Captulo I - Depresin Las dos clasificaciones ms ampliamente aceptadas por la comunidad mdica y cientfica internacional son la dcima revisin

de la Clasificacin Estadstica Internacional de Enfermedades y Problemas de Salud (CIE-10), llevada a cabo por la OMS y la cuarta edicin del Manual Diagnstico y Estadstico de los Trastornos Mentales , de la American Psychiatric Association (DSM-IV). De acuerdo con el CIE-10 un episodio depresivo tpico se caracteriza, tanto en los casos leves como moderados o graves, porque: "el paciente sufre un decaimiento del nimo, con reduccin de su energa y disminucin de su actividad. Se deteriora la capacidad de disfrutar, el inters y la concentracin, y es frecuente un cansancio importante, incluso despus de la realizacin de esfuerzos mnimos. Habitualmente el sueo se halla perturbado, en tanto que disminuye el apetito. Casi siempre decaen la autoestima y la confianza en s mismo, y a menudo aparecen algunas ideas de culpa o de ser intil, incluso en las formas leves. El decaimiento del nimo vara poco de un da al siguiente, es desproporcionado a las circunstancias y puede acompaarse de los as llamados sntomas "somticos", tales como la prdida de inters y de los sentimientos placenteros, el despertar matinal con varias horas de antelacin a la hora habitual, el empeoramiento de la depresin por las maanas, el marcado retraso psicomotor, la agitacin y la prdida del apetito, de peso y de la libido. El episodio depresivo puede ser calificado como leve, moderado o grave, segn la cantidad y la gravedad de sus sntomas". (Secretaria de Salud 2005) De acuerdo al DSM IV-R, 1998, la depresin es una alteracin del estado de nimo que se caracteriza por la presencia de sentimientos de tristeza, desesperanza o abandono, sentimientos de culpa e ideacin suicida. Suele acompaarse de sntomas vegetativos como alteraciones en el sueo, en el apetito o en la locomocin El DSM-IV define, por una parte, episodios afectivos, de carcter depresivo (estado de nimo deprimido o prdida del inters o sensacin de placer), o

maniaco, (estado de nimo anormal y persistentemente elevado, expansivo o irritable). Estos episodios se combinaran generando diversos patrones, constituyendo as los diferentes trastornos del nimo.

Episodios afectivos o Episodio depresivo mayor

o o o

Episodio manaco Episodio mixto Episodio hipomanaco

Trastornos depresivos (con episodios depresivos) o Trastorno depresivo mayor

o o

Trastorno distmico Trastorno depresivo no especificado

Trastornos bipolares (con episodios maniacos y depresivos) o Trastorno bipolar I

o o o

Trastorno bipolar II Trastorno ciclotmico Trastorno bipolar no especificado

Trastorno del estado de nimo debido a enfermedad mdica Trastorno del estado de nimo inducido por sustancias Trastorno del estado de nimo no especificado

De acuerdo con la clasificacin que plantea el DSM-IVR "los trastornos del estado de nimo estn divididos en trastornos depresivos, trastornos bipolares y dos trastornos basados en la etiologa: trastorno del estado de nimo debido a enfermedad mdica y trastorno del estado de nimo inducido por sustancias. Los trastornos depresivos se distinguen de los trastornos bipolares por el hecho de no haber historia previa de episodio manaco, mixto o hipomanaco. Los trastornos bipolares implican la presencia de episodios manacos, episodios mixtos o episodios hipomanacos, normalmente acompaados por la presencia de episodios depresivos mayores. El trastorno depresivo mayor se caracteriza por uno o ms episodios depresivos mayores (al menos dos semanas de estado de nimo depresivo o prdida de inters acompaados por al menos otros cuatro sntomas de depresin). El trastorno distmico se caracteriza por al menos dos aos en los que ha habido ms das con estado de nimo depresivo que sin l, acompaado de otros sntomas depresivos que no cumplen los criterios para un episodio depresivo mayor. El trastorno depresivo no especificado se incluye para definir los trastornos con caractersticas depresivas que no cumplen los criterios para un trastorno depresivo mayor, trastorno distmico, trastorno adaptativo con estado de nimo deprimido o trastorno adaptativo con estado de nimo mixto ansioso y depresivo o con sntomas depresivos sobre los que hay una informacin inadecuada o contradictoria. La caracterstica bsica del episodio depresivo mayor es un perodo de al menos dos semanas durante el que hay un estado de nimo deprimido o una prdida de inters o placer en casi todas las actividades. En los nios y adolescentes el estado de nimo puede ser irritable en lugar de triste. El sujeto tambin debe experimentar al menos otros cuatro sntomas de una lista (tabla 1) que incluye cambios de apetito o peso, del sueo y de la actividad psicomotora; 3

falta de energa; sentimientos de infravaloracin o culpa; dificultad para pensar, concentrarse o tomar decisiones y pensamientos recurrentes de muerte o ideacin, planes o intentos suicidas. Para indicar la existencia de un episodio depresivo mayor, un sntoma debe ser de nueva presentacin o haber empeorado claramente si se compara con el estado del sujeto antes del episodio. Los sntomas han de mantenerse la mayor parte del da, casi cada da, durante al menos dos semanas consecutivas. El episodio debe acompaarse de un malestar clnico significativo o de deterioro social, laboral o de otras reas importantes de la actividad del individuo. En algunos sujetos con episodios leves la actividad puede parecer normal, pero a costa de un esfuerzo muy importante. Tabla 1. Depresin aguda definida segn criterios del DSM-IV y la CIE-10 Sntomas de depresin 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Estado de nimo deprimido la mayor parte del da y casi cada da Marcada disminucin del inters o las sensaciones placenteras por todas o casi todas las actividades la mayor parte del da, Casi todos los das Prdida de energa o cansancio casi todos los das Prdida de la confianza o de la autoestima Sentimientos irracionales de auto reproche o culpa excesiva o inapropiada casi cada da Pensamientos recurrentes de muerte o suicidio, o cualquier comportamiento suicida Disminucin de la capacidad de concentracin o indecisin casi cada da Agitacin o retraso psicomotores casi cada da Insomnio o hipersomnia casi cada da Cambios en el comportamiento alimentario + + + + + + DSM IV + + + CIE10 + + + + + + + + + +

+ Indica la inclusin del sntoma

(Tomado de Michael G.Gelder et al, 2004 tratado de psiquiatra. Tomo I Pg. 81)

Captulo II - Serotonina La serotonina tiene una funcin clave en el estado de nimo, la agresin, en la percepcin del dolor y en actividades bsicas como alimentacin, ciclo sueovigilia, actividad motora, conducta sexual y regulacin de la temperatura. Se ha asociado a la serotonina con varios desordenes psiquitricos como la ansiedad y la depresin y ms recientemente con la esquizofrenia. La serotonina participa en la regulacin presinaptica de la liberacin de otros transmisores y afecta muchas funciones endocrinas (Feldman 1996). 2.2 Metabolismo La serotonina, 5-hidroxitriptamina se forma a partir del triptofano que proviene de la dieta. El triptofano es captado en las neuronas por un transportador de la membrana plasmtica el cual es hidroxilado en una reaccin catalizada por la triptofano-hidroxilasa a 5-hidroxitriptofano, que es el precursor inmediato de la serotonina (ver Fig. 2). Este paso puede ser bloqueado por la p-clorofenilalanina PCPA, del ingles P-chlorophenylalanine, llamada tambin fenclonina. La enzima triptofano-hidroxilasa tiene una distribucin muy limitada, encontrndose solo en las clulas que sintetizan serotonina la cual se metaboliza en los somas de las neuronas serotonrgicas y es transportada mediante transporte axonal a las terminales nerviosas donde la mayora de la serotonina es sintetizada (Meek y Neff, 1972). Esta enzima es la responsable de la etapa reguladora de la va de biosntesis de la serotonina. Utiliza a la pteridina como cofactor y requiere oxigeno molecular. Aparentemente no se satura por el sustrato in vivo, y por ello su actividad es sensible a las concentraciones de triptofano en la dieta.

Metabolismo de la serotonina

Fig. 1: Sntesis y degradacin de serotonina. Modificado de "Las bases farmacolgicas

de la teraputica", Goodman & Gilman (1996)

La conversin del 5-hidroxitriptofano en 5-hidroxitriptamina se lleva a cabo por la accin de una descarboxilasa (hidroxitriptofano-descarboxilasa). Es posible que se trate de la misma enzima que descarboxila a la DOPA. Requiere fosfato de piridoxal y su actividad en el cerebro es de 50 a 100 veces mayor que la de la triptofano-5-hidroxilasa. La inhibicin de esta enzima no modifica las concentraciones de serotonina en el cerebro, mientras que la administracin de 5-

hidroxitriptofano, el cual cruza la barrera hematoenceflica, si produce un incremento en las concentraciones de serotonina en el tejido nervioso. Despus de la sntesis, la serotonina se almacena en vesculas sinpticas para su liberacin y/o almacenamiento Una vez liberada al espacio sinptico la serotonina puede interactuar con receptores pre-sinpticos, receptores postsinpticos o con transportadores para su recaptura. Despus de ejercer sus acciones la serotonina es desactivada mediante la oxidacin de la molcula por la enzima monoamina oxidsa. (MAO) que es la misma enzima mitocondrial que degrada a las catecolaminas. Como se muestra en la Fig. 2, el producto de la degradacin de la serotonina por la MAO es el Acetaldehdo del 5- hidroxindol el cual es convertido, mediante una enzima deshidrogenasa a cido 5hidroxiindolactico. (5-HIAA) que es considerado como el principal metabolito de la serotonina y es utilizado para conocer la tasa de recambio de la serotonina cerebral. Existe una va alterna donde el Acetaldehdo del 5- hidroxindol es reducido hasta un alcohol, 5-hidroxitroptofol, sin embargo esta va es muy baja por lo que casi nunca se toma en cuenta (Goodman & Gilman 1996). 2.3 Vas serotonrgicas. Dahlstrm y Fuxe (1964) (citado en Felman y cols. 1996) describieron 9 ncleos celulares que contienen serotonina los cuales designaron como B1 a B9 (Fig. 3) La mayora de estos ncleos se encuentran en la zona del rafe y en la regin reticular del tallo cerebral, se ha estimado que este grupo contiene aproximadamente 24,000 clulas en el gato y alrededor de 165,000 neuronas en el humano (Trk, 1990). Estos ncleos (B1-B9) se dividen en a) Sistema caudal del tallo cerebral, que proyecta a lo largo de la medula espinal; b) Sistema rostral del tallo, que incluye a las neuronas del rafe dorsal y medial: c) el sistema cerebral en el cual la regin B5 proyecta hacia la corteza cerebral y el ncleocerebelar profunda; y d) el sistema difuso de fibras que proyectan hacia diversas reas entre las que se encuentran el locus coeruleus, el ncleo dorsal tegmental, el ncleo de

