Acidul fenoxiaceti Formul chimic C6H5OCH2COOH Mas molecular 152,14 g/mol Proprieti fizice -pulbere de culoare cafeniu deschis sau solid alb -puin solubil n ap -reacioneaz exotem cu toate bazele att organice ct i anorganice -solubil n eter, metanol, acid acetic -punct de topire 98-101C -stabil n condiii normale Acidul fenoxiacetic este utilizat ca precursor n fermentaia antibioticelor n special pentru penicilina V i este un schelet principal de regulatori de cretere a plantelor i erbicidelor.Acesta este utilizat ca un intermediar pentru vopsele de fabricaie, produse farmaceutice, pesticide,fungicide.Acesta este utilizat n arom. Agent antispumant Uleiu tehnic de floarea soarelui STAS 2710- 70 Standardul cu numrul 2710- 70 se refer la uleiul tehnic obinut din semine de floarea soarelui. Uleiul tehnic de floarea soarelui se livreaz n dou caliti: Calitatea 1, obinut prin presare sau extracie cu solveni i prelucrare ulterioar Calitatea 2, obinut prin presare sau extracie cu solveni Proprieti fizice i chimice Calitate Aspect la 60C 1 2 Limpede fr impuriti mecanice la 0,9140,927 1,47101,4760 20 0,1 1 Tabel 2.11 Metod de analiz STAS 145/1-67 STAS 145/3-67 STAS 145/4-67 STAS 145/2-67 STAS 145/11-67

Densitate relativ 20C Indice de refracie la 20C Culoare de iod,mg I/100cm max Inpuriti insolubile n eter etilic,% max

41

Umiditate i materii volatile,% max Indice de aciditate,mg KOH/g max Sunstane organice nesaponibile, % max Indice de iod, g I/100g min Cenu, % max Indice de saponificare,mg KOH/g Substane mucilaginoase lips

0,2 2 1,2

1 12 1,2 119135

STAS 145/10-67 cap 1 STAS 145/16-67 cap 1 STAS 145/15-67 STAS 145/16-67 cap 1

0,05 186198 165

135

STAS 145/13-67 STAS145/17-67 STAS 145/18-70 STAS 145/6-67 cap 1

Cloroform Formul chimic HCCl3 Mas molecular relativ 119,38 Tipuri ,caliti i domeniu de utilizare n urmtoarele caliti: tip A, stabilizat cu 0,6...1% alcool etilic absolut, utilizat n industria de medicamente: calitatea 1 i 2 tip B,nestabilizat,tehnic,utilizat ca solvent Condiii tehnice de calitate Cloroformul este greu solubil n ap,miscibil n orice proporie cu alcoolul etilic absolut,eter etilic,benzin i majoritatea uleiurilor.Este neinflamabil.

42

Proprieti fizice i chimice Tabel 2.12 Denumirea caracteristicii Calitate 1 Tipul A(stabilizat) Calitate 2 B(nestabilizat)

Aspect Miros Gust Densitate relativ Cloroform %,min Densitate -punct -punct iniial final de de fierbere,C,min

lichid limpede,incolor ,volatil caracteristic dulceag, arztor 1,473...1,480 98 97 59 62 97 57 63 96

1,473...1,490 57 63 94

fierbereC max -ntre punctul iniial i final de fierbere distil % vol.. min Reziduu n 0,002 0,002 0,015

evaporare,% max Clor liber Lips n condiiile determinrii de la pct. 4,6 Cloruri % max 0,0008 0,0008 Aciditate Lips n condiiile determinrii de la pct. 4,8 Substane organiceLips n condiiile determinrii de la15 mg I/100cm

43

strine Ap

pct.4.91 Lips n condiiile determinrii de lapct.4.10 [5]

2.4.3. Mecanismul reaciilor biochimice Mecanismul biosintezei penicilinelor nu este nc elucidat n totalitate, ns innd seama de faptul c n molecula lor se gsesc trei componente de baz: d- valin, l cistein i un acid substituient, precum i identificarea n miceliul de Penicillium crysogenum a unei tripeptide, se pot concepe etapele ce intervin n biositez.Prima etap const n formarea, din glucoz, a l-cisteinei i d- valinei,iar din acesta a -amino-adipil-cisteinil-valinei

44

conform.

Glucoza: Piruvat:

C6H12O6 CH3 CO COOR COOR COOR COOR Acetolacta: CH3 CO C OH CH COOR CH2 CH2 CH2 COOH COOH COOH alfa-hidroxi- (CH3)2 valerianat CH CH OH L-valina; (CH3)2 CH CH NH CH2 Ad NH CH SH COOH COOH COOR Dihidroxi- (CH3)2 izovalerianat C OH CH COOR OH CH3

Succinat: CH2 CH2 Glioxilat: O Glicina: NH2 Serina: HO l- cisteina: HS HOCO

CH(NH2) CH(NH2) COOH

CH3 (CH2)3 NH2

Ac. alfa-amino adipic (Ad)

45 CH2

SH CO NH

CH(CH3)2 COOH

Pentru elucidarea mecanismului celei de a doua etape, n care se formeaz sistemul biciclic al penicilinelor sunt propuse dou ipoteze.n urmtoarea schem este prezentat ipoteza conform careia se pleac de la o tripeptid:
H2C Ad NH SH NH CH Ad CO NH HC CO CH(CH3)2 CH2 COOH S CH3 (CH3)2 CH CO

& & HC N 2
H

COOH

SH CH Ad CO NH HC C O SH CH Ad CO NH HC C O S HC Ad CO NH HC C CH3 CH3 O (CH3)2 N C COOH N CH3 (CH3)2 CH COOH

N CH COOH C O

de l m aci hi c s b
H5 C6

u gr

pe

P ie r d ere

a c il
S HC C(CH3)2 N CO CH COOH

S HC N CO Penicilina V

C(CH3)2 CH COOH

H2N HC

O CH2 CO NH HC

Acid 6 aminopenicilanic

Dup aceast schem sinteza nucleului de baz a penicilinei, acidul 6-amino-penicilanic ar rezulta din acidul -amino-adipic, l-cistein i l-valin trecnd prin faza tripeptidei.n 46

ultima etap se formeaz penicilin Vsau acid 6-aminopenicilanic prin pierderea grupei acil. Penicilinele s-ar putea forma i direct din l-cisteina su l-valina printr-o serie defaze intermediare, despre care nu se tie dac se formeaz n stare liber, aa cum sunt redate n schema de mai sus. n esen, se distung n aceast schem urmatoarele faze in formarea penicilinei: condensarea aminoacizilor, dehidrogenarea peptidei, hidrogenarea i ciclizarea intermediarului la acid 6-aminopenicilanic i introducerea catenei laterale.

47

48

SH H2N CH COOH l-cisteina H2N CH CO SH CH N CH2 + H2N

CH(CH3)2 CH l-valina CH2

CH(CH3)2 CH SH COOH

H2N

CH CO

CH C(CH3)2 N C S COOH

H2N

CH CO

CH N

C(CH3)2 CH COOH

Acid 6 - amino-penicilanic C6H5 C6H5 O CH2 CO NH O CH CO CH2 CH N COOH S

CH(CH3)2

CH

COOH

PENICILINA V

Formarea acidului 6 amino penicilanic n lipasa precursorului, precum i obinerea diferitelor peniciline n funcie de precursorul folosit, demostreaz c precursorul de biosintez poate decurge i dup Schema 3.[1] 2.4.4 Cinetica reaciilor biochimice

49

Prin metoda cinetic se fsce studiul mecanismului reaciilor enzimatice a proceselor metabolice i a vitezei de transformare a substratului n produs.Aceast metoda este singura modalitate de studiu a proceselor enzimatice, deoarece numrul enzimelor pure separate pn n prezent este relativ redus. Viteza de fermentaie este definit prin variaia momentan a concentraiei produsului, a intensitii respiriei sau a concentraiei masei celulare, iar viteza volumetric este definit prin cantitatea de produs obinut, cantitatea de substrat utiliza, consumul de oxigen sau cantitatea de celule obinute pe unitatea de volum de mediu de cultur i n unitatea de timp. Vitezele volumetrice calculate n funcie de masa celular, de consumul de zaharuri, de cantitatea de produs biosintetizat i de consumul de oxigen la fermentaia penicilinei V sunt redate grafic in figura 2.4.1 .

Figura 2.4.1 .Vitezele volumetrice la fermentatia penicilinei V

ABCD-

viteza de utilizare a oxigenului, g/l.h. viteza de crestere a masei celulare, g/l.h viteza de consum a zaharurilor, g/l.h viteza de producere a penicilinei, g/l.h

Viteza specific se definete prin raportul dintre viteza volumetric i densitatea bacteriaa, fiind exprimat n grame produs obinut n unitatea de timp i pe gram de

50

mas celular. Pentru cazul concret al fermenttiei penicilinei V, vitezele specifice sunt prezentate n figura 2.4 .2 Procesele metabolice care au loc n interiorul celulelor vii sunt reatii fizicochimice foarte complexe care se produc cu viteze mari i sunt catalizate de enzime. Referidu-se la acest aspect, Gaden definete fermentaia ca reprezentndreaciile chimice catalizate de sisteme care, la rndul lor, sunt produse de ctre microorganisme n timpul creterii.

Figura 2.4. 2. Vitezele specifice la fermentatia penicilinei V ABCDviteza de producere a penicilinei, g/g.h viteza de utilizare a oxigenului, g/g.h. viteza de consum a zaharurilor, g/g.h viteza de crestere a masei celulare, g/g.h

Enzimele sunt macromolecule cu structur proteic care catalizeaz procesele biochimice. Din punct de vedere structural, enzimele sunt compui de natura heteroproteic cu sensibilitate deosebit la toi factorii care afecteaz proteinele. Activitatea enzimelor este influenat de temperatur, pH, presiune osmotic, concentraia substratului, concentraia produilor rezultai n reacie. Activitatea enzimatic este inhibat de anumii ageni specifici, printre care: sulfamide, antibiotice, narcotice, colorani, ap oxigenat, dioxid de carbon, dezinfectante.Substana asupra creia se

51

exercit

aciunea

enzimelor

se numete substrat . Prezena

enzimelor

permite

transformarea substratului la temperatur normal a materiei vii, oferind, n acest fel, energia necesar desfurrii procesului de biosintez. Funcia esenial a enzimelor const n accelerarea vitezei reaciilor metabolice la temperatur normal a organismelor. Avnd activitatea catalitic foarte ridicat, enzimele reduc considerabil barierele de potenial ale reaciilor de transformare a substratului, facilitnd astfel deplasarea echilibrului spre formarea de produs. Mecanismul prin care enzimele transform substratul poate fi descris cu ajutorul teoriei strii de tranziie. Aceast teorie presupune c substratul se combin cu enzima formnd un complex activat, instabil, care ulterior se descompune n produs i enzim. Enzima eliberat reia ciclul de transformare a substratului, conform schemei: E+S k +1 k-1 S-substrat; P-produs. E - S* k2 P+E

n care: E-enzima liber;

E-S*- complex activat enzim-substrat; k+1 - constanta de vitez a reaciei de formare a complexului enzima- substrat; k-1- costanta de vitez a reaciei de formare a substratului i enzimei din complexul enzima-substrat k2- constanta de vitez a reaciei de formare a produsului din complexul enzima- substrat. De asemenea, se poate admite c ntre enzima i substrat, pe de o parte, i complexul enzima-substrat, pe de alt parte, exist un echilibru descris prin ecuaia:
CE-S* k+1 Kc* = k-1 = C C E* S

Iar viteza de descompunere a complexului enzima- substrat n produs este redat prin intermediul expresiei:

52

K 2=

kBT h

unde; CE-S*-concentraia complexului enzima-substrat n stare activate. Kc*-constanta de echilibru KB-constanta Boltzman h-costanta Planck Viteza reactiei de formare a produsului este:
vp= kB T h CE-S*

vp =viteza specifica de descompunere a complexului activat Reformulnd se obine:

vP = kB T h KC* CE CS

Constanta de echilibru a formrii complexului activat se poate exprima funcie de energia liber standard G*: G* = H* - TS* = -RTlnKC *

Din aceast ecuaie, constanta de echilibru se poate determina cu expresia: KC = eG*/RT

Modele cinetice pentru viteza de formare a produsului Michaelis i Menten dezvolta modelul cinetic al vitezei de formare a produsului n funcie de concentraia substratului i a enzimei. Dup aceti autori, reacia dintre enzim

53

i substrat se desfoar n dou etape. n prima etap, viteza de reacie este dependent direct de cantitatea de substrat, iar n etapa a doua, n care are loc fermentarea produsului i eliberarea enzimei, care este capabil s reia ciclul descries de sistemul de reacie, viteza depinde de concentraia complexului enzim-substrat:
E+S E-S k +1 k+1 E+S P+E

Viteza de formare a produsului n procesul enzimatic este: VP= =k2 Cc Pentru determinarea concentraiei complexului enzim-substrat C c se utilizeaz expresia vitezei de formare a acestuia, pentru cazul n care Cs>CC: =k+ 1 (CE- CC) CS- k-1 CC-K2 CC n regim staionar, concentraia complexului nu variaz n timp, iar expresia anterioar devine: K +1 (CE- CC) CS- k-1 Cc- K2CC= 0 CC= CE CS k-1+K2 +CS k+1

De mai sus rezult: vP== K2 Cc= V= K2 CE -viteza maxim de formare a produsului i corespunde stadiului n

care ntreaga cantitate de enzima formeaz complexul enzim-substrat. K2 KS= k+1

- constanta de echilibru la disocierea complexului enzim-substrat.

KM=KS+ K2 k+1 - constanta Michaelis-Menten.

