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C.

Objetivos

Objetivo General:
Brindar informacin sobre Gentica Forense como rama de la Gentica y su importancia en nuestra sociedad actual.

Objetivos Especficos:
1. Definir que es la Gentica Forense. 2. Describir el tipo de ADN y el tipo de muestras utilizados en la Gentica Forense. 3. Enumerar las tcnicas utilizadas en la Gentica Forense. 4. Citar casos en los que se aplica la Gentica Forense.

II. MARCO TERICO

Gentica Forense

A. Historia
En el ao 1985, en la ciudad de Leicester, Inglaterra, el cientfico Alec Jeffreys, descubri que todos los individuos podan ser identificados a partir de un patrn especfico de su ADN. Jeffreys se hallaba estudiando el gen de una protena llamada mioglobina, cuando se sorprendi al encontrar que, a lo largo de este gen, aparecan regiones que diferan entre las personas. Las diferencias se visualizaban por mtodos indirectos, en formas de bandas de distintos tamaos. Impresionado por su descubrimiento, le solicit una muestra de sangre a varios miembros de su equipo. Detect que estas regiones que variaban en tamao entre los distintos individuos estaban dispersas en todo el genoma y que, a partir de ellas, poda definirse lo que l mismo llam una "huella gentica". Esta "huella gentica" es personal y nica para cada sujeto, exceptuando de esta regla a los gemelos univitelinos. Observ tambin que en cada individuo la mitad de las bandas provenan de la madre y la otra mitad del padre. As como un sistema de cdigos de barras permite reconocer cada artculo en un supermercado, la huella gentica facilita la identificacin de cada individuo (slo la comparten los gemelos univitelinos). Como consecuencia de este descubrimiento, los vnculos biolgicos entre padres e hijos, hermanos, abuelos y nietos pudieron ser determinados con altsimas probabilidades de parentesco. El descubrimiento del cientfico ingls marcaba, as, el comienzo de una nueva era en la identificacin de las personas. Por otro lado mientras esta nueva y poderosa herramienta se iba difundiendo mundialmente, los investigadores comenzaban a utilizarla para la identificacin de criminales.

B. Definicin
La gentica forense es una subespecialidad de la Gentica y de la Medicina Legal que incluye un conjunto de conocimientos de gentica necesarios para resolver ciertos problemas judiciales. Los tipos de pericia ms solicitados al laboratorio de gentica forense por los tribunales son casos de investigacin biolgica de la paternidad, pericias de criminalstica biolgica (estudio de vestigios biolgicos de inters criminal como manchas de sangre, esperma, pelos, muestras de contacto, etc.) y, finalmente, problemas de identificacin.
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C. Tipos de ADN Utilizados en Gentica Forense


Se sabe que todos los seres humanos compartimos el mismo DNA que codifica para las mismas protenas y los mismos caracteres, de ser as, cmo es posible que podamos identificar a un criminal o podamos aseverar la paternidad? Esto tiene respuesta en la definicin misma de la gentica forense: los polimorfismos, el DNA mitocondrial y polimorfismos del cromosoma Y. 1. Polimorfismos De ADN El trmino polimorfismo fue definido por Ford en 1940. Un polimorfismo es una aparicin simultnea de alelos en una poblacin que tiene variaciones para ciertas posiciones, describe cambios en el DNA y son conocidos como polimorfismos de secuencia y polimorfismos de longitud. Si existen modificaciones en un gen, a nivel de un locus especfico en una poblacin, este locus es polimrfico. Para que un locus sea polimrfico, se asume que el alelo ms comn para ese locus debe tener una frecuencia menor del 99%. El genoma humano haploide contiene aproximadamente 3x10 pares de bases, aunque no todas son expresivas en trminos de produccin de protenas. El genoma de los eucariotas contiene secuencias de ADN con una funcin determinada (genes que codifican la secuencia de aminocidos de una protena) denominadas ADN expresivo o codificante y secuencias de ADN que no son transcritas a protenas y que se conoce como ADN no codificante. Este ltimo puede presentarse como ADN de copia nica o en copias mltiples (ADN repetitivo). Slo el 2% del genoma humano (incluso algo menos) corresponde a DNA codificante y el resto (la gran mayora) es DNA no codificante. El ADN codificante es, en general, poco variable o polimrfico entre las personas, con excepcin de la regin HLA (antgenos del sistema mayor de histocompatibilidad). Sin embargo, el ADN no codificante, al no estar sujeto a presin selectiva intensa, admite unos niveles de variacin muy grandes en comparacin con las regiones de ADN codificante. Existen numerosos ejemplos de polimorfismos en el genoma humano. A nivel del ADN, los polimorfismos pueden ser de diversos tipos, desde la mutacin de una sola base hasta el cambio en el nmero de unidades repetidas en tandem en ciertas regiones del ADN y se suelen clasificar en:
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a. Polimorfismos De Secuencia: Producidos por el cambio de uno (mutacin puntual) ms nucletidos en una secuencia de ADN. Estos polimorfismos son muy abundantes en el ADN codificante pero tambin en el no codificante y son conocidos como SNPs (polimorfismos nucletidos simples). Los polimorfismos de secuencia ms relevantes en la actualidad son los SNP debido a que se han descrito alrededor de varios millones de SNP distribuidos por todos los cromosomas humanos, se estima que existe 1 SNP por cada 500-1000 nucletidos. Polimorfismo de secuencia -------ATGCAACGTA-------------AGGCAATGTA-------

