Virologia

Introduo Virologia

Histria Agentes histricos

Os vrus foram inicialmente descritos como agentes filtrveis. De facto, em virtude do seu pequeno tamanho, os vrus podem atravessar filtros destinados a reter bactrias.

Agentes actuais (definio e propriedades)

9 Ao contrrio da maioria das bactrias, fungos e parasitas, os vrus so parasitas intracelulares obrigatrios, que dependem dos processos bioqumicos da clula hospedeira para sua replicao. 9 Os vrus so agentes filtrveis. 9 A reproduo dos vrus ocorre principalmente atravs da organizao dos componentes individuais mais do que atravs da diviso binria. 9 Os vrus so incapazes de produzir energia ou protenas independentemente de uma clula hospedeira. Assim os vrus adaptam-se ao bioquimismo celular para utilizar os mecanismos de biossntese da clula hospedeira. 9 Os genomas virais podem consistir em DNA ou RNA, mas no em ambos. 9 Os vrus apresentam uma morfologia com capsdio nu ou com revestimento.

Estrutura
18 nm (parvovrus) a 300 nm (poxvrus)

DNA ou RNA

Protenas estruturais

Enzimas e protenas de ligao ao cido nucleico

Nucleocapsdio

Nucleocapsdio

Vrus N

Nucleocapsdio

Glicoprotenas e membrana

Vrus com revestimento

9 Capsdio protenas estruturais. uma estrutura rgida capaz de suportar condies ambientais adversas. Os vrus nus so geralmente resistentes ao ressecamento e a cidos detergentes, incluindo cido e blis do sistema entrico. Muitos destes vrus so transmitidos por via orofecal e podem manter a sua capacidade de transmisso mesmo em gua de esgoto. 9 DNA pode consistir em filamento nico ou filamento duplo, linear ou circular 9 RNA pode ser de sentido positivo (+) (como o RNA-mensageiro) ou de sentido negativo (-), de filamento duplo (+/- ) ou de ambos os sentidos ( contendo regies + e de RNA ligadas atravs das extremidades). O genoma RNA tambm pode ser segmentado em peas, cada uma destas peas codificando um gene individual. 9 Revestimento membrana constituda por lpidos, protenas e glicoprotenas. A estrutura membranosa do revestimento s pode ser mantida em solues aquosas. A sua ruptura ocorre facilmente em consequncia de ressecamento, condies cidas, detergentes e solventes, como ter, resultando na inactivao do vrus. Desta maneira, os vrus dotados de revestimento devem permanecer em ambiente hmido e, em geral so transmitidos atravs de lquidos, perdigotos, sangue e tecidos. A maioria incapaz de sobreviver s condies adversas do sistema gastrointestinal.

Capsdio
9 Todos os componentes do capsdio possuem caractersticas qumicas que permitem o seu encaixe e organizao numa unidade maior.

9 Protenas associadas em unidades maiores.

protenas

Subunidades protmeros

Capsmeros (visvel Melet)

Procapsdio ou capsdio

Para alguns vrus o capsidio forma-se em redor do genoma, em outros, o capsdio forma um rea envolvente vazia que dever ser preenchida pelo genoma . 9 Os capsdios no simtricos so formas complexas, que esto associadas a certos vrus bacterianos (fagos) 9 As estruturas virais que podem ser construdas em etapas so simtricas e incluem estruturas: o Helicoidais aparecem na forma de bastes

cido nucleico

Capsmeros O vrus do mosaico do tabaco o exemplo clssico de um vrus de simetria helicoidal. Os seus capsmeros organizam-se no genoma RNA em bastonetes que se estendem ao longo do genoma. Os capsmeros recobrem e protegem o RNA. Os nucleocapsdios helicoidais so observados no interior do revestimento de muitos vrus RNA de filamento negativo.

o Icosadricas esfera formada por subunidades simtricas

cido nucleico

pentameros

Protenas/subunidades

hexameros

capsdio

O icosaedro constitudo por 12 capsmeros, cada um apresentando simetria em pentamero. Os vrus icosadricos maiores so construdos atravs da insero de capsmeros estruturalmente distintos entre os pentomeros (vrtices) adjacentes. Estes icosaedros aumentados so denominados icosadeltaedro, e o seu tamanho determinado pelo nmero de hexameros inseridos ao longo dos bordos e planos entre os pentameros. Os icosaedros simples so utilizados por vrus pequenos e simples, como os picornavrus e os parvovrus.

Revestimento
9 constitudo por lpidos, protenas e glicoprotenas. 9 Possui uma estrutura de membrana semelhante das membranas celulares. 9 As protenas celulares so raramente encontradas no revestimento viral, embora este revestimento seja adquirido a partir das membranas celulares. 9 Os vrus com revestimento so, na sua maioria, redondos ou pleiomrficos. Duas excees so o poxvrus (forma de tijolo) e rabdovrus (forma de projctil). 9 A maioria das glicoprotenas virais apresenta hidratos de carbono ligados a aspargina (ligao N) e estende-se pelo revestimento, ultrapassando a superfcie do vrus. Em muitos vrus, estas glicoprotenas podem ser observadas como pontas. A maioria das glicoprotenas actua como protenas de ligao viral (PLV) que tm a capacidade de se ligar a estruturas existentes entre as clulas-alvo. As PLV

que tambm se ligam a eritrcitos so denominadas hemaglutinas (Has). Algumas glicoprotenas desepenham outras funes, como a neuraminidase dos ortomixovrus (influenza), o receptor para Fc e C3b associados s glicoprotenas do vrus do herpes simples ou glicoprotena de fuso dos paramixovrus. As glicoprotenas tambm constituem importantes antignios para a imunidade protectora. 9 Todos os vrus de RNA de filamento negativo possuem revestimento. Os componentes da Rna-polimerase viral RNA-dependente associam-se ao genoma RNA(-) dos ortomixovrus, para mixovrus e rabdovrus, formando nucleocapsdios helicoidais. Estas enzimas so necessrias para iniciar a replicao do vrus, e a sua associao ao genoma garante a sua distribuio pela clula. As protenas da matriz que revestem o interior do revestimento facilitam a organizao do ribonuclesido em vrus.

Tegumento Ncleo-capsdeo

Revestimento

Estrutura de um vrus com revestimento. O tegumento o espao existente entre o revestimento e o ncleo-capsdio. Contm enzimas e protenas que facilitam a infeco viral.

Caractersticas dos Vrus

VRUS SEM REVESTIMENTO

Componentes Protena

VRUS COM REVESTIMENTO

Componentes Membrana Lpidos Protenas Glicoprotenas

Propriedades So estveis nas seguintes condies ambientais: Temperatura cido Detergentes Ressecagem So libertados da clula por lise

Propriedades Lbil, sofre ruptura nas seguintes condies ambientais: Calor cido Detergentes Ressecagem Modifica a membrana celular durante a replicao

Consequncias Podem ser facilmente disseminados (em fomites, das mos para mos, na poeira, em pequenas gotculas) Podem secar e manter a infectividade

libertada por brotamento ou lise celular Consequncias Deve permanecer hmido No pode sobreviver gastrointestinal no sistema

Podem sobreviver s condies adversas do intestino Podem ser resistentes a detergentes e tratamento inadequado dos esgotos Os anticorpos podem ser suficientes para imunoproteco

Dissemina-se atravs de grandes gotculas, secreo e transplante de rgos e transfuses sanguneas No precisa matar a clula para sofrer disseminao Pode necessitar de resposta imune mediada por anticorpos e clulas para proteco e controle Provoca hipersensibilidade e inflamao para causar imunopatognese

Replicao
As principais etapas de replicao viral so as mesmas para todos vrus. A clula actua como uma fbrica, fornecendo os substratos, a anergia e a maquinaria necessrios para a sntese de protenas virais e a replicao do genoma. Os processos no fornecidos pela clula devem ser codificados pelo genoma do vrus. A maneira pela qual cada vrus realiza estas etapas e supera as limitaes bioqumicas da clula determinada pela estrutura do genoma e pelo vrus.

O ciclo de replicao viral pode ser dividido em vrias fases: 9 Fase inicial Vrus: Reconhece clula-alvo apropriada. Fixa-se clula Penetra na membrana plasmtica capturado pela clula Remove o capsdio ou revestimento Liberta o seu genoma no citoplasma Liberta o genoma no ncleo, se necessrio A remoo do capsdio ou do revestimento do vrus anula a sua infectividade

9 Fase tardia Replicao do genoma Sntese macromolecular viral Organizao do vrus Libertao

o Perodo lactente Neste o vrus infeccioso extracelular no detectado e inclui

1. Perodo de eclipse Inicia-se com a formao do capsdio ou do revestimento Este termina com o aparecimento de novos vrus aps a organizao viral

2. Libertao do vrus Cada clula infecciosa pode produzir at 100.000 partculas; entretanto, apenas 1 a 10% destas partculas podem ser infecciosas. As partculas no-infecciosas (partculas defeituosas) resultam de mutaes e erros na produo e organizao do vrus. A produo de vrus infecciosos por clula ou quantidade de partculas libertadas e o tempo necessrio para concluir um ciclo de reproduo viral so determinados pelas propriedades do vrus e da clula-alvo.

Reconhecimento e fixao clula-alvo

9 A ligao das PLV, ou estruturas sobre a superfcie do capsdio do vrus, aos receptores (protenas ou hidratos de carbono) sobre a clula determina inicialmente quais as clulas que podem ser infectadas por um vrus.

9 A estrutura de fixao de um vrus pode fazer parte do capsdio ou pode estenderse a partir deste 9 Os vrus que se ligam aos receptores expressos em tipos celulares especficos podem ser restritos a: determinadas espcies - espectros de hospedeiros tipos celulares especficos; a clula-alvo susceptvel define o tropismo tecidual (por ex., neurotrpico, linfotrpico). O vrus de Epstein-Barr, um herpesvrus, possui uma faixa de hospedeiro e tropismo muito limitados, uma vez que ele se liga ao receptor C3b (CR2) expresso nas clulas B humanas.

Penetrao
9 A internalizao do vrus na clula iniciada por mltiplas interaces entre as PLV e os receptores celulares. 9 O mecanismo de internalizao depende da estrutura do vrus e do tipo celular: o Endocitose: um processo normal utilizado pela clula para captao de molculas ligadas ao receptor, como hormonas, lipoprotenas de baixa densidade e transferrina. Frequente nos vrus sem revestimento. o Viropexia: as estruturas hidrofbicas das protenas dos capsdio podem ser expostas aps ligao do vrus s clulas, e estas estruturas ajudam o vrus a atravessar (por penetrao directa) a membrana. o Os vrus com revestimento podem fundir as suas membranas com as membranas celulares para libertar o nucleocapsdio ou genoma directamente no citoplasma. O pH ptimo para a fuso de um vrus com revestimento constitui o principal determinante quanto ao facto da penetrao ocorrer na superfcie celular, em pH neutro, ou quanto necessidade de internalizao do vrus por endocitose ou fuso num endossoma em pH cido. A actividade de fuso pode ser proporcionada pela PLV ou outra protena.