54

Constanta KM este egal cu constanta de echilibrul KS numai atunci cnd K2> k+1. Cu ct valoarea lui KM este mai mic, cu att este mai mare afinitatea enzimei pentru substrat. Introducand constanta KM se obine:

Aceast ecuaie este denumit ecuaia Michaelis-Menten i descrie viteza de formare a produsului ntr-un proces enzimatic, reprezentnd modelul ideal pentru viteza proceselor inhibiie. Ecuaia Michaelis-Menten a fost stabilit n ipoteza c C S >> C E . Creterea concentraiei enzimei n mediu de fermentaie peste o anumit limit atrage dup sine anularea acestei ipoteze i, n consecin, viteza reaciei enzimatice nu va mai fi direct proporional cu concentraia enzimei. Din reprezentarea grafic se observ c KM este acea valoare a concentraiei substratului CS pentru care reacia pornete cu jumatate din viteza maxim, V. enzimatice n regim staionar, lipsite de procese secundare de

Figura 2.4.3.Reprezentarea grafic a ecuaiei Michaelis-Menten

55

Deoarece valoarea vitezei maxime de reacie este limita asimptotei la curba, ea nu poate fi determinate cu exactitate. Pentru determinarea constantei KM i a vitezei maxime V, se utilizeaz metodele de liniarizare. Una dintre acestea este metoda Lineweaver-Burk: 1 VP KM V 1 CS + 1 V 1 CS

1 Prin reprezentarea grafic n coordinatele V i

se obine diagrama Lineweaver-

Burk (figura 2.4.4. ), care permite determinarea constantelor V i K M n funcie de variaia concentraiei substratului i de valorile experimentale ale vitezei de formare a produsului.

Figura 2.4.4 Reprezentarea grafica a ecuatiei Lineweaver-Burk.

n literartura de specialitate se ntlnesc si alte reprezentri ale ecuaiei MichaelisMenten:

56

VP Reprezentarea grafica a acestei ecuaii n coordinate VP i redat n figura 2.4.5 CS este o dreapta,

Figura 2.4.5.Reprezentarea grafica a vitezei reaciei enzimatice dup metoda Eadie-Hofsee. O alt reprezentare a ecuaiei Michaelis-Menten a fost propus de Woolf.

Figura 2.4.6. Reprezentarea grafica a ecuaiei Michaelis-Menten dup metoda lui Woolf. Modelul Michaelis-Menten a fost conceput ca un model ideal i descrie viteza de formare a produselor n procese de fermentaie perfecte. ns, acest model, care abordeaz cinetica enzimatic n regim staionar, poate fi extins i la procesele n care, alturi de

57

transformarea enzimatic a substratului n produs, intervin reacii de inhibiie competitiv sau necompetitiv a enzimelor. Prezena inhibitorilor nu se poate evita, deoarece ei apar ca urmare a degradrii mediului nutritiv n timpul sterilizrii, a unor reacii secundare i nu numai. Principalele tipuri de inhibiii ntalnite curent n procesele fermentative sunt: - inhibiia competitiv; - inhibiia necompetitiv; - inhibiie de substrat; - inhibiie de produs. Procesul de transformare enzimatic a substratului n produs nsotit de inhibiie competitiv este descries prin reaciile:
E+S KS KI CC E-S CD E-I K2 P +E

E +I

Caracteristic pentru procesul de transformare enzimatic nsoit de inhibiie competitiv este faptul ca enzima pus n libertate prin disocierea complexului enzima-inhibitor, E-I, i pierde capacitatea de a cataliza transformarea substratului n produs. Viteza de formare a produsului este proporional cu concentraia complexului enzimasubstrat, de aceea este nacesar cunoaterea valorii acesteia, n regim staionar. n acest scop, se scriu constantele de echilibru, pentru situaia n care :

unde:CI - concentratia inhibitorului; CD- concentratia complexului enzima-inhibitor. Ecuaia vitezei de formare a produsului devenind:

58

in care KM=KS

Figura 2.4.7. Reprezentarea grafic a vitezei reaciei enzimatice nsoit de inhibiie competitiv dupa metoda Lineweaver-Burk. n cazul n care inhibitorul nu acioneaz competitiv, afinitatea enzimei pentru substrat sau inhibitor ramne neschimbat, indiferent dac enzima este liber sau fix n complex. Reaciile care au loc n sistemul cu inhibiie necompetitiv sunt:

59

Figura 2.4.8. Reprezentarea grafica a vitezei reactiei enzimatice insotita de inhibitie necompetitiva dupa metoda Lineweaver-Burk. Modele cinetice pentru viteza de crestere a masei celulare Cinetica proceselor de biosintez poate fi studiat i sub aspectul creterii masei celulare funcie de concentraia substratului. Astfel, Monod, analiznd procesul de cretere bacterian n corelaie cu variaia concentraiei unui singur substrat, a stabilit pentru faza de cretere logaritmic a masei celulare (figura 2.4.8) urmatoarea expresie de calcul a vitezei specifice:

n care: -

viteza specific de cretere a masei celulare cnd substratul este limitat: viteza maxim de cretere a masei celulare cnd substratul nu este limitat: constanta de saturaie.

Dependena dintre viteza specific de cretere a masei celulare i concentraia substratului limitativ este redat n figura 2.4.8., din care se constat ca viteza specific de cretere tinde asimptotic ctre valoarea maxim.

60

Figura 2.4.9. Dependena dintre viteza specific de cretere i concentraia substratului limitativ Substratul limitative poate fi sursa de carbon si energie, un aminoacid essential, oxigenul, fosforul sau azotul anorganic. Tinand cont de faptul ca viteza specifica de crestere este definita prin relatia:

Se obine ecuaia de cretere a masei celulare n funcie de concentraia substratului limitativ CS:

Trebuie remarcat faptul c ecuaia Monod este valabil numai n cazul n care creterea este limitat de un singur substrat, ceea ce n condiiile industriale se ntmpl foarte rar. De obicei, n aceste procese intervine i un doilea substrat, care, de cele mai multe ori, este chiar oxigenul. n aceste condiii, vitezele specifice de cretere a masei celulare sunt descrise prin ecuaia Monod modificat sau prin ecuaia Monod-Cantois :

61

n care:CS,CL - concentraiile substraturilor limitative; KL,KS- constantele de saturatie corespunzatoare substraturilor limitative; B- constanta Cantois. Pentru culturi industriale continue, Monod a introdus o constant caracteristic Y, denumit constanta de exploatare sau de cretere:

n funcie de valorile constantelor cinetice KS,max,Y stabilite de Monod, se pot caracteriza cantitativ culturile microbiene discontinue. Totui n unele cazuri s-a observat c valorile vitezelor de cretere calculate cu relaiile propuse de Monod se abat considerabil de la valorile obinute experimental. Aceast abatere evideniaz faptul c descrierea matematic a procesului de cretere a masei celulare trebuie s cuprind ntregul ciclu de cretere, i nu doar faza de cretere exponenial, ca n cazul ecuaiei Monod pe baza acestei premise, Kono i Asai au mprit curba de cretere a microorganismelor n patru faze (figura2.4.10): I. faza de inducie III. faza de trecere microorganismelor: I faza de cretere exponenial IV. faza de scdere

Pentru fiecare faz, autorii au propus urmtoarele ecuaii pentru viteza de cretere a

I. III

II. IV. CIM- concentratia maxima a masei celulare CIC- concentratia critica a masei celulare

in care: - coeficientul Kono

62

Figura 2.4.10. Curba de crestere a microorganismelor dupa Kono si Asai. Formele integrate ale vitezelor de cretere a masei celulare, prezentate mai jos, redau concentraiile biomasei n fiecare etap, iar prin nsumare permit obinerea valorii totale a concentraiei microorganismelor: I.

II. III. IV. unde: CIF - concentraia final a microorganismelor; - durata de cretere a microorganismelor. n faza de inducie =0, n faza exponenial =1, iar n faza de trecere valoarea lui se modific treptat de la 0 la 1. Kono i Asai au demonstrat c relaiile stabilite de ei ofer, comparativ cu relatiile Monod, o concordan mult mai bun cu datele experimentale.

63

2.4.5 Termodinamica reaciilor biochimice Procesul de fermentaie se ncadreaz, din punct de vedere termodinamic, n categoria sistemelor termodinamice deschise, sisteme specifice organismelor vii, caracterizate prin schimb de energie i de materie cu mediul nconjurator, pe care l transform. Sistemelor deschise le este specific faptul c ele nu sunt n echilibru cu mediul lor. Organismele vii se afl, de obicei, ntr-o stare staionar, care reprezint condiia de baz a sistemelor deschise, i n care viteza transferului de materie i energie din mediu n sistem este compensat total de viteza transferului de materie i energie din sistem n afara lui. Faptul c celula este un sistem deschis, care nu se afl n echilibru cu mediul sau, un mecanism care capteaz energie liber din mediu, producndu-i simultan o cretere oarecare a gradului de dezordine, adic a entropiei, face parte din logica molecular a strii vii. n plus, sistemele deschise aflate n stare staionar pot efectua un lucru, deoarece sunt departe de condiia strii de echilibru. n starea stationar, viteza de producere a entropiei are o valoare minim, iar sistemul opereaz cu maximum de eficien n condiiile date. Semnificaia acestei relaii a fost discutat pertinent, punndu-se n eviden faptul c viaa este o continu lupt mpotriva tendinei de a produce entropie. Sinteza unor molecule mari, bogate n informaii, formarea structurilor intracelulare, creterea biomasei sunt puternice fore antientropice. ns, organismele vii, fiind obligate s se supun principiului al doilea al termodinamicii, i anume s produc entropie, au ales calea de a produce entropie cu viteza minim, meninndu-se astfel n stare staionar, stare n care reaciile din celulele vii decurg cu o vitez foarte mare. Ca urmare, studiul entalpiei capat o importan deosebit. n acelai context, trebuie subliniat faptul c fluxul de energie ce trece printr-un sistem termodinamic deschis determin autoorganizarea acestuia, astfel ncat viteza de producere a entropiei s se menin la valori minime. De asemenea, microorganismelor le este caracteristic eficiena deosebit n prelucrarea energiei i materiei, eficien care depaete cu mult majoritatea mainilor cunoscute de omenire. Analiza aprofundat a acestor aspecte evideniaz c celulele vii funcioneaz ca maini izoterme care absorb energia din mediul lor, energie pe care o transform n energie

64

chimic, folosit apoi pentru realizarea funciei chimice, de biosintez a componentelor celulare, a funciei osmotice, necesar transportului de materiale n celula, i a funciei mecanice, de contracie i locomoie, toate acestea la temperatur constant. Sursa de energie a sistemelor termodinamice deschise o reprezint hidratii de carbon, lipidele, alcoolii, proteinele etc, care prin combustie chimic elibereaz o mare cantitate de energie. O parte din aceast energie se elimin din sistem, iar o parte este nmagazinat de sistem n compui organici macroenergetici, dintre care se remarc acidul adenozintrifosforic (ATP), compus care asigur, practic, rezerva energetic a celulei. Din structura ATP-ului, prezentat mai jos, rezult ca legturile dintre gruprile fosfat adiacente din ATP i ADP (acidul adenozindifosforic) sunt legturi de tip anhidrid, notate cu ~, n timp ce legatura dintre acidul fosforic i riboza din AMP (acidul adenozinmonofosforic) este o legatur esteric, notat cu linie dreapta. n acest context, trebuie subliniat faptul c energia liber standard de hidroliz a legturilor tip anhidrid este mult mai mare comparativ cu cea a legturilor esterice. Dei ATP-ul conine doua legturi macroenergice (~), n reaciile enzimatice intervine, de obicei, numai fosfatul terminal. De asemenea, este necesar de precizat c ATP-ul nu este numai un rezervor de energie chimic, ci este n primul rand, un transmitor de energie chimic n celulele vii. Transportnd energia s la alte molecule, acest compus pierde gruparea fosfat terminal, trecnd n ADP, care, la rndul su, poate accepta energie chimic i reface ATP-ul, primind o grupare fosfat.

Prin reunirea acestor observaii, ca i a multor altora, s-a constatat c ATP-ul funcioneaz ciclic ca transportor de energie chimic de la reaciile de ardere, care furnizeaz energia chimic, la diferitele procese celulare care necesit un cosum energetic.