la oliva inferior, el ncleo del tracto solitario, la formacin reticular y algunos nervios craneales incluyendo al trigmino. El sistema rostral del tallo cerebral contiene el 80% de las neuronas serotonrgicas y se proyecta hacia el cerebro anterior formando varias vas: i) La va ascendente ventral (B6-B9) que enva proyecciones al diencfalo, ganglios basales, sistema limbico, corteza, substancia nigra, rea ventral tegmental y ncleos interpedunculares; forma parte del haz medial del cerebro anterior. Las proyecciones dienceflicas terminan en la habnula medial, el tlamo, el hipotlamo, el rea preptica, los cuerpos mamilares, la amgdala, el septum, el hipocampo, el estriado (caudado-putamen y ncleo accumbens), parte del sistema olfatorio incluyendo al bulbo olfatorio y la neocorteza. ii) La va ascendente dorsal, que se origina principalmente en las regiones B7 y B8, proyecta hacia la sustancia gris mesenceflica y los colculos superiores e inferiores. Forma parte del haz medial del cerebro anterior y junto con las fibras del sistema ascendente ventral inerva algunas estructuras del cerebro anterior (Felman y cols. 1996)

Fig.2 Vas serotonrgicas en el cerebro de la rata (tomado de Feldman 1997)

2.4 Receptores serotonrgicos En la actualidad existen 7 familias y 14 subtipos conocidos de receptores de serotonina (5-HT1A, 5-HT1B, 5-HT1D, 5-HT1F, 5-HT2A, 5-HT2B, 5-HT2C 5-HT3 5-HT4, 5HT5A, 5-HT5B, 5-HT6, 5-HT7). Se agrupan en clases y subclases con base en la estructura molecular y acoplamiento con un segundo mensajero y difieren en cuanto a la distribucin en los tejidos. Todos, excepto 5-HT 3, (ste es un canal activado por iones) son receptores acoplados a protena G (Fig. 3) .

Fig. 3. Estructura de los receptores 5-HT

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Tabla 2 Clasificacin de los subtipos de receptores a serotonina

Subtipos de receptores serotonina

Subtip o Seal de Transducci n
Inhibicin de la AC

Localizacin

Funcin

Agonista selectivo
8-OH-DPAT, Ipsapirona

Antagonista selectivo
WAY 100 635 NAN-190 MM-77

5-HT1A

Ncleos del rafe Hipocampo

Autorreceptor

5-HT1B

Inhibicin de la AC Inhibicin de la AC

Sustancia negra subiculo Vasos sanguneos craneales Corteza Cuerpo estriado Encfalo Periferia

Autorreceptor

CP-93,129

NAS-181

5-HT1D

Vasoconstriccin

Sumatripan

BRL-15572

5-HT1E 5-HT1F

Inhibicin de la AC Inhibicin de la AC Activacin de la PLC

Vasoconstriccin Inhibe vasoconstriccin Agregacin de plaquetas Contraccin Excitacin neuronal Contraccin

Triptan zolmitriptan LY344864

Metiotepina

Metisergida

5-HT2A

Plaquetas Msculo liso Corteza cerebral

-Metil-5HT-DOI

Ketancerina LY53857 MDL 100 907

5-HT2B

Activacin de la PLC

Sistema gastrointestinal

Ro-6000175 BW-723C86

LY53857

5-HT2C

Activacin de la PLC Canal de iones (Na, K) operado por ligando Activacin de la AC

Plexo coroideo

_____

-Metil-5HT-DOI

LY53857 Mesulergina

5-HT3

Nervios perifricos rea postrema Hipocampo Tubo digestivo

Excitacin neuronal

2-Metil-5-HT

Ondansetron Tropicetron

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(Continuacin Tabla 2). Clasificacin de receptores a 5-HT.

5-HT4

Hipocampo Tubo digestivo

Excitacin neuronal

Renzaprida

GR 113308

5-HT5A

Se ignora

Hipocampo

Se ignora

_____

_____

5-HT5B

Se ignora

_____

Se ignora

_____

_____

5-HT6

Activacin de la AC

Cuerpo estriado

Se ignora

5methoxytryptamina

Methiothepin

Regulacin de la temperatura Activacin de la LY215840 Hipotlamo Regulacin del AC _______ DR-4004 5-HT7 intestinos sueo REM SB-258719 Aprendizaje y memoria AC, Adenilato ciclasa; PLC, Fosfolipasa C; 8-OH-DPAT, 8-hydroxy-2-(di-n-propylamino)-tetraline Modificado de Goodman 1996. Current Drug Targets-SNC & Neurological Disorder, 2004.

2.5 Receptor 5-HT1A El receptor 5-HT1A es uno de los receptores que ms atencin ha recibido debido a su participacin en un gran nmero de desordenes psiquitricos, entre ellos, la depresin y la ansiedad. La estructura de este receptor fue reportada por primera vez en 1988 (Faring. 1998). Se trata de una protena con siete dominios transmembranales acoplada a protena G la cual modula la actividad de la adenilato ciclasa (Liau. 1999). En 1994 estudios de autorradiografa con agonistas marcados

radioactivamente revelaron una alta densidad de este receptor en el hipocampo 12

(particularmente CA1 y el giro dentado), el septum lateral, en el ncleo amigdalino y en las cortezas frontal y entorrineal. Se ha demostrado la presencia del receptor 5HT1A tanto en neuronas post-sinpticas como en la pre-sinpsis (en los ncleos del rafe dorsal y medial) (Hamon, et al., 1990; Sotelo, et al., 1990), por lo que se ha propuesto a este receptor como autoreceptor somatodendritico de las neuronas serotonrgicas. Fig. 4. La activacin de los autoreceptores 5HT 1A produce una disminucin en la frecuencia de disparo, con la subsiguiente reduccin de la sntesis y de la liberacin de serotonina. A su vez, se ha descrito que la activacin de los receptores 5HT1A post-sinapticos, localizados en la corteza prefrontal, produce la disminucin de la frecuencia de descarga de neuronas en el ncleo dorsal del rafe a travez de un circuito distal que involucra un control GABArgico y glutamatergico (Celada et al 2001). Los receptores 5HT 1A post-sinapticos se ubican, principalmente, en el sistema lmbico y han sido implicados en mecanismos de memoria y aprendizaje. Conductualmente esta implicado en varios sntomas del sndrome serotonrgico como son: movimientos alternos de las patas delanteras (reciprocal forepaw treading), movimientos alternos de la cabeza (head weaving), postura aplanada del cuerpo (flat body posture) y tremor (Tricklebank. 1984). Clnicamente este receptor est involucrado en la patofisiologa de la ansiedad y de la depresin (Peroutka. 1985, Traber. 1984, citados en Liau. 1990). Farmacolgicamente se han descrito un gran nmero de agonistas especficos para este receptor, drogas como la 5-HT y el 8-OH-DPAT son agonistas totales del receptor, mientras que drogas como la buspirona, la ipsapirona y el BMY-7378 actan como agonistas parciales (Bockaert 1987). En contraste, a pesar de que se han descrito algunas drogas con propiedades antagonistas tales como (-)pindol, (-)propranolol y spiroxatrina, slo el WAY100635 es antagonista total pre y post sinptico. Recientemente se ha demostrado que sustancias como el NAN-190 y el MM-77 son potentes antagonistas postsinpticos del receptor 5HT1A (Mokrosz. 1994).

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Desde el punto de vista funcional, la actividad de los receptores 5-HT 1A presinpticos reduce la frecuencia del disparo neuronal en el ncleo del rafe dorsal (De vry 1995) y disminuye la sntesis y liberacin de serotonina Fig. 4 (De vry 1995). Mientras tanto, la actividad de receptores 5-HT 1A post-sinpticos resulta en hiperpolarizacin neuronal en las reas CA1 y CA3 del hipocampo al activar canales de potasio (De vry 1995).

Fig. 4 Sinapsis serotononergica tomado de Blier y Montigny, 1999

14

Capitulo III Depresin y serotonina Las monoaminas tambin

llamadas aminas biognicas, incluyen a las catecolaminas y la serotonina (Fig. 5.) Estos compuestos se relacionaron con la depresin en los aos cincuenta cuando se descubri que un 15 por ciento de los pacientes hipertensos a los que se les recetaba reserpina mostraban una depresin severa como efecto colateral. En esas fechas Edward Freis public un artculo en el que pona de manifiesto que muchos enfermos hipertensos tratados con Reserpina (un frmaco para tratar la hipertensin) se haban suicidado. Posteriormente mediante estudios de laboratorio se demostr que al igual que sucede en los monos reserpina impide la entrada de Fig. 5 Clasificacin de las aminas biognicas Tomado de Dale 2001

la reserpina disminua las concentraciones de las monoaminas en el cerebro. La las monoaminas a las vesculas de almacenamiento para su liberacin, produciendo as una alteracin en el mecanismo normal de la comunicacin entre las neuronas. Otro frmaco, la isoniazida utilizada para tratar la tuberculosis, prob tener efectos en el estado de nimo. Este compuesto tiene un efecto inhibidor sobre una de las principales enzimas que metabolizan a las monoaminas: la MAO. Este frmaco produca un claro efecto sobre el estado de nimo de los pacientes, quienes manifestaban una condicin de euforia y optimismo claramente en desacuerdo con su estado fsico general y sus perspectivas de reanudar una vida normal. Estas evidencias indicaron que los neurotransmisores aminrgicos estaban involucrados en los trastornos del humor (Nemerroff 1998). 15

