Professional Documents
Culture Documents
Objetivos: Establecer los factores que modifican la actividad enzimtica. Analizar cada factor que modifica la velocidad de reaccin enzimtica. Analizar cada sistema de reacciones llevadas a cabo en la prctica, y determinar sus caractersticas de cada una de ellas.
I.
PROCEDIMIENTOS:
Buffer fosfato 0.1 M pH = 6.6, Buffer borato 0.1 M pH = 9, Sol. NaCl 0.2%, HCl 0.05N, Sol. Iodada, Sol. Cprica alcalina.
Sol. Almidn 1%
Sol. Enzimtica
A. Sistema de incubacin:
COMPONENTES / TUBOS Solucin de almidn 1% ml Buffer acetato 0,1 M pH= 4,6 Buffer fosfato 0,1 M pH = 6,6 Buffer borato 0,1M pH =9
I 1 ----5 -----
II 1 --5 -----
III 1 5 ---------
IV 1 ---5 -----
V 1 ------5
VI 1 ---5 ----
I 1,4 2,6
II ----3,4
IV 1,4 2.6
V 1,4 2.0
VI 1,4 2.0
I 0.0
II 0.6
III 0.6
IV 0.2
V 0.6
VI 0.6
VII 0.6
VIII 0.6
MEZCLAR: continuar la incubacin, computar el tiempo desde el momento que el preparado enzimtico fue agregado.
Los controles de la actividad enzimtica se realizaran a los 10 y 30 minutos de acuerdo a los sistemas que a continuacin se presentan.
2
I I 2.5ml
VI VI 2.5 ml
VIII ---2.5 ml
1. Control de la actividad enzimtica a los 10 minutos de la incubacin: Utilizar la serie de tubos control correspondiente a los 10 minutos:
a.
Cumplidos los diez minutos de incubacin de los respectivos sistemas de incubacin transferir 0,5 ml del incubado a los correspondientes tubos control , mezclar:
b. Agregar a cada tubo control 0,5 ml de solucin iodada y mezclar. c. Observar y anotar los resultados de las reacciones valorando en forma de cruces: una disminucin ligera del color respecto al patrn 1= + otra algo ms intensa = ++, etc., sino hubiera cambio alguno = O
2. control de la actividad enzimtica a los 30 minutos de la incubacin : Utilizar la serie de tubos control correspondiente a los 30 minutos.
I 2.5ml
VI 2.5 ml
VII 2.5 ml
---2.5 ml
cumplidos los 30 minutos de incubacin de los respectivos sistemas de incubacin transferir 0,5 ml del incubado a los correspondientes tubos control, mezclar, b y c. son exactamente iguales a los 1 (b) y (c)
3. Control de los productos formados o de transformacin: Se realiza por la capacidad reductora de los oligo y mono sacridos resultantes sobre el cobre y la subsecuente de este con el fosfomolibdato.
1.
este control se realizara con los tubos VI y VII de incubacin enzimtica a los 10 y 30 minutos de incubacin.
COMPONENTES / TUBOS Solucin cprica alcalina Del sistema incubado VI y VII a los 10 minutos Del sistema incubado VI y VII a los 30 minutos
VI
VI
1 ml 0.5 -----
1 ml 0.5 ------
1 ml -----0.5
1 ml -----0.5
Mezclar: colocar en bao de agua hirviendo por 10 minutos. Enfriar rpidamente en agua corriente.
2.
3.
Agregar 5 ml de agua destilada y mezclar. Observar y anotar los resultados de las reacciones valorndolas por la intensidad del color desarrollado.
A los 10 minutos
A los 30 minutos
II.
DISCUSIN:
6
III.
RESULTADOS:
9
IV.
CONCLUSIONES:
V.
BIBLIOGRAFIA:
10