65

Figura 2.4.9.Ciclul ATP ADP i modalitile de utilizare a energiei eliberate de ATP S-a evideniat experimental c, indiferent de natura substratului limitativ considerat ca surs de energie sau molecule combustibil (excepiile fiind foarte rare), raportul dintre cantitatea n grame a celulelor microbiene obinute n stare uscat i numrul de molecule de ATP sintetizate este aproximativ constant i are valoarea de 10,5. De asemenea, s-a demonstrat c n procesul de cultivare a bacteriilor n condiii aerobe 605% din cantitatea de carbon din mediu este asimilat de celule i numai 405% este oxidat la CO2. Din punct de vedere energetic, circa 62% din energia liber de ardere a componentelor masei bacteriene, astfel ncat Hc=22KJ/g s.u. (masa bacteriana). Dac substratul furnizor de energie este glucoza, care se consum ntr-un procesul de fermentaie aerob prin catabolism, atunci se formeaz, conform reaciei de mai jos, 38 moli ATP, care pot nmagazina 1159 kJ din cei 2870 obtinui prin combustia unui mol de glucoz: Glucoza + 6O2 6CO2 + 6H2O + 38 moli ATP Moleculele de ATP si ADP fiind puternic ionizate, datorit faptului c pH-ul lichidului intracelular are valoarea 7, formeaz n prezenta ionilor de Mg2+ (aflat n cantitate ridicat n lichidul intracelular) compleci de tipul celui prezentat mai jos, complecsi care constituie, de altfel, chiar forma activa a ATP-ului:

66

Cea mai important sursa de cldur n timpul fermenta iei o reprezint cldura degajat n urma activittii microorganismelor sau enzimeleor (Q1). Spre deosebire de procesele anaerobe, n fermentaiile aerobe efectul termic activitii metabolice poate determina creterea puternic a temperaturii mediului de cultur, depind nivelul optim. Efectul termic al proceselor biochimice este rezultatul acumulrii biomasei, pe de o parte, i al elaborrii procesului, pe de alt part, ambele etape bazndu-se pe consumul substratului. Cldura degajat poate fi msurat direct n calorimetre sau cu ajutorul unor echipamente speciale. De asemenea, poate fi estimat cu destul precizie, prin corela ia vitezei de consum a oxigenului de ctre microorganisme sau pe baza cldurilor de formare,ori a cldurilor de combustieale substratului, masei celulare, produsului etc. [3] Calculul efectului termic total al proceselor biochimice se realizeaz prin : Q1 = Vu * RQ n care : Q1 = efectul termic al procesului biochimic Vu = volumul util de lichid de fermentaie RQ = viteza de degajare a cldurii Exist o coleraie ntre viteza de degajare a cldurii, oxigenului, RO2. RQ = 5*105 * RO2 [ W/m3], pentru lizin RO2 = 30 mmoli/h. Calculul efectului termic total al proceselor biochimice se realizeaz prin : Q1 = Vu * RQ n care : Q1 = efectul termic al procesului biochimic Exist o coleraie ntre viteza de degajare a cldurii, oxigenului, RO2. RQ = 5*105 * RO2 [ W/m3], pentru penicilina V RO2 = 25 mmoli/h= * 10 -3 moli/s RQ=5 *105 *10 -3 = 0,0347222 * 102 moli/m3 s 67 RQ , i viteza de consum a RQ , i viteza de consum a

2.4.6. Bilanul de materiale Scopul bilanului de materiale const n determinarea cantitilor de substane utilizate n scopul obinerii Penicilinei V. Etapele procesului tehnologic se desfasoara cu urmatoarele randamente: Filtrare: = 80%; Extracie : =94%; Reextracie : = 90%; Cristalizare: = 94%; Filtrare: = 95%; Uscare: = 98%. Calcule preliminare Producia pe an este: Pan = 23 t Penicilina V/an Pan = 23000 kg Penicilina V/an Fondul anual de timp : FAT = 330 zile Durata unei sarje: ts = tf + taux tf = durata fermentaiei, h taux = timpi auxiliari, h tf = 140 h taux = 10-15 h ts = 140 + 12 Se adopta taux = 12 h ts = 152 h

Numrul de arje se calculeaz cu relaia : ns = (FAT * 24) / ts , arje ns = (330 * 24) / 152 ns = 52 arje Producia pe arja : Ps = Pan / ns , kg / arja Ps = 23000 / 52 = 442,30769 kg / sarja n fermentator se obine o producie : Pf = Ps /g g = 0.56709 Pf = 442,30769 / 0.56709 Pf = 779,96030 kg /arja

68

Topt = 26 C Productivitatea microorganismului pentru Penicilina V este 44420 U.I./ ml , iar activitatea standard este 1630 U.I./mg. 1 mg..1630 U.I. X mg44420 U.I. X =27,25153 mg/ml P = 27,25153 kg/m3 Volumul util este dat de relaia : Vu = Pf / P , m3 Vu =779,960301 / 27.25153 = 28,62078 m3 Mmdc = masa mediului de cultur Mmdc = * Vu = densitate apei la temperatura de 26C = 995.9 kg/m3 Mmdc = 995,9 * 28.62078 = 28503,4348kg/ arja Pregatirea mediului de cultura 100 kg mdc.3 kg glucoz 28503,4348kg kg mdc.....x1 x1 = 855,103044 kg glucoza 100 kg mdc.7 kg lactoz 28503,4348kg kg mdc..x2 x2=1995,24043 kg lactoz 100 kg mdc.2.8 kg extract de porumb 28503,4348 kg g mdc..x3 x3 = 798.09617kg extract de porumb 100 kg mdc.0.3 kg fin de soia 28503,4348kg kg mdc...x4 x4 = 85,51030 kg fin de soia

69

100 kg mdc.0.3 kg NH4NO3 28503,4348 kg mdc..x5 X5=85,51030kg NH4NO3 100 kg mdc.1.3 kg CaCO3 28503,4348kg mdc..x6 X6 = 370,54465 kg CaCO3 100 kg mdc.0.002 kg ZnSO4 28503,4348kg mdc..x7 X7 = 0,57006 kg ZnSO4

100 kg mdc.0.06 kg Na2SO4 28503,4348 kg mdc..x8 X8 = 17,10206 kg Na2SO4 100 kg mdc.0.6 kg KH2PO4 28503,4348kg mdc..x9 X9 = 171,02060 kg KH2PO4 100 kg mdc.0.002 kg MnSO4 28503,4348 kg mdc..x10 X10 = 0,57006 kg MnSO4 100 kg mdc.0.4 kg Acid fenilacetic 28503,4348 kg mdc..x11 X11 =114,01373 kg acid fenilacetic 100 kg mdc.0.8 kg Na2S2O3 28503,4348kg kg mdc..x12 X12 = 228,02747 kg Na2S2O3

70

100 kg mdc.83.436 kg H2O 28503,4348 kg mdc..x13 X13 = 23782, 12586 kg H2O

TABEL 2.4.6.1. Compoziia mediului de cultur MATERII INTRATE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic Na2S2O3 H2O TOTAL % 3 7 2.8 0.3 0.3 1.3 0.002 0.06 0.6 0.002 0.4 0.8 83.436 100 Kg/sarja 855,103044 1995,24043 798,09617 85,51030 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373 228,02747 23782,12586 28503,4348 MATERII IESITE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic Na2S2O3 H2O TOTAL % 3 7 2.8 0.3 0.3 1.3 0.002 0.06 0.6 0.002 0.4 0.8 100 Kg/sarja 855,103044 1995,24043 798,09617 85,51030 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373 228,02747 23782,12586 28503,4348

Deoarece in timpul sterilizarii o parte din componentii mediului de cultura se degradeaza, urmatorii component se iau in exces de 10 % : glucoza, lactoza, extract de porumb, faina de soia. - Glucoza: 1.1 * 3 = 3.3% 1.1 * 855,103044 = 940,6133484kg / sarja - Lactoza : 1.1 * 7 = 7.7 % 1.1 * 1995,24043 = 2194,764473 kg/sarja - Extract de porumb : 1.1 * 2.8 = 3.08 % 1.1 * 798,09617 = 877,905787 kg/sarja - Faina de soia : 1.1 * 0.3 = 0.33 % 1.1 * 85,51030 = 94,06133 kg/ arj

71

TABEL 2.4.6.2. Compoziia mediului de cultur cu exces MATERII INTRATE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic Na2S2O3 H2O TOTAL 2.Etapa de sterilizare n aceast etapa se degradeaz compuii care la etapa precedent au primit un exces de 10 %. % 3.3 7.7 3.08 0.33 0.3 1.3 0.002 0.06 0.6 0.002 0.4 0.8 82.126 100 Kg/sarja 940,6133484 2194,764473 877,905787 94,06133 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373 228,02747 23408,73086 28509,4348 MATERII IESITE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic Na2S2O3 H2O TOTAL % 3.3 7.7 3.08 0.33 0.3 1.3 0.002 0.06 0.6 0.002 0.4 0.8 82.126 100 Kg/sarja 940,6133484 2194,764473 877,905787 94,06133 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373 228,02747 23408,73086 28509,4348

TABEL 2.4.6.3. MATERII INTRATE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic % 3.3 7.7 3.08 0.33 0.3 1.3 0.002 0.06 0.6 0.002 0.4 Kg/sarja 940,6133484 2194,764473 877,905787 94,06133 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373 MATERII IESITE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic % 3 7 2.8 0.3 0.3 1.3 0.002 0.06 0.6 0.002 0.4 Kg/sarja 855,103044 1995,24043 798,09617 85,51030 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373

72

Na2S2O3 H2O TOTAL

0.8 82.126 100

228,02747 23408,73086 28509,4348

Na2S2O3 H2O TOTAL

0.8 83.436 100

228,02747 23782,12586 28503,4348

3.Fermentaia Se calculeaz: Necesarul de aer; Biomasa; Apa evaporata. 3.1. Se consider necesarul de aer : 1 L aer pentru 1 L mdc * min. 1 L = 10-3 m3 mdc.1L= 10-3 m3 aer Vu = 28,62078m3 mdc..x m3 aer X =28,62078 m3 aer/m3 mdc 1 min.28,62078m3 aer Tf = 140 * 60 = 8400 Vaer Vaer = 240414,552 m3 aer aer = 0 * (T0 / T)*(p / p0) 0 = densitatea aerului n condiii normale = 1.293 kg /m3 T0 = temperatura normal = 273K T = temperatura de lucru (fermentaie) = 298 K p = presiunea de lucru n fermentator = 1.1 atm p0 = presiunea normal =1 atm aer = 1.293 * (273/299) * 1.1 aer =1,298621 kg/m3 Maer = aer * Vaer Maer = 1.298621*240414,552 = 312207,3859kg aer/ sarja

73

3.2. Biomasa Cx = 20 g s.u. / L mdc Celulele vii contin 20 % substanta uscata si 80 % apa. 10-3 m3..100 g celule (biomasa) 28,62078m3.Mbiomas , g biomas = kg biomas/ arj Mbiomas = 2862,078 bkg biomas/ arj 3.3 Ap evaporat 1 kg aer preia.0.01 kg H2O 312207,3859 kg aerx X = 3122,073859 kg ap evaporat Lichidul de fermentaie: Mldf = Mmdc + Minocul MH2O evaporate - Mbiomas Mmdc = 90% * Mmdc = 0.9 * 28503,4348= 25653,09132 kg/ sarja Minocul = 10% * Mmdc = 0.1 * 28503,4348 = 2850,34348 kg/ sarja Mldf = 2850,34348 + 25653,09132 3122,073859 2862,078 Mldf = 22519,28294 kg lichid de fermentaie / arj TABEL 2.4.6.4. MARIMI INTRATE Mediu de cultura Inocul Aer TOTAL 4. Filtrearea Precipitatul reine 20% din lichidul de fermentaie. MPP = Mbiomasa + MH2O din pp Mpp = Mbiomasa / 0.8 Kg / sarja 2850,34348 25653,09132 312207,3859 340710,8207 MARIMI IESITE Lichid de fermentatie Produs util PG Biomasa Aer Apa evaporate TOTAL = 80% = 0.8 Kg / sarja 22519,28294 779,96030 (Pf ) 2862,078 312207,3859 3122,073859 340710,8207

74

Mpp = 2862,078 / 0.8 = 3577,5975 kg / sarj Mfiltrat = Mldf 0.2 * Mpp Mfiltrat = 22519,28294 0.2 * 3577,5975= 21803,76344kg / sarj TABEL 2.4.6.5. MARIMI INTRATE Kg / sarja Licghid de fermentatie 22519,28294 (Penicilina G) (779,96030 ) Biomasa 2862,078 TOTAL 5. Extratia 25381,36094 MARIMI IESITE Kg / sarja Precipitat 3577,5975 Filtrat 21803,76344 Penicilina G (produs ( 623,96824 ) util) TOTAL = 94% = 0.94 25381,36094

Extracia se realizeaz utiliznd acetat de butil n raport 1:3 cu filtratul. 2PCOOK + H2SO4 2 PCOOH + K2SO4 2 * 372 98.2 * 334..174 623,96824..X.Y..Z X = 78,5975418Kg H2SO4 / sarj Y = 535,7465094 kg penicilina / sarj penicilin/sarj Z = 139,5507375 kg K2SO4 /sarj Fermentaia are loc la un pH = 6.7 dar pentru a avea loc extracia este necesar un pH al fazei apoase egal =2; pentru aceasta se adaug H2SO4. pH = 6.7 pH =2 pH = - log [H+] 4.7 = - log [H+] [H+] = 1.995 * 10-5 ioni H* / L pH = 6.7 2 = 4.7 Y = Y * 0.94 = 503,6017188 Kg

1 mol H2SO4..2H+ t moli H2SO4..1.995 * 10-5 ioni H+ 75

t = 9.975 *10-6 moli H2SO4 Vfiltrat = Mfiltrat / = 21803,76344/ 1000= 21,8683209 m3 = 21868,2091 L 1 L = 10-3 m3 filtrat9.975 * 10-6 moli H2SO4 21,8683209m3 ..u moli H2SO4 U = 0.0218037 kmoli H2SO4 / sarj Md= x + u*0.98 Md =78,5975418 + 0.0218037*0.98 = 80,734310 kg H2SO4 , 100% Pentru extracie se folosete H2SO4 4 %: Ms = (Md * 100) / c Ms=(80,734310 *100) /4 = 2018,357757 kg H2SO4/sarj Map = ms-md= 1937,623447 kg H2SO4 / sarja Macetat de butil = Mfiltrat / 3 = = 7267,921147 kg acetat de butil / sarja Mextract = 98% Macetat + MPG extras=7626,164443 kg/ arj Mrafinat = 2% + MPG neextrasa + MK2SO4 + Mapa din sol + (Mfiltrat MPG) Mrafinat = 145,35842 + 32,1447905 + 139,5507375+ 1937,623447 + 21300,16173 Mrafinat = 23463,84586 kg / sarj TABEL 2.4.6.6 MARIMI INTRATE Filtrat ( Penicilina G) Acetat de butil H2SO4 4% TOTAL Kg / sarja 21803,76344 ( 623,96824) 7267,921147 2018,357757 31090,04234 MARIMI IESITE Extract (Penicilina G extrasa) Rafinat TOTAL Kg / sarja 7626,184443 (503,60171) 23463,84586 31090,04234

6. Reextracia

= 90% = 0.9

Reextracia se realizeaz cu K2CO3 10% n exces de 10%. 2 PCOOH + K2CO3 2 PCOOK + CO2 + H2O 2*334138..2*372.44.....18 503,6017188..X..Y..ZT