3.2 Teora serotonrgica de la depresin El considerable nmero de evidencias sobre las alteraciones serotonrgicas en pacientes deprimidos ha culminado en la hiptesis serotonrgica de la depresin postulada en 1987 por Meltzer y Lowy. Entre las principales evidencias se encuentran: La reserpina (un inhibidor de la vesiculacin de las monoaminas que resulta en una inhibicin de la transmisin monoaminrgica) precipita el sndrome depresivo. Los inhibidores de la recaptura de monoaminas (tricclicos) y los inhibidores de la MAO tienen acciones antidepresivas. Las anfetaminas (inductores de la liberacin de monoaminas) pueden elevar el estado de nimo en algunos pacientes deprimidos. El precursor de la serotonina, el 2-hidroxitriptofano, per se o combinado con los inhibidores de la MAO puede tener efectos benficos sobre la depresin. Hasta el momento se han catalogado tres tipos de pacientes deprimidos de acuerdo con el tipo de monoaminas cuyo contenido se encuentre abatido: con niveles bajos de serotonina, de noradrenalina, o de ambas monoaminas Existen, sin embargo, un par de lneas de investigacin que han complicado esta hiptesis ya que sealan que: 1) Slo el incremento en el contenido de las monoaminas endgenas tiene efectos teraputicos, es decir, la administracin de compuestos con propiedades de agonistas monoaminrgicos no resulta en acciones antidepresivas y 2) las acciones teraputicas de los antidepresivos se observan despus del tratamiento crnico (mnimo 15 das) mientras que sus acciones neurofarmacolgicas ocurren

16

justo despus de su primera administracin. (Meltzer y Lowy 1987; Maes y Meltzer, 1995) A pesar de la evidencia de una predisposicin gentica para los trastornos afectivos, la causa sigue siendo desconocida. La eficacia de gran cantidad de frmacos que influyen en la neurotransmisin serotonrgica y catecolaminrgica corrobora que la base del trastorno es finalmente neuroqumica. La mayora de los pacientes, alrededor del 70%, pueden ser tratados eficazmente con uno de los distintos frmacos para la depresin (los cuales pueden ser antidepresivos tricclicos, los inhibidores de la MAO y los inhibidores selectivos de la recaptura de serotonina). (Dale 2001)

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Capitulo IV Modelos animales para el estudio de la depresin Un modelo se define como una preparacin experimental que se desarrolla con el propsito de estudiar una condicin en diferentes especies (Geyer M and Markou A, 1995). Los modelos animales en psicofarmacologa se basan en cambios conductuales inducidos a travs de manipulaciones del medio ambiente interno y externo, asumiendo que las manipulaciones en el ambiente son analogas a aquellas que inducen la patologa en el humano (Porsolt y Lengre 1992). En los modelos animales de depresin, los roedores o primates no humanos son sometidos a eventos estresantes, quimicos o quirurgicos, con el proposito de generar respuestas bioqumicas o conductuales semejantes a las observadas en individuos deprimidos (Porsolt y Lengre 1992). En 1994 Willner propuso tres criterios para considerar a un modelo animal como valido: o El Criterio de Validez predictiva que dice que todas aquellas

manipulaciones que modifiquen el estado patolgico en los humanos tambin deben hacerlo en el modelo animal. o El Criterio de Validez de apariencia se refiere a la similitud fenomenolgica entre el modelo y el desorden modelado. o El Criterio de Validez de constructo o Validez hipottica ; que establece que las hiptesis que explican las causas del desorden psiquitrico tambin deben servir como fundamento del modelo.

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4.1 Modelo de nado forzado El Modelo de nado forzado (FST por sus siglas en ingles) fue propuesto por Porsolt y cols. (1977), como un modelo de depresin en roedores y actualmente se utiliza para evaluar frmacos con potencial antidepresivo (Borsini y Meli 1988), y para analizar las bases neurobiolgicas de la depresin (Duncan 1985). En el presente trabajo se utiliz el FST como modelo de depresin. Este modelo fue seleccionado tomando en cuenta que a) es sensible y selectivo a frmacos antidepresivos, por lo que cumple con el criterio de validez predictiva; b) el modelo se basa en la respuesta del animal a una situacin estresante ( vide infra) por lo que cumple con la validez de constructo, y c) es confiable, ya que los resultados obtenidos son replicados por distintos observadores (Willner, 1994). El modelo de nado forzado consta de dos sesiones, pre-prueba y prueba, con un intervalo de 24 hrs., entre cada una. Durante la pre-prueba se coloca a la rata en un cilindro de vidrio (46 cm de altura x 20 cm de dimetro) con 30 cm de agua a una temperatura de 19-21C, de forma tal que el animal no puede tocar el fondo del estanque ni tampoco puede escapar de l. La pre-prueba tiene una duracin de 15 min., y es la inductora de desesperanza, 24 horas depuse se lleva acabo la prueba con una duracin de 5 min. en donde se videograban las conductas que presenta el animal. Estas pueden ser: escalamiento, cuando el animal despliega una conducta de movimientos rpidos y vigorosos dirigidos contra la pared del estanque; nado, cuando el animal exhibe una serie de movimientos que le permiten desplazarse alrededor del estanque e inmovilidad, cuando el animal se queda quieto y slo realiza los movimientos que le permitan mantener la narina fuera del agua y respirar. Las conductas activas, escalamiento y nado, son consideradas como los intentos que realiza el animal para resolver la situacin estresante a la que es enfrentado y por lo tanto son interpretadas como motivacin (Porsolt 1997; Willner 1994). La conducta de inmovilidad es interpretada como un estado de desesperanza y/o abandono en donde el animal deja de luchar para resolver la situacin estresante. Se propone que esta

19

conducta es anloga al estado de desesperanza o abandono que muestra un individuo deprimido (Porsolt 1997; Willner 1994). En la tabla 3 se muestran los efectos de algunos tratamientos antidepresivos en el FST, as como el efecto de los estrgenos naturales 17 Estradiol y el Etinil-estradiol, el androgeno natural testosterona, el estrgeno sinttico Dietil-estilbestrol, las fases del ciclo estro y diestro de la rata hembra y frmacos involucrados en la transmisin serotoninergica.

Tabla 3 Efecto de diferentes tratamientos antidepresivos en la conducta de ratas en el modelo de nado forzado

Tratamiento ISRS (Flx, Ser) ISRNe(DMI) 17 -Estradiol Etinil-estradiol Dietil-estilbestrol Testosterona Estro Diestro pCPA 8-OH-DPAT WAY 100635

Inmovilidad

Nado

Escalamiento

ISRS = Inhibidores Selectivos de la Recaptura de Serotoninanhibidores ISRNe= Inhibidores Selectivos de la Recaptura de Noradrenalina Modificado de Cryan 2005

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Captulo IV - Hormonas esteroides Los esteroides son lpidos no saponificables, poco solubles en agua (hidrofobitos), solubles en solventes orgnicos y tienen en comn poseer como ncleo qumico bsico el ciclopentanoperhidrofenantreno (Fig. 6). Este hidrocarburo cclico est constituido por 17 tomos de carbono dispuestos en tres anillos de seis tomos de carbono (ciclohexanos) y un anillo de cinco tomos de carbono (ciclopentano). La Fig. 6 indica la forma de numerar a los tomos de carbono y de designar a los anillos. Los tomos de carbono se numeran convencionalmente del 1 al 17 y los anillos se designan como A, B, C, y D.

Fig. 6. Identificacin de los anillos y sistema de numeracin de los carbonos del

ciclopentanoperhidrofenantreno, ncleo qumico bsico de los esteroides. Recuadro: anillo aromtico caracterstico de los estrgenos (tomado de Goodman 1996).

Existen

clases

principales

de

hormonas

esteroideas:

1)

Los

progestgenos (progesterona) que regulan los eventos que se producen durante el embarazo y son los precursores de todas las dems hormonas esteroideas; 2) los glucocorticoides (cortisol y corticosterona) que regulan la gluconeognesis y a dosis farmacolgicas, suprimen las reacciones inflamatorias; 3) los mineralocorticoides (aldosterona) que regulan el equilibrio inico mediante la reabsorcin de Na+, Cl- y HCO-3, en el rin; 4) los andrgenos (androstenodiona 21

y testosterona), que promueven el desarrollo sexual masculino y mantiene los caracteres sexuales masculinos, y 5) los estrgenos (estradiol, estrona y estriol) que mantienen las caractersticas sexuales femeninas (Mathews., 2000). La mayor parte de estas hormonas se muestran en la Fig. 7, as como su ruta biosinttica

Fig. 7.- Ruta biosinttica de hormonas esteroides. Los nmeros del interior de los crculos indican la clase de hormona que se cita en el texto. (Tomado de Mathews., 2000)

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4.2 Estrgenos Los estrgenos fueron las primeras hormonas esteroides aisladas de lquidos biolgicos (1929), en una poca en la que an no se conoca la estructura del ncleo esteroide. A partir de entonces, como resultado de una extensa serie de investigaciones, se estableci la naturaleza qumica de este importante grupo de hormonas. Se describieron las rutas de biosntesis en rganos endcrinos, su metabolismo y catabolismo perifricos. Posteriormente se elucidaron los mltiples efectos biolgicos, los mecanismos moleculares de accin, incluyendo su interaccin con el genoma celular, se establecieron mtodos analticos para su cuantificacin y se sintetiz un nmero importante de derivados que han contribuido significativamente al desarrollo de varias reas de la teraputica mdica. En los mamferos los principales estrgenos son el 17- estradiol la estrona y el estriol. Cada una de estas molculas es un esteroide de 18 carbonos, que contiene un anillo fenlico A (un anillo aromtico con un grupo hidroxilo en el carbono 3), y un grupo -hidroxilo o cetona en la posicin 17 del anillo D. El anillo fenlico A es la principal caracterstica estructural de la cual depende la unin selectiva y de alta afinidad a receptores de estrgenos (Jordan y cols.., 1985), Fig. 6. Casi todas las sustituciones alquil en el anillo fenlico A alteran la afinidad del compuesto por su receptor, pero las sustituciones en el anillo C o D pueden tolerarse (Goodman., 1997). La potencia estrognica del -estradiol es 12 veces la de la estrona y 80 veces la del estriol. Considerando estas potencias relativas puede verse que el efecto estrognico del -estradiol es habitualmente muchas veces mayor que el de los otros estrgenos juntos. Por esta razn, se considera que el -estradiol es el principal estrgeno, aunque los efectos estrognicos de la estrona no son despreciables (Guyton, 2003).