Desnudamento (perda de capsdeo e /ou de revestimento)

9 Uma vez interiorizado, o nucleocapsdio deve ser libertado no local de replicao, no interior da clula, com remoo do capsdio ou do revestimento. 9 O genoma do vrus DNA, excepo dos poxvrus, deve ser libertado no ncleo, enquanto a maioria dos vrus RNA permanece no citoplasma 9 Este processo pode ser iniciado atravs da fixao ao receptor, ou promovido pelo meio cido ou por proteases encontradas num endossoma ou lisossoma. Ex: os

capsdios dos picornavrus so enfraquecidos por libertao da protena do capsdio VP4, permitindo o seu desnudamento. A VP4 libertada pela insero do receptor no stio de fixao em buraco-fechadura do capsdio. 9 Os vrus com revestimento sofrem desnudamento durante a sua fuso com a membrana celular. 9 Os reovrus e poxvrus so apenas parcialmente desnudados ao serem interiorizados. Exemplo: o capsdio externo do reovrus removido, porm o genoma permanece num capsdio interno, que contm as polimerases necessrias para a sntese de RNA.

Sntese macromolecular
9 Cada vrus deve sintetizar mRNA e protenas e produzir uma cpia idntica do seu genoma. Assim, a transcrio, a traduo e a replicao do genoma constituem, provavelmente, as etapas mais importantes na multiplicao do vrus. 9 Uma vez libertado o genoma na clula, ele torna-se intil, a no ser que possa ser transcrito em mRNA funcionais, capazes de se ligarem a ribossomas e de se traduzirem em protenas. A forma pela qual cada vrus realiza estas etapas depende da estrutura do genoma e do local de replicao. 9 A maquinaria celular para transcrio e processamento do mRNA encontra-se no ncleo. A maioria do vrus DNA utiliza a RNA-polimerase II DNA-dependente da clula e outra enzimas para produzir o mRNA. Por exemplo, os mRNA eucariticos adquirem uma cauda 3 poliadenilada (poli A) e um capuz 5metilado (para ligao ao ribossoma) e so processados para remover intres antes de serem exportados para o citoplasma. 9 Os vrus que se replicam no citoplasma devem desempenhar estas funes ou apresentar uma alternativa. 9 Os vrus RNA devem codificar as enzimas necessrias para transcrio e replicao, visto que a clula no dispe de nenhum meio de replicao do RNA. Os mRNA do vrus RNA so produzidos no citoplasma e podem ou no adquirir um capuz 5 ou uma cauda poli A. 9 O genoma nu dos vrus DNA ( excepo dos poxvrus) e os vrus RNA de sentido positivo ( excepo dos retrovrus) so suficientes para iniciar a replicao ao penetrarem numa clula. Estes genomas so capazes de interagir directamente com a maquinaria do hospedeiro, promovendo a sntese de mRNA, de protenas ou de ambos. Vrus DNA 9 Quanto menor o vrus DNA, mais ele depende da clula hospedeira. Os vrus DNA maiores codificam uma DNA-polimerase e protenas para acelerar e controlar a transcrio e a replicao do genoma. 9 A sntese de DNA e mRNA do vrus pode ser intensificada ao acelerar o crescimento da clula ou ao aumentar o nmero de moldes de DNA para transcrio aps a replicao do genoma. A clula em crescimento fornece

desoxirribonucletidos, polimerases e outros elementos necessrios para a replicao do DNA viral. Em consequncia, muitos vrus DNA codificam protenas que promovem o crescimento da clula hospedeira. 9 A transcrio do genoma dos vrus DNA ( excepo dos poxvrus) ocorre no ncleo e utiliza as polimerases e outras enzimas da clula hospedeira para a sntese de mRNA viral. A transcrio dos genes virais regulada pela interaco de protenas de ligao do DNA especficas com elementos promotores e intensificadores no genoma viral. Os elementos promotores e intensificadores virais assemelham-se, pela sua sequncia, aos da clula hospedeira para permitir a ligao dos factores de activao transcricionais da clula e da RNA-polimerase DNAdependente. 9 As protenas de ligao do DNA especficas do tecido determinam qual o mRNA viral a ser sintetizado e se o vrus se ir replicar. Trata-se de um factor na determinao do tropismo tecidual e o espectro de hospedeiro do vrus. 9 Os diferentes vrus DNA e RNA controlam a sequncia e a quantidade de sntese de genes e protenas virais de diferentes maneiras. Os vrus mais complexos codificam seus prprios activadores de transcrio, que intensificam ou regulam a expresso de genes virais. - Em geral, o mRNA para protenas no-estrurais transcrito em primeiro lugar. Os produtos gnicos iniciais (protenas no-estruturais) consistem, frequentemente, em protenas de ligao do DNA e enzimas, incluindo polimerases codificadas pelos vrus. Estas protenas so catalticas, e somente algumas delas so necessrias. Em geral, a replicao do genoma inicia a transio para transcrio por produtos gnicos tardios. Os genes virais tardios codificam protenas estruturais. So necessrias muitas cpias destas protenas para o acondicionamento do vrus; todavia, no so geralmente necessrias antes da replicao do genoma. Os genomas recm-replicados tambm fornecem novos modelos que amplificam a sntese de mRNA de genes tardios. Os diferentes genes DNA e RNA controlam o tempo e a quantidade de sntese de genes e protenas virais de diferentes maneiras. - Os genes podem ser transcritos a partir do filamento de DNA do genoma, em direces opostas. Por exemplo os genes iniciais e tardios do papovavrus SV40 encontram-se em filamentos de DNA opostos e no-superpostos. Os genes virais podem ter intres exigindo processamento ps-transcricional do mRNA pela maquinaria nuclear da clula (unio ou splicing). Os genes tardios dos papovrus e adenovrus so inicialmente transcritos na forma de um grande RNA a partir de um nico promotor e, a seguir, processados para produzir vrios mRNA diferentes aps a remoo de diferentes sequncias interpostas (intres). 9 A replicao do DNA viral segue as mesmas regras bioqumicas do DNA celular. A replicao iniciada numa sequncia de DNA peculiar do genoma, denominada origem (ori). Trata-se de um stio reconhecido por factores nucleares celulares ou virais ou pela DNA-polimerase DNA-dependente. A sntese do DNA viral semiconservadora, e tanto as DNA-polimerases virais quanto as celulares exigem um primer para iniciar a sntese da cadeia de DNA. Os parvovrus possuem sequncias de DNA que so invertidas e repetidas, permitindo ao DNA que se dobre e hibridize com ele mesmo para produzir um primer. A replicao do genoma dos adenovrus preparada pelo monofosfato de desoxicitidina ligado a uma protena terminal. Uma enzima celular (primase) sintetiza um primer de RNA para iniciar a replicao do genoma do papovrus, enquanto os herpesvrus codificam uma primase. - A replicao do genoma dos vrus DNA simples utiliza as DNA-polimerases DNA-dependentes do hospedeiro, enquanto os vrus maiores e mais complexos (por

ex. adenovrus, herpesvrus, poxvrus) codificam as suas prprias polimerases. Em geral, as polimerases virais so mais rpidas, porm menos precisas do que as polimerases da clula do hospedeiro, causando maior taxa de mutao nos vrus, bem como fornecendo um alvo para agentes antivirais. - A principal limitao replicao de um vrus DNA consiste na disponibilidade da DNA-polimerase e dos substratos desoxirribonucleotidos. A maioria das clulas na fase de repouso do crescimento no apresenta sntese de DNA, e os reservatrios de desoxitimidina so limitados. Os parvovrus so os menores vrus DNA que dependem acentuadamente da clula hospedeira. S se replicam nas clulas em crescimento, como as clulas eritrides ou o tecido fetal. Os vrus DNA maiores so mais independentes. Podem fornecer enzimas e outras protenas que estimulam o crescimento celular e podem obter desoxirribonucleotdio.

Vrus RNA 9 A replicao e a transcrio dos vrus RNA so processos semelhantes visto que os genomas virais geralmente consistem em mRNA (RNA de filamento negativo). Durante a replicao e a transcrio, forma-se RNA de duplo filamento replicativo intermedirio, que no normalmente no encontrado nas clulas no-infectadas. 9 Os genomas dos vrus RNA devem codificar RNA-polimerases RNAdependentes (replicases e transcriptases), visto que a clula no dispe de nenhum meio para a replicao do RNA. Como o RNA sofre degradao relativamente rpida, a RNA-polimerase RNA-dependente deve ser fornecida ou sintetizada logo aps o desnudamento para gerar mais RNA viral, ou, de outro modo, a infeco ser interrompida. A replicao do genoma tambm fornece novos modelos para a produo de mais RNAm, amplificando e acelerando a replicao viral. 9 Os genomas dos vrus RNA de filamento positivo dos picornavrus, calicivrus, coronavrus, flavivrus e togavrus actuam como mRNA, ligam-se a ribossomas e dirigem a sntese de protena. O genoma viral RNA de filamento positivo nu suficiente para iniciar a infeco por si s. Aps codificao do vrus, ocorre produo de RNA-polimerase RNA-dependente, e um modelo de RNA de filamento negativo sintetizado. A seguir, o modelo pode ser utilizado para gerar mais togavrus e tambm utilizado na produo de um RNA menor para as protenas estruturais (genes tardios). Os mRNA destes vrus no apresentam capa na extremidade 5, porm o genoma codifica uma curta sequncia poli A. A transcrio e replicao dos coronavrus compartilham muitos destes aspectos, porm so mais complexas. 9 Os genomas dos vrus RNA de filamento negativo dos rabdovrus, ortomixovrus, paramixovrus, filovirus e bunyavrus constituem os modelos para a produo de mRNA. O genoma de RNA de filamento negativo no infeccioso em si, e necessrio o transporte de uma polimerase para o interior da clula com um genoma (associada ao genoma como parte do nucleocapsdio) para produzir mRNA e iniciar a sntese de protenas virais. O mRNA ou outra espcie de RNA de filamento positivo podem actuar ento como modelo para a produo de mais cpias do genoma. excepo dos vrus da influenza, a trancrio e a replicao dos vrus RNA de filamento negativo ocorrem no citoplasma. A transcriptase do vrus da influenza exige um primer para produzir mRNA. Utiliza as extremidades 5 do mRNA celular no ncleo como iniciadores para a sua polimerase e, no processo,