76

X = 99,281481 kg K2CO3 /sarj Y = 535,256684 kg Penicilina V Z = 31,654965 kg CO2 T = 12,949758 kg H2O Soluia K2CO3 n exces: X = x + 10% = x*1.1= 99,281481 * 1.1 = 109,209629 kg K2CO3 100% K2CO3 exces = 0.1 * 109,209629 = 10,9209629 kg/ sarja Ms = x * (100/10) = 109,2096299 * 10 = 1092,096299 kg K2CO3 10% Mapa = ms x =1092,096299 109,209629= 983,000001 kg H2O din carbonat Datorit excesului exist K2CO3 nereacionat: a = 0.1 * x a = 0.1 * 99,281481 = 9,9281481 kg K2CO3 nereacionat Solvent: Msolvent = Mextract MPG extras - 2% Macetat = 7626,16443 (503,6017188 * 0.9 ) (0.02 * 7267,921147) = 7027,564473 Msol carbonat = MPG Extrasa + MH20din carbonat + MK2CO3 nereactionat + MK2CO3 exces + Mapa din reactie + MCO2 + (0.02* Macetat) Msol carbonat = 503,6017188+ 983,000001 + 10,920962+ 11,654782 + 28,489468 + +(0.02*7267,921147) Msol carbonat = 1690,953503 kg /arj Y = 481,731015 kg PV reextras Z = 28,489468 kg CO2 T = 11,654782 kg H2O

TABEL 2.4.6.7. MARIMI INTRATE Extract K2CO3 10% TOTAL Kg / sarja 7626,164443 1092,096299 8718,517986 MARIMI IESITE Solvent-acetat epuizat Solutie carbonat TOTAL Kg / sarja 7027,564473 1690,953503 8718,517986

77

7. Cristalizarea prin distilare azeotropa = 94% = 0.94 Compoziia azeotropului ap : butanol = 32 : 68 (%) Map din carbonat = Msol carbonat - MPG (Y) = 1690,953503 481,731015 = 1209,22248 kg /arj 32 kg H2O..68 kg BuOH 1209,22248 kg ap din carbonat..x X = 2569,597787 kg BuOH Se ia un exces de 20% butanol : X = x * 1.2= 3083,88373 kg / arj butanol Mbutanol exces = 3083,88373 2569,597787 = 513,9195574 kg/ arja Mazetrop = Mapa din sol de carbonat + x = 1209,222488 + 2569,597787 = 3788,820275 kg/arj MPG necrsistalizata = y *0.06 = 481,731015 * 0.06 = 28,90386 kg / arj MPG cristalizata = y * 0.94=472,09639 kg/arj MBuOH = MBuOH exces MPG necristalizat = 513,915574 28,90386 = 485,015697kg/arj MBuOH 1 = MBuOH + MPG necrisatliza = 485,015697 + 28,90386 = 542,823417 kg / arj TABEL 2.4.6.8. MARIMI INTRATE Kg / sarja MARIMI IESITE Kg / sarja

78

Solutie carbonat (Penicilina G) Butanol TOTAL

1690,953503 (481,731015) 3083,517344 4774,83723

PG precipitat Azeotrop Butanol + PG necrist TOTAL

472,0963947 3788,820275 542,823417 4774,83723

8. Filtrarea. Spalarea pe filtru

= 95% = 0.95

Spalarea se face cu butanol i apoi cu CHCl3, care reprezint 20% din masa penicilinei cristalizata. (BuOH + CHCl3)necesar = (20*MPGpp)/100 (BuOH + CHCl3)necesara = (0.2 * 481,73101) = 96,3462 kg/arj MBuOH : MCHCl3 = 1:1 MBuOH = 48,1713 kg/arj MCHCl = 48,1713 kg/ arj Precipitatul conine 10% umiditate: Mpp = PG + 0.1 * Mpp 0.9 * MPP =PG MPP = (481,73101* 0.95 )/0.9 Mpp= 508,49384kg/ sarja Mbutanol 2 = Mbutanol 1 + MPG pierduta - Mpp = 542,82341 + 481,73101 (508,49384 * 0.1) = 516,06062 kg/arj TABEL 2.4.6.9 MARIMI INTRATE Penicilina G pp Butanol 1 Cloroform Butanol TOTAL Kg/sarja 481,73101 542,82341 48,1731 48,1731 1120,9006 MARIMI IESITE Precipitat (Penicilina G) Butanol 2 Cloroform Butanol TOTAL Kg/sarja 508,49384 (367,0790) 516,06062 48,1731 48,1731 1120,9006

79

9. Uscarea Umiditatea este de 10 %. Mcloroform = 0.1 * Mpp + MPG pierduta

= 98% = 0.98

= (0.1* 508,49384 ) + ( 0.02*452,82715 )=141,41481 TABEL 2.4.6.10. MARIMI INTRATE Precipitat TOTAL Kg/sarja 508,49384 508,49384 MARIMI IESITE Penicilina G Cloroform evaporat TOTAL Kg/sarja 367,0790 141,41481 508,49384

80

2.4.7. Consumuri specifice CS = MS / PS PS = 442,30769 kg / arj TABEL 2.4.6.11 CONSUMURI SPECIFICE Glucoza Lactoza Extract de porumb Faina de soia NH4NO3 CaCO3 ZnSO4 Na2SO4 KH2PO4 MnSO4 Acid fenilacetic Na2S2O3 H2O TOTAL 940,6133484 2194,764473 877,905787 94,06133 85,51030 370,54465 0,57006 17,10206 171,02060 0,57006 114,01373 228,02747 23408,73086 28509,4348 MS CS = MS / PS 2,126604 4,962076 1,984830 0,212660 0,193327 0,837753 0,001288 0,038665 0,386655 0,001288 0,257770 0,515540 52,92408 64,44253

81

Cap.3.Controlul fabricaiei
3.1 Controlul, reglarea i automatizarea procesului tehnologic Obiectivul conducerii automate a unui fermentator este realizarea i meninerea condiiilor favorabile pentru viaa i producerea microorganismelor.Acest fapt se face prin reglarea automat a unor parametri tehnologici specifici proceselor de biosintez.Principalii parametric luai n considerare sunt: -temperatura - presiunea - pH-ul - concentraia reactanilor - debitul - nivelul lichidului - nivelul spumei - nivelul oxigenului

1. Reglarea automata a nivelului Schemele de reglare a nivelului, precum i tipul de regulator utilizat, depende de: 1. obiectivul urmrit prin reglarea automat: pentru meninerea, cu precizie ridicat, a unui nivel constant (n reactoare, tamburele cazanelor de abur, s.a.) se va folosi un regulator PI; pentru reglarea nivelului n limite largi (vase tampon, rezervoare de depozitare, rezervoare de decantare din instalaiile de tratare a apelor uzate) se utilizeaz regulatoare P, montate ca n fig.nr.3.1 ;

82

Figura.3.1. Schema de reglare a nivelului Aici, nivelul va fi meninut ntre limitele date de poziiile A i B n aceste cazuri, mai important dect stabilizarea nivelului este stabilizarea debitului de ieire din rezervoare; 2. mrimea manipulat disponibil: debitul fluxului de intrare, Fi ,sau debitul fluxului de ieire, Fe,din rezervor. Alegerea variabilei manipulate este dictat de poziia rezervorului n schema tehnologic din care face parte. Astfel, dac principala perturbaie apare pe calea de evacuare a lichidului (rezervor intermediar care alimenteaz alte utilaje), ventilul de reglare se plaseaz pe conducta de intrare (fig.nr.3.2) i invers, dac variaia debitului de intrare este perturbaia major (rezervoare de depozitare, rezervoare tampon n coloane de distilare, reactoare cu amestec) variabila manipulate va fi debitul de evacuare (fig.nr.3.3).

Figura.3.2. Ventil pe conducta de intrare

Figura.3.3Ventil pe conducta de ieire

La scaderea nivelului sub valoarea de referin, de pild, regulatorul va comanda deschiderea, n plus, a ventilului de reglare (fig.nr.3.2) sau nchiderea lui (fig.nr.3.3) pn la anularea abaterilor. 3.presiunea din rezervor. n cazul unui rezervor nchis, cu seciune transversal mare i cu suprapresiune depind considerabil presiunea hidrostatic, variaii ale suprapresiunii vor induce abateri relative mici ale nivelului dar modificari nseminate ale debitului de ieire.

83

Figura.3.4.Schema de reglare a nivelului n cascad Pentru aceste situaii se recomanda reglarea nivelului cu SRA evaluate, n cascad i nivel-debit ca n figura 3.4. Dac perturbaia este modificarea debitului Fi, atunci abaterea nivelului este eliminat prin aciunea cascadei nivel-debit dac perturbaia este variaia suprapresiunii, atunci bucla de debit reactioneaz rapid, modificnd debitul Fe, nainte ca perturbaia s provoace abateri semnificative ale nivelului; 4. tipul de proces-cu autostabilizare (rezervoare deschise cu evacuare liber sub influena presiunii hidrostatice) sau far autostabilizare (rezervoare cu evacuare forat asigurat de o pompa cu debit constant sau acordarea acestuia. 2.Reglarea automat a temperaturii n procesele din industria chimic, caldura este transferat prin radiaie, prin amestecarea fluidelor reci i calde sau, cel mai frecvent, prin conducie prin pereii utilajelor. Variabila manipulata este, de regula, debitul de agent termic. Pentru schimbatoarele de caldur montate orizontal se recomand plasarea ventilului de reglare pe conducta de alimentare cu abur (figura.3.5), iar pentru cele montate vertical, pe conducta de evacuare a condensului (figura.3.6.). n primul caz, (figura.3.5. ) la o micorare a temperaturii lichidului ncalzit, sub valoarea de referin, regulatorul comand creterea debitului de abur.Aceast cretere conduce la ridicarea rapid a presiunii n spaial de abur i, ca urmare, la o mrire a temperaturii de condensare i la un transfer de caldur mai intens ctre lichidul tehnologic. n al doilea caz (figura.3.6.), dac temperatura lichidului ncalzit depeste referina, regulatorul comand nchiderea parial a ventilului de reglare de pe conducta de rezervoare nchise cu suprapresiune) nu modific schemele de reglare i este luat n considerare doar la alegerea regulatorului i la

84

condens.n consecin, crete nivelul condensului, acesta acoperind o suprafa mai mare a tuburilor ncalzitoare.

Figura.3.5Schimbtor de cldur .orizontal este mai lent dect al celui din primul caz.

Figura.3.6.Schimbtor de cldur vertical

Deoarece timpul de retenie a condensului este apreciabil, rspunsul sistemului de reglare Dac reglarea automat a temperaturii trebuie realizat rapid i schimbtorul de caldur este supradimensionat, se recomand utilizarea schemei din figura.3.7. Aici 10% pana la 30% din fluxul de lichid tehnologic este trimis pe o cale ocolitoare si amestecat, la iesire, cu lichidul incalzit.

Figura 3.7.Schimbtor de cldur cu reglare automat Pentru stabilizarea temperaturii n vaporizatoare se folosete o schem de reglare n cascad: temperatura (bucla supraordonat)-debit (bucla subordonat) ca n figura.3.8.Bucla de debit stabilizeaz debitul de abur (la valoarea de referin dat de regulatorul de temperatur) nainte ca abaterea acestui debit (ca perturbaie pentru vaporizator) s influeneze temperatura care este parametrul reglat principal.

85

Figura .3.8.Schema de reglare n cascad a temperaturii Sisteme de reglare evoluat (mai ales n cascad) sunt curent utilizate i pentru stabilizarea temperaturii n reactoare chimice. 3.Reglarea automata a concentraiei Reglarea automat a concentraiei n reactoare este realizat de cele mai multe ori indirect, stabiliznd direct ali parametri care influeneaz desfsurarea procesului de reacie: temperatura, debitele de reactani, timpii de staionare n reactor, etc.Deseori nici nu este nevoie de o reglare a concentraiei n reactor deoarece se urmreste obinerea conversiei maxime posibile. Reglarea automat direct a concentraiei este justificat n cazurile n care viteza de reacie fluctueaz, datorit modificrii activitii catalizatorului, a temperaturii sau a puritii fluxurilor de alimentare i abaterile concentraiei produsului au efecte economice semnificative.De exemplu, concentraia unui produs poate trece printr-un maximum dup care, creterea conversiei reactanilor duce la descompunerea acestuia ntr-o serie de produse secundare.n acest caz, reactorul trebuie automatizat avnd ca scop obinerea unei concentraii optime a produsului care, n mod obinuit, poate fi mai mic dect valoarea maxim. Utilizarea schemelor de reglare bazate pe masurarea automat a concentraiei este, nca, puin practicat deoarece: Analizoarele automate au, de regul, un domeniu limitat de aplicare; ele pot analiza numai concentraia ntr-un anumit component pe cnd aparatele care masoar temperaturi, debite, presiuni, etc, funcioneaz indiferent de natura mediului msurat;

86

Analizoarele introduc n bucla de reglare ntrzieri mari de transport (timpi necesari pentru prelevarea probei, analiza ei i comunicarea rezultatului), chiar dac sunt montate n flux i nelinearitai; De regul, analizoarele sunt aparate puin robuste cu fiabilitate redus i ntreinere pretenioas. Se prefer reglarea concentraiei masurnd ali parametri care descriu, cu aproximaie, compoziia sau gradul de conversie: densitatea, indicele de refracie, vscozitatea, etc. Mai des ntalnim reglarea concentraiei amestecurilor de lichide sau de gaze. n figura . 3.9. schema stabilizrii concentraiei soluiei la ieirea dintr-un amestector de lichide i n figura.3.10 schema reglrii concentraiei produsului unui amestector de gaze.

Figura.3.9 Schema de reglare a concentraiei soluiei la ieirea dintr-un amestector de lichide n figura.3.9.msurarea concentraiei se realizeaz cu un analizor ca aparat de msura pe ramura de reacie a buclei 1, montat n flux pe o cale ocolitoare variabil manipulat este debitul de concentrate la intrarea n amestecator.