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De manera general, los estrgenos provocan principalmente proliferacin de clulas especficas en el cuerpo involucradas en los ciclos reproductores femeninos y son la causa de la mayor parte de los caracteres sexuales secundarios en la mujer. La progesterona se relaciona casi totalmente con la preparacin del tero para el embarazo y durante la lactancia. En la mujer no embarazada se secretan estrgenos en cantidades importantes solamente por los ovarios y cantidades minimas por la corteza suprarrenal. Durante el embarazo se secretan cantidades enormes de estrgenos por medio de la placenta, hasta 50 veces la cantidad secretada por los ovarios durante un ciclo normal. (Guyton, 2003). 4.3 Neuroesteroides y esteroides neuroactivos Los estrgenos tambin se producen de manera local bajo condiciones particulares, por ejemplo, en el cerebro pueden ser sintetizados a partir de andrgenos por la accin de una aromatasa, una enzima de tipo mono-oxigenasa con amplia distribucin en el Sistema Nervioso Central (SNC), y as ejercer efectos locales cerca de su sitio de produccin (Dubrovsky 2004). En 1981, Baulieu introdujo el trmino Neuroesteroides para nombrar a las hormonas esteroideas que se encontraron en el cerebro de ratas ovarectomizadas y adrenalectomizadas, ms tarde se demostr que eran sintetizadas en el cerebro (Rupreccht et al 2003). A su vez, el trmino esteroides neuroactivos se refiere a los esteroides que se producen fuera del SNC pero que ejercen sus acciones modificando la actividad neuronal a diferentes niveles y en diferentes sistemas de neurotransmisin (Dubrovsky 2004). As, por el lugar donde son sintetizados y por su accin a nivel de SNC, los estrgenos pueden ser considerados como neuroesteroides y/o esteroides neuroactivos.

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4.4 Metabolismo de estrgenos La biosntesis de novo de los estrgenos se realiza, a partir del acetato utilizando el colesterol, la androstendiona y la testosterona como intermediarios obligatorios. A partir de los andrgenos, la biosntesis de estrgenos se efecta a travs de una secuencia de reacciones enzimticas, genricamente conocidas como proceso de aromatizacin que transforma el anillo A neutro de los andrgenos en un anillo aromtico caracterstico de los estrgenos, el anillo fenlico (Fig. 6, recuadro). Esta reaccin es catalizada en tres pasos por un complejo formado por la enzima mono-oxigenasa (aromatasa) que utiliza la forma reducida de NADPH y oxigeno molecular como sustrato. A su vez, el estradiol puede oxidarse de manera reversible hasta generar estrona mediante la 17hidroxiesteroide deshidrogenasa tipo 3 y ambos estrgenos pueden convertirse en estriol. Estas transformaciones ocurren principalmente en el hgado. En mujeres premenopusicas, la principal fuente de estrgenos son los ovarios, en tanto que en varones y en mujeres post-menopusicas, la fuente principal la constituye el estroma del tejido adiposo, donde se sintetiza estrona a partir de dehidroepiandrosterona, la cual es secretada por la corteza suprarrenal (Feder 1981). 4.5 Mecanismos de accin de los estrgenos Los esteroides son compuestos no polares y por lo tanto no son solubles en el plasma as que para poder permanecer ms tiempo en el torrente sanguneo sin ser degradadas deben viajar unidos a protenas transportadoras llamadas protenas de unin a hormonas sexuales. Una vez en la clula blanco los estrgenos pueden interactuar con receptores membranales promoviendo respuestas rpidas (no geonmicas) o bien, con receptores intracelulares localizados en el citoplasma generando respuestas lentas y a largo plazo (geonmicas). En el mecanismo de accin clsico, los estrgenos se unen a

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receptores citoplasmticos, que se encuentran en estado inactivo, acoplados a protenas tipo chaperonas como son las protenas de choque trmico. La unin de la hormona al receptor provoca la disociacin de las protenas de choque trmico y el complejo hormona-receptor es transportado al ncleo en donde interacta con el DNA unindose a los elementos de respuesta hormonal del promotor. Este mecanismo de accin hormonal tomara a la clula varias horas, sin embargo desde 1960 existen evidencias de efectos hormonales no nucleares cuyos efectos son mucho ms rpidos y son, aparentemente, mediados por receptores membranales (Dubrovsky 2004). Este mecanismo de accin se denomina no geonmico e involucra la activacin de protenas G o protenas que tienen actividad de tirosina cinasa (Toran-Allerand y cols.. 1999). Estas protenas producen segundos mensajeros como el AMPc, movilizacin de calcio, la fosforilacin de MAP-cinasas y la activacin de las protenas sinasas A y C (Kelly y Wagner 1999; Lee and McEwen 2001; Mize y Alper 2000, 2002). Hasta el momento se han descubierto dos tipos de receptores para los estrgenos los ER (67 KDa) y los ER (54 KDa) ste ltimo tiene dos isoformas ER1 y el ER2. Tanto el ER como el ER interactan con elementos idnticos de respuesta al DNA y muestran ms o menos un perfil de afinidad similar para diferentes compuestos estrognicos en estudios in vitro; sin embargo, tienen un patrn diferente de distribucin en los tejidos (Hall y cols. 2001). La expresin de ER es de moderada a alta en la hipfisis, el rin, el epiddimo y la glndula adrenal; mientras que la del ER es de moderada a alta en el cerebro, la prstata, el pulmn, la vejiga y el sistema gastrointestinal (Gustafsson 2000).

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Captulo V - Estrgenos y Depresin En diversas investigaciones a nivel clnico y bsico se han encontrado diferencias genricas en la incidencia de los desordenes afectivos. Estudios epidemiolgicos demuestran que a partir de la pubertad el trastorno de depresin mayor, el distmico y el de ansiedad son de 1.5 a 3 veces ms frecuente en las mujeres que en los hombres (Berlanga y Huerta 2000; Caraveo-Arduaga y cols. 1997; Halbreich y Kahn 2001; Nemeroff 1998), adems, en comparacin con los hombres, las mujeres son ms propensas a otros tipos de desordenes afectivos como la depresin ansiosa y los desordenes afectivos estacionales (Halbreich y Kahn 2001). Aunque an se desconoce el papel de las hormonas en la modulacin de los desrdenes afectivos, diversos autores han propuesto que las hormonas gonadales, estradiol, progesterona y testosterona juegan un papel importante en estos padecimientos (Halbreich 1986, Hamilton y cols. 1988). Halbreich (1986) propuso que los cambios bruscos en los niveles plasmticos de estradiol y progesterona podran ser el factor que desencadena estos padecimientos en mujeres susceptibles. Con base en esta propuesta, se han identificado tres periodos importantes durante la vida de la mujer en los que se presentan cambios endocrinos significativos asociados con trastornos afectivos (Soares 2001) por ejemplo: Periodo El periodo premenstrual El periodo post-parto El periodo perimenopusico Desorden afectivo Desorden disfrico premenstrual (DDPM) Depresin post-parto Depresin menopusica

En el caso del DDPM se ha encontrado una correlacin entre la aparicin de sntomas de depresin y el descenso en las concentraciones plasmticas de estradiol y progesterona durante la fase ltea tarda del ciclo menstrual (Halbreich y Kahn 2001). 27

En el caso de la depresin post-parto, se ha encontrado una correlacin positiva entre la cada brusca de los niveles plasmticos de hormonas ovricas despus del parto, particularmente de la progesterona, y la depresin (Jensvold 1996b; Sichel y cols. 1995). En la depresin asociada a la perimenopausia, se da una oscilacin de los niveles plasmticos de las hormonas gonadales, en particular de los estrgenos, que se correlacionan con la aparicin o el incremento de sntomas de depresin durante este periodo de la vida de la mujer (Soares 2001). La restitucin hormonal con compuestos con actividad estrognica como el E2 y el equiln estradiol, entre otros, reducen los sntomas de depresin post-parto o en la etapa perimenopusica (Rubinow y cols. 1998). A la fecha se ha estudiado extensivamente el efecto antidepresivo de los estrgenos as como el efecto facilitador de los estrgenos sobre los tratamientos antidepresivos, sin embargo, se presentan diferencias metodolgicas notables entre cada uno de los trabajos (Amsterdam y cols. 1999, Berlanga 1988, Schneider y cols. 1997, 2001; Soares y cols. 2001) lo que hace difcil la implicacin de los estrgenos en los trastornos afectivos. En cuanto a la investigacin bsica, a finales de los 90 dos grupos de investigacin evaluaron el efecto de un tratamiento crnico con benzoato de estradiol y E2 en el modelo de nado forzado en ratas hembras ovarectomizadas (Okada y cols. 1997; Rachman y cols. 1998). Dos esteroides promovan efectos semejantes a los antidepresivos en este modelo animal. Adems el E 2 y el etinilestradiol tienen efectos antidepresivos en ratas ovarectomizadas en el modelo de nado forzado (Estrada-Camarena y cols. 2003). A pesar de estos antecedentes no se ha definido la participacin del sistema serotonrgico como mediador de las acciones de los estrgenos.