rouba a capa 5 do mRNA celular. A replicao do genoma do vrus da influenza tambm ocorre no ncleo. 9 Os reovrus possuem um genoma de RNA de filamento duplo segmentado e sofrem uma forma mais complexa de replicao e transcrio. A RNA-polimerase do reovrus faz parte dos ncleos internos do capsdio. As unidades do mRNA so transcritas a partir de cada um dos 10 ou mais segmentos do genoma, enquanto ainda esto no cerne. Os filamentos negativos dos segmentos do genoma so utilizados como modelos para o mRNA, de modo semelhante aos vrus RNA de filamento negativo.O mRNA libertado no citoplasma, onde dirige a sntese de protena, ou sequestrado em novos ncleos. As enzimas codificadas pelo reovrus, contidas no capsdio interno, adicionam a capa 5 ao mRNA viral. O mRNA no apresenta poli A. O RNA de filamento positivo nos ncleos actua como modelo para o RNA de filamento negativo, produzindo a progene de RNA de filamento duplo. 9 Os arenovrus possuem um genoma circular de filamento duplo, com sequncias (+) adjacentes a sequncias (-). Os genes iniciais do vrus so transcritos a partir da fraco do genoma de sentido negativo, enquanto os genes tardios do vrus so transcritos a partir do intermedirio replicativo total. 9 Apesar dos retrovrus terem um genoma RNA de filamento positivo, o vrus no dispe de nenhum meio para a replicao do RNA no citoplasma. Em vez disso, os retrovrus transportam duas cpias do genoma, duas molculas de tRNA e uma DNA-polimerase RNA-dependente (transcriptase reversa) no vrus. O tRNA utilizado como modelo para a sntese de uma cpia de DNA (cDNA) do genoma. O cDNA sintetizado no citoplasma e, a seguir, integrado na cromatina do hospedeiro. A seguir, ocorre transcrio do genoma viral na forma de gene celular. Os promotores existentes na extremidade do genoma viral integrado aumentam a extenso da sua transcrio. As transcries de comprimento total so utilizadas como novos genomas, e so produzidos mRNAs individuais por unio diferencial do RNA. 9 O modo mais comum de replicao observado no vrus delta. Este vrus assemelha-se a um viride. O genoma consiste em RNA de filamento nico (+) circular, em forma de basto, que sofre extensa hibridizao. Como excepo, o genoma RNA do vrus delta replicado pela RNA-polimerase II DNA-dependente da clula hospedeira no ncleo. O genoma forma uma estrutura de RNA denominada ribosina, que cliva o crculo de RNA para produzir um mRNA.

Sntese de protenas
9 Todos os vrus dependem dos ribossomas, do RNA de transferncia (tRNA) e dos mecanismos da clula do hospedeiro para modificao ps-traduo para a sntese de suas protenas. 9 Em contraste com os ribossomas bacterianos, que podem ligar-se a um mRNA policistrnico e traduzir diversas sequncias genticas em protenas separadas, o ribossoma dos eucariotas liga-se ao mRNA, produz uma protena e, a seguir, desligase do mRNA. 9 Cada vrus enfrenta esta limitao de modo diferente, dependendo da estrutura do genoma. Assim, por exemplo, ocorre leitura de todo o genoma de um vrus RNA de filamento positivo pelo ribossoma, sendo traduzido numa poliprotena gigante. Subsequentemente, a poliprotena clivada por proteases celulares e virais em protenas funcionais. Os vrus do DNA e os retrovrus e a maioria dos vrus RNA de filamento negativo transcrevem o mRNA para poliprotenas menores ou protenas

individuais. Os genomas dos ortomixovrus e dos reovrus so segmentados, e a maioria dos segmentos codifica uma nica protena. 9 Os vrus utilizam diferentes tcticas para promover a traduo preferencial de seu mRNA em lugar de mRNA celular. Em muitos casos, a concentrao de mRNA viral na clula to grande que ela ocupa a maior parte dos ribossomas, impedindo a traduo de mRNA celular. A infeco por adenovrus bloqueia a sada do mRNA celular do ncleo. 9 Algumas protenas virais exigem modificaes ps-traduo, como fosforilao, glicolisao, acilao ou sulfao. A fosforilao das protenas realizada por quinases proteicas celulares ou virais e constitui uma forma de modular, activar ou inactivar protenas. 9 As glicoprotenas virais so sintetizadas em ribossomas ligados membrana e apresentam as sequncias de aminocidos para permitir a insero no retculo endoplasmtico rugoso e a glicolisao ligada a N. A forma precursora de manose alta das gicoprotenas progride do retculo endoplasmtico atravs do sistema de transporte vesicular da clula, sendo processada atravs do aparelho de Golgi. 9 A glicoprotena madura contendo cido silico expressa na membrana plasmtica da clula, a menos que a glicoprotena expresse sequncias proteicas para reteno num organelo intracelular. A presena das glicoprotenas determina onde ocorrer organizao do vrus. Alm disso, podem ocorrer outras modificaes, como O-glicolisao, acilao e sulfao das protenas, durante a progresso atravs do aparelho de Golgi.

Organizao
9 O vrus construdo a partir de pequenas fraces que contm o genoma num revestimento funcional. O local e o mecanismo de organizao do vrus na clula dependem do local de ocorrncia da replicao do genoma e da estrutura final consistir num capsdio nu ou num vrus com envoltrio. 9 A organizao dos vrus DNA, alm dos poxvrus, ocorre no ncleo e requer o transporte das protenas do vrus para o ncleo. Estas protenas devem ter os sinais peptdicos apropriados para transporte nuclear alm das caractersticas estruturais. A organizao dos vrus RNA e dos poxvrus ocorre no citoplasma. 9 Cada parte do vrus possui estruturas de reconhecimento que permitem ao vrus formar as interaces apropriadas protena-protena, protena-cido nucleico e (para os vrus com revestimento) protena-membrana necessrias para a organizao na estrutura final. O processo de organizao ou montagem comea quando as peas necessrias so sintetizadas e a concentrao de protenas estruturais na clula suficiente para impulsionar termodinamicamente o processo, de modo semelhante a uma reaco de cristalizao. 9 A organizao pode ser facilitada por protenas de construo ou outras protenas que so activadas ou que libertam energia durante a protelise. 9 Os vrus com capsdio podem ser organizados com estruturas vazias (procapsdios) a serem preenchidas com o genoma (ex: picornavrus, herpesvrus) ou podem ser organizados ao redor do genoma. Os nucleocapsdios dos retrovrus, togavrus e dos vrus RNA de filamento negativo organizam-se ao redor do genoma e, subsequentemente, so contidos num revestimento. 9 A aquisio de um revestimento ocorre aps associao do nucleocapsdio a regies da membrana da clula hospedeira modificada com glicoprotenas virais. As protenas da matriz para vrus RNA de filamento negativo alinham-se e promovem a

adeso de nucleocapsdios membrana modificada pelas glicoprotenas. Com a ocorrncia de mais interaces, a membrana circunda o nucleocapsdio, e ocorre brotamento do vrus a partir da membrana. 9 O local de brotamento determinado pelo tipo de genoma e pela sequncia de protena das glicoprotenas. A maioria dos vrus RNA brota a partir da membrana plasmtica, e o vrus libertado da clula ao mesmo tempo. 9 So cometidos erros durante a organizao viral. Verifica-se a produo de vrus vazios e vrus contendo genoma defeituoso. Em consequncia, a relao partculavrus infeccioso, tambm denominado da relao partcula-unidade formadora de placa, apresenta-se elevada, geralmente superior a 10, e durante a rpida replicao viral pode atingir 104. Os vrus defeituosos podem ocupar a maquinaria necessria para a replicao de vrus normais, impedindo (interferindo) a produo de vrus (partculas defeituosas de interferncia).

Libertao
9 Os vrus podem ser libertados das clulas aps a sua lise, por exocitose ou brotamento a partir da membrana plasmtica. Em geral, os vrus com capsdio nu so libertados aps a lise da clula. 9 A libertao de alguns vrus com revestimento ocorre aps brotamento da membrana plasmtica. A lise e o brotamento da membrana plasmtica constituem formas eficazes de libertao. Os vrus que brotam ou adquirem a sua membrana no citoplasma so libertados por exocitose ou lise celular e esto mais associados clula. Os vrus que se ligam a receptores de cido silico tambm podem apresentar uma neurominidase. A neurominidase remove os receptores potenciais de cido silico sobre as glicoprotenas do vrus e a clula do hospedeiro, impedindo a agregao e facilitando a libertao.

Reinicio do ciclo de replicao

9 O vrus libertado no meio extracelular usualmente responsvel pelo inicio de novas infeces. Todavia, a fuso clula-clula ou a transmisso vertical do genoma para clulas-filhas tambm pode disseminar a infeco. 9 Alguns herpesvrus, retrovrus e paramixovrus podem induzir fuso clula-clula para criar clulas gigantes multinucleadas (sinccios). Os retrovrus podem transmitir sua cpia integrada do genoma verticalmente para as clulas-filhas durante a diviso celular.

Gentica Viral
Ocorrem mutaes espontneas nos genomas virais, criando novas estirpes de vrus com diferentes propriedades do vrus original ou tipo selvagem. Estas variantes podem ser identificadas pelas suas sequncias de nucleotdos, diferenas antignicas ou diferenas nas suas propriedades funcionais ou estruturais. Na maioria das vezes, as mutaes no tm nenhum efeito ou so prejudiciais para o vrus. As mutaes que

ocorrem em genes essenciais inactivam o vrus, enquanto as mutaes em outros genes podem produzir resistncia a agentes antivirais ou alterar a antigenicidade ou patogenicidade do vrus. Diversas mutaes so produzidas por erros na cpia do genoma viral durante a replicao do vrus. Estes erros decorrem da baixa afinidade da polimerase viral e da rpida taxa de replicao dos vrus DNA. Alm disso, os vrus RNA carecem de um mecanismo gentico de avaliao de erros. Em consequncia, as taxas de mutao dos vrus DNA costumam ser menores do que a dos vrus RNA. As mutaes que ocorrem em genes essenciais so denominadas mutaes letais. difcil isolar estes mutantes, uma vez que o vrus incapaz de se replicar. Podem ocorrer: 9 um mutante por deleco em consequncia da perda ou remoo selectiva de parte do genoma e da funo codificada. 9 Outras mutaes podem produzir mutantes de formao de placa, que diferem do tipo selvagem no tamanho e aspecto da clula infectada. 9 Mutantes de espectro de hospedeiros que diferem quanto ao tipo tecidual ao espcie de clula-alvo que podem ser infectados. 9 Mutantes atenuados que so variantes que causam infeces menos graves em animais ou humanos. 9 Mutantes condicionais, como os mutantes termossensveis ou criossensveis, exibem uma mutao num gene ou protena essencial que permite a produo do vrus apenas em certas temperaturas 9 A troca gentica intramolecular entre vrus ou entre vrus e o hospedeiro denominada recombinao. Pode ocorrer recombinao imediata entre dois vrus DNA correlacionados. 9 Os vrus com genomas segmentados (como os vrus influenza e reovrus) formam culturas hbridas na infeco de uma clula com mais de uma cultura. Este processo denomina-se reagrupamento. 9 Noutros casos, uma estirpe viral defeituosa pode ser resgatada pela replicao de outro mutante, pelo vrus do tipo selvagem ou por uma linhagem celular apresentando um gene viral de reposio. A replicao de outro vrus fornece a funo ausente necessria para o mutante (complementao), permitindo a ocorrncia da replicao. 9 O resgate de um mutante letal ou letal-condicional com uma sequncia gentica definida, como um fragmento sde DNA de endonuclease de restrio, conhecido como marcador de resgate. O marcador de resgate utilizado para mapear os genomas de vrus como o vrus do herpes simples. Os vrus produzidos a partir de clulas infectadas por diferentes estirpes virais podem ser fenotipicamente mistos, apresentando protenas de uma estirpe e o genoma de outra (transcapsidao). So produzidos pseudotipos quando ocorre transcapsidao entre diferentes tipos de vrus, embora este evento seja raro. Estirpes virias individuais ou mutantes so seleccionadas em virtude da sua capacidade de utilizar a maquinaria da clula hospedeira e resistir s condies do hospedeiro e do ambiente.