Figura.3.10.Schema de reglare a concentraiei produsului cu un amestector de gaze

87

n figura.3.10 se folosete drept aparat de masur un analizor de compoziie a amestecurilor de gaze analizor specific tipurilor de componente care se amestec montat, deasemenea, pe o derivaie a conductei de ieire a produsului; variabila manipulat n bucla I este debitul unuia dintre componeni (gaz A). n ambele situaii, stabilizarea concentraiei este uurat adaugnd, la buclele I, circuite de stabilizare ale debitelor componentelor care nu sunt mrimi de execuie (diluant, respectiv gaz B, buclele II); n acest fel se elimin fluctuaiile de debit ale acestor componente, fluctuaii care se manifest ca perturbaii pentru sistem. 4.Reglarea automat a pH-ului Pentru obinerea pH-ului dorit al unei soluii se recurge la adugarea, n aceasta, ca medii de reglare, a unor reactivi sub forma altor soluii de acizi sau baze, substane pulverizante (CaCO3, CaO etc), substane gazoase (CO2, SO2, NH3 ) sau a unor soluii tampon sau ageni precipitare. Sistemele de reglare pentru pH pot fi mprite n 2 categorii, dup scopul urmrit: 1. reglarea pH-ului este o aciune suplimentar, avnd ca scop realizarea unei condiii necesare pentru buna desfurare a procesului; un exemplu bun l constituie procesul de fermentaie discontinuu unde, datorit unui timp ndelungat de staionare a masei de reacie n reactor i a consumului lent de reactiv adugat pentru stabilizarea pH-ului, reglarea este destul de uor de ndeplinit i un regulator simplu, bipoziional, da satisfacie. 2. stabilizarea pH-ului n reactoarele de neutralizare n care se amestec soluia principal cu un reactiv, cu scopul de a se realiza un anumit pH; exemplul cel mai des ntalnit este cel al tratrii continue al unor soluii sau al neutralizrii produselor reziduale. Reglarea automat a pH-ului este afectat de o serie de dificulti specifice, dintre care remarcm: 1. spre deosebire de reglarea altor parametri (nivel, debit, presiune, etc), unde se folosete un singur mediu de reglare, n cazul stabilizrii pH-ului la o anumit valoare vor fi necesare, uneori, 2 medii de reglare diferite ; este cazul neutralizrii unor ape reziduale, al cror pH se poate abate n ambele sensuri, n raport cu valoarea prescris care, de de

88

regula, este 6-7; o astfel situaie poate fi rezolvat adaugnd fie reactivi acizi, fie reactivi bazici n funcie de sensul n care se abate, iniial, pH-ul. 2. precizia cu care se poate regal pH-ul este dependent de valoarea de referin (figura.3.11), de faptul dac mediul reglat este puternic sau slab acid sau basic (fig.nr.3.11.), de valoarea abaterii primare i, bineneles, de precizia cu care se adaug reactivul de neutralizare, n cm3 [reactiv/l solutie], la aceeai valoare prescris. Pentru a ne explica aceast comportare, se pleac de la forma tipic, neliniar, a curbelor de titrare care are aspectul unui S. In figura.3.11 observm c, datorit acestui aspect, cu ct este mai departat de valoarea pH=7, cu att crete precizia de reglare; astfel, dac referina este (pH) r1 (punctul 1), plasat n apropierea punctului de echivalen, la o imprecizie de adugare a reactivului de +/-(V), abaterea valorii reglate de la cea de referin este evident mai mare dect abaterea corespunzatoare referinei (pH) r2 (punctul 2), pentru aceeai imprecizie de adugare a reactivului.

Figura 3.11.Schema de reglare a pH-ului 3. existena, n bucl, a unor ntrzieri (timp mort i ntrzieri de capacitate) apreciabile. ntrzierea pur este dat, n principal, de timpul necesar transmiterii semnalului de la punctul de adugare a reactivului de neutralizare (punctul A) pn la punctul de msurare (punctul B ). Apropierea celor 2 puncte, ca n schema de reglare din figura.3.12, n scopul

89

reducerii timpului mort, este limitat de necesitatea de a asigura un timp de reacie suficient de lung.

Figura 3.12 Schema de reglare n scopul reducerii timpului mort ntrzierea de capacitate este introdus att de traductorul de pH ct, mai ales, de capacitatea rezervorului tampon de amestec, impus de acea necesitate de a asigura timpul de reacie, ca n schema de reglare din figura.3.13.

Figura.3.13.Schema de reglare a timpului de reacie Dac timpul de reacie este tr [s] atunci volumul rezervorului tampon, Vr [m3], se calculeaz cu relaia : Vr=F tr unde : F[m3/s] - este debitul de soluie ce intr n vas. Mrind volumul vasului tampon atenum oscilaiile pH-ului soluiei reglate, avnd ca rezultat creterea preciziei de reglare; n acelai timp, ns, crete ntrzierea de capacitate introdus de rezervor n bucla de reglare, ceea ce mrete dificultatea reglrii;

90

O calitate bun a reglrii pH-ului este condiionat de o bun amestecare a soluiei cu reactivul de neutralizare i, n fine, de o curaire periodic a electrodului de masur a pH-ului. Schema de reglare din figura.3.14. este utilizabil, ndeosebi, n situaiile n care debitul soluiei al crei pH trebuie stabilizat este constant i reacia de neutralizare este rapid. Dac reacia de neutralizare este lent i este nsoit de variaii mari de debit ale mediului reglat se utilizeaz schema de reglare n cascad din figura.3.15 Ambele regulatoare ale cascadei sunt regulatoare de pH; cel din bucla supraordonat, pHC-1, care este informat asupra valorii msurate la punctul final, B, furnizeaz referina celui din bucla subordonat, pHC-2, care stabilizeaz pH-ul n punctul A, imediat dup ieirea din vasul tampon.

Figura .3.15Schema de reglare n cascad Pentru cazuri mai dificile, cum sunt cele ntalnite n neutralizarea apelor reziduale al cror pH se poate abate n ambele sensuri, ceea ce impune utilizarea a 2 medii de reglare diferite se poate folosi schema de reglare din figura.3.16, o combinaie de reglare n cascad cu o reglare cu divizarea comenzilor. Regulatorul supraordonat pHC-1, informat asupra pH-ului n punctul final B, comand debitul de reactiv bazic, ca variabil manipulat i, n acelai timp, furnizeaz referina pentru regulatorul subordonat pHC-2 care stabilizeaz pH-ul n punctul intermediar A. Regulatorul subordonat va comanda, n regim de divizare, doua mrimi de execuiedebitele celor 2 reactivi disponibili.

91

Figura .3.16Schema de reglare n cascad ce reglarea divizrii comenzilor 5.Reglarea nivelului spumei Aeraia i agitarea interna necesar a se efectua n procesele biochimice industriale, are ca efect formarea de spume, uneori deosebit de abundente. n orice biosintez industrial este absolut necesar efectuarea unui control al formrii spumei pe toat durata desfurrii procesului. Operaiile de control i reglare sunt efectuate automat sau continuu pe toat durata procesului biochimic respectiv. Aceast problem este rezolvat relativ simplu prin cuplarea controlului analitic al formrii spumei, cu introducerea n bioreactor a agenilor de antispumare cu o vitez care trebuie sa depind de nivelul spumei. Senzorii sau electrozii de contact reprezint cea mai simpl soluie pentru controlul formrii spumei. Aceste sisteme (figura 3.17) sunt constituite din dou fire metalice fixate ntr-un corp izolant a cror capete sunt plasate la o foarte mic distan unul de altul. Acest tip de senzor se plaseaz la o anumit naltime deasupra mediului lichid din interiorul bioreactorului. Prin ajungerea spumei la extremitile capetelor neizolate ale firelor metalice, se realizeaz practic un contact electric cu apariia unui semnal analitic, care dup o 92

prealabil amplificare poate declana un sistem de avertizare optic (un bec luminos), acustic (o sonerie sau siren) sau ambele. Simultan, semnalul dat poate aciona sprgtorul mecanic de spum sau dup un anumit interval de timp sistemul de adugare a agentului antispumare. 1.- nivelul lichidului mediu de cultur 2.- spum 3.- corpul senzorului 4.- sursa electric 5.- avertizor optic 6.- avertizor acustic Figura .3.17 Principiul constructiv al unui senzor de contact pentru controlul formrii spumei n cazul sistemelor de contact, de control al formrii spumei, au fost descrise i dispozitive bazate pe utilizarea unor electrozi capacitivi acoperii cu teflon. La toate aceste sisteme cu electrozi de contact, dup scaderea nivelului spumei, prin acionarea mecanic, fizic sau chimic, se produce implicit deschiderea circuitului electric i ntreruperea sistemelor de combatere a formrii spumei. n acest mod, ori de cate ori are loc o cretere a nivelului spumei peste o anumit limit la care este plasat senzorul, are loc declanarea sistemelor de avertizare i combatere a spumei, iar dup scaderea nivelului spumei, sunt deconectate sistemele respective . Bazat pe utilizarea electrozilor de contact au fost realizate i sisteme de control automat al formrii spumei i conectare gradat a diferitelor dispozitive de combatere a formrii spumei. Un asemenea sistem, utilizabil n procese de culturi microbiene, se prezint sub forma unei scheme bloc, n figura 3.18. Cnd n bioreactorul 1 spuma ajunge la nivelul senzorului 2, apare un semnal care ajunge apoi la blocul de control 3, care pune n funciune dispozitivul 7, ce controleaz primul mecanism de spargere a spumei 4 (de exemplu un disc rotitor rapid). Dac formarea spumei la nivelul senzorului 2 se ntrerupe, atunci elementele finale de combatere chimic a spumei 5 si 6, nu se comut. Dac sistemul mecanic 4 nu reueste s opreasc

93

formarea spumei sau spuma se formeaz din nou, atunci prin linia ulterioar 10, semnalul de ieire ajunge la circuitul logic 12 (de tip AND), cand se conecteaz cu senzorul 2, cea de a doua linie de combatere a formrii spumei, prin intermediul dispozitivului 8. Se activeaz (prin furnizarea unui impuls la o valva solenoid) dispozitivul auxiliar 5, de introducere a unor antispumani din rezervorul 14. Dac i acest caz combaterea spumei nu este eficient, astfel ncat nivelul acesteia s scad la o poziie sub senzorul 2, se activeaz ntr-un mod similar sistemul final de reglare 6, care introduce n bioreactor un antispumant de mai mare eficien. Dispozitivele 10 si 11 are rolul de a preveni conectarea simultan a tuturor sistemelor finale de reglare i combatere a formrii spumei, atunci cnd spuma intra n contact cu senzorul 2. De asemenea, dispozitivul este prevzut i cu un sistem pentru ntreruperea ansamblului 7, dup un anumit interval de timp (5 sau 30 minute) dup care revine la poziia iniial. Parile operatorii ale sistemelor mecanice de distrugere a spumei, pot fi bineneles diferite.

1.-senzor 2.-spuma 3.-lichid 4.-sistem de amplificare 5.-electrovalva 6.- rezervor de lichid antispumant 7.-sisteme de egalizare a presiunii Figura .3.18.Reprezentarea schematic a unui sistem automat de control al formrii spumei i reglare

94

Figura3.19. Schema unei instaltii de control al formrii spumei 1 bioreactor; 2 senzor de contact; 3 blocul de control; 4 dispozitiv de conectare a sistemului mecanic de spargere a spumei; 5, 6 sisteme finale de introducere a antispumantilor; 7, 8, 9 declanatoare ale dispozitivelor de combatere a formrii spumei; 10, 11 dispozitive de prevenire a conectrii simultane a tuturor sistemelor de reglare i combatere a formrii spumei;12, 13 circuite logice; 14, 15 rezervoare cu antispumani. 6.Reglarea automat a oxigenului Oxigenul constituie unul din parametrii chimici de bazpentru majoritatea proceselor biochimice industrial influennd n mod decisive numeroase microorganism, nct dezvoltarea multora dintrea acestea este condiionat. Reglarea automat a oxigenului se face prin intermediul senzorului Mancy.Este un sensor de tip galvanic, const n eliminarea complet a rezervorului cu electrolit.ntreaga cantitate de electrolit se gsete sub forma unui film plasat ntre electrozi i membrane permeabil pentru O2. Suprafaa relative mare a catodului din argint face posibil msurarea semnalului analitic prin conectarea direct a senzorului la un ampermetru. Datorit acestui principiu constructive, senzorul nu prezint rspuns histerezis.n schimb acest sensor prezint o mare dependen a semnalului analitic fa de micarea lichidului probei de analizat.Astfel, pentru o aceeai prob, s-a constatat un rspuns al senzorului de aproximativ 20 ori mai mare, n condiii de agitare comparative cu proba neagitat.[10]

95

3.2. Controlul de calitate 3.2.1. Metode de analiza a materiilor prime si a materialelor intermediare 1. Extractul de porumb Metoda de analiza a aminoacizilor aminoacizii, n prezena ninhidrinei, formeaz un compus albastru violet, care prezint un maxim de absorbie la 570 nm sau prin descompunere enzimatic ionii de amoniu formai pot fi dozai spectrofotometric, permind dozarea direct a azotului din aminoacizi (metode spectrofotometrice). Cromatografia cu gradient de pH st la baza funcionarii unor analizoare automate pentru aminoacizi (figura nr.3.20.).

Figura nr.3.20.Principiul constructiv al unui analizor de aminoacizi cu eluie n gradient de pH 1 coloana cromatografic termostata; 2 rezervor cu soluie tampon de pH; 3 soluie cu reactiv de culoare pentru determinarea spectrofotometrica a aminoacizilor (ninhidrina); 4 camera de amestecare; 5 serpentina pentru rcire; 6 spectrofotometru ; 96

7 nregistrator; 8 pompe; 9 proba de analizat. Aceste analizoare folosesc n general separarea pe o coloana cromatografic termostatata (1) umplut cu schimbatori de ioni, iar eluarea se face cu soluie tampon (2), cu diferite valori ale pH ului, dup un program prestabilit obinerea unui gradient de pH cu rezoluie maxim, ntr-un timp minim. Detecia se efectueaz spectrofotometric, pe baza reaciei de culoare pe care o dau aminoacizii eluai de pe coloana, cu ninhidrina.

