el siglo XXI F. Ll eonart Entre los procesos que mueven el pro- greso de la sanidad animal debemos citar la biotecnologa. Sin duda alguna, los avan- ces en esta materia ofrecern a la ganadera nuevas tcnicas, nuevos productos y nuevas posibilidades; hasta ahora, la mayora de in- cursiones en este campo se han polarizado hacia la ganadera y poco hacia la avicultura, por razones de costo y de perspectivas de rentabilidad a corto y medio plazo. Actual- mente este enfoque ha variado y es posible que en los prximos decenios asistamos a la profundizacin de una serie de recursos tec- nolgicos que abrirn nuevos horizontes en materia de inmunoprofilaxis y sanidad avcola, ya que el potencial que ofrece la biotecnologa es apasionante. Hasta el presente, la industria ha desa- rrollado de forma preferente nuevas estirpes vacunantes y estudio de nuevas molculas, actividad esta ltima que est resultando cada vez ms cara y difcil. Estos hechos y la escasa posibilidad de elaborar preparados a precio- dosis muy bajos quizs hayan sido la causa del relativo retraso en el desarrollo de nuevos conc.eptos de vacunaciones en avicultura. Los expertos en la industria avcola prevn que en un futuro aparecern nuevas y mejores vacunas, nuevas tcnicas de inmunizacin y. nuevos conceptos vacunantes como produc- to de la manipulacin gentica. El Dr. S.L. Pardue, de la Universidad A & M de Te- jas, indi c recientemente que la avicultura es pionera en la "manipulacin" gentica pues desde hace aos est progresando en sus perspectivas de produccin y no en vano desde 1940 ha mejorado en un 67% la capa- cidad de puesta y en un 40% la produccin de carne. Obviamente no es ste el progreso Direccin del autor: Real Escuela de Avicuhur8. Plana del Paraiso, 14.08350 Atenys de Mar (Barcelona) 231 biotecnol gico a que nos referimos, pero valga el caso para tener en cuenta que la avicultura ha sido siempre uno de los campos pioneros en investigacin y desarrollo zootcnico. Las lneas de investigacin iniciadas deben intensificarse dados los primeros resultados obtenidos, hacindose preciso progresar en materia de diagnsticos a base de prepa- rados de biotecnologa, por introduccin de nuevas cepas "competitivas", por las vacunas liposomas y por la aplicacin de prepara- dos inmunizantes a partir de recombinantes biolgicos. Entre las investigaciones ms prometedoras en la nueva tecnologa figuran sin duda las que se realizan sobre la coccidiosis, enfermedad que sigue lastrando a la industri a avcola en tratamientos y prdidas y de la que no se ve una solucin quimioterpi ca efectiva a medio plazo. Las investigaciones en productos con ac- tividad contra los coccidios avanzan en la bsqueda y fijacin de anticuerpos clonados, que 'pueden ser la base de una nueva familia de coccidiostatos basados en la inmunizacin que aporten conceptos altamente innovado- res. Otras directrices no menos importantes consisten en el desarrollo de sistemas diagnsticos para detectar diversos cidos nucleicos vricos en aves afectadas por viro- sis varias. Se sabe que se han hecho estudios al respecto con el virus de la.enfermedad de Marek y el de la bronquitis infecciosa. Las nuevas tcnicas de recombi nacin yel uso de soportes incuos para los elementos antignicos podra llevar a la introduccin de nuevas tcnicas de vacunacin. Un ejem- plo de ello podra ser la ovovacunacin, que ofrecera la posibilidad de proteger a los em- briones contra una serie de vi rus, con la 232 comodidad de poder automatizar el proceso a 25.000 huevos/hora y con una eficacia un 40% mayor que las tcnicas actuales -en el caso concreto de la profilaxis de la enferme- dad de Marek. El proyecto de ovovacunaciones y vacu- nas para embriones est siendo estudiado por los Servicios de Investigacin y Desarro- ll o Agrario de los Estados Unidos en cola- boracin con una empresa privada (Embex, Inc.), ensayndose para ello nuevos tipos de antgenos. El Dr. T. Kinney, del citado Servicio, puntualiz que actualmente se ad- ministraron en los Estados Unidos cinco mil millones de vacunas en las aves, por lo que la investi gacin y posible desarrollo d e las va- cunaciones sobre embriones podra ser una solucin muy til si se lograse aumentar la eficacia protectora, acelerar la inmunidad y superar posibles incompatibilidades entre las distintas vacunas. Uno de los programas de desarrollo de las embriovacunas se centra en la prevencin de la cocci diosis mediante la inoculacin de antfgenos a huevos embriona- dos de 17 das. La biotecnologa contra la coccidiosis aviar La lucha contra los coccidios ha sido una de las constantes que han predominado en el campo de la tecnologa y quimioprofilaxis desde hace muchos aos. No es de extraar