I) OBJETIVOS Objetivo General Identificar carbohidratos en las muestras desconocidas.

Objetivos Especficos Reconocer la presencia de carbohidratos en muestras desconocidas, empleando pruebas de identificacin mediante la coloracin. Identificar cual es la relacin del tiempo en la reaccin de Barfoed para el reconocimiento de monosacridos y disacridos reductores. Anotar el tiempo y el objetivo de la realizacin del test de Seliwanoff.

II) MARCO TEORICO IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS Para identificar carbohidratos se pueden realizar algunos de las siguientes test: REACCION DE MOLISCH Este ensayo permite detectar la presencia de hidratos de carbono en una muestra; se basa en la accin hidrolizante y deshidratante que ejerce el cido sulfrico sobre estos compuestos. Como se sabe, los cidos concentrados originan una deshidratacin de los azcares para rendir furfurales, que son derivados aldehdos del furano. Los furfurales se condensan con los fenoles para dar productos coloreados caractersticos, empleados frecuentemente en el anlisis colorimtrico. REACCION DE BARFOED Este ensayo se emplea para diferenciar a los monos de los disacridos. Estos ltimos reaccionan ms lentamente con el acetato cprico, debido probablemente al tamao molecular, aunque tambin pueden estar implicados otros factores tales como una interaccin ms compleja con los dos anillos monosacridos. REACTIVO DE FEHLING El reactivo de Fehling, tambin conocido como Licor de Fehling, es una disolucin descubierta por el qumico alemn Hermann Von Fehling y que se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores. Sirve para demostrar la presencia de glucosa en la orina. El licor de Fehling consiste en dos soluciones acuosas: Sulfato de cobre cristalizado, 35 g; agua destilada, hasta 1.000 ml.

Sal de Seignette (Tartrato mixto de Potasio y Sodio), 150 g; solucin de hidrxido de sodio al 40%, 3; agua, hasta 1.000 ml. Ambas se guardan separadas hasta el momento de su uso para evitar la precipitacin del hidrxido de cobre (II). El ensayo con el licor de Fehling se funda en el poder reductor del grupo carbonilo de un aldehdo. ste se oxida a cido y reduce la sal de cobre (II) en medio alcalino a xido de cobre (I), que forma un precipitado de color rojo. Un aspecto importante de esta reaccin es que la forma aldehdo puede detectarse fcilmente aunque exista en muy pequea cantidad. Si un azcar reduce el licor de Fehling a xido de cobre (I) rojo, se dice que es un azcar reductor. Se utiliza como reactivo para la determinacin de azcares reductores, y es til para demostrar la presencia de glucosa en la orina, y tambin para detectar derivados de la glucosa como la sacarosa o la fructosa. Al reaccionar con monosacridos, se torna verdoso; si lo hace con disacridos, toma el color del ladrillo. REACCION DE BARFOED Sirve para distinguir monosacridos reductores de disacridos reductores, basndose en la velocidad de reaccin; en los monosacridos la formacin del xido cuproso es ms rpido que en los disacridos. La reaccin consiste en utilizar acetato cprico y cido actico en solucin cida con lo que los monosacridos son capaces de reducir al cobre de manera ms rpida y en condiciones menos drsticas. Por supuesto que al tener la solucin un pH cido resulta necesario controlar rigurosamente el tiempo de reaccin, pues si ste se prolongara se producira la hidrlisis cida del enlace glucosdico con la consiguiente liberacin del carbono anomrico y la aparicin de nuevos grupos reductores que falsearan el resultado. CONCLUSIONES Se reconoci la presencia de carbohidratos mediante la reaccin de molisch que tie cualquier carbohidrato presente en una disolucin; ya que al iniciar la prctica se expuso en un tubo de ensayo a temperatura ambiente una solucin problema y se aadi un poco su compuesto bsico -naftol al 5% en etanol de 96 ya que no se contaba con el reactivo de Molisch. A continuacin, se le aade cido sulfrico e inmediatamente aparece un anillo violeta que separa al cido sulfrico debajo de este anillo, entonces mediante esta coloracin reconocemos que es un carbohidrato. Se identific que en la reaccin de barfoed la cual sirve para distinguir monosacridos de disacridos reductores se relaciona con el tiempo en la velocidad de reaccin; en los monosacridos la formacin del xido cuproso es ms rpido que en los disacridos.

