Prof.

Waldemar TECIDO MUSCULAR

O tecido muscular, responsvel pelos movimentos corporais, constitudo por clulas alongadas e que contm grande quantidade de filamentos citoplasmticos, responsveis pela contrao. FUNO = contrao, gerando todos os tipos de movimentos. CLULA MUSCULAR = denominada fibra muscular (especializada), so estruturas alongadas. ______________________________________________________________________ SARCOPLASMA = CITOPLASMA SARCOLEMA = MEMBRANA PLASMTICA SARCOSSOMA = MITOCNDRIAS RETCULO SARCOPLASMTICO = RETCULO ENDOPLASMTICO LISO ______________________________________________________________________ As clulas musculares tm origem MESODRMICA e sua diferenciao ocorre principalmente decido a um processo de alongamento gradativo, com simultnea sntese de protenas filamentosas. De acordo com suas caractersticas morfolgicas e funcionais, podem-se distinguir nos mamferos 3 tipos de tecido muscular. MSCULO LISO = formado por aglomerados de clulas fusiformes que no possuem estrias transversais. O processo de contrao lento e no est sujeito ao controle voluntrio. MSCULO ESTRIADO ESQUELTICO = formado por feixes de clulas cilndricas muito longas e multinucleadas, que apresentam estrias transversais, Tm contrao rpida, vigorosa e sujeita ao controle voluntrio. MSCULO ESTRIADO CARDACO = que tambm apresenta estrias transversais sendo formado por clulas alongadas e ramificadas, que se unem por intermdio dos discos intercalares, estruturas encontradas exclusivamente no msculo cardaco.

O msculo estriado esqueltico constitudo de fibras musculares envoltas por camadas de tecido conjuntivo: o endomsio, o perimsio e o epimsio MSCULO ESTRIADO ESQUELTICO = msculo de contrao rpida, forte, descontnua e voluntria, existe em maior quantidade e faz parte do aparelho locomotor. Os msculos so formados por feixes de clulas muito longas (at 30 cm), cilndricas e multinucleadas, com um dimetro que varia de 10 a 100 um, chamadas fibras musculares estriadas. Estas fibras musculares se originam no embrio atravs da fuso de clulas alongadas, os mioblastos. O processo caracterizado pelo aumento de volume das clulas, chama-se HIPERTROFIA, enquanto o crescimento devido proliferao das clulas por multiplicao mittica chama-se HIPERPLASIA. CONSTITUIO: fibras musculares estriadas esquelticas. Essa fibra longa (at 30 cm de comprimento), so poligonais (no corte transversal), algumas poucas so cilndricas. A clula multinucleada, com ncleos em posio perifrica. A fibra estriada (riscada = estrias).
BANDA A - faixa escura anisotrpica. BANDA i - faixa clara, e isotrpica. LINHA Z - no centro de cada banda i aparece uma linha transversal escura (linha Z).

O citoplasma repleto de miofibrilas (observado no corte transversal apenas). Existe grande quantidade de mitocndrias (pelo alto gasto de energia), e grande quantidade de retculo sarcoplasmtico, onde armazenado clcio = usado na contrao muscular. A fibra muscular armazena muito glicognio, devido ao seu metabolismo celular. ORGANIZAO DO MSCULO ESTRIADO ESQUELTICO D-se na presena do tecido conjuntivo. As fibras musculares esto organizadas em feixes, ao redor de cada fibra muscular existe o ENDOMSIO (tecido conjuntivo frouxo rico em fibras reticulares). Ao redor de cada feixe temos o PERIMSIO, e ao redor do msculo inteiro temos o EPIMSIO, sendo tecido conjuntivo denso.