Classificao

Formas de classificao
Estrutura: tamanho, morfologia e cido nucleico (por ex. picornavrus (rna pequeno), togavrus (manto) ) Caractersticas bioqumicas: estrutura e modo de replicao Doena: vrus da encefalite e da hepatite Formas de transmisso: por exemplo, os arbovrus so propagados por insectos Clula hospedeira (espectro de hospedeiro): animais (seres humanos, ratos, aves) , vegetais, bactrias Tecido ou orgo (tropismo): adenovrus e enterovrus, por exemplo Taxonomia

Famlia
Herpesviridae

Sub-famlia
Betaherpesviridae

Gnero
Cytomegalovrus

Espcie
Vrus citomeglico humano

Classificao segundo a estrutura

DNA
Vrus N Parvoviridae Adenoviridae Papovaviridae Vrus com revestimento Herpesviridae Hepadnaviridae

Icosadrica

Helicoidal Complexa

Poxviridae

RNA
Icosadrica Vrus N Picornaviridae Helicoidal Astroviridae Vrus com revestimento Togaviridae

Helicoidal

Bunyaviridae Rhabdoviridae Paramyxoviridae Orthomyxoviridae Filoviridae Retroviridae Arenaviridae Coronaviridae Flaviviridae

Complexa

Classificao segundo a transmisso

9 RESPIRATRIA: rinovrus, adenovrus, influenza, parainfluenza, vsr, coronavrus 9 FECAL-ORAL: picornavrus, adenovrus, reovrus, calicivrus 9 PARENTRICA: vrus das hepatites B e C, HIV 9 SEXUAL: vrus da hepatite B, HIV, papilomavrus, Herpesviridae 9 TRANSPLANTAO: Herpesviridae, vrus das hepatites B e C, retrovrus 9 ARTRPODES OU MORDEDURA ANIMAL: Vrus das febres hemorrgicas, vrus da raiva 9 TRANSMISSO VERTICAL: Herpesviridae, vrus da rubola, parvovrus, vrus das hepatotes B e C, HIV

Patogenia viral
Os vrus causam doena quando: 9 transpem as barreiras protectoras naturais do organismo; 9 escapam do controle imunolgico; 9 matam clulas de um tecido importante ( por exemplo, crebro); 9 deflagraram uma resposta imune e inflamatria destrutiva A evoluo de uma infeco viral determinada pela natureza da interaco entre vrus e hospedeiro e pela resposta do hospedeiro infeco.

A resposta imune de um individuo constitui o melhor tratamento, mas tambm representa um importante factor na patogenia de uma infeco viral. Factores que determinam as caractersticas da doena 9 natureza dos seus sintomas: tecido-alvo do vrus 9 gravidade : numerosos factores virais e do hospedeiro, estirpe do vrus, o tamanho do inculo e o estado de sade do geral do indviduo afectado 9 gravidade e durao da doena: resposta imune do indviduo Uma doena particular pode ser causada por diversos vrus que possuem tropismo (preferncia) tecidual comum (por exemplo, hepatite, fgado; resfriado comum, vias reas superiores; encefalite, sistema nervoso central). Por outro lado, um determinado vrus pode causar doenas diferentes ou nenhum sintoma. Por exemplo, dependendo do tipo celular afetado, o vrus do herpes simples tipo I pode causar gengivoestomatite, faringite, herpes labial (lceras frias), herpes genital, encefalite, ceratoconjuntive,ou pode no causar nenhuma doena. Apesar de usualmente benigno, este vrus pode tornar-se potencialmente fatal no recm-nascido ou no ndividuo imunocomprometido. Numerosos vrus codificam actividades (factores de virulncia) que promovem a eficincia da replicao e transmisso virais, o acesso e a ligao do vrus ao tecidoalvo ou a evaso do vrus das defesas do hospedeiro e resoluo imunolgica. Essas actividades podem no ser essenciais para o crescimento do vrus em cultura tecidual, porm so necessrias para a patogenicidade ou a sobrevivncia resulta em atenuao do vrus.

Infeco do tecido-alvo
Penetrao O vrus consegue penetrar no organismo atravs: de solues de continuidade na pele , embora esta seja uma ptima barreira contra a infeco das membranas mucoepiteliais que revestem os orificios do corpo (olhos, vias respiratrias, boca, sistema digestivo e orgos genitais). Os orificios so protegidos por lgrimas, muco, epitlio ciliado, cido gstrico, bilis e imunoglobulina A via mais comum de infeco: inalao Replicao e Disseminao Desenvolve-se em clulas que possuem equipamento biossinttico apropriado e receptores virais. Pode ser acompanhada de sintomas na replicao viral no stio primrio.

 O vrus pode replicar-se e permanecer no stio primrio, mas tambm pode disseminar-se para outros tecidos. A corrente sangunea e o sistema linftico constituem as vias predominantes de transferncia viral no organismo. Muitos vrus podem ser transportados atravs das clulas mucoepiteliais da orofaringe, sistema gastrointestinal, vagina e nus e infect-las. O transporte de vrus no sangue conhecido como virmia. O vrus pode estar livre no plasma ou associado a clulas nos linfctos ou macrfagos. Os vrus capturados por macrfagos fagocticos podem ser inactivados, podem replicar-se ou podem ser libertados em outros tecidos atravs do sistema mononuclear fagoctico. A replicao de um vrus nos macrfagos, revestimento endotelial dos vasos sanguneos ou fgado pode resultar em amplificao da infeco, iniciando o desenvolvimento de virmia secundria. Em muitos casos, a virmia secundria precede a libertao do vrus no tecido-alvo (por exemplo, fgado,pele) e a manifestao dos sintomas. Os vrus podem ter acesso ao sistema nervoso central ou crebro apartir da corrente sangunea, das meninges ou no lquido cefalorraquidiano infectados ou atravs da migrao de macrfagos infectados, ou ainda por infeco dos neurnios perifricos e sensoriais (olfactivos). Os vrus no sangue podem infectar o revestimento celular endotelial e causar a sua ruptura, saindo dos vasos sanguneos ou atravessando a barreira hematoenceflica para infectar o sistema nervoso central. As meninges so acessveis a muitos dos vrus disseminados por virmia, que pode propiciar acesso do vrus aos neurnios. O vrus do herpes simples, o vrus varicela zoster e o vrus da raiva infectam inicialmente o mucoepitlio, a pele ou msculo e, a seguir, o neurnio perifrico, que transporta o vrus at o sistema nervoso central ou o crebro.

Citopatogenia
A infeco viral de uma clula possui trs tipos potenciais de evoluo: 9 fracasso da infeco (infeco abortiva) 9 morte celular (infeco ltica) 9 infeco sem morte celular (infeco persistente) infeces crnicas (no-lticas, produtivas) infeces latentes (sntese macromolecular viral limitada, porm sem sntese virica) recorrente transformao (imortalizao) A natureza da infeco determinada por caractersticas tanto virais como celulares: 9 Clula no permissiva no permite a replicao de determinado tipo ou estirpe viral 9 Clula permissiva fornece o equipamento biossinttico para a realizao do ciclo de replicao completo do vrus 9 Clula semipermissiva pode ser muito ineficaz ou sustentar algumas, mas no todas as etapas da replicao viral A replicao do vrus pode iniciar alteraes nas clulas, resultando em citlise ou em alteraes na aparncia, propriedades funcionais ou antigenicidade da clula. Os efeitos sobre a clula podem resultar do controle da sntese macromolecular assumido pelo vrus, da acumulao de protenas ou partculas virais ou de uma modificao ou ruptura das estruturas celulares.

Infeces lticas
A replicao viral frequentemente incompatvel com a manuteno das funes celulares essenciais e viabilidade. Alguns vrus impedem a sntese de macromolculas celulares ou produzem enzimas degradativas e protenas txicas, impedindo o crescimento e reparao celulares e resultando em morte da clula. A acumulao de componentes virais e a replicao do vrus no interior da clula podem romper a estrutura e funo celulares ou causar ruptura dos lisossomas, com consequente autlise. A expresso de antignios virais sobre a superfcie celular e a ruptura do citoesqueleto podem dar origem a alteraes nas interaces entre clulas e na aparncia celular, transformando a clula num alvo para imunocitlise. A expresso de glicoprotenas na superfcie celular de alguns paramixovrus, herpesvrus e retrovrus desencadeia a fuso de clulas adjacentes, com consequente formao de clulas gigantes multinucleadas, denominadas sncicios. A formao de sncicios que ocorre na infeco pelos vrus permite que este se dissemine de uma clula para outra e escape deteco dos anticorpos. Pode ocorrer fuso entre clulas na ausncia de nova sntese proteica (ex:vrus Sendai) ou pode exigir nova sntese proteica (ex. Herpes simples).

