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COLORACIN DE PAPANICOLAOU Y SU VARIANTE

La tincin de Papanicolaou es un mtodo de tincin policrmico que consta de una tincin nuclear y un contraste citoplsmicos. Tiene como ventaja una buena denicin del detalle nuclear, evidenciando el patrn de cromatina; un aspecto transparente del citoplasma, que permite apreciar los grados de diferenciacin celular y actividad metablica. Colorantes empleados: Existen varias soluciones de Papanicolaous, pero todas son variantes de los siguientes colorantes: Hematoxilina de Harris (EA50, EA65,EA36) Naranja G Eosina La tincin de Papanicolaou tiene cuatro pasos principales: a. Fijacin. b. Tincin del ncleo con Hematoxilina. c. Tincin de citoplasma con Orange G y EA. d. Aclaramiento.

La tcnica utiliza un elevado nmero de colorantes en su procedimiento.

Hematoxilina: es la tincin nuclear escogida, permite bsicamente revelar los ncleos de las clulas presentes en la muestra. Suele usarse Hematoxilina de Harris. Orange G: es un colorante sinttico de carcter cido que revela compuestos bsicos como la prequeratina (que tie de color rosado) o la queratina (que tie de color naranja brillante). Eosina amarillenta: tie de color rosa-anaranjado el citoplasma de las clulas escamosas maduras, de las clulas ciliadas y de los eritrocitos. Verde Luz SF amarillento: tie de color verde-azulado las clulas escamosas no superficiales (inmaduras o a parcialmente maduras). Pardo Bismark R: no tie el citoplasma celular pero si la mucina. cido fosfotngstico: tiene una funcin mordiente, especialmente importante para el Verde Luz SF.

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Al presentar su composicin varios colorantes, es capaz de revelar diferentes tipos de clulas. Estas caractersticas son las que la hacen ptima para estudios de tipo citolgico. La tcnica implica el uso de tres soluciones diferentes, por un lado la correspondiente a la hematoxilina, por otro la que contiene Orange G (solucin de Papanicolaou OG) y la ltima con el resto de colorantes (solucin de Papanicolaou EA). Para lograr una buena preparacin citolgica es necesario que el la toma o recoleccin del material sea adecuada, una correcta y rpida fijacin, y un buen proceso de coloracin. Para la Coloracin de Papanicolaou es necesario que los preparados sean previamente fijados en alcohol 96. El material extendido en el portaobjeto debe fijarse inmediatamente antes que comience la desecacin. Lo ideal es sumergirlo en alcohol 96 no menos de 10 minutos. La tincin de Papanicolaou es una prueba fiable. Requiere de experiencia en la interpretacin de los resultados, el porcentaje de aciertos es muy elevado. Esta prueba ha ayudado a disminuir drsticamente el nmero de mujeres que mueren por causa de cncer cervical. En nuestro pas el Programa de deteccin de cncer cervico-uterino con las pruebas citolgicas peridicas ha ayudado extraordinariamente a reducir esta enfermedad. Otros mtodos computarizados, utilizados en conjuncin con el Papanicolaou, ayudan a la fiabilidad de la prueba, pero aumentan el costo de su utilizacin.

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COLORACIN DE SHORR
La tincin de Shorr se usa solamente en citodiagnstico hormonal en el cual es superior. Permite lograr la diferenciacin neta de las clulas del epitelio vaginal. Tincin nuclear intensa y coloracin citoplasmtica homognea. Tcnica con muy buenos resultados para la evaluacin hormonal de la citologa vaginal. Permite distinguir con gran facilidad las clulas queratinizadas (color naranja brillante) de las no queratinizadas (color azul verdoso). Los ncleos se tien de azul. Adems tambin pueden reconocerse bien otros elementos presentes en las muestras como hemates, bacterias, etc.

Tcnica Fijacin: se prefiere el etanol al 96% o el alcohol-eter al 50%. Soluciones Solucin colorante: Alcohol etlico 50100ml Escarlata de Biebrich .. 0.50mg. Naranja G 0.25g. Verde resistente FCF.0.075g. Acido fosfotndstico..0.50g. Acido fosfomolibdico..0.50g. Acido actico glacial.1.00ml.
Agitar y mezclar todo. Slo se utilizara esta solucin cuando todos los componentes estn perfectamente disueltos. Hematoxilina de Harris

Pasos
Hidratar en alcoholes de graduacin decreciente. Lavados en agua destilada. 20 inmersiones. Hematoxilina de Harris. De 30 segundos a 1 minuto. Lavado en agua corriente. Durante 5 minutos. Lavado en alcohol etlico 70 20 inmersiones. Lavado en alcohol etlico 96 20 inmersiones. Solucin de Shorr durante 1 minuto. Deshidratar, aclarar y montar como en Papanicolaou.