O tecido conjuntivo d sustentao, preenchimento, defesa, e deixa as fibras aderidas entre elas, fazendo a contrao do msculo inteiro, porm sem utilizar todos os feixes recrutando apenas alguns desses feixes, ocorrendo contrao do msculo todo em decorrncia do tecido conjuntivo unir os feixes. ainda por intermdio do tecido conjuntivo que a fora de contrao do msculo se transmite a outras estruturas como tendes, ligamentos e ossos. Cada fibra muscular apresenta perto do seu centro uma terminao nervosa motora, a chamada placa motora. O citoplasma da fibra muscular apresenta-se preenchido principalmente por fibrilas paralelas, as miofibrilas. Cada miofibrila formada de unidades morfofuncionais - os sarcmeros MIOFIBRILA - filamento citoplasmtico da fibra muscular, alongada, cilndrica, estriada, sendo formada de protenas preenchendo quase completamente o interior da fibra muscular. Ao microscpio ptico, aparecem com estrias transversais, pela alternncia de faixas claras e escuras. Ao microscpio de polarizao, a faixa escura anisotrpica e, portanto, recebeu o nome de banda A, enquanto a faixa clara, ou banda I, isotrpica. No centro da cada banda I aparece uma linha transversal escura - a linha Z. A estriao da miofibrila devida repetio de unidades iguais, chamadas de sarcmeros. Cada sarcmero formado pela parte da miofibrila que fica entre duas linhas Z sucessivas e contm uma banda A separando duas semibandas I. A banda A apresenta uma zona mais clara no seu centro, a banda H. A disposio dos sarcmeros coincide nas vrias miofibrilas da fibra muscular, e as bandas formam um sistema de estriaes transversais, paralelas, que caracterstico das fibras musculares estriadas. RESUMO DA MIOFIBRLILA= Possui banda I e banda A; - No meio da banda A temos a banda H; - No meio da banda I temos a linha Z. De uma linha Z a outra chamado de sarcmero (entre duas linhas Z, formado por banda A e duas metades de banda I). SARCMERO = a estrutura que fica entre 2 linhas Z formado por banda A e 2 metades da banda I, sendo responsvel pela funo da clula. Unidade morfofuncional da fibra muscular.

Dentro da fibra muscular as miofibrilas so paralelas entre si e longitudinais, formado por filamentos grossos e filamentos finos. Filamento Grosso = chamado de miofilamentos de miosina, formado por molculas de miosina (basto e cabea).

Filamento Fino = chamado de miofilamentos de actina, protena actina em maior quantidade (duas cadeias de actina), molcula esfrica globular. Tropomiosina = entre duas cadeias de actina. TROPONINA = ligada a tropomiosina. BANDA I = somente filamentos finos; BANDA A = principalmente filamentos grossos e poucos finos; BANDA H = somente filamentos grossos. A banda H, representa uma regio de sobreposio da miosina constituda exclusivamente da parte em basto das molculas. Os filamentos finos esto fixados na linha Z, no meio da banda H tem a presena da linha M (onde os filamentos esto fixados entre si por protenas).

As miofibrilas do msculo estriado contm quatro (4) protenas principais: miosina, actina, tropomiosina e troponina. Os filamentos grossos so formados de miosina e as outras trs protenas so encontradas nos filamentos finos. A miosina e a actina, juntas, representam 55% do total de protenas do msculo estriado.

* Desenho esquemtico mostrando a estrutura do filamento fino do msculo estriado. Em cima, seus componentes isolados e, embaixo, montados. Observe que cada molcula de tropomiosina ocupa o sulco que corresponde a sete molculas de actina. Para cada molcula de tropomiosina existe uma de troponina composta de trs (3) polipeptdios globosos. Quando o msculo estimulado, a molcula de troponina altera a sua forma, afundando a tropomiosina no seu sulco e liberando na actina os centros de atividade que se combina com as cabeas da miosina. Por isso a troponina chamada de gatilho da contrao muscular.

* A contrao muscular se inicia pela combinao de Ca2+ com a subunidade TnC da troponina, o que expe o local ativo da actina (rea tracejada) que se combina com a miosina. Na etapa seguinte, a cabea da miosina liga-se actina e o ATP se decompe