Absoria optic a compusului dorit se masoar la 440 si 570 nm cu un spectrofotometru cu dublu fascicul (6), iar semnalul analitic obinut care e direct proporional cu concentraiile diferiilor aminoacizi din proba de analizat, se nregistreaza grafic cu ajutorul unui nregistrator. 2. Glucoza Reactivii folosii pentru analiz trebuie sa fie de calitateapentru analiza(p.a.) sau de calitate echivalent. Apa trebuie sa fie distilat. 2.1.Examenul organoleptic Examenul organoleptic se face asupra probei aduse la temperatura de 20oC. Pentru verificarea aspectului, culorii i a corpurilor strine, o parte din proba de glucoza lichid se introduce ntr-un vas de sticl incolora cu diametrul de 7-12 cm, iar proba de glucoza solid se secioneaz cu un cuit n buci de cca. 250 g. Verificrile respective se fac la lumina natural a zilei sau la o surs de, pe fondul unei hrtii albe. Gustul i mirosul se apreciaz asupra probei respective prin degustare i mirosire. 2.2. Determinarea culorii glucozei Principiul metodei. Se adaug soluia de iod 0,1 n n ap, n condiii determinate, pn se obine o culoare identic cu cea a glucozei lichide de analizat.

97

Mod de lucru.ntr-un pahar de laborator se introduc 100 ml din proba de glucoza lichid. ntr-un alt pahar identic se introduc 100 ml ap, n care se adaug cu ajutorul unei biurete, pictur cu pictur, soluie de iod, pn cnd coloraia din cele doua pahare este identic. Compararea se face la volume egale de lichid. Coloraia celor 2 pahare se constat cu ochiul liber la lumina zilei, pe fondul unei hrtii albe. Exprimarea rezultatelor. Culoarea se exprim prin volumul soluiei de iod 0,1 n folosit pentru egalarea culorii, n ml. 2.3. Determinarea aciditii Principiul metodei. Proba de analizat, dizolvata n ap, se titreaz cu hidroxid de sodiu, soluie 0,1 n n prezena de FF soluie 1% n alcool etilic 70% vol. Mod de lucru. Se masoar cu pipeta 100 ml din soluia de lucru obinut anterior i se introduc ntr-o capsul de porelan. Se titreaz cu soluie de hidroxid de sodiu n prezena FF, pn la apariia coloraiei roz, care persist timp de 1 minut. Se execut n paralel 2 determinri din aceeai soluie de lucru. Calcul. Aciditatea se exprim n grade de aciditate. 1 grad de aciditate reprezint volumul n ml de soluie de NaOH n, necesar pentru neutralizarea acizilor liberi din 100 g produs. Determinarea umiditii se face prin: metoda picnometric, obligatorie n caz de litigiu i metoda refractometric, rapid. Metoda picnometric Principiul metodei. Se determin cu ajutorul picnometrului densitatea soluiei de glucoza de 20 g/100 ml i n funcie de aceasta se stabilete coninutul de substan uscat i respectiv de umiditate. Mod de lucru. Se umple picnometrul cu soluie de lucru obinut anterior i se ine n termostat 30 min la temperatura de 20oc. se densitatea conform STAS 184/2-71, iar din tabel se deduce coninutul n substan uscat, corespunzator densitii relative determinate. Calculul : %s.u.= 100-Su n care s.u. reprezint coninutul de substan uscat , n % citit n tabelul din anexa A. Metoda refractometric

98

Principiul metodei. Se citete la refractometru coninutul de substan uscat solubil (exprimat n zaharoz) din soluia de glucoz cu concentraia de 20 g/100 ml i n funcie de acesta se stabilete coninutul de substan uscat i respectiv de umiditate. Mod de lucru. Pe prisma fix a refractometrului se picur cu ajutorul unei baghete 2 sau 3 picturi din soluia de lucru obinut anterior i se nchid prismele imediat. Se deplaseaz ocularul pn la suprapunerea reperului cu linia de separare a celor dou cmpuri. Apoi se citete direct coninutul de substan uscat a substanei de lucru. Se efectueaz dou determinri din soluia de lucru. Calcul . Coninutul de substan uscat al probei de analizat, exprimat n %, se calculeaz cu relaia:

n care: c- coninutul de substan uscat citit la refractometru. %. v- volumul soluiei obinute, ml. m- masa probei de analizat luate pentru pregtirea soluiei de lucru. 3 .Sulfat de Zinc, tehnic Determinarea coninutului de zinc Metoda polarografic Principiul metodei.Proba se dizolv n ap i se aciduleaz cu acid pentru oxidarea fierului. Dupa separarea fierului, zincul se polarografiaz n mediu amoniacal, ntre 1,0 v i 1,5 v.78 Aparatura Polarograf i accesorii. Reactivi:acid azotic d = 1,40 diluat 1+1 amoniac, sol d = 0,91 gelatin, sol 1% preparat la 60C - proaspat preparat .soluie de baz - ntr-un balon cotat de 1000 ml se introduc 20g clorur de amoniu i 80 ml amoniac sol. d = 0,91, se aduce la semn cu apa .soluie etalon de zinc - ntr-un pahar Berzelius de 150 ml se dizolv 0,4g zinc metalic intr-un amestec format din 10ml acid sulfuric d = 1,84 diluat 1+1 si 1 ml

99

acid azotic d = 1,40 diluat 1+1. Se fierbe pentru dizolvare complet i eliminarea vaporilor nitroi. Soluia se trece ntr-un balon cotat de 1000 ml. Se adauga 25 ml soluie d = 0,91, 100 ml soluie de baz i 20 ml soluie 1% de gelatin. Se aduce la semn cu ap. 1 ml soluie etalon conine 0,0004 g zinc. Modul de lucru ntr-un pahar Berzelius de 250 ml se introduce 1 g proba de analizat i se dizolv n 30 ml ap 5 ml acid azotic. Se fierbe pentru oxidarea fierului i eliminareavaporilor nitroi.Dup rcire, soluia se trece ntr-un balon cotat de 500 ml i se adaug 25 ml soluie de ammoniac, 50 ml soluie de baza,10 ml soluie de gelatin Se aduce la semn cu ap. Se las s se depun hidroxidul de fier. Soluia se introduce n vasul pentru polarografiere. Se adaug circa 1 g sulfit de sodiu, se agit i se las 5 minute n repaus.Se polarografiaz fa de electrodul saturat de calomel ntre 1 V si 1.5 V. n aceleai condiii se polarografiaz i un volum egal de soluie etalon. Se msoar nlimea treptei polarografice a probei de analizat i a soluiei etalon. 4. Sulfat de sodiu anhidru tehnic Determinarea coninutului de sulfat de sodiu Principiul metodei Ionul sulfat se precipit sub forma de sulfat de bariu, care se determin gravimetric. Reactivi: acid azotic d= 1,4 acid clorhidric 10% azotat de argint, soluie 1% clorur de bariu, soluie 10%. Modul de lucru Din prob se introduc 25 ml ntr-un pahar Berzelius i se adaug 250 ml ap.Soluia se aciduleaz cu 5 ml acid clorhidric, se nclzete la fierbere, apoi se adaug pictur cu pictur, sub continu agitare, 20 ml soluie de clorur de bariu. Se fierbe circa 10 minute.Se las s se depun precipitatul de sulfat de bariu, circa 30 minute dup care se controleaz dac precipitarea este complet - prin adaos de 1 ml soluie de clorura

100

de bariu. Se las s se depun precipitatul minim 4 ore. Se filtrez prin hrtie de filtru cu porii mici i precipitatul se spal cu ap fierbinte pn la dispariia ionilor clor n filtrat. Hrtia de filtru cu precipitat se introduce ntr-un creuzet de porelan, adus n prealabil la mas constant la 800C, se arde apoi se calcineaz la 800C, n etuv, pn la mas constant. 5. Carbonat de calciu precipitat Determinarea coninutului de Carbonat de calciu Reactivi - acid clorhidric, n. - hidroxid de sodiu, sol. 0.5 n - fenolftalein, sol 1% in alcool etilic sol 96% vol .- metiloranj, sol 0.1 % Mod de lucru Circa 1 gram din proba uscat se introduce cantitativ ntr-un vas Erlenmayer de 300 ml. Se adaug 100 ml ap lipsit de dioxid de carbon i se amestec prin agitarea vasului timp de 3 minute. Se adaug 2 picturi soluie fenolftalein, apoi, acid clorhidric pictur cu pictur, sub agitare, pn la virarea culorii indicatorului.Se adaug 40 ml acid clorhidric, exact msurai, se fierbe timp de 10 minute i se rcete. Se adaug 2 picturi soluie metiloranj i se titreaz excesul de acidclorhidric cu soluie de hidroxid de sodiu. Titrarea este considerat terminat atunci cnd, prin adaugarea unei picturi de soluie de hidroxid de sodiu, indicatorul vireaz de la portocaliu la galben. Aceast picatur se scade din volumul de soluie de consumat pentru titrare .ntre dou determinri paralele se admite o diferen de maxim 0,5 % n valoarea absolut. 6.Azotat de amoniu, tehnic Principiul metodei hidroxid de sodiu

101

Azotatul

de

amoniu

reacioneaz

cu

aldehida

formic

cu

formare

de

hexametillentetramina.Acidul azotic pus n libertate se titreaz cu hidroxidul n prezen de fenolftalein. Reactivi aldehida formic, soluie 16%, neutralizat cu sol 0,1 n de hidroxid de sodiu n prezen de fenolftalein - fenolftaleina, soluie 1% in alcool etilic 96% vol. - hidroxid de sodiu, sol 0,1 n - rou de metil, sol 0,1% n alcool etilic 96% vol. Modul de lucru Din proba de azotat de amoniu se iau 5g i se introduc ntr-un balon cotat de100 ml i se completeaz cu ap pn la semn. Din aceast soluie, se iau cu o pipet cte 25 ml i se introduc n doua vase Erlenmayer de 200 ml. n primul vas, se adaug una sau dou picturi de soluie de rou de metil i dac este cazul se neutralizeaz cu soluie de hidroxid de sodiu. n al doilea vas, se adaug volumul de soluie de hidroxid de sodiu adugat n primul vas pentru neutralizarea soluiei - fr soluia de rou de metil, 10 ml soluie de aldehid formic masurai cu cilindrul gradat i 5...7 picturi de fenolftalein. Se agit i se las s stea 5 minute, pentru terminarea reaciei de formare a hexametilentetraminei i elibereaz acidul azotic. Se titreaz cu soluie de hidroxid de sodium pn la coloraia slab roz, persistent.

7.Tiosulfat de sodiu Reactivi iod, sol. 0,1 n amidon, sol. 0,5 % Preparare: se dizolv prin agitare continu 0,5 g amidon n 10 ml acid salicilic soluie 0,1 %. Se adaug 3040 ml ap clocotit i se fierbe pn la dizolvarea amidonului. Dup rcire se completeaz cu ap pn la 100 ml.

102

Mod de lucru 10 ml proba tiosulfat de sodiu n ap i se trece cantitativ ntr-un balon cotat de100 ml, se adduce la semn cu ap i se omogenizeaz. Se iau cu pipeta 10 ml proba, se introduce ntr-un vas Erlenmeyer de 300 ml i se adaug circa 40 ml ap. Se titreaz cu o soluie de iod n prezen de amidon, pn cnd apare o coloraie albastr care se menine timp de un minut. 8.Carbonat de potasiu tehnic Determinarea coninutului de sulfai Principiul metodei: Precipitarea ionului sulfat cu clorur de bariu i dozarea gravimetric a acestuia ca sulfat de bariu. Reactivi: acid azotic d = 1,4 acid clorhidric d = 1,19 azotat de argint, sol. ,5 % acid sulfuric d = 1,84 clorur de bariu, sol. 10 % metiloraj sol. 0,1 % Mod de lucru Din soluia pregtit se iau 50 ml i se introduce ntr-un pahar de 200 ml.Se adaug 2-3 picturi de soluie de metiloranj, se neutralizeaz cu acid clorhidric pn la virarea indicatorului,apoi se adaug 1 ml acid clorhidric n exces. Se fierbe soluia cateva minute, apoi n soluia cald se adaug n fir subire, 25 ml soluie de clorur de bariu. Se fierbe nc 2 - 3 min. Se las s se depun pn a doua zi. Se filtreaz apoi prin hrtie de filtru cu porozitate mic i se spal precipitatul cu ap cald pn cnd filtratul nu mai d reacia ionului clor (verificarea cu soluie de azotat de argint, n prezena de acid azotic). Filtrul cu precipitat se introduce ntr-un creuzet de platin sau de porelan, adus n prealabil la mas constant prin calcinare n cuptor electric, la cca. 800C. Precipitatul se usuc n etuv la 105 2 C, apoi se carbonizeaz hrtia pe becul de gaz, avnd grij ca hrtia s nu ard cu flacar. Se calcineaza creuzetul n cuptorul electric la

103

800C, timp de 30 de minute. Se rcete creuzetul n exicator i apoi se cntarete. Se repet operaiile de uscare, rcire i cntrire pn la mas constant. Dac precipitatul calcinat are o culoare cenuie, se adaug o pictur de acid sulfuric i se calcineaz din nou nca 15 minute. 9.Acetat de n-butil Principiul metodei. Saponificarea esterilor cu soluie alcoolic de KOH i titrarea excesului de KOH cu HCl, n prezena FF ca indicator. Mod de lucru. ntr-un vas conic de 250 ml cu gtul slefuit se introduc 50 ml soluie de KOH i se cntarete la balana analitic. Se introduc apoi 5 ml proba i se cntrete din nou la balana anlitic, determinndu-se prin diferena, cantitatea de prob. Vasul se racordeaz la un refrigerent cu reflux, rcit cu ap i se nclzete la fierbere timp de 1 ora pe baia de ap. Apoi se rcete vasul i se spal interiorul refrigerentului i sliful de doua ori cu cate 20 ml ap, care se prinde n vasul cu proba. Se adaug 0,5 ml soluie de FF i se titreaz excesul de KOH cu HCl pn la dispariia culorii roz. 10.Cloroform Principiul metodei. Cotinutul de cloroform se determin prin metoda gazcromatografic. Componenii din proba de analizat se identific prin compararea timpilor de reinere a fiecrui component de pe cromatograma probei cu cei ai unui amestec etalon cu compoziie cunoscut i care conine toi componenii prin metoda normrii interne. Mod de lucru. ntr-o eprubeta colorimetric cu dop slefuit, splat n prealabil cu aicid sulfuric, se introduc, cu ajutorul unei pipete, 10 ml prob. Se adaug 10 ml acid sulfuric, se agit 30 minute, apoi se las n repaus la ntuneric timp de 60 minute, dup care se examineaz stratul de acid sulfuric.

