Universidad Nacional de Trujillo Facultad de Farmacia y Bioqumica- Dpto.

Bioqumica Ctedra de Bioqumica y Anlisis Clnicos

Teora 13: Inmunologa clnica: Inmunidad humoral y celular. Linfocitos T y B. Macrfagos y complemento. Funciones. Marcadores especfico. Inmunoglobulinas normales y anormales. Regulacin de la respuesta inmune. Tcnicas de laboratorio. Docente: Msc Anabel Gonzlez Siccha

Trujillo, 14 de Mayo de 2013

Inmunologa Clnica
La defensa contra los microorganismos, se efecta

en dos instancias: 1. Ocurre en los mecanismos inespecficos de defensa a microorganismos denominada inmunidad innata y 2. Ocurre al exponerse a los diferentes antgenos, llamada inmunidad adaptativa o especfica o natural

Componentes del Sistema Inmunitario Innato

Barreras epiteliales de .Superficies mucosas de, aparato

digestivo, respiratorio; piel. Los fagocitos: neutrfilos y macrfagos . Clulas dentrticas , las que tienen prolongaciones de membranas y propiedades fagocticas, estn en los tejidos linfticos, el epitelio de las mucosas, tienen receptores y responden a los microbios mediante la secrecin de citocinas.

CLULAS DEL SISTEMA INMUNITARIO ADAPTATIVO.

Linfocitos Tipo T, pueden ser:

cooperadores, citotxicos, Citolticos naturales (NK).; los linfocitos expresan unas protenas de superficie y sirven para diferenciarlas. Linfocitos tipo B, producen anticuerpos los que se unen a los antgenos.

Linfocitos T
Representan el 60-70% de los linfocitos perifricos. Ubicados en regiones paracorticales de ganglios linfticos y

manguitos periarteriolares del bazo. Genticamente programados para reconocer un antgeno especfico por medio de su receptor especfico (TCR) Marcadores comunes: CD2, CD7, CD3, CD28 CD4+: linfocitos T cooperadores/inductores CD8+: linfocitos T citotxicos/supresores CD4 y CD8 son mutuamente excluyentes Relacin CD4 : CD8 = 2 : 1

LINFOCITOS T Molculas de Superficie de las Th y Tc

ICAM-1 y LFA-1 son molculas de adhesin celular

LINFOCITOS T Complejo Receptor de las Clulas T (TCR)

Sitio de unin del antgeno

CD3 cadenas theta

TCR alfa - beta

CD3 cadenas gamma, delta y epsilon

LINFOCITOS B
Representan el 10- 20% de linfocitos circulantes
Ubicados en centros germinales y folculos linfoides de ganglios, bazo, amgdalas y tejido linfoide asociado a mucosas Se transforman en clulas plasmticas para la secrecin de inmunoglobulinas

Reconocen especficamente a los antgenos mediante su complejo receptor especfico BCR compuesto por cadenas y cadenas Ig. Marcadores especficos: CD19, CD21.

ANTICUERPOS (Ac)
Son protenas producidas en respuesta a la exposicin a

estructuras extraas conocidas como antgenos. Se presentan en dos formas:

A) unidos a las membranas de los linfocitos B y B) los Ac secretados que se encuentran en la circulacin, los tejidos, y en las mucosas. con frecuencia se unen a la superficie de otras clulas como los fagocitos los NK y mastocitos, los que presentan receptores especficos para unirse a los anticuerpos.
ANTISUERO.- es un suero que contiene anticuerpo que se une a un

antgeno concreto. Anticuerpos monoclonales.-son anticuerpos homogneos con especificidad conocida.

LINFOCITOS B
Marcadores de superficie

CLULA PLASMTICA

ANTGENOS
Es cualquier sustancia que se une especficamente a una

molcula de anticuerpo o a un receptor del linfocito T.

CLULAS PRESENTADORAS DE ANTGENOS (CPA)
Monocito: Macrfago Clula dentrtica

Monocitos
Se originan a partir de progenitores comunes de granulocitos-monocitos por accin de la IL-3, GM-CSF y M-CSF Circulan por la sangre, migran a los tejidos y se diferencian en macrfagos.

Macrfagos
Son unas clulas del sistema inmunitario, que se localizan en los

tejidos procedentes de la emigracin desde la sangre a partir de un tipo de leucocito llamado monocito. Sistema monocito-macrofgico Esta diferenciacin de monocito a macrfago afecta a gran cantidad de cambios como que la clula aumenta su tamao de 5 a 10 veces, sus orgnulos incrementan tanto su nmero como su complejidad, adquiere capacidad fagoctica, produce altas concentraciones de enzimas lticas y empieza a secretar gran variedad de substancias solubles que realizan diferentes funciones.