em ADP e energia, produzindo o movimento da cabea da miosina. Em conseqncia dessa modificao da miosina, o filamento fino desliza sobre o filamento grosso. Esse processo, que se repete muitas vezes durante um ciclo de contrao, leva a uma sobreposio completa dos filamentos de actina e miosina e, concomitantemente, ao encurtamento da fibra muscular. O conjunto de miofibrilas (actina e miosina) , por sua vez, preso a membrana plasmtica da clula muscular por meio de diversas protenas que tm afinidade pelos miofilamentos e pro protenas da membrana plasmtica. Uma dessas protenas, chamada distrofina, liga os filamentos de actina a protenas integrais da membrana plasmtica. * A distrofia muscular de Duchenne uma miopatia hereditria, ligada ao cromossomo X, que causa leses progressivas das fibras musculares e, freqentemente, leva morte prematura. No msculo esqueltico desses doentes, nota-se que a distrofina inexistente ou ento sua molcula defeituosa. Na contrao muscular os filamentos finos (actina) deslizam sobre os filamentos de miosina (filamentos grossos) Estruturas envolvidas na contrao muscular PLACA MOTORA = uma sinapse entre o neurnio e a fibra muscular. O impulso nervoso passa do neurnio para a fibra muscular. O neurotransmissor a ACETILCOLINA. TBULO T = uma invaginao da membrana, adentra na fibra muscular, posicionando-se ao redor das miofibrilas. Est ao redor da miofibrila. FUNO: levar o estmulo da contrao todas as partes da fibra muscular. RETCULO SARCOPLASMTICO = o R.E.L (retculo endoplasmtico liso) com a FUNO de armazenar clcio. Posicionado ao redor das miofibrilas. TRADE = o conjunto de 1 tbulo T com 2 retculos sarcoplasmticos. CONTRAO MUSCULAR = impulso passa do tbulo T para os retculos sarcoplasmticos (liberando clcio). O clcio liberado se liga na troponina mudando sua estrutura, deslocando a tropomiosina expondo a actina. Liberando a actina a cabea da miosina vai se ligar a actina, o filamento fino desliza entre o filamento grosso, isso ocorre na contrao muscular, diminuindo o tamanho do sarcmero. Essa diminuio do sarcmero faz com que as miofibrilas diminuem de tamanho (se contraem) , contraindo a fibra, dessa forma ocorre a contrao muscular. OBS = No existindo ATP o complexo actina-miosina torna-se estvel; isto explica a rigidez muscular muito intensa que ocorre aps a morte (rigor mortis). Uma nica contrao muscular o resultado da milhares de ciclos de formao e destruio de pontes de actina-miosina. A atividade contrtil, que leva a uma sobreposio completa entre os filamentos finos e grossos, continua at que os ons Ca2+

sejam removidos e o complexo de troponina-tropomiosina cubra novamente o local de combinao da miosina. Durante a contrao a banda I diminui de tamanho, medida que os filamentos de actina penetram na banda A. Concomitantemente, a banda H - parte da banda A contendo somente filamentos grossos - tambm se reduz, medida que os filamentos finos se sobrepem completamente aos grossos. Como resultado, cada sarcmero, e em conseqncia a fibra muscular inteira, sofrem encurtamento. O retculo sarcoplasmtico regula o fluxo de Ca2+ entre suas cisternas e o sarcoplasma A contrao muscular depende da disponibilidade de ons clcio (Ca2+) e o relaxamento muscular est na dependncia da ausncia destes ons. O retculo sarcoplasmtico regula o fluxo do on clcio, necessrio para a realizao rpida dos ciclos de contrao e relaxamento. O retculo sarcoplasmtico consiste em uma rede de cisternas do retculo endoplasmtico liso, que envolve grupos de miofilamentos, separando-os em feixes cilndricos. Os tbulos transversais levam a despolarizao, iniciada na placa motora, para o retculo sarcoplasmtico situado na parte profunda das fibras estriadas A despolarizao da membrana do retculo sarcoplasmtico, que resulta na liberao de Ca2+, inicia-se na placa motora, uma juno mioneural situada na superfcie da fibra muscular. A despolarizao iniciada na superfcie teria de se difundir atravs da espessura da fibra para efetuar a liberao de Ca2+ nas cisternas profundas do retculo sarcoplasmtico. O sistema de tbulos transversais ou sistema T responsvel pela contrao uniforme de cada fibra muscular esqueltica. Em cada lado de cada tbulo T existe uma expanso ou cisterna terminal do retculo sarcoplasmtico, este complexo, formado de 1 tbulo T e 2 expanses do retculo sarcoplasmtico, conhecido como trade. Na trade a despolarizao dos tbulos T, derivados do sarcolema, transmitida ao retculo sarcoplasmtico. A unidade motora constituda por uma fibra nervosa e as fibras musculares por ela inervadas A contrao normal das fibras musculares esquelticas comandada pro nervos motores que se ramificam no tecido conjuntivo do perimsio, onde cada nervo origina numerosas terminaes. No local de inervao, o nervo perde sua bainha de mielina e forma uma dilatao que se coloca dentro de uma depresso da superfcie da fibra muscular. Esta estrutura chama-se placa motora. Neste local o axnio recoberto por uma delgada camada de citoplasma da clulas de Schwann. O terminal axnico apresenta numerosas mitocndrias e vesculas sinpticas com o neurotransmissor acetilcolina. Entre o axnio e a superfcie da fibra muscular existe uma fenda sinptica, contendo material que forma uma lmina basal. Na juno, o sarcolema forma as dobras juncionais. O sarcoplasma