104

3.2.2. Metode de analiza a produsului finit Pentru analiza Penicilinei V sare de potasiu se folosete ca microorganism: Staphylococcus aureus ATCC 6538 P. Medii de cultur pentru: - ntreinerea tulpinii de microorganisme-test (A) - obinerea suspensiei-stoc de spori (B) - treceri zilnice (C) Medii de cultur pentru determinarea activitii microbiologice a antibioticului: - strat inferior (i) - strat superior (s) Concentraia suspensiei de microorganisme-test (n microorganisme-test/ml): Solveni pentru prepararea soluiei-stoc (standard i proba): tampon fosfat pH = 7,0 Solveni pentru prepararea diluiilor de lucru (standard i proba): tampon fosfat pH = 7,0 Timp de conservare a soluiei stoc (standard i proba) la 4oC: 3 zile n mediul de cultur prevzut mai sus pentru a forma stratul inferior al mediului de cultura folosit pentru determinarea activitii microbiologice a antibioticului, topit i rcit la 50oC, n cazul suspensiei de microorganisme-test n form vegetativ sau rcit la 60oC n cazul suspensiilor de microorganisme-test n form sporulat, se introduce un ml de suspensie de microorganisme-test pentru 100 ml mediu de cultur i se amestec pentru omogenizare. Concentraiile suspensiilor de microorganisme-test, obinute prin diluie, conform prevederilor anterioare, necesare nsmnrilor sunt prevazute mai sus. 5 ml mediu de cultur nsmnat se aduc peste stratul inferior de mediu de cultur solidificat n plcile Petri, astfel ncat s se formeze un strat superior uniform ca grosime. Dup solidificarea stratului superior se aeaz pe suprafaa acestuia la o distan de aproximativ 28 mm de centrul plcii Petri i la o distan egal unul fa de celalalt, patru cilindri din hotel inoxidabil sau dintr-un alt material adecvat, cu diametrul interior de 7 mm i cu nlimea de 10 mm. Se efectueaz cate 3 cntriri att din antibioticul standard ct i din cel de analizat. Din fiecare cntrire se prepar soluiile-stoc i soluiile de lucru. Se folosesc cte 6 placi Petri. Diluiile de lucru se introduc n cei 4 cilindri din fiecare din plcile Petri, dup cum urmeaz: n primele 6 plci Petri, n cei 2 cilindri se introduc cte 0,4 ml I-A I-C

105

din prima soluie standard de lucru i n ceilali 2 cilindri cte 0,4 ml din prima diluie proba de lucru. n celelalte 6 plci Petri se procedeaz n mod identic cu cea de-a doua diluie de lucru (standard i proba). Plcile Petri se nchid, se incubeaz la termostat la 35-37oC timp de 18 ore i se masoar diametrul zonelor de inhibiie a creterii microorganismelor-test, produse att de diluiile standard de lucru ct i de diluiile-prob de lucru. Determinarea se efectueaz cu o precizie de 0,1 mm, folosind un instrument adecvat de msurare. Intrepretarea rezultatelor. Se calculeaz media aritmetic a diametrelor zonelor de inhibiie pentru fiecare diluie de lucru i se procedeaz conform prevederilor de la Evaluarea statistic a determinrilor biologice-Calculul activitii biologice prin evaluarea indirect-Metode bazate pe rspunsuri gradate. Proba de analizat este corespunzatoare dac activitatea microbiologic a acesteia este de cel putin 90% i de cel mult 110% fa de activitatea microbiologic a penicilinei V.. Limitele de eroare sunt cuprinse ntre 80 si 125%.

106

Cap.4 Utiliti Utilitile folosite n procesul de producie al penicilinei V sunt: -energia electrica -aburul -apa -aerul comprimat Toate utilitile sunt considerate ca fcnd parte din sfera produselor energetice ale unei ntreprinderi. Energia electric Aceasta reprezint una din formele de energie cele mai folosite n industria chimic datorit uurinei de transport la distane mari cu care poate fi transformat n energie mecanic, termic sau luminoas.Energia electric transformat n energie mecanic este utilizat la acionarea electromotoarelor cu care sunt dotate: pompele i reactorul Aburul Vapori de ap sunt cei mai utilizai ageni termici pentru nclzire. Realizarea unor temperaturi peste 200C necesit presiuni mai mari de 35 atmosfere, ceea ce conduce la creterea cheltuielilor de investiie. Funcie de presiunea pe care o are la ieirea din generator aburul poate fi: abur umed, abur saturat, abur supranclzit.Aburul umed conine picturi de ap i rezult de la turbinele cu contra presiune sau din operaiile de evaporare, ca produs secundar. Este cunoscut sub denumirea de abur mort.Aburul saturat este frecvent folosit ca agent de nclzire, avnd cldur latent de condensare mare i coeficienii individuali de tranfer de cldur mari. Temperatura aburului saturat poate fi reglat uor prin modificarea presiunii.nclzirea se poate face direct , prin barbotare, sau indirect, prin intermediul unei suptafee ce separ cele dou fluide.Aburul supra nclzit cedeaz cldur,n prima faz cldur sensibil de rcire, pn atinge temperature de saturaie, cnd coeficientul individual de transfer de cldur este mic i apoi cldur latent prin condensare. Apa cu agitare mecanic. Se utilizeaz energie electric pentru iluminatmonofazat i pentru motoare-trifazat

107

Se utilizeaz apa pentru rcirea masei de reacie n timpul fermentaiei. Apa de rcire poate proveni din fntni de adncime, temperatura ei se menine ntre 10 - 15C tot anul, sau apa de la turnurile de rcire, cnd se recircul avnd temperatura n timpul verii 25 30 C. Pentru rcirea coninutului de suspensii se realizeaz coagularea, decantarea sau filtrarea apei nainte de a fi utilizat n instalaii. Pentru evitarea formrii crustei, temperatura apei la ieire din aparate nu trebuie s depeasc 50C. Rcirile cu ap industrial se pot realiza pn la 35-40C. Apa este un agent termic cu capacitate caloric mare, uor de procurat. Se utilizeaz i: apa de incendiu, apa potabil, apa tehnologic. Aerul comprimat Aerul comprimat se utilizeaz n urmtoarele scopuri: materie prim tehnologic; amestecare pneumatic; uscare; diferite scopuri: curirea utilajelor; purttor de energie (pentru acionarea aparatelor de msur i de reglare, n atelierul mecanic etc.)

108

Cap.5. Produse secundare, deeuri de fabricaie, epurarea apelor reziduale

Din tehnologia obinerii penicilinei V prin fermentaie discontinu, pe lng produsul principal apar n diferite etape produse secundare i deeuri de fabricaie. Principalul deeu rezultat n procesul de biosintez a penicilinei V este miceliul separat prin filtrarea lichidului de fermentaie. Miceliul se usuc, se trateaz cu un mediu alcalin, se amestec cu lisin sau extract vitaminic obinnd o mas proteic valoroas pentru zootehnie. Procesul de epurare const n ndeprtarea din apele uzate a substanelor toxice, a microorganismelor, n scopul proteciei mediului nconjurtor.Evacuarea apelor uzate neepurate n mod necorespunztor poate prejudicia sntatea public.Ca o prim msur STAS 1481-76, prevede ca apele uzate s fie evacuate ntotdeauna naval de punctele de folosin.Epurarea apelor uzate se realizeaz n staii de epurare; acestea fac parte integrat din canalizarea oraului sau industriei, mrimea lor fiind determinat de gradual de epurare necesar, de debitele i caracteristicile apelor uzate, de folosinele prezente i viitoare ale apelor. Epurarea apelor uzate se poate realize prin metode ce se bazeaz pe procese fizice, chimice i biologice, care difer n funcie de tipul poluanilor i concentraia lor n apa uzat.Se poate face o clasificare a acestor metode lund n considerare tipul procesului care st la baza metodei de epurare: Epurare mecanic Epurare chimic Epurare biologic Epurare avansat Considernd operaiile i procesele unitare necesare pentru a realiza ndeprtarea poluanilor ntr-un anumit stadiu al sistemului de epurare n: Epurare primar Epurare secundar Epurare teriar (avansat)

109

Apele uzate industriale sunt admise n reeaua de canalizare a oraului numai dac ndeplinesc anumite condiii.Este interzis evacuarea n reelele de canalizare orenetia apelor reziduale industrial ce conin: suspensii sau alte materiale care se pot depune-corpuri solide, solide plutitoare sau antrenate care nu trec prin grtarul cu spaiul liber de 20 mm ntre bare-corpuri solide antrenate, dure care pot genera zone de corodare a colectoarelor -pcur, uleiuri, grsimi care pot genera aderen pe pereii colectorului -substane care provoac fenomene de coagulare -substane cu agresivitate chimic asupra materialului de construcie a colectorului i staiei de epurare -substane ca: benzin, benzen, eter, cloroform, acetilen, hidrocarburi clorurate,etc., care prin evaporare pot provoca amestecuri detonante -substane nocive care pot pune n pericolpersonalul de deservire al staiilor de epurare - substane inhibitoate ale procesului de epurare care ar putea prejudicial funcionarea instalaiilor de epurare biologic sau a celor de fermentare a nmolului - ape cu temperature de peste50C. O alt surs de poluare este reprezentat de eliminarea de gaze, CO2 i aer de cele mai multe ori amestecat cu particule lichide sau solide.Prin interaciunea chimic a acestor substane cu diferite forme fizice ale apei pot rezulta uneori substane chimice foarte toxice.

110

Cap.6 Transport, ambalare, depozitare

Glucoza Se ambaleaz, pentru desfacere, n hrtie pergaminat i apoi n hrtie velin. Ambalajele de transport pentru glucoza solid sunt lzi de lemn cptuite cu material corespunztor, iar pentru glucoza lichid, butoaie de metal sau de material plastic. Toate ambalajele de desfacere i transport trebuie s corespund normelor legale sanitare n vigoare. Abaterea admis la coninutul net al ambalajelor de desfacere este de 10 g.Glucoza se depoziteaz n magazii curate, uscate, dezinfectate, lipsite de miros strin i aerisite, avnd temperatura de max. 20C i umiditatea relativ a aerului de max. 70%. Transportul glucozei se face n vehicule acoperite, curate, dezinfectate, uscate i fr miros strin. Azotat de amoniu tehnic, granulat Se amabaleaz n saci de polietilen nchii prin sudur. Viza organului de control tehnic al calitiia ambalajelor se face prin ablonare sau etichetare cu urmtoarele specificaii: -marca de fabricaie a ntreprinderii productoare -denumirea produsului de calitate STAS 2126-84-masa net-numrul lotului -data livrrii -data fabricaiei -termenul de garanie. Depozitarea azotatului de amoniu se face n stive, de max. 20 saci, pentru tipul I i de max. 10 saci pentru tipul II, n magazii special amenajate, pentru acest produs.Magaziile vor fi curate, uscate i fr alte surse de nclzire, dect cele ale instalai ilor de condiionare. Temperatura n timpul depozitrii nu trebuie s depeasc valorile cuprinse ntre -15C i +30C. Azotatul de amoniu nu se depoziteaz la un loc cu alte materiale.Pentru transportul azotatului de amoniu, se folosesc vehicule acoperite, uscate i curate. 111

Manipularea, depozitarea i transportul azotatului de amoniu, tehic, granulat, se face n conformitate cu legile, regulamentele i instruciunile n vigoare privind tehnica securitii muncii pentru produse comburante.Fiecare lot de livrare va fi inso it de documentul de certificare a calitii ntocmit conform dispoziiilor legale n vigoare. Carbonat de calciu precipitat tehnic Se ambaleaz n saci de hrtie, curai, legai cu srm. Sacii se marcheaz vizibil prin ablonare sau etichetare, cu urmtoarele specificaii: -marca de fabric; -denumirea produsului, tipul i STAS 1083-76; -masa net; -numrul lotului; -semnul organului de control tehnic al calitii (CTC). Carbonatul de calciu precipitat, tehnic se depoziteaz n locuri curate, ferite de umezeal.Transportul produsului se face cu mijloace de transport curate i acoperite. La documentele de transport se va anexa un certificat de calitate ntocmit conform dispoziiilor legale n vigoare. Tiosulfat de sodiu Tiosulfatul de sodiu cristalizat, tehnic, se ambaleaz n butoaie din hrtie nfurat STAS 5537-65, sau n butoaie din fag STAS 1648-71. Se admite folosirea i a altor ambalaje numai dac ele se ncadreaz n prescripiile respective prevzute de legislatia n vigoare.Ambalajele se eticheteaz n mod vizibil i durabil cu urmtoarele specificaii: -marca de fabric -denumirea produsului, calitatea i STAS 1817/2-75 -numrul lotului i data fabricaiei -masa brut i tara -semnul organului de control tehnic al calitii (CTC) -termenul de garanie. Tiosulfatul de sodiu cristalizat, tehnic se depoziteaz n ncperi uscate, n care temperatura nu depete 30C. 112

Transportul produsului se face numai cu mijloace de transport acoperite.La documentele de transport se va anexa un certificat de calitate ntocmit conform reglementrilor legale n vigoare. Cloroform Cloroformul se ambaleaz astfel: Tipul A n damigene de sticl, de culoare nchis sau vopsite n negru, nchise cu dopuri de plut nvelite n foi de staniol sau n celofan i apoi parafinate. Damigenele de sticl se introduc n couri de nuiele i se protejeaz cu un strat de paie sau tala. Sau cisterne de oel. Tipul B n cisterne de oel sau bidoane de polietilen. Ambalajele trebuie s fie curate, uscate i nchise etan. Ambalajele vor fi marcate cu urmtoarele specificaii: -marca de fabric a ntreprinderii productoare -denumirea produsului, tipul, calitatea, STAS 330-82 -masa net-numarul lotului -data fabricaiei -termenul de garanie -viza organului de control tehnic al calitii (CTC). -semnele avertizoare pentru produse toxice, produse care trebuie ferite de umezeal i produse care trebuie pstrate la rece, conform STAS 5055-66. Manipularea, depozitarea i transportul cloroformului se face cu respectarea normelor de tehnic a securitii muncii referitoare la produsele toxice. Cloroformul se depoziteaz n ncperi, ferite de lumin, de umiditate i de cldur,pentru a evita descompunerea produsului cu formare de fosgen (foarte toxic).Transportul se face cu mijloace de transport acoperite.Fiecare lot de livrare va fi nsoit de documentul de certificare a calit ii ntocmit conform dispoziiilor legale n vigoare.