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5.1 Estrgenos y serotonina La presencia de receptores citoplasmticos a estradiol (ER) y a progesterona (PR) convierte a la clula en blanco para la accin de sus ligndos especficos. Mediante las tcnicas de inmunoistoqumica, autorradiografa de receptores e hibridacin in situ se ha reportado la presencia de ER y PR en el CNS del pollo (Sterling et al; 1987), el ratn (Shughrye et al; 1992), la rata (Romano et al; 1989), cobayos (Don Carlos et al; 1989), el gato (Bayliss et al; 1991) y en primates (Pfaff et al; 1976). (Bethea et al 1998). Estudios en primates no humanos muestran la presencia de receptores a estrgenos tanto del tipo ER- y ER- en neuronas serotonrgicas del rafe dorsal (Shively et al 2004); de esta manera las hormonas esteroideas podran estar regulando las funciones de estas clulas serotonrgicas a diferentes niveles como son la sntesis, la recaptura, la degradacin e interaccin con autoreceptores 5HT1A que regulan la actividad de dichas neuronas. Debido a que los ER actan como factores de trascripcin, se sugiere que los estrgenos estaran regulando la expresin de los genes que codifican para cada una de las protenas involucradas en los diferentes niveles de accin de las neuronas serotonrgicas. A continuacin se describe el mecanismo propuesto mediante el cual los estrgenos podran ejercer sus acciones en las neuronas serotonrgicas. Las acciones de los estrgenos sobre los niveles de serotonina podran deberse a sus acciones sobre la enzima triptofano hidroxilasa. Ya que los estrgenos (E2 y equin estrgenos) aumentan la expresin de la enzima triptofano hidroxilasa en el rafe dorsal de monos rhesus (Bethea y cols. 2000) y cobayos (Betea y cols. 1998). Si bien estudios en realizados en el ncleo dorsal del rafe de la rata no se ha encontrado que la expresin de la enzima triptofano hidroxilasa sea modulada directamente por estrgenos (McEwen y Alves 1999), existen estudios inminohistoqumicos que revelan la existencia de RNAm para receptores

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a estrgenos del tipo en neuronas del mismo ncleo (McEwen y Alves 1999). As, aunque la protena no ha sido detectada hasta el momento, se sugiere que los estrgenos podran modular la actividad de la enzima o su sntesis a travs de RE tipo y, de ese modo, incidir sobre los niveles de serotonina (McEwen y Alves 1999). Otro sitio a travs del cual los estrgenos influyen en los niveles de serotonina es el transportador de serotonina (SERT, serotonin transporter). Estudios realizados en macacos revelan que el E 2 aumenta la expresin de la triptofano hidroxilasa al mismo tiempo que disminuyen el RNAm del SERT (Behtea y cols. 2002). Asimismo, estudios realizados en diferentes reas del cerebro de la rata indican que el tratamiento crnico (7 das) o agudo con benzoato de estradiol disminuye el numero de sitios de unin a [ 3H] paroxetina (Mendelson y cols.1993). Estos resultados coinciden con los obtenidos en estudios in vitro realizados en membranas obtenidas de corteza cerebral, hipocampo, hipotlamo y ncleo estriado en las que se encontr que algunos compuestos estrognicos interactan con el transportador de serotonina, ya sea inhibiendo su actividad o disminuyendo su numero (Chang y Chang 1999; Gras y cols. 1983; Stockert y De Robertis 1985). Asimismo, en 1988, Wilson y cols., demostraron en un estudio realizado in vivo e in vitro que el estradiol a concentraciones elevadas disminuye los sitios de unin a imipramina en el cerebro de la rata (Wilson y cols. 1988). En cuanto a la accin de los estrgenos sobre receptores serotonrgicos 5HT1A se ha reportado que el E2 disminuyen la unin del ligando a receptores 5HT1A post-sinpticos en el hipotlamo y a receptores 5-HT 1A pre-sinpticos en el ncleo del rafe dorsal. (Lu y Behtea 2002). En este estudio los autores demuestran que la desensibilizacin del receptor 5-HT 1A tanto pre como-post-sinptico estn asociados a la disminucin de protenas Gi acoplados a ese receptor (Lu y Betea 2002). Estos resultados son similares a los encontrados en estudios in vitro en los que se observa que el estradiol produce la desensibilizacin funcional del receptor 5-HT1A debido a la disminucin de la protena Gi/0 (Mize y Alper 2000, 2001; Raap

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y cols. 2000). Dado que el efecto de los estrgenos sobre el receptor 5-HT 1A es similar en condiciones agudas y crnicas, es posible que este receptor sea un sitio de interaccin entre el sistema serotonrgico y los estrgenos. En forma paralela, diversos reportes indican que la expresin de receptores 5-HT2A y 5-HT2C es afectada por estrgenos. Estudios realizados por Sumner y Fink demuestran que una sola aplicacin de E 2 a ratas ovarectomizadas inducen un aumento significativo del receptor 5-HT 2A en el ncleo dorsal del rafe, la corteza frontal anterior, el cngulo, la corteza olfatoria primaria, algunos ncleos amigdalinos y el ncleo accumbens (Summer y Fink 1995; Fink y cols. 1996). En consideracin con estos hallazgos, Cry y cols., en el 2000 encuentran que la reduccin del receptor 5-HT2A inducida por la ovarectoma es revertida por la aplicacin de estradiol. En relacin al receptor 5-HT 2C estudios de hibridacin in situ indican que el tratamiento crnico con E2 induce la disminucin del RNAm de este receptor en el hipocampo de la rata (Birzniece y cols. 2002). Estudios recientes sealan que los receptores 5-HT 3 son blanco de las hormonas gonadales, estradiol y progesterona (Rupprecht y cols. 2001). En este receptor, compuestos estrognicos como el E 2, 17-estradiol y etinil estradiol, se comportan como antagonistas y se considera que sus acciones dependen de la estructura qumica del esteroide (Rupprecht y cols. 2001). Aunque no se ha determinado la participacin de este receptor en los desordenes psiquitricos, se considera que el antagonismo funcional de las hormonas gonadales sobre el receptor 5-HT3 podra jugar un papel importante en el control de algunos sntomas vegetativos como la nusea durante la gestacin. Es importante sealar que las reas cerebrales en las que se reportan cambios en receptores serotonrgicos por accin de los estrgenos forman parte del sistema lmbico, el cual esta involucrado en la modulacin de los desordenes afectivos y en el mecanismo de accin de frmacos psicotrpicos, incluyendo los antidepresivos (Duman 1999), por lo anterior, es factible considerar que las

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acciones de los estrgenos sobre los sitios de accin de la serotonina, as como de otros neurotransmisores, podran influir en la depresin y en el mecanismo de accin de los tratamientos antidepresivos. En el caso particular del receptor 5-HT 1A diversos grupos de trabajo han reportado cambios en la sensibilidad de receptor como consecuencia de la administracin crnica y sub-crnica de antidepresivos dependiendo del rea de estudio. Por ejemplo, Blier y cols (1997; 2003) reportan la desensibilizacin del receptor en el ncleo del raf dorsal. As mismo otros grupos han mostrado de manera consistente cambios en la sensibilidad del receptor en sitios post-sinpticos como el hipocampo (Lu y Betea 2002), la corteza cerebral y el hipotlamo (Li y cols 1997; 1996). Estos datos sugieren que este receptor es uno de los sitos blancos de los tratamientos antidepresivos. En un estudio reciente se encontr que el efecto antidepresivo del E 2 en el modelo de nado forzado es cancelado por un antagonista selectivo al receptor serotoninrgico 5-HT1A, el WAY 100635 (Estrada Camarena y cols., 2005). Este resultado sugiere la participacin de este receptor como posible blanco de las acciones antidepresivas del estrgeno, sin embargo se desconoce si la accin del esteroide se debe a la interaccin con sitios pre- o post-sinpticos.

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Captulo VI - Planteamiento del problema Se sabe que el E2 tiene un efecto similar al de la fluoxetina en la prueba de nado forzado, esto es, disminuye la inmovilidad y aumenta el nado sin provocar cambios en el escalamiento (Estrada-Camarena et al 2003), lo que sugiere la participacin del sistema serotonrgico en el efecto del E 2. En un estudio previo se encontr que el efecto antidepresivo del E 2 es bloqueado por el antagonista al receptor 5-HT1A, WAY100635 (Estrada-Camarena y cols. 2005). Estos datos sugieren que las acciones antidepresivas del E 2 reportadas en el modelo de nado forzado podran estar mediadas por el sistema serotonrgico en particular por los receptores 5-HT1A. Hasta el momento, no existen reportes en donde se evale directamente el papel del sistema serotonrgico, as como el de los receptores pre y/o post-sinpticos, en el efecto antidepresivo del E 2 en vivo en un modelo conductual como el modelo de nado forzado. Por lo que en este estudio se estudiara el efecto de la serotonina cerebral en las acciones antidepresivas del E 2 en ratas hembras ovariectomizadas

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Captulo VII - Hiptesis Si el efecto antidepresivo del E2 es mediado por serotonina, entonces es posible que la disminucin de serotonina en el SNC de la rata cancele el efecto del E2 en el modelo de nado forzado. Si el efecto antidepresivo del E 2 observado en el modelo de nado forzado esta mediado por receptores pre-sinpticos, entonces la destruccin de las terminales pre-sinpticas cancelar el efecto antidepresivo del E 2 en el modelo de nado forzado. Por ltimo, si la accin antidepresiva del E 2 es regulada por receptores postsinpticos, el bloqueo de stos cancelar el efecto del E 2 en el modelo de nado forzado. Captulo VIII Objetivos 8.1 Objetivos Generales A) Determinar si el sistema serotonrgico est involucrado en el efecto antidepresivo del E2 en el modelo de nado forzado en rata B) Determinar si el efecto antidepresivo del E 2 es mediado por la va serotonrgica pre y/o post-sinptica.

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8.2 Objetivos Particulares 1.- Determinar el efecto de la inhibicin de la sntesis de serotonina en ratas ovariectomizadas con y sin tratamiento con 17 -estradiol sometidas al modelo de depresin de nado forzado (Forced Swimming Test o FST). 2.- Determinar el efecto de la destruccin de neuronas serotonrgicas, por la administracin intracerebroventricular de la neurotoxina 5,7-DHT, en ratas ovariectomizadas con y sin 17 -estradiol, sometidas al FST. 3.- Analizar el efecto del antagonismo 5-HT1A post-sinptico sobre la accin del 17 -estradiol en el modelo de depresin FST.