La reaccin consiste en utilizar acetato cprico y cido actico en solucin cida con lo que los monosacridos son capaces de reducir al cobre de manera ms rpida y en condiciones menos drsticas de cinco a siete minutos mientas que en los disacridos necesitan ms condiciones drsticas y ms tiempo en la prctica en un tiempo de siete a doce minutos o ms. Se anot los tiempos que transcurren en todas las reacciones y en la de Seliwanoff ocurren de manera inmediata apenas cinco segundos, el objetivo de utilizar esta reaccin es para distinguir entre aldosas y cetosas. Esta prueba est basada en el hecho de que, al calentarlas, las cetosas son deshidratadas ms rpido que las aldosas en la prctica se nota que produce un color rojo ladrillo por lo que reconoce a la fructosa por lo que es positiva la reaccin al reconocer el grupo carbonilo de cetona.

RECOMENDACIONES: Priorizar las adecuadas cantidades de reactivos utilizados en la prctica con el fin de obtener coloraciones precisas. Trabajar con todo el equipo disponible en el laboratorio con el fin de ser ms cuidadosos al momento de trabajar con las muestras. CUESTIONARIO 1.-Cual es la prueba a travs de la cual verificamos la presencia de carbohidratos. ? La prueba de Molisch es una prueba cualitativa para la presencia de carbohidratos en una muestra de composicin desconocida. Para determinar la cantidad y naturaleza especfica de los carbohidratos se requieren otras pruebas. Esta prueba sirve para detectar la presencia de grupos reductores presentes en la muestra. (Clark 1964) Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos compuestos furfricos reaccionan positivamente con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfa-naftol).

2.-Cmo establecemos la presencia de polisacridos en muestras desconocidas? Mediante el test del lugol donde la solucin acuosa, la amilosa forma estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formacin de puentes de H entre los grupos OH de la glucosa y las molculas de H2O. Si a una disolucin de almidn de le aade I, esta toma un color azul intenso como en la prctica por lo que nos identificamos que es polisacrido, almidn correspondientemente. Esta caracterstica es

especfica del almidn, debido a su estructura, y se debe a la adsorcin del I por las cadenas helicoidales, especialmente de la amilosa. Por tanto no es una reaccin qumica, sino una interaccin fsica reversible por mtodos fsicos. Esto se puede comprobar fcilmente, pues al calentar la mezcla, el color azul desaparece, y al enfriarla vuelve a aparecer. 3.- Qu proceso realizara usted para verificar la presencia o ausencia de fructosa en una muestra? Se utilizara la reaccin de Seliwanoff ya que Este ensayo es especfico para cetosas y se basa en la conversin de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior condensacin con resorcinol formando as complejos coloreados.

4.- Cmo identifica un disacrido reductor?

Se puede identificar un disacrido reductor mediante el ensayo de Barfoed: Esta prueba permite diferenciar entre monosacridos y disacridos reductores, tambin contiene ion cprico que se reduce hasta xido cuproso ms rpidamente con los monosacridos que con los disacridos.

BIBLIOGRAFIA:

Reaccin de molisch (http://es.slideshare.net/vegabner/reconocimiento-y-propiedades-qumicas-de-loscarbohidratos 2013/04/05 pg visitada 9:35) Reaccin de barfoed Reactivo de Fehling (http://nocturno3.blogspot.es/ 2013/04/05 pg visitada 21:45 pm) Generalidades (http://docencia.izt.uam.mx/japg/RedVirtualJAP/CursoDRosado/2_EstructuradeCompuesto sBioquimicos/9-1_ReaccionesIdentificacion.pdf / 2013/04/05 pg visitada 22:00 pm)