Algumas infeces virais causam alteraes caractersticas na aparncia e propriedades da clula-alvo. Por exemplo, podem ocorrer aberraes e degradao dos cromossomas que podem ser detectadas por meio de colorao histolgica ( por exemplo, cromatina marginada ao redor da membrana nuclear em clulas infectadas pelo vrus do herpes simples e adenovrus). Alm disso, novas estruturas corveis, denominadas corpsculos de incluso, podem ocorrer no interior do ncleo ou citoplasma. Estas corpsculos de incluso podem resultar de alteraes induzidas pelo vrus na estrutura da membrana ou do cromossoma, ou podem representar os locais de replicao viral ou acumulao de capsdios virais. A natureza e a localizao desses corpsculos de incluso so caractersticas de infeces virais especficas e facilitam o diagnstico laboratorial. A infeco viral tambm pode causar vacuolizao, arredondamento das clulas ou outras alteraes histolgicas inespecficas indicadoras de clulas doentes.

Infeces no-lticas
Ocorre infeco persistente, quando uma clula infectada no destruda pelo vrus. Alguns vrus causam este tipo de infeco produtiva persistente em consequncia da sua libertao no-agressiva incua para a clula por exocitose ou brotamento a partir da membrana plasmtica. As infeces por vrus de DNA, nas quais a clula restringe o equipamento para a transcrio de todos os genes virais ou carece do equipamento para a transcrio de todos os genes virais ou carece do equipamento necessrio causam infeco latente ou de imortalizao. Os factores de transcrio especficos necessrios para este tipo de vrus podem ser expressos apenas em tecidos especficos, em clulas em fase de crescimento, mas no em repouso ou aps induo de hormonas ou citocinas. Por exemplo, o vrus do herpes simples estabelece uma infeco latente nos neurnios que carecem dos factores nucleares necessrios para transcrever os genes virais; entretanto, o stress ou outros estmulos so capazes de activar a replicao viral.

Vrus Oncognicos
Alguns vrus de DNA e retrovrus estabelecem infeces persistentes que tambm podem estimular o crescimento celular descontrolado, causando transformao ou imortalizao da clula. As caractersticas das clulas transformadas incluem crescimento contnuo sem envelhecimento, alteraes na morfologia e metabolismo da clula, aumento na velocidade de crescimento celular e transporte de acar, perda da inibio do crescimento por contacto celular e capacidade de crescer em suspenso ou gar semislido. Diferentes vrus oncognicos possuem mecanismos distintos de imortalizao das clulas. Os vrus imortalizam as clulas ao promover ou fornecer genes de estmulo do crescimento ou ao remover os mecanismos de restrio inerentes que limitam a sntese de DNA e o crescimento celular.

Os vrus DNA induzem imortalizao em clulas semipermissivas, que expressam genes apenas genes virais especficos, mas que no produzem vrus. A sntese de DNA viral, mRNA, protenas ou vrus ou uma combinao deles produzem morte celular, impedindo a imortalizao. Os retrovrus (vrus RNA) utilizam dois mecanismos na oncognese. Algus oncovrus codificam protenas oncognicas que so quase idnticas s protenas celulares envolvidas no controle de crescimento celular. A superproduo ou a alterao da funo deses produtos oncognicos estimulam o crescimento celular. Eses vrus oncognicos induzem rapidamente a formao de tumores. Entretanto, no foi identificado nenhum retrovrus deste tipo. Os retrovrus continuam a produzir vrus nas clulas imortalizadas ou transformadas. A transformao viral constitui a primeira etapa, mas geralmente no suficiente para induzir a oncognese e formao de tumor. Na verdade, com o decorrer do tempo, ocorrem oncognese e formao de tumor uma vez que as clulas imortalizadas tm mais probabilidade que as clulas normais de acumular outras mutaes ou rearranjos cromossmicos que promovem o desenvolvimento de clulas tumorais. As clulas imortalizadas tambm podem ser mais susceptveis a co-factores e promotores tumorais que aumentam a formao de tumor.

Doena viral
A susceptibilidade relativa de um indviduo e a gravidade da doena dependem de diversos factores: Natureza da exposio Estado imunolgico Idade e sade geral do indviduo Dose viral Gentica do vrus e do hospedeiro Uma vez infectado o estado imunolgico do hospedeiro constitui provavelmente o principal factor que ir determinar se uma infeco viral produzir uma doena potencialmente fatal,uma leso benigna ou nenhum sintoma. Os estgios da doena viral esto ilustrados na figura da pgina seguinte. O perodo inicial antes da deteco dos sintomas caractersticos da doena denominado perodo de incubao. Durante este perodo, o vrus replica-se, mas no alcana o tecido-alvo ou induz leso suficiente para causar doena. O perodo de incubao relativamente curto se a infeco do local primrio produzir os sintomas caractersticos da doena. Durante o pr-dromo, sintomas inespecficos ou semelhantes influenza podem preceder os sintomas inespecficos da doena. A tabela em baixo fornece uma relao dos perodos de incubao de muitas infeces virais comuns.

As infeces virais podem ser aparentes ou inaparentes e podem causar doena aguda ou crnica. Infeces inaparentes ocorrem se no houver leso do tecido infectado, se a infeco for controlada antes do vrus atingir o tecido-alvo, se o tecido alvo for sacrificvel, se tiver a capacidade de sofrer reparao rpido ou se o grau de leso for abaixo de um limiar funcional para esse tecido. As infeces assintomticas constituem importantes fontes de contgio. Essas infeces inaparentes so frequentemente detectadas nas pessoas pelo achado de anticorpos vrus-especficos.

A natureza e a gravidade dos sintomas de uma doena viral esto relacionadas com a funo do tecido-alvo infectado (por ex., fgado, hepatite, crebro, encefalite) e a extenso da imunopatologia desencadeada pela infeco. A capacidade e a velocidade de controle pelo sistema imunolgico de controle pelo sistema imunolgico do indviduo e resoluo da infeco viral geralmente so os factores que determinam o desenvolvimento da doena aguda ou crnica e a gravidade dos sintomas.

Estdios de infeco vrica

Perodo de Infeco incubao aguda

meses

anos

caracterstico da maior parte das infeces

anos

Perodo de Infeco incubao aguda

infeco crnica

meses

inf. crnica anos

Hepatite B

Perodo de incubao

meses

inf. crnica anos

HIV Inf.primria reactivao reactivao anos Perodo de Infeco incubao aguda Infeco aguda meses Infeco aguda

Nota: o vrus est latente entre perodos de reactivao. A infeco persistente mas no crnica.

Inf.primria

Complicaes imunolgicas tardias

Perodo de Infeco incubao aguda

meses

anos

Sarampo

Defesas do hospedeiro contra infecco viral

Barreiras naturais: Pele, muco, epitlio ciliado, cido gstrico, bilis Defesas imunolgicas inespecficas: Febre, interfero, macrfagos, clulas natural killer Respostas imunes antignio-especficas: Anticorpos, clulas T

A pele constitui a melhor barreira contra a infeco. Entretanto a presena de escoriaes ou solues de continuidade na pele permite o acesso dos agentes patognicos a clulas permissivas infeco. Quando o vrus atravessa as barreiras naturais, ele activa defesas imunes inespecficas, que procuram limitar e controlar a replicao viral local e a disseminao do vrus. As respostas imunes antignio-especficas so as ltimas a serem activadas, e so geralmente sistmicas. O objectivo final da resposta imune consiste em eliminar o vrus e as cluls que abrigam ou replicam o vrus (resoluo). A resposta imune a melhor e, na maioria dos casos, a nica maneira de controlar uma infeco viral. As respostas imunes tanto humorais quanto celulares so importantes na imunidade antiviral. Ocorre resoluo de uma infeco viral quando todos os vrus infecciosos e as clulas infectadas por vrus so eliminados do organismo. As respostas inespecficas produzidas pelo interfero e antignio local so frequentemente suficientes para limitar a infeco e promover a resoluo. Os anticorpos so eficazes contra os vrus extracelulares, particularmente a virmias, e podem ser suficientes para controlar os vrus citolticos, uma vez que a fbrica de vrus da clula infectada eliminada por replicao viral. A imunidade mediada por clulas necessria para a lise da clula-alvo na presena de infeces no-citolticas e infeces causadas por vrus com revestimento.

As reaces de hipersensibilidade e as reaces inflamatrias iniciadas pela imunidade antiviral podem constituir a principal causa das condies patolgicas associadas doena. O interfero produzido por leuccitos em resposta ao estmulo viral ou de outros agentes. Os interferes actuam por meio da sua ligao a receptores de superfcie celular, desencadeando uma resposta celular antiviral .Esta resposta prende-se com a diminuio da translocao ou transcrio e alterao do metabolismo celular. Alm disso, os interferes estimulam a resposta imunolgica e promovem a resoluo imune da infeco viral.

Epidemiologia viral Mecanismos de transmisso viral

9 9 9 9 9 Aerossis Fomites (objectos contaminados:por exemplo, tecidos, roupas) Contato directo com secrees (por exemplo saliva, smen) Contato sexual Transfuso sangunea ou transplante de orgos

9 Zoonose (animais, insectos (arbovrus)) Uma zoonose uma doena viral compartilhada por animais ou insectos e seres humanos. Os animais podem actuar como vectores para disseminar a doena viral para outros animais e humanos e at mesmo para outros locais. Alm disso, podem constituir reservatrios para o vrus, mantendo e amplificando o vrus no ambiente. A via de transmisso depende da fonte do vrus (local tecidual de replicao e secreo viral) e da capacidade do vrus de resistir s condies desfavorveis e barreiras do ambiente e do organismo durante ao seu trajecto at ao tecido-alvo. A presena ou ausncia de revestimento constitui o principal determinante estrutural do modo de transmisso viral, como j foi analisado anteriormente.

Doena e factores virais que promovem a transmisso 9 Estabilidade do vrus em resposta ao ambiente (por exemplo, ressecagem, gua potvel, detergentes, temperaturas) 9 Replicao e secreo do vrus em aerossis e secrees transmissiveis (por exemplo, saliva, smen) 9 Transmisso assintomtica 9 Transio ou ineficcia da resposta imune no controle da infeco ou recidiva

Factores de risco 9 Ocupao: contacto com agentes ou vectores 9 Estado imunolgico

A competncia da resposta imunolgica do indviduo e da sua histria imunolgica determinam a rapidez e a eficcia de resoluo de uma infeco; alm disso, esses factores tambm podem determinar a gravidade dos sintomas. Os indviduos que se encontram num estado de imunossupresso devido ao HIV, cancro ou terapia imunossupressora apresentam maior risco de desenvolver doena mais grave com infeco primria e so mais susceptiveis a sofrer reincidncia de infeces de vrus latentes. (por exemplo, herpesvrus, papovavrus).