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Captulo IX - Material y mtodo 9.1 Sujetos experimentales En todos los experimentos se utilizaron ratas hembra de la cepa Wistar (250-300g) ovariectomizadas, mantenidas en un bioterio de estancia, con ciclo invertido de luz-obscuridad de 12/12 h., y libre acceso al agua y al alimento. 9.2 Ovariectoma (OVX) Con el fin de suprimir la fuente de estrgenos los animales fueron sometidos a una ovariectoma bilateral para lo cual fueron anestesiadas con 2,2,2Tribromoethanol (Fluka Cat. 90710) a una dosis de 200mg/kg, i.p. La ciruga consisti en realizar una incisin longitudinal sobre la piel y el msculo del animal hasta exponer los oviductos y los ovarios. Una vez localizados, se ligaron los oviductos, se extirparon los ovarios y se suturaron el msculo y la piel del animal. Finalmente, las ratas fueron mantenidas en el bioterio de residencia durante tres semanas antes de ser sometidas a los experimentos. 9.3 Modelo de nado forzado El modelo de nado forzado consta de dos sesiones, pre-prueba y prueba, con un intervalo de 24 hrs., entre cada una. Durante la pre-prueba se coloca a la rata en un cilindro de vidrio (46 cm de altura x 20 cm de dimetro) con 30 cm de agua a una temperatura de 19-21C, de forma tal que el animal no puede tocar el fondo del estanque ni tampoco puede escapar de l. La pre-prueba tiene una duracin de 15 min., y es la inductora de desesperanza. Una vez terminada la sesin el animal es retirado del estanque, se seca con una franela y se deja en una caja con calor hasta que el animal recupera su temperatura normal, despus se regresa a su caja de residencia; 24 horas despus se lleva a cabo la prueba con una duracin de 5 minutos en donde se video-graban las conductas que presenta el animal durante la prueba Posteriormente la grabacin es revisada y se evalan las conductas mostradas por el animal durante la prueba. El observador

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registra a intervalos de 5 segundos, la conducta realizada por el animal (escalamiento, nado o inmovilidad). De esta forma al final de la sesin se obtiene la frecuencia con un total de 60 cuentas repartidas en las tres conductas evaluadas. 9.4 Prueba locomotriz Para poder descartar un posible efecto de los tratamientos sobre la actividad locomotriz se midi la conducta ambulatoria del animal. El registro se realiz en una caja de acrlico transparente de 43 X 36 X 19 cms., la cual es marcada y dividida en la base por 12 cuadros iguales (11 X 11 cm). El animal es colocado en una de las esquinas de la caja y se cuenta el nmero de cruces que el animal hace durante una sesin de 5 minutos (Estrada-Camarena 2002). 9.5 Frmacos y esteroides Los frmacos y esteroides utilizados en este estudio fueron: ParaClorofenilalanina (pCPA) (SIGMA) resuspendida en Metil celulosa 2%, 5,7Dihidroxitriptamina (5,7-DHT) (Fluka) que fue disuelta en cido ascrbico 0.2%, 1(2-methoxyphenyl)-4-[(4-succinimido)butyl]-piperazine ( MM-77) (Tocris) resuspendido en solucin salina 0.9% con una o dos gotas de Tween 80, Desipramina (SIGMA) disuelta en solucin salina 0.9% y 17- estradiol (SIGMA) diluido en aceite de maz con una o dos gotas de diclorometano.

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9.6 Experimento 1 Participacin de la serotonina en los efectos antidepresivos del E2 en el modelo de nado forzado

Para poder cubrir el primer objetivo se utiliz pCPA (Fig. 7) un potente inhibidor de la tirosina hidroxilasa que depleta las concentraciones de serotonina totales del cerebro de la rata y otros rganos (Kenneth and Weissman, 1966; Weissman, 1973).

Fig. 7. Estructura qumica del pCPA

La dosis que se utiliz fue 200 mg/kg, i.p. en dos administraciones 48 y 24 horas antes de la prueba. Se sabe que este tratamiento reduce los niveles de serotonina del cerebro de la rata un 93% (Page 1999). El E 2 (10g/rata) se administr s.c, 24 hrs., antes de la prueba (Estrada-Camarena 2003). Esta dosis fue tomada de Estrada- Camarena (2003), la cual mostr tener efecto antidepresivo en el modelo de nado forzado. Las ratas utilizadas para este experimento fueron ovariectomizadas y 21 das despus se dividieron en cuatro grupos experimentales: a) Los animales que recibieron pCPA + E2. (n=15) b) Los animales que recibieron E2 + el vehculo de pCPA.(n=14) c) Los animales que recibieron pCPA + el vehculo de E 2. (n=15) d) Los animales que recibieron nicamente los vehculos de pCPA y E 2 (n=12)

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9.7 Experimento 2 Destruccin de la presinapsis serotonrgica con 5,7-DHT y efecto antidepresivo del E2 en el modelo de nado forzado

Para poder cubrir el segundo objetivo se utiliz la neurotoxina 5,7-DHT. (Fig. 8) Esta es una neurotoxina anloga a la serotonina que destruye los axones y las terminales de las neuronas serotonrgicas (Anders, 1978). Sus propiedades neurotxicas fueron descritas por primera vez por Baumgarten en 1971 (Jonson 1980). Poco tiempo despus numerosos laboratorios confirmaron los mismos resultados. Se ha utilizado ampliamente para el estudio de las proyecciones serotonrgicas en el SNC mediante estudios histolgicos y farmacolgicos entre otros. HO N H

CH2

CH2

NH2

OH

Fig. 8. Estructura qumica de la 5,7-Dihidroxitriptamina

La administracin de 5,7-DHT (200 g/10l) va intracerebroventricular (icv) causa una reduccin del 75 al 95% del total de la serotonina en el cerebro de la rata (Anders, 1978). Sin embargo, la 5,7-DHT tambin tiene efectos sobre las neuronas noradrenrgicas disminuyendo la concentracin de noradrenalina del cerebro de la rata un 50%, sin embargo este efecto puede evitarse bloqueando los sitios de recaptura de 5,7-DHT en las neuronas noradrenrgicas con desipramina (25mg/Kg IP) una hora antes de la lesin con 5,7-DHT (Anders, 1978).

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Administracin intracerebroventricular (icv) de 5,7-DHT Debido a que la 5,7-DHT no atravieza la barrera hematoenceflica debe ser administrada va icv., para lo cual las ratas, ovariectomizadas 21 das antes, fueron anestesiadas con 2,2,2-Tribromoethanol (200mg/Kg Ip.) y colocadas en un aparato estereotxico, la inyeccin se aplic en el ventrculo lateral izquierdo [AP= 0.8 bregma, L =1.4, DV= 3.9 mm; (Paxinos y Watson 1982) ]. La administracin de 5,7-DHT (150 g/10l cido ascrbico 0.2%), se realizo mediante una bomba de infusin calibrada para inyectar a un flujo de 5/min. Los animales control recibieron nicamente el vehculo de la neurotoxina. 60 min., antes de la lesin todos los animales fueron pretratados con desipramina (25mg/Kg Ip). Siete das despus se llevaron a cabo las pruebas conductuales (Fernndez-G. 1992). El E 2 (10g/rata) se administr despus de la pre-prueba, esto es 24 hrs. antes de la prueba (Estrada-Camarena 2003) Las ratas utilizadas en este experimento se dividieron en cuatro grupos experimentales: a) Los animales lesionados con 5,7-DHT + E2. (n=13) b) Los animales que recibieron E2 + el vehculo de 5,7-DHT. (n=10) c) Los animales lesionados con 5,7-DHT + el vehculo de E 2. (n=13) d) Los animales que recibieron nicamente los vehculos de 5,7-DHT y E 2. (n=13)

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9.8 Experimento 3 Accin del MM-77 sobre el efecto antidepresivo del E 2 en el modelo de nado forzado.

Para poder contestar a la pregunta de si el efecto del E 2 en el modelo de nado forzado esta regulado por receptores post-sinpticos, utilizamos un antagonista selectivo para receptores 5-HT1A post sinpticos el MM-77 (Fig. 9) (Mokrosz et al; 1994) O N OCH3 N N O

Fig. 9. Estructura qumica del MM-77

La dosis que se utiliz fue 0.1 mg/kg, administrado Ip despus de la preprueba (24 hrs., antes de la prueba). El 17- estradiol (10g/rata) se administr simultneamente con el MM-77, esto es 24 hrs., antes de la prueba. Diferentes autores (Gribel, et al 1999, Wesolowska, et al 2003, Aranda, et al 2005) han reportado que el MM-77 a una dosis de (0.1 mg/kg) tiene efectos significativos en diferentes pruebas conductuales en las que medan los efectos del frmaco sobre el estrs. Las ratas ovariectomizadas se dividieron en cuatro grupos experimentales: a) Los animales que recibieron MM-77 + E2. (n=10) b) Los animales que recibieron E2 + el vehculo de MM-77. (n=9) c) Los animales que recibieron MM-77 + el vehculo de E 2. (n=10) d) Los animales que recibieron nicamente los vehculos de MM-77 y E 2. (n=12)

41

9.9 Anlisis estadsticos Los datos del experimento con la administracin de PCPA y de 5,7-DHT se analizaron con una ANOVA de dos vas tomando la deplecin o la lesin de las vas serotonrgicas como primer factor y el tratamiento con estrgenos como segundo factor. Para analizar si haba diferencias significativas entre grupos se utiliz la prueba U de Mann-Whitney. Los resultados obtenidos en el experimento 3 fueron analizados por medio de una ANOVA de una va para grupos independientes, tomando en cuenta el posible bloqueo de los receptores post-sinpticos en el efecto antidepresivo del E 2 y como prueba post-hoc se aplic la prueba U de Mann-Whitney.

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Captulo X - Resultados 10.1 - Participacin de la serotonina en los efectos antidepresivos del E 2 en el modelo de nado forzado. La Fig. 10 muestra el efecto del pCPA sobre las acciones antidepresivas del E2 en ratas ovarectomizadas en el modelo de nado forzado. El pCPA por si solo no modific significativamente ninguna de las conductas evaluadas. Como se puede ver en la Fig. 10, panel a, el E 2 disminuye significativamente la inmovilidad con respecto a su control (p=0.001), sin embargo, este efecto es cancelado cuando se administra el E2 junto con pCPA. En el panel b, se puede observar que la conducta de nado aumenta significativamente en los animales que recibieron E 2 con respecto al grupo control (p=0.001), sin embargo, el E 2 no tiene efecto cuando se administra junto con pCPA. Por ltimo en el panel c se observa que el E 2 solo o administrado con pCPA no tiene efecto sobre la conducta de escalamiento.