Acid sulfuric tehnic

113

Pn la stabilirea ambalajelor i materialelor de ambalare pentru acidul sulfuric tehnic, prin normativul de ambalare pe produse i grupe de produse destinate consumului intern, aprobat de organul central coordonator, acesta se livreaz n cisterne de o el, butoaie i baloane de sticl,curate i uscate, sau alte ambalaje convenite ntre pari cu condiia meninerii integritii produsului. Butoaiele de oel vor fi prevzute cu dopuri de oel,filetate, cu garnituri de azbest i vor fi plumbuite. Baloanele de sticl vor fi prevzute cu dopuri etane cu ipsos. Baloanele de sticl vor fi protejate cu un strat de vat mineral i introduse n couri metalice, prevzute cu capace de protecie i mnere. Marcarea ambalajelor se face prin ablonare sau etichetare cu urmtoarele specificaii: -marca de fabric a ntreprinderii productoare -denumirea produsului, tipul, STAS 97-80 -masa brut -tara -viza organului de control tehnic al calitii (CTC). -semnul avertizor pentru produse corosive, STAS 5055-66-PRODUS COROSV, A SE MANIPULA CU ATENIE. Manipularea, depozitarea i transportul acidului sulfuric tehnic se fac cu respectarea normelor de tehnic a securitii muncii, referitoare la produsele corosive. Se interzice transportul altor produse (inclusiv acid sulfuric rezidual) n cisternele destinate transportului de acid sulfuric tehnic.Fiecare lot de livrare va fi nsoit de documentul de certificare a calitii, ntocmit conform dispoziiilor n vigoare.[8]

Cap.7 Norme de protecia muncii i PSI

114

Protecia muncii cuprinde totalitatea msurilor luate pentru a se asigura tuturor oamenilor muncii condiii bune de munc, pentru a-i feri de accidente i boli profesionale. Protecia muncii face parte integrant din procesul de munc. n industria chimic problema proteciei muncii este deosebit de important deoarece pe lang factorii de periculozitate comuni cu alte ramuri industriale elemente mobile (periculoase) ale utilajelor , aciunea curentului electric, degajri importante de cldur, zgomote i trepidaii intervin i numeroi factori specifici industriei chimice, cum ar fi: degajri de substane toxice; prezena frecvena a unor substane inflamabile; posibilitatea exploziilor cauzate de amestecuri explozive; operaii cu lichide agresive care pot provoca arsuri chimice; temperaturi ridicate. Protecia muncii are urmtoarele trei aspecte: protecia juridiar a muncii reprezentat de legislaia referitoare la protecia muncii, legislaie constituit n principal din: Codul muncii, Legea nr. 5/1965 cu privire la protecia muncii, HCM nr. 12896/1966 cu privire la accidentele de munc, Legea nr. 1/1970 privind organizarea i disciplina muncii, Decretul 400/1981, alte HCM, decretate elaborate de Consiliul de Stat, instruciuni i ordine elaborate de ministere; protecia sanitar a muncii cuprinde msurile pentru crearea unor condi ii fiziologice normale de munc i de suprimare a riscului mbolnvirilor profesionale; protecia tehnic a muncii const n msuri tehnice i organizatorice pentru uurarea muncii i prevenirea accidentelor de munc. Normele de tehica securitii muncii elaborate de M.I.Ch. sunt grupate n 6 capitole: a) Tehnica securitii muncii la instalaii, aparate i maini. b) Tehnica securiti muncii la ntreinere, reparaii i intervenii. c) Tehnica securitii muncii pentru procese fizice i chimice. d) Tehnica securitii muncii la depozitare. e) Tehnica securitii muncii la manipulare, ambalare i transport. f) Tehnica securitii muncii n laboratoare.

115

n ceea ce privete msurile de protecie individual ale muncitorului, pentru a completa msurile tehnice luate n instalaii este necesar s se foloseasc echipamente i materiale de protecie individual prevzute de nornative. Toi cei care conduc i controleaz procesele de producie sunt obligate s nu permit executarea nici unei opera ii nainte de a verific dotarea fiecrui muncitor cu toate sortimentele de echipament i materiale necesare. Norme de igien a muncii Normele de igien a muncii se refer la principalii factori profesionali nocivi din mediul de producie. Ele stabilesc valorile limit sau optime ale acestor factori, valori care, respectate previn mbolnvirile profesionale i asigur condiii normale de lucru. n aceste norme sunt tratate probeme referitoare la efortul fizic (mase maxime admise la ridicat, distanele de transport manual, etc.), micriclimatul ncperilor de lucru (temperatura, umiditate, viteza curenilor de aer, radiaii termice, etc.) precum i prevenirea mbolnvirilor profesionale i a accidentelor de munc provocate de gaze, vapori i pulberi. Se dau concentraiile maxime admise (CMA) n atmosfera zonei de lucru, n mg/m3 aer, la circa 400 substane, de asemenea norme referitoare la iluminat, nivel de zgomot i vibraii. Msuri P.S.I. Incendiile i exploziile se produc numai atunci cnd sunt prezente n cantit i suficiente trei elemente: substana combustibil, oxigenul i cldur. Cauzele principale ale incendiilor i exploziilor se datoresc, pe de o parte aprinderii, iar pe de alt parte nerespectrii parametrilor procesului tehnologic, lipsei de instructaj, de atenie, de curenie, etc. Exploziile pot fi provocate de depirea instantanee a limitei de rezistena a pereilor vaselor (cazane, butelii de gaze, reactoare, rezervoare, etc.) produs de presiunea gazelor sau vaporilor. Exploziile produse de gaze combustibile, vapori sau praf n amestec cu oxigenul au loc numai la anumite concentraii, care variaz cu presiunea i temperatura amestecului. Incendiul izbucnete ca urmare a depozitrii n secii a unor substane uor inflamabile sau explosive, care depesc cantitile admise, precum i a depozitrii lor 116

necorespunzatoare n ambalaje deteriorate, lang surse de caldur i lipsa de supraveghere a lor. Cea mai frecvent cauz a aprinderii este flacra direct produs de diferite surse. Caldura degajat n cursul unor reacii exoterme, poate constitui de asemenea, o surs de aprindere provocnd incendiul. Deosebit de periculos este contactul acizilor concentrate (H2SO4, HNO3) cu substane combustibile. In timpul desfurrii proceselor tehnologice sunt cazuri cnd incendiile sau exploziile se produc datorit aprinderii substanelor combustibile, fie de la o scnteie electric, fie prin nclzirea exagerat a conductorilor electrici i aprinderea materialului izolant. Incendiile mai pot fi provocate, de asemenea, din cauza electricit ii statice i a descrcrilor atmosferice. Deci, msurile generale prevenirii incendiilor sau exploziilor sunt, n principal, urmtoarele: evitarea sau reducerea substanei combustibile; evitarea sau reducerea sursei de cldur; evitarea sau reducerea oxigenului, aerului sau a substan elor cu un coninut mare n oxigen; mpiedicarea contactului substanei combustibile cu sursa de caldur; controlul permanent al surselor de cldur i cunoaterea caracteristicilor periculoase ale substanelor combustibile; msuri de siguran pentru ecranarea sursei de caldura i oprirea accesului substanelor combustibile n eventuala zon de ardere; controlul automat al concentraiilor de oxigen n zona de pericol. Materiale folosite pentru stingerea incendiilor Materialele stigtoare sunt acele materiale care, folosite ntr-un anumit mod n zona de ardere, acioneaz defavorabil asupra condiiilor necesare arderii, oprind arderea. Materialele stingtoare se folosesc fie n stare gazoas, lichid sau solid, fie sub forma unor amestecuri de lichide cu gaze sau lichide cu substan e solide, nsa procesul i rapiditatea aplicrii sunt factorii hotrtori ai stingerii incendiilor.

117

Cele mai rspandite substane stingtoare, sunt: apa, aburul, soluiile apoase de sruri, bioxidul de carbon, spuma chimic sau mecanic, prafurile stingatoare. Apa folosirea apei la stigerea incendiilor se bazeaz pe propriet ile ei de rcire i izolare termic. Proprietile de racire a apei se datoresc capacit ii de absorbie a cldurii i cldurii latente de vaporizare, care au o valoare important. Rcirea suprafeelor aprinse va fi cu att mai mare, cu ct cantitatea de ap transformat n vapori va fi mai mare. Dei apa posed astfel de calit i pentru stingerea incendiilor, totui domeniul ei de utilizare n acest scop este limitat. Produsele petroliere i dizolvanii organici nemiscibili cu apa, avnd o densitate mai mic, plutesc la suprafa a apei i ard n continuare. Apa folosit la stingerea incendiilor conine sruri, deci ea este bun conducatoare de electricitate, din acest moriv folosirea ei la stingerea incendiilor produse n instalaii de nalt tensiune trebuie s se fac utilizndu-se dispozitive speciale. Unele substane reacioneaz violent cu apa, producnd o degajare mare de cldur i de gaze, care pot da natere incendiilor i exploziilor. Astfel, carbura de calciu (carbidul) reacioneaz cu ap degajnd acetilena i caldura. La stingerea incendiilor se folosesc jeturi de ap compacte sau pulverizate. Aburul stingerea incendiilor cu ajutorul aburului se bazeaz pe reducerea concentra iei de oxigen din zonele de ardere (la o concentra ie a aburului de 35% vol. arderea nceteaz). Folosirea aburului pentru stingerea substanelor gazoase, lichide i solide se face n locurile unde exist instalaii de cazane i sisteme fixe de stingere. n afar de reducerea concentraiei de oxigen din zona de ardere, la stingerea incendiilor contribuie i efectul mecanic al jetului. Acest procedeu se folosete la stingerea incendiului la coloanele de rectificare, la conducte, etc. Soluii apoase de sruri n scopul mbunt irii calitii apei se folosesc ca adaosuri: clorura de calciu, sulfatul de sodiu, sulfat de amoniu, etc. prin evaporarea apei aceste soluii formeaz la suprafaa materialului aprins un strat de sare care se topete, iar n unele cazuri se dezagreg. n urma dezagregrii se degaj gaze necombustibile care reduce concentraia oxigenului n zona de ardere, contribuind astfel la stingerea incendiului. Soluiile de sruri se folosesc la stingtoarele manuale. 118

Bioxidul de carbon nu arde i este un slab conductor de electricitate, ceea ce permite folosirea lui la stingerea incendiilor izbucnite n instala iile electrice. Introdus n zonele de ardere, bioxidul de carbon dilueaz atmosfera, reducnd concentra ia substanei combustibile i a oxigenului din atmosfera de ardere, micornd sau oprind arederea. Bioxidul de carbon nu poate opri arderea pentru o serie de substan e ca bumbacul care poate s ard i n mediu inert. Spumele stingtoare spuma este format din bule de gaz nconjurate de un strat sub ire de lichid. n prezent se folosesc dou feluri de spume: chimice i mecanice (aeromecanice). Spuma chimic este rezultatul unei reacii chimice i se compune din bule de gaz (CO2) care au un nveli din soluii apoase de sruri. Spumele mecanice se realizeaz prin amestecarea mecanic a solu iei. Densitatea spumelor este mic i n consecin plutesc pe suprafaa lichidelor uoare (benzina, petro, esteri, etc) separnd flacra de substan combustibil. Prafuri stingtoare n compozi ia acestor prafuri intr diferite sruri (carbonat de sodiu, bicarbonat de sodiu, alaun, etc.) substan e care prentmpin aglomerarea srurilor (talc, kiselgur, praf de azbest) i substane care contribuie la topirea lor (clorura de sodiu, clorura de calciu). Prafurile stingtoare mpiedic dezvoltarea arderii prin acoperirea suprafe elor solide aprinse cu un strat izolator care prin topirea sri contribuie mai active la stingerea incendiului. Degajarea unor sruri, produce gaze incombustibile care contribuie la stingerea incendiului. Stingtoarele de incendiu cu praf sunt acionate prin presiunea unui gaz incombustibil (CO2), jetul de praf acionnd mecanic asupra zonei de ardere. Jeturile de praf avnd conductivitate electric mic pot fi utilizate pentru stingerea incendiilor instala iilor electrice.

BIBLIOGRAFIE

119

1 .C.Oniscu, Tehnologia produselor de biosintez, Ed.Tehnic, Bucureti, 1978 2. www.eu5.org 3.Cacaval, Metabolii secundari i bioreactoare, Ed. Bit, Iai, 2004
4.www.scribtube.com

5.STAS-uri i standarde conform Consiliului naional pentru tiin i tehnologie, Institutul romn de standardizare ;
6. www.regielive.ro 7. Anca Irina Galaction, D. Cacaval, Metabolii secundari cu aplicaii farmaceutice,cosmetice i alimentare,Ed. Venus Iai 2006 8. Mihai Dima,Canalizri,Volumul II,Epurarea apelor uzate,1998

9. Ioan t. Bonta,Microbiologie industrial,1996 10. Radu Z. Tudose,Alexandru Tancu,Fenomene de transfer i utilaje n industria chimic,ndrumar de proiectare,1990

120