Indviduos imunocompetentes

Grvidas

CMV Rubola Parvo VIH Hepatite B e C Herpes Simples

Indviduos imunocomprometidos

9 Sade 9 Idade Os lactentes e crianas adquirem uma srie de doenas virais respiratrias e exantemosas porque ainda no foram expostos a esses vrus e, portanto, so imunologicamente virgens. Os lactentes esto particularmente sujeitos a manifestaes mais graves de infeces respiratrios por paramixovrus e gastroenterite, devido ao seu pequeno tamanho e necessidades fisiolgicas (por exemplo, nutrientes, gua e electrlitos). Todavia, as crianas no produzem uma resposta imunopatolgica to grave quanto a dos adultos, e algumas crianas doenas (herpesvrus) so mais benignas em crianas. Os ndividuos idosos so particularmente susceptveis a novas infeces virais e reactivao de vrus latentes. Devido sua menor capacidade de iniciar uma nova resposta imunolgica, de reparar o tecido lesado e recuperar-se, estes individuos so portanto, mais susceptiveis a surtos de novas estirpes dos vrus influenza A e B. Os indviduos idosos tambm so mais propensos ao zoster, uma recorrncia do vrus varicela zoster. 9 Histria de viagem

9 Estilo de vida (promiscuidade sexual) 9 Crianas em creches

Manuteno de um vrus na populao A persistncia de um vrus numa comunidade depende da existncia de um nmero crtico de pessoas susceptveis e imunologicamente virgens (soronegativas). A eficincia da via de transmisso determina o tamanho da populao susceptvel necessrio para a sua contaminao. Distribuio geogrfica/sazonal 9 9 9 9 Presena de co-factores ou vectores no ambiente Habitat e estao sazonal para vetores artrpodes (mosquitos) Ambiente escolar: proximidade estreita e aglomerao Estao de aquecimento do lar

Formas de controle 9 9 9 9 9 9 9 9 Quarentena Eliminao do vector Imunizao Infeco natural Vacinao Tratamento Boa Higiene Mudanas de estilo de vida

Conceitos utis... Surtos- introduo de um vrus (como hepatite A) numa nova localizao. O surto origina-se de uma fonte comum. Epidemia- pode ser interrompida, uma vez identificada a fonte. Ocorre numa regio geogrfica maior, e em geral, resultam da introduo de uma nova estirpe do vrus numa populao imunologicamente virgem. Pandemias- so epidemiais mundiais, que geralmente resultam na introduo de um novo vrus (por exemplo HIV). A pandemia de influenza A ocorre aproximadamente a cada 10 anos em consequncia da introduo de novas estirpes de vrus.

Diagnstico laboratorial em Virologia Objectivo: Identificao laboratorial de uma agente viral como factor etiolgico da doena para orientao teraputica e/ou profiltica. Mtodos
1- Identificao do vrus directamente no produto biolgico 2- Isolamento do vrus por replicao em sistemas celulares e identificao posterior 3- Deteco de anticorpos especficos

Colheita de produto biolgico

Factores a ter em conta: Seleco da amostra de acordo com a patologia A seleco da amostra apropriada para cultura viral frequentemente complicada, visto que diversos vrus podem causar a mesma diferena clnica. Timing da colheita Deve obter-se amostras inicialmente na fase aguda da infeco, antes da interrupo da eliminao do vrus. Colheita para serologia Informao clnica relevante

Informao clnica Identificao do produto e data de colheita Identificao do doente Histria clnica: Data de incio Quadro clnico Resultados laboratoriais relevantes Hipteses de diagnstico Dados epidemiolgicos (viagens, contacto com animais, vacinas, etc.)

Transporte
Deve ser to rpido quanto possvel, sobretudo se a amostra se destinar a isolamento viral. Muitos vrus so lbeis, e as amostras so tambm susceptveis ao crescimento bacteriano e fngico excessivo. Meios de transporte- sobretudo solues tamponadas de protenas com antibiticos. Refrigerao a 4C ou congelao a 70C ou azoto lquido (nunca a 20C) se o isolamento s se fizer 24 h depois da colheita.

Isolamento do vrus
Sistemas para a propagao de vrus Pessoas Animais: bois (por exemplo, vacina com vacnia de Jenner), galinhas, ratos Inoculao intracerebral ou intranasal de murganhos, hamsters, cobaias, etc. Observao de doena/morte e anlise de dados. Ovos embrionados (vrus gripe, poxvrus) Inoculao nove dias ps fecundao Membrana corioalantoideia Saco amnitico Saco alantoideu Saco vitelino Cultura de rgos e tecidos Cultura de rgos Cultura de tecido primrio Linhagens celulares; diplides Linhagem celular tumoral ou imortalizada Tipos de cultura Culturas de clulas primrias So obtidas por dissociao de rgos animais especficos com tripsina ou colagenase As clulas obtidas por este mtodo so cultivadas em monocamadas (fibroblastos ou clulas epiteliais) ou em suspenso (linfcitos) em meios artificiais suplementados com soro bovino ou outra fonte de factores de crescimento. As clulas primrias podem ser dissociadas com tripsina ou transferidas para tornar-se culturas de clulas secundrias.

Linhas celulares: Diplides ou finitas So culturas de um tipo nico celular, capazes de serem utilizadas inmeras vezes antes da sua senescncia ou de sofrerem alterao significativa nas suas caractersticas. Contnuas As clulas tumorais e clulas imortalizadas por vrus ou substncias qumicas podem crescer na forma de linhagens celulares e consistem num nico tipo celular que pode ser continuamente utilizado sem haver senescncia.

Identificao de vrus Infeco de culturas Produto no contaminado (sangue, LCR) inoculao directa Produto contaminado (secrees farngeas, fezes) tratamento com antibiticos Inoculao tradicional Shell vial culture ou spin enhanced culture

Em geral, a deteco de qualquer vrus nos tecidos, lquido cefalorraquidiano, sangue ou lquido vesicular do hospedeiro pode ser considerada altamente significativa. Entretanto, a eliminao do vrus tambm pode ser induzida por uma condio subjacente, no estando relacionada com os sintomas da doena. Certos vrus podem ser eliminados intermitentemente sem que a pessoa afectada manifeste sintomas por perodos que variam desde semanas (enterovrus nas fezes) a vrios meses ou anos (HSV ou CMV na orofaringe e vagina; adenovrus na orofaringe e sistema intestinal). Ser impossvel isolar um vrus se a amostra for inadequadamente processada, se houver anticorpo neutralizante na amostra, ou se esta for adquirida antes ou depois da eliminao viral.

Deteco de vrus Pode demorar 3 semanas; dispendioso, requer pessoal especializado; laboratrio bem apetrechado. Utiliza-se em casos especiais. Ex: vigilncia especializada do vrus da gripe identificao de agentes desconhecidos O aparecimento de ECP no suficiente para identificar vrus. ECP so efeitos citopatolgicos induzidos pelos vrus sobre as clulas.

Efeitos citopatolgicos do vrus Morte celular Arredondamento da clula Degenerao Agregao Perda da fixao ao substrato Alteraes histolgicas caractersticas: corpsculos de incluso no ncleo ou citoplasma, marginao da cromatina. Sinccios: clulas gigantes multinucleadas produzidas por fuso entre clulas induzidas por vrus. Alteraes na superfcie celular Expresso do antignio viral Hemadsoro (expresso da hemaglutinina)

A identificao pode fazer-se por: Imunofluorescncia usando Ac especficos Imunocitoqumica usando Ac especficos Hemadsoro nos vrus com hemaglutininas (gripe, sarampo).Ligam as hemcias de determinadas espcies animais superfcie das clulas infectadas. Quando estes vrus so libertados no meio de cultura celular, estes podem ser identificados pela aglutinao de hemcias, um processo conhecido como hemaglutinao. Interferncia heterloga no caso do vrus da rubola e echovrus 11 (no livro diz picornavus). O primeiro impede a replicao do segundo. Seroneutralizao usando Ac especficos.

O Exame histoqumico (ex. raspados de clulas na base de leses herpticas, sedimento urinrio para CMV) 1- Fixao (metanol/acetona fria) 2- Colorao (hematoxilina-eosina, Giemsa) 3- Observao ao MO de alteraes morfolgicas caractersticas.

Imunofluorescncia Directa (ex. esfregaos de clulas epiteliais da nasofaringe para VRS, parainfluenza) 1- Fixao
Ag??? + Ac marcado

2- Incubao com Ac especfico conjugado com fluorocromo 3- Lavagem 4- Observao

Se h Ag-Ac marcado emisso de luz No h Ag No h emisso de luz

Imunocitoqumica Utiliza Ac especficos marcados com enzima e substrato cromognico desta.

Pesquisa de antignios virais circulantes ELISA O antignio colocado numa placo que o absorve, ficando assim sensibilizada. ento adicionado um antisoro de teste: se o anticorpo for complementar liga-se ao antignio. Uma anti-globulina ligada enzima liga-se ao anticorpo ligado. Adiciona-se um substrato enzimtico, e a reaco produz uma modificao de cor visvel que se mede espectrofotometricamente. Semelhante ao ELISA temos o Western-Blot, no entanto este segundo detecta se h ou no anticorpos, o Western-blot detecta quais so os anticorpos. RIA Aglutinao de partculas de ltex marcadas

Pesquisa de cidos nucleicos virais Hibridao in situ Reaco entre o DNA do vrus e o da sonda especfica. Sonda- pequena sequncia de DNA (30 a 40 bases) que complementar ao do DNA viral. Ex: DNA GGAACTGTACCGGAATCTTAG Sonda- CCTTGACATGGCCTTAGAATC A sonda pode estar marcada com enzima ou com fluorocromo

PCR/RT-PCR (reaco de polimerizao em cadeia) Aumento exponencial de parte do DNA/RNA do vrus torna detectvel sequncias de cido nucleico em pequeno nmero. A deteco pode fazer-se por hibridao, por electroforese, etc. Requisitos: molde de DNA, dNTPs, polimerase, primers (sequncias iniciadoras) e meio apropriado reaco Aparelho: faz sequencialmente e de forma automtica os vrios passos necessrios transcrio: desnaturao, hibridao e elongamento.

Microscopia electrnica Para vrus que no possvel estudar de outra forma Desvantagem : mtodo muito dispendioso, exige grandes quantidades de vrus e a morfologia no suficiente para o diagnstico.

Sorologia viral
A resposta imune humoral do paciente fornece uma histria das infeces. A sorologia pode ser utilizada para identificar o vrus e a sua estirpe ou serotipo, avaliar a evoluo de uma infeco e determinar se ela primria ou se se trata de uma reinfeco, se aguda ou crnica.