43

a) Inmovilidad
Inmovilidad
50 40 30 20 10 0 NS

*
NS

Cuentas / 5 min.

Vehiculos E2

CTRL

pCPA

b) Nado
Vehiculos E2

50

*
Cuentas / 5 min.
40 30 20 10 0

NS

NS

CTRL

pCPA

c) Escalamiento
Vehiculos E2

50 40 30 20 10 0 NS NS NS NS

Cuentas / 5 min.

CTRL

pCPA

Fig. 10 Efecto del pCPA (200 mg/kg ip, 48 y 24 h antes de la prueba) en las acciones
antidepresivas del 17- Estradiol (E 2. 10l/0.2ml 24h antes de la prueba) en las tres conductas evaluadas durante la prueba de nado forzado. Vehculo = Aceite de maz. CTRL = grupos tratado con metilcelulosa 2%. Prueba post-hoc U de Mann-Whitney *p<0.05

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Anlisis de varianza de dos vas (Two-Way ANOVA) En la tabla 3 podemos ver que en la conducta de inmovilidad, el E 2 si tiene efectos sobre sta. El bloqueo de la sintesis de serotonina con pCPA no influye sobre la conducta de inmovilidad y la interaccin (E 2 + pCPA) indica que el efecto del estrgeno sobre la conducta de inmovilidad es dependiente de los niveles de serotonina. En el nado: el aumento del nado es dependiente del estrgeno; el bloqueo de en la sintesis de serotonina modifica esta conducta; sin embargo, la interaccin pCPA + E2 indica que el efecto del estrgeno sobre el nado es dependiente de los niveles de serotonina El escalamiento: no es modificado por ninguno de los tratamientos. Tabla 3. Resultados de la ANOVA de dos vas para determinar el efecto del tratamiento con pCPA en las acciones antidepresivas del E 2 Conducta Inmovilidad Factor pCPA E2 E2 - pCPA pCPA E2 E2 - pCPA pCPA E2 E2 - pCPA Valor de F 3.19 13.27 18.41 6.70 20.12 12.81 0.05 0.116 1.28 Valor de P ns <0.001 <0.001 0.012 <0.001 <0.001 ns ns ns

Nado

Escalamiento

Nota: Valores de P<0.05 son estadsticamente significativos

10.2 Destruccin de la presinapsis serotonrgica con 5,7-DHT y efecto antidepresivo del E2 en el modelo de nado forzado

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La Fig. 11 muestra los efectos de la neurotoxina 5,7-DHT sobre las acciones antidepresivas del E2 en el modelo de nado forzado. La 5,7-DHT por s misma no modific significativamente ninguna de las conductas evaluadas. Como se puede observar en el panel a, el E 2 disminuye significativamente la conducta de inmovilidad con respecto a su control (p =0.002), mientras que en los animales tratados con 5,7-DHT el efecto del E 2 no se observa cuando se compara contra su propio control. Sin embargo, al comparar el efecto de E 2 en animales lesionados vs., el efecto de E2 en animales sham no se encuentra diferencia significativa. El E2 aumenta significativamente la conducta de nado con respecto al control (p =0.007), mientras que en los animales tratados con 5,7-DHT el E 2 no tiene efecto; panel b. Por ltimo, como se puede observar en el panel c, ninguno de los tratamientos modific de manera significativa la conducta de escalamiento.

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a) Inmovilidad

50 40
Cuentas / 5 min.

NS NS

Veiculos E2

NS

30 20 10 0
Sham 5,7-DHT

b) Nado

50 40
Cuentas / 5 min

NS NS

vehiculos E2

30 20 10 0

NS

Sham

5,7-DHT

c) Escalamiento

50

vehiculos E2 NS NS NS NS

40
Cuentas / 5 min

30

20

10

0
Sham 5,7-DHT

Fig. 11 Efecto del 5,7-DHT (150 g/10l icv, una semana antes de la prueba) en las acciones
antidepresivas del 17- Estradiol (E2. 10l/0.2ml -24h) En las tres conductas evaluadas durante la prueba de nado forzado. Vehculos = Aceite de maz, Sham = cido ascrbico 0.2%. Prueba posthoc U de Mann-Whitney *p<0.05.

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Anlisis de varianza de dos vas (Two-Way ANOVA) En la tabla 4 se puede ver los resultados del ANOVA de dos vas del experimento con 5,7-DHT. En este caso se puede observar que la administracin de la 5,7-DHT por s misma no tiene efecto sobre las conductas analizadas, mientras que el E2 tiene efectos significativos tanto en inmovilidad como en nado y en escalamiento. Por ltimo no hay efectos significativos en la interaccin E 2 - 5,7DHT en ninguna de las conductas evaluadas. Tabla 4. . Resultados de la ANOVA de dos vas para determinar el efecto del tratamiento con 5,7-DHT en las acciones antidepresivas del E 2.

conducta Inmovilidad

Factor 5,7-DHT E2 E2 + 5,7-DHT 5,7-DHT E2 E2 + 5,7-DHT 5,7-DHT E2 E2 + 5,7-DHT

Valor de F 0.568 15.95 2.276 0.037 7.675 2.498 0.434 4.697 0.184

Valor de P ns <0.001 ns ns 0.008 ns ns 0.036 ns

Nado

Escalamiento

Nota: Valores de P<0.05 son estadsticamente significativos

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10.3 Accin del MM-77 sobre el efecto antidepresivo del E 2 en el modelo de nado forzado La Fig. 12 muestra los efectos del antagonista al receptor 5-HT 1A postsinptico, MM-77 sobre las acciones antidepresivas del E 2 F(3,40) = 9.4, P<0.001 en el modelo de nado forzado. Como se puede ver en el panel a el E 2 disminuye significativamente la inmovilidad con respecto a su control (p=<0.001), mientras que el MM-77 no tiene acciones por s mismo. Sin embargo, cuando se administra simultneamente el MM-77 con el E2, los efectos ste ltimo se cancelan. De la misma forma, en el panel b se puede observar que la administracin de E 2 aumenta significativamente la conducta de nado F(3,40) = 23.32, P<0.001 con respecto al control (p=<0.001), mientras que en los animales tratados con MM-77 el E2 no tiene efecto. Por ltimo, en el panel c F(3,40) = 7.44, P<0.001 se puede ver que tanto el MM-77 como el E2 disminuyen la conducta de escalamiento (p=0.021 y P0<0.002, respectivamente), sin embargo, cuando se administra el E 2 ms el antagonista, MM-77, el efecto sobre la conducta de escalamiento se pierde.

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a) Inmovilidad

50

*
NS

40

NS

Cuentas c/5 min.

vehiculos E2 MM-77 MM-77+E2

30

20

10

b) Nado
*
NS 40 vehiculos E2 MM-77 MM-77+E2

50

*
NS

Cuentas c/5 min.

30 20 10 0

c) Escalamiento
vehiculos E2 MM-77 MM-77+E2

50 40

Cuentas c/5 min.

30 20 10 0

NS

* *
NS

Fig. 12 Efecto del MM-77 (0.5 mg/kg ip. -24h) en las acciones antidepresivas del 17- Estradiol
(E2. 10l/0.2ml;-24 h) en las tres conductas evaluadas durante la prueba de nado forzado. Vehculos = Aceite de maz + tween 80. Prueba post-hoc U Mann-Whitney *p<0.05.

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10.4 Prueba locomotriz Los efectos de los diferentes tratamientos sobre la actividad locomotriz se muestran en la tabla 5. Como se puede ver el nico frmaco que disminuy la actividad significativamente fue el pCPA (P<0.015). Tabla 5. Efecto de los tratamientos utilizados en el modelo de nado forzado sobre la actividad locomotriz Tratamiento (dosis) Aceite E2 (10g/rata) pCPA (200mg/kg) 5,7-DHT (150 g/10l) MM-77 (0.5mg/kg) E2 + pCPA E2 + 5,7-DHT E2 + MM-77 Numero de Cruces /5min. 54.87 4.25 65.75 7.38 36.25 5.1* 54.9 8.4 61.0 5.6 47.37 8.2 74.75 5.6 60.77 7.1

Los datos se presentan como promedio el error estndar de la media. Mann-Whitney *p<0.005

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Captulo XI - Discusin Como se mencion anteriormente, la prueba de nado forzado fue propuesta por Porsolt y cols. (1977) como un modelo de depresin en roedores y actualmente se utiliza como un modelo para evaluar frmacos con potencial antidepresivo (Borsini y Meli 1988). Detke y cols. (1995) proponen que al analizar las conductas activas, nado y escalamiento, es posible discernir el sistema de neurotransmisin participante en el efecto antidepresivo del frmaco evaluado (Detke y cols. 1995). As, se considera que una disminucin de la conducta de inmovilidad a expensas de un aumento en la conducta de nado, es resultado del efecto antidepresivo de frmacos cuya accin est mediada principalmente por el sistema serotonrgico; mientras que aquellos antidepresivos que actan sobre el sistema noradrenrgico disminuyen la conducta de inmovilidad aumentando el escalamiento (Cryan y cols. 2000; Detke y cols. 1995; Espejo y Minao 1999; Page y cols. 1999; Lucki 1997). En el presente estudio se observ el efecto antidepresivo del E 2 en ratas ovariectomizadas en el modelo de depresin de nado forzado. Este compuesto indujo una disminucin en la conducta de inmovilidad y un aumento en la conducta de nado sin efecto en el escalamiento. Cabe sealar que este perfil conductual es similar al reportado por otros autores para estrgenos (Estrada-Camarena 2003, Rachman y cols. 1998) y antidepresivos serotonrgicos como son: los inhibidores selectivos de la recaptura de serotonina (ISRS) (fluoxetina y sertralina) (Detke et al, 1995; Page et al, 1999), antidepresivos tricclicos como clorimipramina, y con algunos agonistas al receptor 5-HT 1A como son el indorrenato y la 8-OH-DPAT (Martnez Mota et al 2002; Estrada-Camarena, 2005). Estos resultados sealan que la serotonina juega un papel importante en el efecto antidepresivo del E 2. Con base en estos antecedentes se plante el primer objetivo del trabajo que fue comprobar si el sistema serotonrgico est involucrado en el efecto antidepresivo del E2. Para ello se utiliz la pCPA que es un inhibidor selectivo de la tirosina hidroxilasa, la enzima limitante en la biosntesis de serotonina (Koe y Weissman,