que este campo sea nuevamente el pionero en la bsqueda de sustancias inmunizantes a travs de los avances biotecnolgicos. Uno de los expertos en esta actividad es el Dr. H.D. Danforth, del Instituto de Parasitologa Animal del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos, el cual seal las po- sibilidades de desarrollo de nuevas vacunas a base de las tcnicas de produccin de hibridomas de coccidios, o intentando una operacin de ingeniera gentica como sera la de incorporar determinadas protenas coc- cidianas en bacterias tipo Escherichia coli y buscando ulteriormente su empleo como antgeno en sub-unidades vacunales. La eficacia de un producto obtenido por biotecnologa contra los coccidios, tiene via- bilidad y posibilidades pues el coste de su investigacin y desarrollo es mucho ms bajo que el de un anticoccidisico qumico. De ah BIQTECNOLOGIA: SANIDAD AVICOLA EN EL SIGLO XXI precisamente la escasez de perspectiva de este campo en un futuro a medio plazo. Las posibilidades de la ingeniera gentica son por lo tanto importantes, caso de hallarse antgenos polivalentes capaces de crear al mismo tiempo inmunidad a diversas varieda- des patgenas. Segn el Dr. Danforth, hay dos formas de enfocar el desarrollo de las va- cunas anticoccidisicas, una apuesta por el desarrollo individual de cada antgeno y otra que se orienta hacia la bsqueda de reac- ciones cruzadas frente a un gran nmero de variedades -vacunas polivalentes. Una de las posibilidades tcnicas actuales est en la produccin de hibridomas; en este caso, los anticuerpos de hibridomas seran los activadores de la respuesta inmunitaria del ave a nivel individual, por actuar como transportadores de una protena o antgeno especffico que pod ra actuar contra los me- canismos activad ores de los esporozoitos. Para fabricar el hibridoma anticuerpo, podra actuarse de la siguiente forma: se inmunizar a un ratn con coccidios, para tomarse clulas del bazo del mismo y mez- clarlas seguidamente con clulas de mieloma cultivadas "in vitro". La fusin de estas clulas permitira la produccin de una lnea celular hbrida que incorporara la capacidad inmuni- zante de las clulas del ratn, la cual, conve- nientemente reproducida, sera la fuente de produccin de cantidades ilimitadas de anti- cuerpos especficos contra los esporozoitos. Una vez superado el problema de pro- duccin de estos anti cuerpos, sera preciso averiguar la especificidad o reactividad de es- tos hibridomas contra las diversas especies parsitas. Los estudios de algunos hibrido- mas estn en fase avanzada; segn el Dr. Danford, se han realizado con xito estudios con 34 hibridomas con anticuerpos frente a siete variedades de eimerias aviares, 20 de los cuales mostraron una actividad especfica y 14 dieron indicios de reacti vidad cruzada, lo cual muestra el diverso comportamiento antignico frente a los esporozoitos. Otra rea que debe estudiarse profunda- mente es el mecanismo exacto med iante el cual actan estos anticuerpos y cmo pue- den penetrar en las clul as del hospedador, siendo el ltimo paso la deteccin de la activi- dad y naturaleza antignica del coccidio para precisar los mecanismos protectores. La KB- 130 AIRE es una baterla de puesta provista. de un original sistema de secado de las deyecciones. La .. KB-130 AIRE- proporciona el sistema ideal para conseguir una gallinaza seca y fcil de mane}ar, en combinacin con unas condiciones' ambientales ptimas en el gallinero. El aire fresco exterior es precaldeado y distribuido regularmente gracias a una tubera rgida de PVC en cada piso, asegurando un mximo secado. Estas conducciones forman parte integral de la batera en la pared longitudinal entre las jaulas. Caracterstcas especales: Conducciones de aire rgidas dePVC Buen control de las aves gracias a la distancia entre 105 pisos. 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El sis- tema de produccin de estos nuevos prepara- dos consistira en la elaboracin de protenas coccidianas -fig 1-, separando el mensajero RNA de ooquistes purificados conteniendo esporozoitos, los cual es sern utilizados ul- teriormente para elaborar el DNA, que con- tiene todo el material gentico para sintetizar la protena, previamente implantada en una base orgnica -fig 2-, la cual la elaborara ulteriormente en cantidades prcticamente ili - mitadas. ' Las aplicaciones de estas nuevas vacu- mis en estudio son muy interesantes, si bien DNA cocckliano - capt urado ... Insercin t decDNA
DNA del plasmido , Plasmido portador del gen O antignico del coccldio Plsmido insertado portador del gene Desarrollo bacterial10 en condbones para el y sntesis I anligeno, Fig. 2. Expresin de los antgenos de coc:cldios en et E. coli.