abaixo dessas dobras contm ncleos da fibra muscular, numerosas mitocndrias, ribossomos e grnulos de glicognio.

As fibras vermelhas so adaptadas para contrao lenta e continuada; as fibras brancas so de contrao rpida e de curta durao De acordo com sua estrutura e composio bioqumica, s fibras musculares esquelticas podem ser identificadas como do tipo I, ou fibras lentas, e do tipo II, ou fibras rpidas. As fibras do tipo I so ricas em sarcoplasma contendo mioglobina e tm cor vermelhoescura. Estas fibras so adaptadas para contraes continuadas. Sua energia obtida principalmente da fosforilao oxidativa de cidos graxos. As fibras do tipo II so adaptadas para contraes rpidas e descontnuas. Elas contm pouca mioglobina e, por isso, so de cor vermelho-clara. As fibras do tipo II podem ser divididas nos tipos II A, B, C de acordo com suas caractersticas funcionais e bioqumicas, principalmente a estabilidade da actomiosina-ATPase que elas contm. As fibras do tipo II B so as mais rpidas e depende principalmente da gliclise como fonte energia. Esta classificao das fibras musculares importante para a caracterizao das doenas musculares ou miopatias. Nos humanos, os msculos esquelticos geralmente apresentam propores diferentes desses diferentes tipos de fibras. * A diferenciao das fibras musculares nos tipos vermelho, branco e intermedirio controlada pelos nervos. Quando se cortam experimentalmente os nervos das fibras brancas e vermelhas e se faz reimplante cruzado, as fibras musculares mudam seu carter durante a regenerao, seguindo a nova inervao recebida. A simples desnervao de um msculo leva sua atrofia e conseqente paralisia.

Outros componentes do sarcoplasma O sarcoplasma contm grnulos de glicognio que constituem 0,5 a 1% do peso do msculo e representam depsito de energia para a contrao muscular. Outro componente. Outro componente do sarcoplasma a mioglobina, uma protena que armazena oxignio, parecido com a hemoglobina, e que o principal responsvel pela cor vermelho-escura de alguns msculos. A mioglobina serve de depsito de oxignio e existe em grande quantidade no msculo de mamferos que normalmente mergulham como focas e baleias. Tambm os msculos que se mantm em atividade por longos perodos geralmente so vermelhos e tm uma taxa alta de mioglobina. As fibras musculares esquelticas tm pequenas quantidades de retculo endoplasmtico rugoso e ribossomos, um aspecto que coincide com a reduzida sntese protica que ocorre nesse tecido.

O msculo cardaco constitudo por uma rede tridimensional de clulas que se interligam por junes aderentes e se comunicam por junes comunicantes

MSCULO ESTRIADO CARDACO = msculo de contrao rpida, forte, contnua, rtmica e involuntria. Localizado apenas no corao, sendo formado por fibras estriadas cardacas, essas fibras so alongadas, ramificadas, estriada e possui 1 ou 2 ncleos centrais localizados. As fibras cardacas so revestidas por uma delicada bainha de tecido conjuntivo, equivalente ao endomsio do msculo esqueltico, que contm uma abundante rede de capilares sanguneos. Seu citoplasma repleto de miofibrila, o volume de mitocndrias pode chegar at 40% do volume celular, o que reflete o intenso metabolismo aerbico desse tecido. Em comparao com o msculo esqueltico, as mitocndrias ocupam apenas cerca de 2% do volume do citoplasma. A fonte principal de energia para o msculo cardaco so os cidos graxos, trazidos pelas lipoprotenas do sangue. O msculo cardaco armazena