Macrofagos
Fagocitos tisulares, segregan citoquinas, enzimas

proteolticas y factores citotxicos. Procesan y presentan el antgeno a clulas T. Producen (IL-1 e IFN-alfa) Son clulas efectoras en algunas formas de inmunidad celular, tal como en las reacciones de hipersensibilidad retardada. Los macrfagos y su actividad pueden aumentarse por citocinas secretadas por linfocitos T colaboradores y productos bacterianos. Uno de los ms potentes activadores de macrfagos es el interfern gamma.

Funciones de los Macrfagos

La inflamacin: Inmunidad celular innata, es decir, inician una

respuesta natural contra los microorganismos, porque expresan receptores de membrana para numerosas molculas bacterianos, por ejemplo: receptor para lipopolisacrido (CD14), receptores para manosas, y receptor para glcidos entre otros. La fagocitosis: todos los cuerpos extraos que se introducen en el organismo como las bacterias y sustancias de desecho de los tejidos, tienen la capacidad de quimiotaxis, por la presencia de determinados factores quimiotcticos para monocitos como interleucina-I, trombina, factor de crecimiento derivado de las plaquetas, factor de complemento C5a, fragmentos de colgeno, elastina, fibronectina, calicrena, activador del plasmingeno, inmunoglobulinas y leucotrienos.

Funciones de los Macrfagos

Presentacin de Antgenos: , porque poseen en sus membranas

molculas del complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) de clase II. Los linfocitos B activados producen y liberan Ac especficos a los Ag presentados por el macrfago. Estos Ac se adhieren a los Ag de los microbios o de clulas invadidas por virus y as atraen con mayor avidez a los macrfagos para fagocitarlos. Hemostasia: el macrfago produce una serie de substancias que participan en la coagulacin como son: protena C, trombomodulina, factor tisular, factor VII, factor XIII y el inhibidor del activador del plasmingeno.

CLULAS DENDRTICAS y de LANGERHANS

Presentadoras de antgenos profesionales Se encuentran en superficies tisulares mucosos y cutneas. Captan los antgenos y migran a los ganglios linfticos Presentan prolongaciones citoplasmticas dendrticas y gran cantidad de molculas MHC tipo II Poca o ninguna capacidad fagoctica.

El Sistema del Complemento

Es una cascada bioqumica que ataca las superficies de las clulas

extraas. Contiene ms de 20 protenas diferentes y recibe ese nombre por su capacidad para complementar la destruccin de patgenos iniciada por los anticuerpos. El SC es el mayor componente humoral de la respuesta inmune innata. Muchas especies tienenSC, el mismo no slo se presenta en los mamferos, sino que las plantas, peces y algunos invertebrados tambin lo poseen. La respuesta es activada por la unin de protenas del complemento a CHO de las superficies del microorganismo o por la unin del complemento a AC unido a los microorganismos. Esta seal de reconocimiento produce una rpida respuesta de destruccin.

El Sistema del Complemento

La velocidad de la respuesta es el resultado de la amplificacin de

la seal que ocurre tras la activacin proteoltica secuencial de las molculas del complemento, que tambin son proteasas. Tras la unin inicial de protenas del complemento al microbio, activan su capacidad protesica, que a su vez activa a otras proteasas del complemento y as sucesivamente. La cascada origina la produccin de pptidos que atraen clulas inmunitarias, aumentan la permeabilidad vascular y opsonizan (recubren) la superficie del patgeno, marcndolo para su destruccin. Esta deposicin del complemento puede tambin matar clulas directamente al bloquear su membrana plasmtica.

Marcadores de Superficie de Leucocitos

Los linfocitos y otros leucocitos, presentan patrones caractersticos de

molculas de superficie, que pueden ser aprovechadas como marcadores para distinguir y caracterizar distintas poblaciones celulares. Esta caracterizacin se realiza mediante Ac monoclonales (AcMo); cada AcMo distingue un solo tipo de molcula, e incluso partes especficas y variantes de cada tipo de molcula. Existe una nomenclatura basada en los llamados grupos de diferenciacin (CD), se tiene marcadores de: de linaje (p. ej., el CD3 slo existe en el linaje que conduce a los LT de maduracin (ej.: el CD1 slo aparece en las fases madurativas de clulas T en el timo);

Marcadores de Superficie de Leucocitos

Marcadores de activacin (p. ej., el CD25 es el receptor de la

citoquina IL-2, y slo se expresa en aquellas clulas T estimuladas previamente por el antgeno). Se tiene otras familias de marcadores: Superfamilia de las inmunoglobulinas , donde se incluyen CD2, CD3, CD4, CD8. Familia de las integrinas: cada miembro de esta familia consta de dos cadenas, a y b . Se distinguen distintas subfamilias, dependiendo del tipo de cadena . Selectinas (que tienen especificidad de lectinas). Proteoglucanos (como el CD44), que se unen a componentes de la matriz extracelular.