bacteri tago ArJ. 11 DNA __ + AgI DNA portador de DNA coccldio DNA del coc:cidio ."" .. ba,",<;I,go FiHro bacledaago con Pfolenas
, fiNro bacterifago clonado
233 Fig. 1. Clonado de anHgenos de coccidios en el bacterifago ...\ del E. coli. quedan puntos muy importantes por resolver, como son la va de admi ni stracin ms ade- cuada, la edad de aplicacin de las vacunas y el tiempo necesario para induccin de la inmunidad. Vacunas liposomadas Una de las aplicaciones ms prometedoras de las nuevas tcnicas sobre biodisponibi- lidad y liberacin de frmacos se refiere a la posibilidad de que el futuro depare el he- cho de dirigir un producto de forma directa hacia la cl ula efectora adecuada. Esto se puede consegui r mediante tcnicas de mi- croencapsulacin molecular que confieren a las sustancias una actividad o tropismo para un ti po determinado de clulas. Esta cap- sulacin favorece el trnsito o retarda las respuestas del animal ante un determinado estmulo a causa de las partculas envolven- tes de la base activa denominadas liposomas, las cuales estructuralmente estn constitudas por lpidos uni o multilaminares, de acuerdo con las caractersti cas de su preparacin. En la figura 3 se representan de forma esquemtica algunas de las mi croestructuras 234 GrM vescula lJ'lllaminar (LUV) Vesicuas miJIilaminares (PLV) con pocas bicapas cOIlI;ntricas BIQTECNOLOGIA: SANIDAD AVICOLA EN EL SIGLO XXI o Vescllas miJIilaminares (MLV) con gan numero de bicapas. Vesculas multiveslculares (MW) Pequeas vesculas O IZIlIaminares (SUV) Fig. 3. Esquema de diversos liposomas por su eslruetlJra y tamao. que comentamos. Las ms utilizadas en va- cunas sern posiblemente las multilaminares, formadas por capas lipdicas concntricas, que pueden ser a su vez el reservorio de sus- tancias hidrosolubles. La firma Vineland, de los Estados Unidos, ha registrado ya ernom- bre de "Novasomes" como denominador ge- neral de los productos liposomados, que en el caso de las vacunas actuaran como inmuno- moduladores o adyuvantes; sustancias que hasta el momento se estn administrando por separado. La asociacin adecuada de ambos puede adecuar las respuestas inmunitarias a las defensas, actuando de forma selectiva so- bre las clulas y produciendo anticuerpos con ms eficacia, durante ms tiempo y a menor dosis. En el aspecto prctico los liposomas condicionaran la velocidad y caractersticas de la vacuna, de acuerdo con sus carac- tersticas fsicas y su mayor o menor lipofilia. Las vacunas liposomadas, tanto elaboradas sobre virus como sobre bacterias o parsitos, pueden ofrecer mayor capacidad protectora que las actuales, siendo enormes sus posi- bilidades para el futuro, por cuanto suponen una alta seguridad, una baja toxicidad y una reduccin de los mecanismos secundarios. Los ensayos efectuados sealan que ocasio- nan menores casos de reacci n locales en el punto de inoculacin y carecen de problemas de tolerancia general , al mismo tiempo que ofrecen mayores niveles de proteccin.