cidos graxos sob a forma de triglicerdeos encontrados nas numerosas gotculas lipdicas presentes no citoplasma de suas clulas. Apresenta glicognio armazenado. Apresenta tbulos 1 T, tm 1 retculo sarcoplasmtico. As trades no so freqentes nas clulas cardacas, pois os tbulos T geralmente associam-se apenas a uma expanso lateral do retculo sarcoplasmtico. Por isso, uma das caractersticas do msculo cardaco a presena de dades, constitudas por 1 tbulo T e uma cisterna do retculo sarcoplasmtico. Sistema de contrao igual ao do msculo estriado esqueltico. As fibras cardacas principalmente as do trio do corao produzem um hormnio chamado natriurtico esse hormnio faz com que a presso arterial diminua eliminando Na+ (sdio) e H2O (gua) pela urina agindo nos rins. As fibras cardacas apresentam grnulos secretores recobertos por membrana, localizados prximos aos ncleos celulares, na regio do aparelho de Golgi. Esses grnulos so mais abundantes nas clulas musculares do trio esquerdo do corao, mas existem tambm no trio direito e nos ventrculos. So grnulos que contm a molcula precursora do hormnio ou peptdeo atrial natriurtico. Este hormnio atua nos rins aumentando a eliminao de sdio (natriurese) e gua (diurese) pela urina. O hormnio natriurtico tem ao oposta da aldosterona, um hormnio antidiurtico que atua sobre os rins promovendo a reteno de sdio e gua. Enquanto a aldosterona aumenta a presso arterial, o hormnio natriurtico tem efeito contrrio, fazendo baixar a presso arterial. HORMNIOS PRODUZIDOS NO TRIO ESQUERDO DO CORAO E QUE ATUAM NOS RINS NATRIURTICO - DIURTICO, ELIMINA SDIO E GUA PELA URINA (NATRIURESE), DIMINUINDO A PRESSO ARTERIAL. ALDOSTERONA - ANTIDIURTICO, NO ELIMINA SDIO NEM AGUA PELA URINA (DIURESE), AUMENTANDO A PRESSO ARTERIAL. DISCOS INTERCALARES = contm desmossomos que vai promover a coeso entre as clulas, tm junes comunicantes (so canais de comunicao entre as fibras, passando ons e hormnios - so aberturas existentes na membrana).

Outra caracterstica do msculo cardaco a presena de linhas transversais fortemente corveis que aparecem em intervalos irregulares. Estes discos intercalares representam complexos juncionais encontrados na interface de clulas musculares adjacentes. So junes que aparecem como linhas retas ou exibem um aspecto de escada. Nas partes em escada, distinguem-se duas regies: a parte transversal, que cruza a fibra em ngulo reto, e a parte lateral, caminhando paralelamente aos miofilamentos. Nos discos intercalares encontram-se 3 especializaes juncionais principais: znula de adeso, desmossomos e junes comunicantes. As znulas de adeso onde as miofibrilas ficam presas e representam principal especializao da membrana da parte transversal do disco, esto presentes tambm nas partes laterais e servem para ancorar os filamentos de actina dos sarcmeros terminais. Os desmossomos unem as clulas musculares cardacas, impedindo que elas se separem sob a atividade sob a atividade contrtil do corao. Nas partes laterais dos discos encontram-se junes comunicantes responsveis pela continuidade inica entre clulas musculares cardacas vizinhas. Do ponto de vista funcional, a passagem de ons permite que cadeias de clulas musculares se comportem como se fossem um sinccio, pois o sinal para a contrao passa como uma onda de uma clula para a outra. SINCCIO = Clulas nicas (vida nica). O msculo estriado cardaco se apresenta desta forma do ponto de vista funcional. Os msculos estriados cardaco s possuem ENDOMSIO, no tem PERIMSIO, nem EPIMSIO. No se regenera frente s leses (no tem regenerao).

O miocrdio tem um sistema prprio de auto-estimulao No corao existe uma rede de clulas musculares cardacas modificadas, acopladas s outras clulas musculares do rgo, que tm papel importante na gerao e conduo do estmulo cardaco, de tal modo que as contraes dos trios e ventrculos ocorrem em determinada seqncia, permitindo ao msculo cardaco exercer com eficincia a sua funo de bombeamento do sangue. No existem no corao terminaes nervosas comparveis s placas motora do msculo esqueltico. No apresenta placa motora, porque as clulas so autoexcitveis, no precisam de estmulos nervosos para realizar a contrao que involuntria. O sistema nervoso estimula a freqncia cardaca (aumentando ou diminuindo). O hormnio ADRENALINA aumenta a freqncia cardaca.