Inmunoglobulinas normales
Las inmunoglobulinas estn formadas por una unidad bsica

compuesta de dos cadenas polipetdicas globulares pesadas y dos cadenas livianas unidas entre s por puentes disulfuro. Ambas cadenas presentan una zona constante y una zona variable. En esta ltima, se encuentra una zona hipervariable formada por 10 a 15 aminocidos que conforman el receptor idiotpico responsable de la unin con el epitopo presente en el antgeno. Al ser sometida a digestin por papana (flecha), esta molcula genera dos fragmentos, el fragmento Fab responsable de la unin con antgeno y el fragmento Fc que determina diversas funciones biolgicas en las diferentes inmunoglobulinas.

Inmunoglobulinas normales
El fragmento Fab est formado por una regin constante y una

regin variable de una cadena pesada y de una cadena liviana. El fragmento Fc est formado slo por regiones constantes de cadenas pesadas. Las clases de inmunoglobulinas estn determinadas por los diferentes isotipos de las cadenas pesadas. Estas pueden ser mu, gamma, alfa, delta o epsilon. Las cadenas livianas pueden ser kappa o bien lambda. Las distintas clases de inmunoglobulinas presentan diversas funciones biolgicas. Cinco tipos generales de anticuerpos inmunoglobulnicos producidos por el sistema de linfocitos clulas plasmticas: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE

Sntesis de Inmunoglobulinas

El tipo de anticuerpo resultante depende del perfil de citoquinas secretado por las clulas Th en respuesta a la presentacin del Ag

Inmunoglobulinas
Cada monmero se forma por la unin no covalente de dos cadenas livianas (kappa o lambda) y dos cadenas pesadas especficas de cada isotipo de inmunoglobulina: IgM cadenas IgG cadenas IgA cadenas IgE cadenas IgD cadenas

Inmunoglobulinas normales
IgM: es secretada principalmente en respuestas humorales primarias

timodependientes y timoindependientes. Es una potente fijadora del complemento, se encuentra en la membrana de linfocitos B en forma de monmero, constituyendo los receptores idiotpicos de estas clulas. IgG: ms abundante en el plasma, fija el complemento, unin a receptores para Fc en clulas fagocticas y unin a receptores en clulas NK durante la citotoxicidad mediada por anticuerpos (ADCC). Esta inmunoglobulina atraviesa la placenta confiriendo proteccin al feto durante el embarazo.

Inmunoglobulinas normales
IgA: Se encuentra en lgrimas, leche, saliva y mucosa de los tractos

intestinal y digestivo. proteje de la accin de enzimas proteolticas. Es sintetizada en grandes cantidades por acmulos linfoides y placas de Peyer del intestino. No fija complemento ni es opsonina.
IgE: Se une a receptores de alta afinidad en basofilos y mastocitos,

interviene en la respuesta inmune protectora contra parsitos especialmente helmintos e hipersensibilidad inmediata (anafilaxia) IgD: Es una inmunoglobulina unida a membrana de los linfocitos B. Su presencia en conjunto con IgM confiere inmunocompetencia a estos linfocitos. Est practicamente ausente en el suero.

Inmunoglobulinas anormales
Los trastornos debidos a inmunodeficiencia son un grupo de

enfermedades diversas en las que el sistema inmunitario no funciona de forma adecuada, y en consecuencia las infecciones son ms frecuentes, recurren con ms frecuencia, por lo general son graves y duran ms de lo habitual. Las infecciones frecuentes y graves (tengan lugar en un recin nacido, un nio o un adulto) que no responden inmediatamente a los antibiticos sugieren la existencia de un problema en el sistema inmunitario. Algunos problemas del sistema inmunitario tambin derivan en cnceres raros o infecciones inusuales por virus, hongos y bacterias.