Resultados
Ncleos: de azul a violeta oscuro.

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Citoplasma: de naranja brillante a azul verdoso. Bacterias: azul oscuro

CITOLOGA HORMONAL
La citologa hormonal puede ser empleada para evaluar ciertos aspectos de la condicin hormonal en la mujer.

EVALUACION CITO-HORMONAL
El epitelio pluri-estratificado plano no cornificado, que recubre la vagina y algunos islotes del trgono vesical y de la uretra, son efectores perifricos de los estrgenos y la progesterona. Los estrgenos.- determinan el crecimiento (proliferacin celular), aumento del nmero de capas celulares y aumento de grosor epitelial. La progesterona.- produce disminucin del contenido intracelular del glucgeno y aumenta la descamacin celular de la capa intermedia y superficial.

CUELLO UTERINO
Est compuesto por epitelio cilndrico que reviste el conducto endocervical, y epitelio escamoso que cubre la superficie del exocrvix. El punto de unin de estos dos epitelios se denomina UNION ESCAMOCILINDRICA UNION ESCAMO-COLUMNAR

CORTE HISTOLOGICO DEL EXOCERVIX CELULAS

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EPITELIO ESCAMOSO ORIGINAL DE VAGINA Y EXOCERVIX 1.-CAPA BASAL.-Es una sola fila de clulas madre con grandes ncleos y citoplasma escaso. 2.-CAPA PARABASAL.-Abarca dos a cuatro filas de clulas inmaduras que tienen mitosis para sustituir a las del epitelio suprayacente conforme ste se descama. 3.-CAPA INTERMEDIA.-Abarca 4 a 5 filas de clulas con mayor cantidad de citoplasma, y ncleos vesiculares. Tienen forma polidrica y estn separadas por un espacio intracelular. 4.-CAPA SUPERFICIAL.-Abarca 5 a 8 filas de clulas aplanadas con ncleos pequeos uniformes y citoplasma lleno de glucgeno, el ncleo se vuelve picntico y las clulas se desprenden desde la superficie (exfoliacin). Estas clulas constituyen la base en la interpretacin de la respuesta estrognica.

ACTIVIDAD HORMONAL
Estructura del epitelio vaginal en funcin de la accin de las hormonas sexuales.

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COLPOCITOGRAMA: INDICES MAS FRECUENTES

ndice de maduracin (IM).- Establece la relacin porcentual de los 3 tipos de clulas vaginales (P/I/S: parabasales, intermedias, superficiales).Presentes en el frotis para esto se cuentan 200 clulas en 5 campos microscpicos diferentes. ndice picntico (IP).- Establece la relacin porcentual entre las clulas con ncleo picntico y el resto de clulas superficiales. En el periodo ovulatorio el IP puede alcanzar valores de 75 a 80 %. Es importante conocer los antecedentes clnicos y fase del ciclo menstrual en que se encuentra la mujer. En el embarazo, la imagen citolgica est compuesta casi exclusivamente por clulas intermedias de bordes muy delgados, toman el aspecto de clulas naviculares. Las clulas se exfolian agrupadas. El frotis es muy celular y sucio, con leucocitos abundantes y citolisis frecuente. El IM caracterstico es: 0/95/5. Climaterio y Menopausia. En la pre-menopausia es frecuente encontrar ciclos anovulatorios con marcado estrogenismo citolgico. En la post-menopausia temprana es frecuente encontrar predominio de clulas intermedias. En la postmenopausia tarda es ms frecuente encontrar clulas parabasales. CICLO MENSTRUAL Durante el ciclo menstrual, la mucosa cervico-vaginal, muy sensible a la secuencia hormonal fisiolgica (estrgenos y progesterona), sufrir cambios que nos permitirn darnos una idea de la maduracin celular, averiguando el "estatus" hormonal, as como detectar situaciones patolgicas en las que secundariamente va a estar alterada. En una mujer de edad frtil es frecuente observar un 40% de clulas intermedias y un 60% de clulas superficiales en la fase pre-ovulatoria. En la fase post-ovulatoria el porcentaje ser inverso, con un 60% de clulas intermedias y 40% de clulas superficiales. En ambas situaciones no existen clulas basales ni parabasales. En la menopausia encontraremos aproximadamente un 80% de clulas parabasales y un 20% de clulas intermedias (atrofia epitelial).

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