A deteco do anticorpo IgM vrus-especfico, que aparece durante as primeiras 2 ou 3 semanas de uma infecco primria, geralmente indica infeco primria recente. A soroconverso indicada por uma elevao de pelo menos quatro vezes nos ttulos de anticorpos entre o ttulo determinado no soro obtido pelo menos 2 a 3 semanas depois, durante a fase de convalescena. A reinfeco posterior produz uma resposta anamnstica (secundria ou de reforo). Os ttulos de anticorpos podem permanecer elevados em pacientes que sofrem reinfeces frequentes de uma doena ( por exemplo, herpesvrus). Devido impreciso inerente dos ensaios sorolgicos baseados em diluies do dobro e seriadas, necessrio um aumento de quatro vezes nos ttulos de anticorpos entre soros de fase aguda e da fase convalescente para indicar a seroconverso. A evoluo de uma infeco crnica tambm pode ser determinada por um perfil serolgico. Especificamente, a presena de anticorpos contra vrios antignios virais essenciais e seus ttulos podem ser utilizados para identificar o estgio de doenas causadas por certos vrus. Este procedimento particularmente nico para o diagnstico de doenas virais com evoluo lenta (por exemplo, hepatite B, monunucleose infecciosa causada pelo vrus de Epstein-Barr). Em geral, os primeiros anticorpos detectados so dirigidos contra os antignios mais disponveis ao sistema imune. Posteriormente no decurso da infeco,

quando as clulas so lisadas pelo vrus infectante ou pela resposta imune celular, so detectados anticorpos dirigidos contra as protenas e enzimas virais intracelulares Para estabelecer o diagnstico de certas doenas, pode-se utilizar uma bateria ou painel serolgico, que consiste em ensaios para diversos vrus. Os factores epidemiolgicos locais, a poca sazonal do ano, os factores do paciente, como imunocompetncia, histria de viagens e idade, influenciam a escolha dos ensaios virais a serem includos no painel.

Limitaes da serologia A presena de anticorpo antiviral indica infeco anterior, porm no suficiente para indicar a poca em que ela ocorreu. O achado de IgM vrus-especfica, uma elevao de quatro vezes nos ttulos de anticorpos entre soros de fase aguda e da fase convalescente ou perfis de anticorpos especficos indicam infeco recente. Os resultados falso positivos ou falso negativos tambm podem confundir o diagnstico. Alm disso, o anticorpo do paciente pode estar ligado ao antignio viral (conforme observado em pacientes com hepatite B) em imunocomplexos, impedindo assim a sua deteco. As reaces serolgicas cruzadas entre diferentes vrus tambm podem confundir a identificao do agente infeccioso. Por outro lado, o anticorpo utilizado no ensaio pode ser demasiado especfico (muitos anticorpos monoclonais) e pode ser incapaz de reconhecer outros vrus da mesma famlia, fornecendo um resultado falso-negativo. Uma boa compreenso dos sintomas clnicos e o reconhecimento das limitaes e problemas potenciais dos ensaios serolgicos ajudaro a estabelecer o diagnstico.

IgM infeco recente

1 colheita

IgG - infeco antiga

Seroconverso infeco recente Subida de ttulo (4) infeco recente

2 colheitas separadas de 3 semanas

Medicamentos antivirais
Os vrus, ao contrrio da maioria das bactrias, so parasitas intracelulares obrigatrias que utilizam os processos de biossntese e enzimas da clula hospedeira para a sua replicao. Por conseguinte, mais difcil inibir a replicao dos vrus sem tambm produzir efeitos txicos no hospedeiro. Em contraste com a actividade das drogas antibacterianas, a actividade dos agentes virais tem por objectivo familiares especficos de vrus.

Nota: para melhor anlise do quadro, recordar figura pgina 8

A fixao constitui a primeira etapa na replicao viral. mediada pela interaco de uma protena de fixao viral com o seu receptor na superfcie celular. Esta interaco pode ser bloqueada por anticorpos neutralizantes, que se ligam ao vrus e o recobrem, ou por antagonistas dos receptores. A penetrao e o desnudamento do vrus so etapas necessrias para a libertao do genoma viral no citoplasma da clula hospedeira. Aps captao de numerosos vrus, o ambiente cido da vescula endoctica utilizado para iniciar o processo de desnudamento. Especificamente, o pH cido promove alteraes na configurao das protenas de fixao que promovem fuso ou ruptura de membrana. A amantadina e a rimantadina e outras aminas hidrofbicas (bases orgnicas fracas) so agentes antivirais que podem neutralizar o pH desses compartimentos e inibir o desnudamento do vrus. O processamento (unio) adequado e a traduo do mRNA viral podem ser inibidos por interferes, oligonucletidos de sentido contrrio e outros agentes. A infeco viral de uma clula tratada com interfero deflagra uma cascata de reaces bioqumicas que bloqueiam a replicao do vrus.

As DNA polimerases virais (incluindo as transcriptases reversas) incluem o principal alvo dos agentes antivirais, uma vez que so essenciais replicao do vrus. A maioria dos agentes antivirais consiste em anlogos nucleosdios, que consistem em anlogos com modificaes da base, acar ou de ambos. Antes de serem utilizados pela polimerase, os anlogos nuclesidos devem ser fosforilados forma trifosfato por enzimas virais, enzimas celulares ou ambas. Os anlogos de nucletidos inibem selectivamente polimerases virais , uma vez que estas enzimas so menos precisas do que as enzimas da clula hospedeira e ligam-se a um anlogo nucletido com modificaes da base, do acar ou de ambos, vrias centenas de vezes melhor que a enzima da clula hospedeira. Estas drogas impedem o alongamento da cadeia ou o reconhecimento e emparelhamento correctos de bases. As enzimas removedoras de desoxirrribonucletido (por exemplo, a timidina-quinase e a ribonucletido-redutase dos herpesvrus) tambm constituem alvos enzimticos das drogas antivirais. Estas enzimas fornecem substratos nucletidos para facilitar a replicao do genoma dos vrus de DNA. As enzimas ou vias celulares importantes para a replicao viral mas no essenciais viabilidade da clula tambm constituem alvos enzimticos das drogas antivirais. Estas enzimas fornecem substratos nucleotdos para facilitar a replicao do genoma dos vrus de DNA. As enzimas ou vias celulares importantes para a replicao viral mas no essenciais viabilidade da clula tambm constituem alvos para as drogas antivirais. A ribavirina um agente deste tipo. A replicao viral pode ser inibida por meio da inibio da modificao pstraduo de protenas, como a protelise de uma poliprotena viral, o processamento de gicoprotenas (castanopesmina, desoxinojirimicina) ou fosforilao. A preveno da aquisio do vrus, a preveno de sua disseminao e a estimulao de uma resposta imune antiviral do hospedeiro tambm possuem potencial teraputico. Por exemplo, os vrus com revestimento so susceptivis a certas molculas lpidicas e semelhantes a detergentes, que dispersam ou rompem a membrana, impedindo assim a aquisio do vrus. O interfero, os indutores de interfero e outros modificadores imunomoduladores da resposta biolgica so agentes que estimulam o processo de resoluo da infeco pelo hospedeiro. Os modificadores da resposta biolgica em fase de pesquisa incluem adjuvantes que consistem em componentes bacterianos, polinucletidos incompatveis e substncias qumicas imunomoduladoras. Estas agentes estimulam a produo e a libertao de interfero e de outras linfocinas que possuem actividade antiviral, e activam respostas imunolgicas das clulas natural killer.

1-Inibidores da adsoro viral Impedem a entrada de vrus na clula ou descapsidao (libertao do cido nucleico no interior da clula) e consequente replicao celular. Ex: amantadina

Actualmente disponveis para o vrus influenza Futuramente: vrus influenza VIH 2- Anlogos nuclesidos/ nucletidos Medicamentos que mimetizam os dNTPs naturais mas que no permitem a transcrio de cidos nucleicos. A maioria so tambm utilizados pelas clulas humanas efeitos colaterais. Uso: SIDA Infeco e herpesvrus (citomegalovrus, herpes zoster)

Nuclesido vs nucletido Naturais

Nuclesido = base +acar Nucletido = base + acar + fosfato

Sintticos (anlogos)

Anlogos nuclesidos ausncia do grupo 3 hidroxilo Zidovudina (ZDV) Lamivudina (3TC) Estavudina (d4T) Abacavir (ABC) Didanosina (DDI) Zalcitabina (ddC)

Anlogos nucletidos nucletido inibidor da TR (tenofir DF) Vantagens: necessita apenas de 2 fosforilaes versus 3 fosforilaes dos anlogos nuclesidos A fosforilao de alguns anlogos nuclesidos s pode ser realizada em clulas activadas.

3- Inibidores das protenas virais. Utilizados no tratamento da SIDA A.Inibidores da transcriptase reversa Impedem a actividade das enzimas por se ligarem perto do local de actividade enzimtica. Ex: efavirenze, nevirapina. No caso dos inibidores de transcriptase reversa a ligao dos inibidores impede a ligao dos dNTPs ou dos anlogos. (impede a sntese de DNA = impede a formao de novos vrus)

Originam o rpido aparecimento de mutaes de resistncias. B. Inibidores da protease viral Utilizados na infeco a VIH Frmacos que mimetizam o substrato que clivado pela protease do VIH. Actuam por competio com o substrato natural (quanto maior a quantidade de frmaco, maior a probabilidade da protease actuar sobre o frmaco e no sob o substrato natural). Impede a maturao viral = formam-se vrus que no so infecciosos. Ex: ritonavir, saquinovir, nelfinovir, lopinavir Eficazes durante um perodo de 3-4 anos.

Vacinas
Histria.... Jenner- vacinas contra a varola Pasteur- vacina contra a raiva Sabin e Salk- vacina contra a poliomielite

Tipos Inactivadas = mantm os Ag virais mas no provocam doena

Multiplicao de vrus Inactivao dos vrus

Primovacinao = vrias doses, necessidade de reforos

Atenuadas = vrus vivos, mantm os Ag mas no provocam doena mimetizam a infeco viral. Multiplicao de vrus Inactivao dos vrus
Estas vacinas tm o risco (mnimo) de reverterem para a forma selvagem por isso no devem ser administradas a pessoas com dficites imunitrios.