Inmunoglobulinas anormales

Reacciones de

hipersensibilidad Inmunodeficiencias Autoinmunidad Trasplante y rechazo Inmunidad frente a tumores

Regulacin de la Respuesta Inmune: reconocimiento de Antgenos

Presentacin del pptido antignico en la fosa o canal de la molcula MHC clase I a un linfocito T CD8+ o citotxico

RESPUESTA INMUNE PRESENTACIN DEL ANTGENO

Presentacin del pptido antignico por molculas MHC clase II a las clulas T CD4+ (helper). Importancia de las molculas co-estimulatorias CD28 y B7

CLULA PRESENTADORA DE ANTGENOS Molcula Clase II del MHC

CLULA T CD4*

Regulacin de la Respuesta Inmune: Induccin

Th 1 Th 0

Th 2
Alergeno

Tcnicas de Laboratorio para detectar reacciones Ag-Ac

AGLUTINACIN. Son reacciones de antgeno-anticuerpo que se observan .Ejemplo, la prueba para la artritis reumatoidea. PRECIPITACION. Son las ms simples de realizar, reacciona un antgeno soluble precipitgeno, con un anticuerpo correspondiente precipitina que pertenecen a las IgG, Es til en el examen de VDRL para el diagnstico de sfilis congnito. INMUNODIFUSIN Ejemplo en la deteccin de gamaglobulinas.

Mtodos para detectar reacciones Ag-Ac

INMUNOELECTROFORESIS

Es la separacin de los componentes de una protena que migran a diferentes distancias en un medio de soporte y en un campo elctrico, una de las sustancias que migran es el antgeno que acta con el anticuerpo especfico que se encuentra en el medio de soporte. RADIOINMUNOENSAYO. Se fundamenta en la competencia de un antgeno radiomarcado(con Iodo 125, tritio) de concentracin conocida con una concentracin desconocida del mismo antgeno (problema) por los sitios de ligazn del respectivo anticuerpo que se encuentra en una proporcin constante.

Mtodos para detectar reacciones Ag-Ac

INMUNOENSAYO ENZIMTICO (ELISA) Se marca un anticuerpo con una enzima, que es utilizado para

detectar un AG o un AC. Las enzimas ms comunes son la Fosfatasa alcalina o la peroxidasa. Despus de producirse la reaccin inmunolgica se aade el respectivo sustrato cromognico y detectado por un fotocolormetro. Ejemplos: Deteccin de retrovirus en heces. Deteccin de Acs contra el virus VHI. El suero del paciente conteniendo supuestamente el AC, contra el virus del SIDA se coloca en uno de los pozos de una placa, en cuyo fondo se encuentra el virus VIH inactivo

Mtodos para detectar reacciones Ag-Ac

INMUNOENSAYO ENZIMTICO (ELISA) Ejemplo: Deteccin de Acs contra el virus VHI. El suero del paciente conteniendo supuestamente el AC, contra el virus del SIDA se coloca en uno de los pozos de una placa, en cuyo fondo se encuentra el virus VIH inactivo o (antgeno), se realiza la reaccin inmunolgica Ag-Ac. Del paciente, despus se le aade un antianticuerpo o Ac. Antiinmunoglobulina humana marcada con fosfatasa alcalina , que reaccionar con el anticuerpo del paciente que ya est ligado al Ag viral. Luego se lava y se le aade el sustrato cromognico evidencindose el color en caso de actividad el cual se observa.

MEJORA DE LA RESPUESTA INMUNE POR IgM

Experimentalmente se ha visto que cuando se administra

simultneamente un antgeno y anticuerpos monoclonales IgM frente a dicho antgeno, se mejora la respuesta inmune. Las posibles explicaciones son: Desarrollo de una respuesta anti-idiotpica a la IgM monoclonal, que amplifica la respuesta (ver ms adelante el concepto de regulacin por anti-idiotipos). Unin de complejos inmunes Ag-IgM monoclonal a los receptores Fc de ciertas CPA, que de esta forma mejoran su capacidad de engullir, procesar y presentar el antgeno.

REGULACIN POR INMUNOCOMPLEJOS

Los inmunocomplejos pueden inhibir a los LT y LB va Rc de

Fc (entrecruzamiento). El antgeno que forma parte del inmunocomplejo puede quedar entrecruzado por un brazo Fab de la mIg del linfocito B y por un brazo Fab de un Ac distinto (que reconoce otro epitopo) que forma parte del inmunocomplejo, y que est unido a la clula B por el engarce de su porcin Fc a un receptor para Fc. Esto puede producir una sea inhibitoria en la ruta de los segundos mensajeros, de modo que el linfocito B entra en un estado de no respuesta.

REGULACIN MEDIADA POR CITOCINAS.

Las citocinas pueden modular la respuesta

inmunitaria, pero especialmente producidas por los linfocitos T.