b. Polimorfismos De Longitud: Producidos por inserciones o deleciones de uno o ms nucletidos. Este tipo de polimorfismo es el que se observa ms frecuentemente en el ADN repetitivo nuclear. Polimorfismo de longitud ------(TGCC)(TGCC)(TGCC)-----3 repeticiones ------(TGCC)(TGCC)-----2 repeticiones El ADN repetitivo en tandem est formado por bloques de ADN que se repiten consecutivamente y se suele dividir en ADN satlite, ADN minisatlite y ADN microsatlite. Los polimorfismos de longitud variable son los ms utilizados en la actualidad y se pueden clasificar en dos grupos: los VNTR-minisatlites y los VNTR-microsatlites (VNTR: Nmero variable de repeticin en tndem), entre las que estn los STR (Secuencias cortas en tndem). El ADN minisatlite y microsatlite, que son los utilizados con fines forenses, consisten en repeticiones de fragmentos de ADN de nmero variable. La repeticiones en el ADN microsatlite son de tamao pequeo (de 2 a 6 pares de bases) por lo que se suelen denominar STRs ("short tandem repeats"). Las repeticiones en un locus minisatlite tienen un tamao entre 15 y 50 pares de bases para un total de 300 bp hasta 20 Kb. El tamao
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total de los STRs es de 50 bp a 500 bp. El anlisis de los polimorfismos en gentica forense se puede dividir en dos grandes grupos: aquellos procedimientos clsicos o antiguos de anlisis que utilizan sondas multilocus (MLP, multilocus probes) unilocus (SLP, single locus probes) y aquellos procedimientos basados en la reaccin en cadena de la polimerasa o PCR, que actualmente son ms utilizados mundialmente.

2. ADN Mitocondrial El DNA mitocondrial presenta una regin control en la que existen dos zonas llamadas regiones hipervariables (HSV1 y HSV2), en sta se acumulan preferentemente los polimorfismos que pueden ser analizados para establecer una relacin de maternidad entre sujetos. Estos estudios se pueden llevar a cabo gracias a que las mitocondrias slo proceden de la madre; por lo tanto, el material gentico mitocondrial de cualquier individuo se hereda exclusivamente por va materna.

3. Polimorfismos Del Cromosoma Y Debido a la falta de un elemento homlogo, gran parte del cromosoma Y no recombina, por lo que la mayor parte de las secuencias se heredan como un bloque constituyendo un grupo de ligamiento que ser cedido de padres a hijos varones en forma obligada. Los polimorfismos presentes en el cromosoma Y son del tipo STRs y SNPs, se utilizan en casos de paternidad o de violacin, ya que permiten identificar especficamente restos celulares de un varn.

D. Tipos De Muestras Utilizadas en Gentica Forense


Las muestras ms frecuentes en donde se encuentra DNA son: la sangre fresca, la saliva, el semen, fluidos mixtos (semen-sangre-epitelios) tejidos cadavricos (tejidos blandos, huesos o dientes), as como fluidos en soportes slidos como hisopos, papel filtro, etc. Sin embargo, existen fuentes menos frecuentes como tejidos en parafina, uas, estampillas postales, sobres, colillas, restos de utensilios (vasos, afeitadoras, cepillos de dientes, etc.) entre otros sitios. No obstante, la obtencin de DNA en estas muestras es ms difcil porque existe un alto grado de contaminacin ambiental y la muestra puede ser muy pequea.