O msculo liso constitudo por clulas fusiformes adaptadas para a contrao lenta de determinadas vsceras (tubo digestivo, vasos sanguneos, tero, vescula biliar)

MSCULO LISO = localizado nos vasos sanguneos, dentro dos olhos (ris), tubo digestivo, vescula biliar, tuba uterina, bexiga urinria, pele (msculo eretor do pelo). formado por fibras musculares lisas (alongada, fusiforme, cilndrica, possui 1 ncleo central). No possui estrias, no possui miofibrilas. Possui filamentos de actina e miosina (interagem no momento da contrao). Possui pouco retculo sarcoplasmtico. O clcio fica no meio extracelular, no tem tbulos T, no tem trade e no possui placa motora. S possui ENDOMSIO, no tem PERIMSIO. Sintetiza fibras reticulares, sendo o nico msculo que sofre hiperplasia - aumento na quantidade de clulas. Sofre hipertrofia - aumento no volume da clula, sendo que os 3 tipos musculares apresentam hipertrofia. Regenera-se totalmente - (100% de regenerao). Sofra ao hormonal da oxitocina e da vasopressina, alm da ao do tecido nervoso. O msculo liso formado pela associao de clulas longas, mais espessas no centro e afilando-se nas extremidades, com ncleo nico e central. O tamanho da clula muscular lisa pode variar de 20 um na parede dos pequenos vasos sanguneos at 500 um no tero grvido. Durante a gravidez, aumenta muito o nmero e o tamanho das fibras musculares do tero. As clulas musculares lisas so revestidas por lmina basal e mantidas juntos por uma rede muito delicada de fibras reticulares. Alm dos filamento de actina e miosina, a clula muscular lisa exibe uma trama de filamentos intermedirios. O principal componente dos filamentos intermedirios de todas as clulas musculares lisas desmina, sendo que no msculo liso dos vasos sanguneos se encontra a vimentina associada desmina. As clulas musculares lisas apresentam os corpos densos, em duas localizaes. Muitos esto no interior do citoplasma e outros se associam membrana plasmtica. Ambos contm alfa-actinina, sendo, portanto, semelhantes linha Z dos msculos estriados. Filamentos finos e filamentos intermedirios se inserem nos corpos densos, de modo que a clula inteira se reduz de tamanho durante a contrao. As clulas musculares lisas no possuem sistema T e seu retculo sarcoplasmtico (regulador do fluxo de clcio) extremamente reduzido. As vesculas de pinocitose so numerosas e desempenham um papel na entrada e sada do on clcio.

A clula muscular lisa, alm da sua capacidade contrtil, pode tambm sintetizar colgeno do tipo III (fibras reticulares), fibras elsticas e proteoglicanas. As clulas musculares em atividade sinttica mostram o retculo endoplasmtico rugoso desenvolvido. As junes comunicantes so importantes na transmisso do estmulo da clula para clula. O msculo liso recebe fibras do sistema nervoso simptico e parassimptico, porm no exibe as junes neuromusculares elaboradas (placas motoras) que ocorrem no msculo esqueltico.

O tecido muscular cardaco no se regenera o estriado esqueltico regenera-se parcialmente e o tecido muscular liso regenera-se com facilidade No adulto, os trs tipos de tecido muscular exibem diferenas na capacidade regenerativa aps uma leso que produza destruio parcial do msculo. O msculo cardaco no se regenera. Nas leses do corao, como nos enfartes, por exemplo, as partes destrudas so invadidas por fibroblastos que produzem fibras colgenas, formando uma cicatriz de tecido conjuntivo denso. O msculo estriado esqueltico tem uma pequena capacidade de reconstituio . Admite-se que as clulas satlites sejam responsveis pela regenerao do msculo esqueltico. O msculo liso capaz de uma resposta regenerativa mais eficiente. Ocorrendo leso, as clulas musculares lisas que permanecem viveis entram em mitose e reparam o tecido destrudo. Na regenerao do tecido muscular liso da parede dos vasos sanguneos, h tambm a participao dos pericitos, que se multiplica por mitose e originam novas clulas musculares lisas.