52

1966). Inicialmente se analiz el efecto del PCPA per se en el FST y posteriormente se estudi la accin del E2 cuando se administra en ratas previamente tratadas con pCPA. Los resultados indican que la deplecin de serotonina no alter el patrn conductual basal de las ratas sometidas al FST. Resultados similares han sido reportados por otros autores en el mismo modelo de depresin (Page y cols. 1999; Cervo y cols. 1991; Lucki y cols. 1994). Al respecto se sugiere que la serotonina podra estar ms involucrada en mediar la respuesta de los antidepresivos con actividad serotonrgica que en inducir la conducta de desesperanza en el modelo de nado forzado (Page y cols. 1999). Estos resultados concuerdan con lo reportado en otros modelos de depresin como lo es el modelo de desesperanza aprendida donde el pCPA por s mismo no altera la conducta basal de los animales sometidos a este modelo (Anisman y cols., 1979). Al administrar E2 en ratas pretratadas con pCPA, el efecto antidepresivo del E2 fue totalmente cancelado sealando que la serotonina es indispensable para que el E2 pueda tener efectos antidepresivos. Es interesante sealar que la pCPA tambin bloquea por completo la accin de antidepresivos como son los ISRS, fluoxetina y paroxetina, en el modelo de nado forzado (Page y cols. 1999; Redrobe 1998), lo que nos indica que tanto el E 2 como los ISRS actan de manera similar en el sistema serotonrgico. El mecanismo de accin de los ISRS, como la fluoxetina se da en varias fases. Al inicio del tratamiento, los ISRS bloquean el transportador selectivo de la recaptura de serotonina (SERT, por sus iniciales en ingls) aumentando los niveles de serotonina en el soma y las dendritas de las neuronas. Al cabo de un tiempo, el incremento sostenido del neurotransmisor provoca la desensibilizacin de los receptores somatodendrticos 5-HT 1A y de los autoreceptores 5-HT 1B, facilitando as, la liberacin de serotonina en la terminal sinptica (Blier, 2001; Duman y cols., 1997; Pieyro y Blier, 1999; Stahl, 1998). Finalmente, el aumento de los niveles de serotonina en el espacio sinptico conduce a la desensibilizacin o bien a la sensibilizacin, segn sea el caso, de receptores post-sinpticos del

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tipo 5-HT1A y 5-HT2A/2C (Li y cols., 1996; 1997; Massou y cols., 1997; Palvimki y cols., 1996; Raap y Van de Kar, 1999). A la fecha, no se conoce del todo el mecanismo de accin de los estrgenos como antidepresivos. En trabajos recientes se ha reportado que los estrgenos pueden actuar directamente con receptores serotonrgicos. As, el E 2 induce una desensibilizacin de los receptores 5-HT1A, 5-HT1B (Mize y Alper 2000; Raap y cols. 2000; Uphouse 2000) y promueven un incremento en el nmero de receptores 5-HT 2A. En trabajos previos de nuestro laboratorio se ha demostrado que el efecto antidepresivo del E 2 es bloqueado por el antagonista selectivo 5-HT1A, WAY 100635 (Estrada-Camarena y cols.,2005) y ms an se logr facilitar las acciones del E 2 (a una dosis subefectiva) al ser combinada con dosis subptimas del agonista selectivo 5-HT 1A, 8-OH-DPAT (Estrada-Camarena y cols., 2005). Estos datos indican que el receptor 5-HT1A est involucrado de manera importante en el efecto antidepresivo del E2. Cabe sealar que el WAY 100635 bloquea receptores 5-HT 1A tanto precomo post-sinpticos. Como se mencion anteriormente, se ha propuesto que en la accin de antidepresivos como los ISRS participan estos dos tipos de receptores. Inicialmente, hay una desensibilizacin de los receptores somatodendrticos 5-HT1A (Blier, 2001; Duman y cols., 1997; Pieyro y Blier, 1999; Stahl 1998) y posteriormente los receptores post-sinpticos (Li y cols., 1996; 1997; Raap y Van de Kar, 1999). Estudios in vitro e in vivo han demostrado que el E 2 induce una desenzibilizacin de receptores 5-HT 1A tanto pre-sinpticos (Mize y Alper, 2000, 2001; Raap y cols., 2000) como post-sinpticos posiblemente a travs de la reduccin de la protena Gi/0 en reas cerebrales como la corteza frontal, hipocampo e hipotlamo (DSouza y cols., 2001; Mize y Alper 2000, 2001, 2002; Raap y cols., 2000; Uphouse 2000; Van de Kar, 2002). Hasta el momento no existen reportes en donde se evale el papel de los receptores 5-HT 1A pre y/o post-sinpticos, en el efecto antidepresivo del E 2. En este trabajo decidimos analizar el papel de los receptores pre-sinpticos eliminando la pre-sinapsis serotonrgica con la administracin intracerebroventricular de la neurotoxina 5,7-

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DHT. Esta es una neurotoxina anloga a la serotonina que destruye los axones y las terminales pre-sinpticas de las neuronas serotonrgicas (Nobin, 1978). Al analizar el efecto del 5,7-DHT por si mismo, en ratas sometidas al FST, se observ que esta neurotoxina no modifica la conducta basal de las ratas. Otros autores han descrito resultados similares en este modelo de depresin (Wieland y Lucki, 1990; Cervo y cols., 1991; Lucki y cols., 1994) lo que indicara, al igual que en animales tratados con pCPA, que la serotonina basal no influye directamente en el establecimiento de la conducta de desesperanza en el modelo de depresin de nado forzado. Por otra parte, la administracin de 5,7-DHT por va intracerebroventricular cancel parcialmente el efecto antidepresivo del E 2. Considerando que la serotonina es necesaria para establecer el efecto antidepresivo del E 2 (experimento 1) y que la destruccin de las terminales serotonrgicas conduce a la prdida parcial de su efecto antidepresivo (experimento 2), es posible proponer que para el establecimiento total del efecto antidepresivo del E 2 sea necesaria la participacin tanto de los receptores 5-HT1A pre como post-sinpticos. Se ha estudiado ampliamente la participacin de los receptores 5-HT 1A pre y/o post-sinpticos en el efecto antidepresivo de agonistas 5-HT 1A en el nado forzado. Sin embargo, hay todava mucha controversia. Por una parte, se apoya una accin pre-sinptica dado que la administracin local de agonistas 5-HT 1A como el 8-OH-DPAT o la buspirona en el rafe dorsal disminuye la inmovilidad en el FST (Cervo et al., 1988; Schreiber y De vry, 1993). As mismo, hay reportes en donde la destruccin de neuronas serotonrgicas pre-sinpticas con 5,7-DHT bloquea los efectos antidepresivos del 8-OH-DPAT (Cervo y Samanin, 1991). Sin embargo, otros autores apoyan la teora de una accin post-sinptica de los agonistas 5-HT1A. Por ejemplo, Weiland y Lucki (1990) no lograron bloquear las acciones antidepresivas del 8-OH-DPAT o tandospirona en el FST con la administracin de pCPA y ms aun, otros autores sealan que la administracin de 5,7-DHT no alter el efecto antidepresivo de diferentes frmacos como la

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fluoxetina y sertralina en el modelo de desesperanza aprendida (Soubrie y cols., 1986) y en el modelo de nado forzado (Soubrie y cols., 1986; Cervo y cols., 1991; Lucki y cols., 1994). Por ltimo, la administracin directa de 8-OH-DPAT o ipsapirona en el septum lateral induce un efecto antidepresivo en el modelo de nado forzado. Por ltimo, en 1994 se sintetiz un nuevo ligando al receptor 5-HT 1A, el MM77, el cual demostr ser un potente antagonista 5-HT 1A post-sinptico. Es decir, este compuesto pudo bloquear efectivamente el sndrome serotonrgico inducido por 8-OH-DPAT (efecto post-sinptico) pero no la hipotermia inducida por el mismo compuesto (efecto pre-sinptico) (Mokrosz y cols., 1994). Con base en estos antecedentes, se utiliz este compuesto como una herramienta extra para analizar la participacin de receptores 5-HT 1A pre y/o post-sinpticos en el efecto antidepresivo del E2. Nuestros resultados indican que el MM-77 por s solo no tiene ningn efecto en el modelo de nado forzado pero cuando se administra junto con el E2 el efecto antidepresivo de este ltimo es cancelado por completo. Estos resultados apoyan la hiptesis de que el E 2 acta en los receptores postsinpticos. La prueba de actividad locomotora fue diseada para evaluar la actividad exploratoria en los roedores y es comnmente utilizada en combinacin con el modelo de nado forzado para descartar las acciones inespecficas de los tratamientos usados. En este trabajo el nico frmaco que disminuy significativamente la actividad fue el pCPA, sin embargo, increment la actividad durante la prueba de nado forzado. As, el efecto observado en la actividad locomotora con pCPA no interfiere con las conductas activas observadas durante el FST.

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Conclusin Con base en las herramientas utilizadas en el presente trabajo podramos concluir lo siguiente: nuestros resultados muestran que es necesaria la presencia de serotonina para poder observar los efectos antidepresivos del E 2, tambin sabemos que la destruccin de la pre-sinapsis bloquea parcialmente el efecto antidepresivo del E2, lo que nos hace pensar que existen elementos pre-sinpticos involucrados en el efecto antidepresivo del E 2, que, aunque no son determinantes para consolidar el efecto antidepresivo total, si podran estar participando en la regulacin de ste. Por ltimo demostramos que la participacin de los receptores post-sinpticos en el efecto antidepresivo del E 2 es indispensable para poder establecer o cancelar por completo el efecto del E 2 en el modelo de nado forzado.

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