E. Tcnicas Utilizadas en Gentica Forense


1. STRs Desde principios de la dcada de los noventa se ha extendido con gran xito el uso de los microsatlites STRs. El anlisis de estos, ha permitido establecer que son elementos extraordinariamente tiles en la identificacin humana y en el mapeo gentico, debido a su elevado polimorfismo (gran poder de discriminacin), tasa de mutacin relativamente baja, tamao pequeo y ubicacin cromosmica establecida. Adems, varios de estos marcadores pueden amplificarse mediante PCR de forma simultnea (multiplex). La combinacin de estos marcadores es la base de los bancos de datos para almacenar la informacin. El CODIS utiliza un conjunto estndar de 13 regiones STRs especficos. Aun cuando los marcadores STRs son actualmente los ms informativos para las pruebas forenses, ahora se ha comenzado a trabajar con el mejoramiento de stos para muestras sumamente degradadas. La tcnica se basa en un simple cambio en la posicin de las sondas (primers) para la amplificacin de los loci de STRs, stos se posicionan ms cerca del inicio de la repeticin en tndem, lo que genera un producto mucho ms pequeo (Mulero et al., 2008). Como ejemplo, ya se han aceptado 3 nuevos miniSTRs (D10S1248, D14S1434, D22S1045) como loci estndar en el Interpol Europeo, el cual comprende de 10 loci STR (Gill et al., 2006). 2. PCR El anlisis de polimorfismos de ADN mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) solucion muchos problemas y actualmente la mayora de los vestigios biolgicos de inters criminal se analizan utilizando esta tcnica. El PCR (reaccin en cadena de la polimerasa) es una tcnica que permite crear millones de replicaciones precisas de DNA a partir de una sola muestra de DNA. La amplificacin de DNA por el mtodo PCR puede permitir a los cientficos forenses realizar anlisis en muestras tan pequeas como un par de clulas de la piel. En contraste con algunas otras tcnicas de anlisis, la PCR tiene la ventaja de analizar tamaos de muestra pequeos, incluso si se degradan, aunque no debe ser contaminado con DNA de otras fuentes durante la recoleccin, almacenamiento y transporte de la muestra. Bsicamente la PCR consiste en una serie de ciclos que se realizan automticamente en un termociclador (bao termosttico que proporciona temperaturas muy exactas a gran velocidad). Cada ciclo consta de tres etapas: desnaturalizacin, acoplamiento de los cebadores y extensin, esto es creacin de una cadena complementaria de ADN con una polimerasa termoestable. Los cebadores son oligonucletidos de cadena corta (unos 20 bp) que se sintetizan en sintetizadores de oligonucletidos.
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Una PCR tpica para fines forenses tiene 28 ciclos y no se suelen utilizar ms salvo circunstancias excepcionales y controles estrictos para monitorizar la contaminacin. Los polimorfismos de ms inters analizables por PCR son los minisatlites y los microsatlites (STRs), especialmente estos ltimos que son los ms utilizados. Los polimorfismos analizables por PCR antes de ser aceptados para la prctica forense deben cumplir una serie de requisitos y pasar sucesivos controles de validacin. 3. Anlisis de DNA mitocondrial Este tipo de anlisis funciona bien en las muestras que no pueden ser analizados a travs de STR, sabiendo que hay dos tipos de DNA: mitocondrial y nuclear. A veces, una muestra puede ser antigua y ya no tener material nuclear en la clula, lo que supone un problema para los otros tipos de anlisis de DNA. Con el anlisis del DNA mitocondrial, el DNA mitocondrial se puede retirar, lo que tiene importantes resultados para los casos que no fueron resueltos durante muchos aos. El anlisis del DNA mitocondrial puede ser muy valioso tambin en las investigaciones de personas desaparecidas. Desde el punto de vista forense es de gran importancia el anlisis de ADN mitocondrial (regiones hipervariables HV1 y HV2) pues es ms eficaz en muestras degradadas y es el nico polimorfismo que se puede analizar en cabellos sin bulbo, que son vestigios que aparecen con mucha frecuencia en la escena de delitos. Por su mejor comportamiento en muestras degradadas el ADNmt es esencial para muchos casos de identificacin a partir de restos seos. Se han obtenido secuencias de ADNmt en muestras de miles de aos y la prueba ha servido para solucionar numerosos enigmas histricos como la identificacin. 4. Anlisis de cromosoma Y Dado que el cromosoma Y pasa de un padre a su hijo, el anlisis de marcadores genticos en un cromosoma Y puede ser de ayuda en la identificacin de los vnculos familiares en los hombres o para el anlisis de las pruebas que impliquen a muchos varones. Con estos anlisis se puede establecer una lnea de la familia durante muchas generaciones. Los polimorfismos de cromosoma Y se emplean cada vez ms en aquellos casos en los que no hay muestra del presunto padre y sus supuestos hijos son varones. As, si se cuenta con otro familiar masculino de la lnea paterna, su cromosoma Y ser idntico al del padre no disponible y su supuesto hijo varn. Pero en estos casos, hay que tener en consideracin
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que el resultado basado exclusivamente en microsatlites de Y, no excluye como padre a ningn otro varn de esa lnea paterna. Por lo tanto, el estudio debe complementarse con marcadores autosmicos en el caso de que sea necesario eliminar esa posibilidad. Pero sobre todo, los polimorfismos de cromosoma Y son importantes en el anlisis de muestras en delitos contra la libertad sexual en las que el esperma u otras clulas del agresor estn mezcladas con clulas femeninas de la vctima. 5. SNPs Los SNPs son marcadores biallicos, es decir, slo existen dos alelos posibles para cada locus, por lo tanto son menos informativos para pruebas forenses que un locus STR, por lo que se necesitan analizar una mayor cantidad de marcadores para alcanzar el mismo poder de discriminacin que los 13 STRs utilizados por CODIS. Una ventaja, sin embargo, es que una vez que se mejore la capacidad de anlisis con ensayos multiplex y la completa automatizacin, sern una herramienta con gran poder en las pruebas forenses, ya que nos permitirn el anlisis de miles de SNPs. Las caractersticas de los SNPs tales como que poseen una tasa de mutacin muy baja los hace idneos para pruebas de paternidad. Adems en teora al menos, el polimorfismo solo afecta una base, por lo que la posibilidad de que est intacta en material degradado es mxima. La mayora de las muestras del atentado del World Trade Center no pudieron ser analizadas mediante STRs por la degradacin de las muestras y est intentndose su anlisis mediante SNPs. Adems su simplicidad los hace susceptible de anlisis a gran escala y particularmente de anlisis con chips o microarrays de ADN. En la actualidad se estn utilizando los SNPs para la resolucin de casos complejos de parentesco o identificacin (cuando tenemos muestras muy degradadas donde los STRs clsicos no funcionan). Otra de las grandes utilidades de los SNPs la determinacin el origen geogrfico de una muestra biolgica o para determinar determinadas caractersticas fsicas como el color del pelo (pelirrojo) o el color de los ojos.

F. Casos
Aplicaciones En Investigacin De La Paternidad, Identificacin Y Criminalstica El anlisis de los polimorfismos de ADN ha supuesto un cambio radical en las posibilidades del laboratorio de Gentica forense. En la investigacin de la paternidad antes del desarrollo de esta nueva metodologa, se solucionaban la casi totalidad de los casos con los marcadores clsicos. Sin embargo, el uso de polimorfismos del ADN ha simplificado la prueba, la ha hecho ms barata y ofrece, adems, mayor posibilidades en casos difciles como aquellos en los que el presunto padre ha fallecido y hay que realizar la investigacin de la paternidad a travs de restos cadavricos o de familiares directos del mismo, o en los diagnsticos prenatales de paternidad (en casos de violacin, por ejemplo). Todos estos casos eran difcilmente abordables con la metodologa anterior al descubrimiento de los polimorfismos de ADN repetitivo. En identificacin de restos seos la revolucin ha sido tambin notable ya que la mayora de los casos se pueden resolver a travs del anlisis del ADNmt y en muchos casos se pueden incluso obtener datos con STRs. As se han resuelto numerosos casos de gran importancia en todo el mundo como la identificacin de desaparecidos en la dictadura argentina, y muchos desastres de masas y enigmas histricos han sido y estn siendo investigados. En criminalstica biolgica la revolucin ha sido total, particularmente en el anlisis de manchas de esperma, de pelos y cabellos, saliva, o manchas minsculas de sangre, dado que, en estos vestigios, se poda dar muy poca informacin sobre la persona a quien pertenecen utilizando marcadores clsicos. Hoy a partir de un nico cabello o de un mnimo nmero de espermatozoides recogidos en cavidad bucal o una mancha envejecida y minscula de sangre se puede, en muchas ocasiones, aportar datos de gran valor sobre la individualidad de ese vestigio, lo que era totalmente impensable hace pocos aos.