Recombinantes

Identificao de cidos nucleicos Identificao das sequncias que do protenas que originam anticorpos neutralizantes clonagem, produo e purificao de protenas vacinas mais seguras (porque no h administrao de vrus)

Doenas virais (re)emergentes

Famlia Flaviridae
9 9 9 9 Vrus esfricos de 40 a 50 nm de dimetro RNA cadeia nica, linear, polaridade positiva Cpside Envlucro com glicoprotenas

Vrus Dengue 9 Provoca sndromes febris-lgicos: Artralgias Mialgias, +++ membros Lombalgias Cefaleias, ++frontais 9 Seguido de exantema eritematoso ou maculo-papilar. 9 Complicaes do Dengue ++ zonas endmicas febre hemorrgica por reinfeco com tipo diferente e reactividade com os Ac do 1 tipo

Vrus da febre amarela 9 Origina sndrome febril seguido de sndrome hemorrgico 1-febre sbita-39C, cefaleias 2-algias difusas conjuntive sinais digestivos 3- sintomas e sinais de leso visceral: hepatite, s.hemorrgico (vmito negro), s. Renal 4- Cura ou morte (10%)

Hantavrus
9 Famlia- Bunyaviridae 9 Virio: RNA polaridade negativo, segmentado (3-L, M e S) Nucleocpside Envlucro

9 Protenas: transcriptase, glicoprotenas, nucleoprotena 9 Tipos: Sndrome renal 7 tipos diferentes Dependem da espcie do roedor Sndrome pulmonar 7 tipos 9 1967 Marburg Laboratrio de Virologia enquanto preparavam cultura de clulas do macaco verde africano, os tcnicos adoeceram com doena desconhecida: 31 casos - 7 mortos. 1976- Zaire e Sudo surtos de febre hemorrgica: 500 casos- 460 mortes A ltima epidemia deu-se no Zaire em 1995

Vrus Ebola
9 Famlia Filoviridae 9 Virio: comprimento de 920 nm, 80 de dimetro, pleomrficos nucleocpside helicoidal Envlucro Rna cadeia nica de polaridade negativa Protenas: 7 polipptidos, 2 nucleoprotena, 1 glicoprotena, 1 polimerase e 4 protenas ainda no identificadas 9 Patologia Febre hemorrgica, com mortalidade de 90% Hemorragias: mucosas, intra-abdominais, pericrdio, vagina 9 Disseminao hematognia com replicao em vrios orgos A replicao viral origina lise celular com necrose do tecido incluindo fgado, bao, rim, ovrios e testculos Afecta o endotlio vascular e as plaquetas 9 Transmisso: Pesso-a-pessoa com perodo de incubao de 6-12 dias Nasocomial agulhas infectadas com perodo de incubao de 5-7 dias 9 Diagnstico: Serologia imunofluorescncia Pesquisa de IgM e IgG Isolamento de vrus

9 Tratamento no existe 9 Preveno: Parar a transmisso isolamento dos doentes No h evidncias de Ac neutralizantes (recuperao mediada por resposta celular)

Vrus Lentos No Convencionais Pries

9 Os vrus lentos no convencionais causam encefalopatias espongiformes que so doenas neurodegenerativas lentas. 9 Doenas causadas por vrus lentos Homem: - doena humana Kuru - doena de Creutzfeldt-Jakob (DCJ) - insnia familiar fatal (IFF) - doena de Gerstmann- Straussler- Scheinker (GSS) Animais: - Scrapie - Encefalopatia bovina espongiforme (doena das vaca loucas) - Doena crnica degenerativa (mula, alce, veado) - Encefalopatia transmissvel (marta) 9 Os vrus lentos so filtrveis e podem transmitir doena, embora, nos demais aspectos, no preencham a definio padro de vrus. Agentes infecciosos filtrveis Presena de cido nucleico Morfologia definida (microscopia electrnica) Presena de protena Desinfeco por: Formaldedo Proteases Aquecimento (80 C) Radiao ionizante e ultravioleta Doena Efeito citopatolgico Perodo de incubao Resposta imune Produo de interfero Resposta inflamatria Vrus Sim Sim Sim Sim Sim Algumas A maioria Sim Sim Depende do vrus Sim Sim Sim Prio Sim No? No Sim No No No No No Longo No No No So tambm distrbios humanos genticos

Estes agentes consideram-se vrus porque so estruturas filtrveis atravs de filtros que bloqueiam a passagem de partculas maiores que 100 nm de dimetro e ainda por transmitirem doena. O vrus lento parece ser uma protena do hospedeiro modificada, conhecida por prio (pequena partcula proteica infecciosa), capaz de transmitir a doena. 9 Depois de um longo perodo de incubao, esses agentes causam leso do sistema nervoso central, levando ao desenvolvimento de encefalopatia espongiforme subaguda.

Estrutura e fisiologia

Hipteses Histricas Hiptese 1- Doena devido a modificao conformacional da protena Hiptese 2- Vrus pequeno em que a PrP seria o receptor do vrus Hiptese 3- Virino: pequena molcula de cido nucleico associado a protena do hospedeiro

O prio: 9 Carece de cido nucleico detectvel 9 Consiste em agregados de uma glicoprotena hidrofbica resistente protease. 9 Nos anos 80 foi identificada uma protena de 27-30 kD especfica da infeco- PrP (proteinase-resistant protein) 9 A forma da PrP no crebro normal PrPC sensvel protenase e tem 3335 KD. No caso do Scrapie denomina-se PrPsc (protena de prio associada ao scrapie) Os humanos e outros animais codificam uma protena PrPc estreitamente relacionada com a anterior em termos de sequncia proteica mas que difere em muitas outras outras propriedades. As diferenas nas modificaes ps-translacionais fazem com que as duas protenas exibam comportamento muito diferente. A PrPsc resistente protease, agrega-se em longos amilides (fibrilhas), encontrada em vesculas citoplasmticas na clula e

secretada. Por outro lado a PrPc normal sensvel protease e aparece na superfcie celular. Teoria explicativa do mecanismo pelo qual uma protena aberrante pode causar doena (Stanley Prusiner): A PrPsc liga-se PrPc normal na superfcie celular; a seguir, ocorre processamento em PrPsc, que libertada na clula e agregada, na forma de placas semelhantes ao amilide, no crebro. Depois deste processo, a clula repe a PrPc e o ciclo prossegue. O facto de que estas placas consistem em protena do hospedeiro pode explicar a ausncia de resposta imune a esses agentesem doentes com encefalopatia espongiforme.

Patogenia (caractersticas) 9 O termo encefelopatia espongiforme tem a sua origem na degenerao caracterstica dos neurnios e axnios da substncia cinzenta que ocorre nos pacientes afectados. 9 Vacuolizao dos neurnios 9 Formao de placas e fibrilhas contendo amilide 9 Proliferao e hipertrofia dos astrcitos 9 Fuso de neurnios e clulas gliais adjacentes 9 Pries atingem altas concentraes no crebro, contribuindo ainda mais para a leso tecidual. Os pries tambm podem ser isolados de outros tecidos alm do crebro, porm apenas este ltimo revela alguma patologia 9 Ausncia de ECP in vitro 9 Tempo de duplicao prolongada de pelo menos 5,2 dias 9 Depsito de protena sob a forma de placas esfricas ou fibras, amilide. 9 Os neurnios morrem e aparecem vacolos juntamente com fibras de amilide que no seu conjunto do o aspecto de esponja 9 Perodo de incubao longo 9 Os sintomas incluem perda do controle muscular, calafrios, tremores, demncia 9 Ausncia de antigenicidade

9 Ausncia de inflamao 9 Ausncia de resposta imune 9 Ausncia de produo e interfero

Epidemiologia 9 As EET so doenas preocupantes porque so: Incontrolveis Incompreensveis Indestrutveis Incurveis At Fevereiro de 1998 24 casos de DJC-V tinham sido notificados. O tempo de incubao da doena de 10-15 anos da que nas prximas decadas se possa assistir a uma epidemia (cada vez menos provvel) At 1989 calcula-se que 3-5% dos animais que entraram na cadeia alimentar estariam infectados Risco de infeco: 1 bife/semana 12 anos 3 % de hiptese de estar infectado = 18 exposies ao agente 9 Doena/ factores virais Os agentes so refractrios aos procedimentos de desinfeco padro para vrus. As doenas possuem longos perodos de incubao, que se estendem por at 30 anos.

Transmisso 9 A transmisso faz-se por meio de tecido infectado, ou a sndrome pode ser hereditria. 9 Ocorre infeco por meio de cortes na pele, transplante de tecidos contaminados (por ex. crnea) e uso de dispositivos mdicos contaminados (por ex, elctrodos cerebrais) e potencialmente atravs da ingesto de tecido infectado. 9 Distribuio da infecciosidade Dose infectante = 105 107 molculas de protena

Infecciosidade alta (105 106 LD 50/g) Crebro, espinhal medula, retina Infecciosidade Mdia (104-105 LD 50/g) leo, cego, clon proximal, gnglios, bao, amgdalas, meninges, placenta, hipfise, suprarrenais I Infecciosidade reduzida (102-103,5 LD50/g) Citico, intestino grosso terminal, timo, medula ssea, fgado, medula ssea, fgado, pulmo, pncreas Infecciosidade no-detectvel Msculo, sangue, leite, rim, estmago, lngua, corao, tecidos conjuntivos e cartilagens, mama, testculo, ovrio, glndulas salivares, tiroideia, tero.

Quais os grupos de alto risco? As mulheres e crianas da tribo Fore na Nova Guin apresentavam alto rico ao Kuru. Cirurgies, doentes submetidos a transplante e cirurgia do crebro e outros apresentem risco de DCJ e doena GSS.

Distribuio Geogrfica/Sazonal A doena GSS e a DCJ so de ocorrncia espordica no mundo inteiro. No h nenhuma incidncia sazonal. Formas de Controlo No existe tratamento disponvel A cessao de ritual com canibalismo levou ao desaparecimento do Kuru Para as doenas GSS e DCJ, necessrio desinfectar os instrumentos neurocirrgicos e elctrodos em soluo de hipoclorito a 5% ou hidrxido de sdo 1,0 M ou autoclavar durante 1 hora.

Diagnstico laboratorial Diagnstico estabelece-se com base em bases clnicas, com confirmao pelas alteraes histolgicas caractersticas do tecido cerebral.

Tratamento No existe Preveno Para descontaminao pode utilizar-se a autoclavao durante 1 hora, em lugar de 20 minutos, ou tratamento com soluo de hipoclorito a 5% ou hidrxido de sdio a 1,0 M. Como estes agentes podem ser transmitidos por meio de instrumentos e elctrodos

cerebrais, estes objectos devem ser cuidadosamente desinfectados antes da sua reutilizao.

Sndromes Clnicas Diagnstico clnico: critrio de definio de CJD espordica 1. Demncia progressiva, e pelo menos 2 dos seguintes: - mioclonia; - alteraes visuais ou cerebelares; - disfuno piramidal/extrapiramidal - mutismo acintico e EEG caracterstico e/ou -

Teste positivo para a protena 14-3-3 no LCR

Desde que as investigaes mdicas no sugiram outro diagnstico. Quando a doena clinicamente evidente a progresso paraa morte rpida No pode ser diagnosticada de certeza s por critrios clnicos. Suspeita de DCJnv se estiverem presentes 5/6 critrios: - Sinais/sintomas psquicos - Parestesia persistente em jovens - Ataxia - Coreia/mioclonia - Demncia - Muitissimo acintico O diagnstico definitivo feito na autpsia. