Escola Secundria Francisco Franco Tcnicas Laboratoriais de Biologia Bloco I

Observao de clulas da epiderme do bolbo da cebola (allium cepa)

Relatrio elaborado: Eduardo Freitas N5 126 Funchal, 29 de Outubro 2003

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Observao mic rosc pica de clula s da epide rme do bolbo da cebola

1. ndice

1.ndice ................................................................................................................2
2.Objectivo ...........................................................................................................3 3.Introduo .......................................................................................................3,4 4.Material / Reagentes ....................................................................................... 5 5.Procedimento Experimental ............................................................................5 6.Resultados .........................................................................................................6 7. Discusso dos Resultados ................................................................................7 8. Concluso..........................................................................................................7 9. Bibliografia ......................................................................................................8

2. Objectivo
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Este trabalho experimental relativo observao de clulas da epiderme do bolbo da cebola, teve como objectivos: conhecer a constituio da clula eucaritica vegetal ao MFO, possibilitar a identificao de diferentes estruturas celulares da clula vegetal, e verificar que os diferentes corantes actuam de modo diferente sobre as estruturas celulares.

3. Introduo
O bolbo da cebola trata-se de um caule subterrneo que apresenta tnicas carnudas e sobrepostas. Cada tnica uma folha modificada em forma de escama, que acumula substncias de reserva. Na superfcie cncava de cada uma dessas tnicas existe uma epiderme, ou seja uma pelcula fina, facilmente destacvel e constituda por uma s camada de clulas. Esta epiderme ser o nosso objecto de observao microscpica. A clula um pequeno elemento autnomo de dimenses microscpicas, sendo considerada a unidade morfolgica e funcional da constituio dos seres vivos. Existem dois tipos de clulas: as clulas eucariticas e as clulas procariticas. As clulas eucariticas so organismos muito mais complexos do que as clulas procariticas e distinguem-se destas pelo facto de possurem o seu material gentico organizado num compartimento, o ncleo, que se encontra separado do resto da clula por uma membrana plasmtica. frequente dividir as clulas eucariticas em duas categorias: as clulas animais e as clulas vegetais. As clulas vegetais possuem organelos similares aos das clulas animais, no entanto possuem organelos nicos como a parede celular, os plasmodesmos, os cloroplastos e possuem vacolos que embora em nmero inferior as das clulas animais so de dimenses maiores. A figura abaixo esquematiza as principais diferenas entre a clula eucaritica animal e a clula eucaritica vegetal.

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A observao de material microscpico exige a aplicao de diversas tcnicas que permitem uma melhor visualizao dos seus componentes, uma vez que as clulas para alm das suas reduzidas dimenses no apresentam contraste entre os seus constituintes. Estas tcnicas tm como finalidade permitir que o material seja melhor visualizado, alterando o menos possvel as suas caractersticas originais, e conservando-o por um perodo de tempo mais longo do que o habitual, uma vez que as clulas rapidamente se danificam devido evaporao do meio de montagem, que acompanhado de um processo progressivo de degradao e autlise.

As preparaes podem ser temporrias ou definitivas, sendo que esta preparao relativa cebola foi temporria. Designa-se por preparao temporria aquela em que o meio de montagem um meio lquido onde o material biolgico se encontra imerso numa substncia que no o altere ou danifique como por exemplo a soluo de Ringer, um lquido fisiolgico que permite manter as clulas vivas, utilizando-se sobretudo nas clulas vegetais. A colorao uma tcnica importante em microscopia, pois permite evidenciar estruturas celulares pouco perceptveis. Isto torna-se vivel visto que determinados constituintes celulares tendem a absorver certos corantes enquanto que outros no tm essa capacidade. Assim sendo, nesta actividade experimental utilizou-se a soluo de vermelho neutro, soluto de Lugol e a soluo de azul metileno. O vermelho neutro um corante que, usado em baixa concentrao, penetra na clula sem a matar (corante vital); assim, enquanto a clula se mantiver viva, o citoplasma e os organitos permanecem incolores, introduzindo-se o corante no vacolo, corando-o de vermelho. Pelo contrrio, o azul metileno um corante bsico que actua preferencialmente sobre o ncleo, corando-o de azul. O soluto de Lugol esse por sua vez evidncia os elementos celulares em preparaes extemporneas, cora o amiloplastos, j que um corante que cora o amido. Os corantes por seu lado, possuem tambm tcnicas de aplicao, sendo uma dela s a tcnica de irrigao. Esta tcnica consiste na aplicao de uma gota de corante num dos bordos da lamela, e no lado oposto da lamela, coloca-se uma tira de papel de filtro, cujo efeito de suco permite ao material biolgico entrar em contacto com o corante. Outra tcnica a tcnica de imerso. Esta tcnica consiste em colocar o corante na lmina ou no vidro relgio e de seguida colocar a clula no material de montagem e o corante actua como meio de montagem. Atravs destes processos torna-se possvel realar as estruturas que no contrastam suficientemente de modo a tornarem-se distintas umas das outras e permitindo que compreendamos melhor as diferenas entre os organitos que compem a clula eucaritica vegetal e que no existem na clula eucaritica animal , tendo em conta a importncia dos processos de colorao na observao dos mesmos.

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4. Material Material
- M.O.C. - 2 Agulhas de disseco - 2 Lminas / 2 Lamela - Bisturi - Papel de filtro - Pina - 3 Conta-gotas - Vidro de relgio

Reagentes / Material Biolgico

Soluto de Lugol Soluto de vermelho neutro Corante azul metileno Cebola gua destilada

5. Procedimento Experimental
1. A partir de um quarto do bolbo da cebola, retirei, com o auxlio da pina, uma poro da pelcula da epiderme interna; 2. No vidro de relgio coloquei um pouco de gua e coloquei rapidamente as pelculas que obtive em 1. de forma a evitar o seu enrolamento; 3. Coloquei numa lmina e distendi sobre ela a pelcula da cebola e adicionei com uma gota de gua, sendo este o meio de montagem. Cobri cuidadosamente com uma lamela; 4. Observei a preparao ao microscpio utilizando a objectiva de menor poder ampliador, seguida das restantes objectivas. 5. Coloquei, ao longo do bordo da lamela, duas gotas de soluto de Lugol; 6. Do lado oposto quele em que coloquei o corante, absorvi com um papel de filtro o excesso de soluto de Lugol para que o soluto atravessasse toda a preparao (mtodo de irrigao ou capilaridade); 7. Procedi observao da preparao no M.O.C., utilizando a objectiva de menor ampliao, seguida das restantes objectivas. 8. Efectuei os registos necessrios. Fiz o esquema do que observei, e identifiquei as estruturas a presentes. 9. Repeti os passos 1 e 2; 10. Na gua do vidro de relgio, onde se encontrava parte do fragmento da epiderme que destaquei inicialmente, lancei gotas de soluto de vermelho neutro (Mtodo de Imerso); 11. Ao fim de alguns segundos, retirei e repeti o passo descrito em 3. 12. Repeti os passos 7 e 8. 13. Voltei a repetir os passos 1 e 2, no entanto na gua do vidro de relgio lancei algumas gotas de soluo de azul-de- metileno, voltado a repetir o mtodo de imerso. 14. Procedi como em 11. 15. Tornei a efectuar os passos 7 e 8.

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6. Resultados

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7. Discusso dos Resultados

Observando os resultados posso verificar que cada corante actua de modo diferente na clula. Com o uso do soluto de Lugol foi possvel evidenciar os amiloplastos, e partir da utilizao do corante vermelho neutro, os vacolos ficaram corados de modo que se tornou possvel a sua visualizao, e com o corante azul os organitos que coraram foram os ncleos. Em ambas as imagens pude observar o citoplasma, tal como a parede nuclear.

8. Concluso
Em jeito de concluso poderei dizer que cada corante actua de forma especfica e divergente sobre a clula, logo deveremos ter em conta as estruturas que se desejam observar e a partir de tal escolher o corante a utilizar, de forma a tornar o trabalho mais simples e concreto. Assim sendo, posso dizer que o soluto de Lugol cora os amiloplastos, a soluo de vermelho neutro cora os vacolos, e a soluo de azul metileno cora o ncleo das clulas. Concluo ento que existem diversas tcnicas de preparao que nos possibilitam uma melhor visualizao dos materiais ao MOF e que os conservam, para alm de evidenciarem certas estruturas, como no caso da colorao. Estas tcnicas so por conseguinte deveras importantes na observao das clulas pois facilitam a observao das mesmas, e proporcionam ao observador um trabalho mais pormenorizado e credvel devido a evidenciar determinados organitos pelo uso de corantes. A partir deste destaque podemos fazer observaes minuciosas relativamente a certas estruturas que compem a clula eucaritica vegetal nunca esquecendo que so as pequenas observaes que revelam as grandes descobertas.

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9. Bibliografia
GONALVES, Salom, 1999, A vida ao Microscpio Tcnicas Laboratoriais de Biologia, Porto Editora

PINTO, Ana Maria; FIALHO, Elisa; et Al; Texto Editora

Tcnicas Laboratoriais de Biologia;

LEITE, Ana Isabel; ALMEIDA, Maria; OLIVEIRA, Maria I.; Do microscpio clula Bloco 1, Areal Editores

MARQUES, Eva; SOARES, Rosa; ALMEIDA, Carla; Tcnicas Laboratoriais de Biologia , Porto Editora

NPOLES, Anabela; BRANCO, Maria do Carmo; Tcnicas Laboratoriais de Biologia Bloco 1, Didctica Editora

LEAL, Jlia; SERAPICOS, Maria; PINTO, Maria; Tcnicas Laboratoriais de Biologia Bloco 1 Nova Edio, Edies Asa

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