III. PRESENTACIN DE RESULTADOS A. Conclusiones


1. La Gentica Forense es el anlisis de los polimorfismos responsables de la variabilidad gentica en la poblacin humana aplicados a los problemas judiciales como: investigaciones de paternidad, criminalstica o la identificacin de restos cadavricos. 2. Los tipos de ADN utilizados en Gentica Forense son los polimorfismos, el DNA mitocondrial y polimorfismos del cromosoma Y; las muestras ms frecuentes en donde se encuentra DNA son: la sangre fresca, la saliva, el semen, fluidos mixtos tejidos cadavricos. 3. Las tcnicas que se utilizan en la Gentica Forense son: STRs, PCR, Anlisis de DNA mitocondrial, Anlisis de cromosoma Y, SNPs. 4. La Gentica Forense se aplica en casos de investigaciones legales de la paternidad,
identificacin y criminalstica.

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B. Bibliografa
1 A. Carracedo, A salas, M.V lareu. Problemas y retos de futuro de la gentica forense en el siglo XXI. ISSN, 2011 julio 3 (a mayo 2013); 464(728):325 disponible en: http://dx.doi.org/10.4321/S1135-76062010000100004. 2 Rodriguez, Carlin, B. Rodarte, M. Monter, A. Coss, A, Surtibran, R. Arnaiz. Gentica Forense, ISSN. 2011 septiembre 8 ( 4 de mayo 2013); 46(339) 350 disponible en: http://www.exploredna.co.uk/basics-dna-forensics-techniques.html. 3 Mayr WB. Gentica forense de los grupos sanguneos del ADN. ADN YSTR, 2010 noviembre 13 (4 de mayo 2013); 123(241); 26 disponible en: http://www.scielo.sa.cr/scielo.php?pid=S003477442004000300030&script=sci_arttext. 4 M.J Alvarez Cubero, L.J Mtnez, M Saiz, J.C Alvarez, J.A Lorente. Nuevas aplicaciones en identificacin gentica, BIOL. 2010 27 septiembre (4 de mayo 2013); 16(3); 24 disponible en: www.scielo.iscciii.es 5 Medicina legal Universidad de Granda Espaa, tcnicas de anlisis del ADN en gentica forense UIGE, 31 agosto 2009 (3 de mayo 2013; 53(87);12 disponible en: http://scielo.isciii.es/pdf/cmf/v16n1-2/revision1.pdf. 6 Bernath. ADN como herramientas para la resolucin de procesos judiciales, pasado, presente y futuro: GENDA. 2010 4 de agosto (3 de mayo 2013); 15 (8);23 disponible en: http://www.quimicaviva.qb.fcen.uba.ar/v7n2/bernath.pdf. 7 J. Cano. Gentica forense crimen e identidad, UISSI, 2010 marzo 20 (3 de mayo 2013) 124:83-9168-74 disponible en: http://es.scribd.com/doc/111579039/Genetica-forense. 8 Pedro A, B, Caballero. Revisin de mtodos de extraccin de ADN en el laboratorio forense, REML 2012 septiembre 5 (4 de mayo 2013); 9 (41) disponible: www. Elsevier.es 9 J. Pacharliucia, JV. Actualidad institucional forense en Amrica Latina, SCI; 2012 junio 4 ( 4 de mayo 2013) ; 23 (7)55 disponible en: scielo, isiii. E

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IV. ANEXOS

El Cientfico Genetista Alec Jeffreys

Tcnicas de PCR
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PRIMER PROCESO:

1. La mezcla de reaccin contiene la secuencia de DNA que se quiere amplificar, dos oligonucletidos sintticos (P1 y P2) que servirn como cebadores, una DNA polimerasa termoestable (Taq) y los cuatro desoxirribonucletidos trifosfato dATP, dGTP, dCTP y dTTP.

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Segundo proceso

a) Durante la desnaturalizacin, que se realiza por calentamiento de la mezcla a 95C, se separan las dos cadenas del ADN molde. b) Durante la hibridacin, la temperatura de incubacin se reduce para permitir el apareamiento de las bases de ambos cebadores en el sitio donde encuentran una secuencia complementaria. c) Durante la fase de elongacin, la mezcla se calienta a 72C y la enzima Taq ADN polimerasa se usa para replicar las hebras de DNA. La Taq polimerasa comienza el proceso de extensin de la cadena complementaria a partir del extremo 3 de los cebadores. Al finalizar cada ciclo, la cantidad de ADN molde disponible para el ciclo siguiente aumenta al doble.

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Polimorfismos de ADN

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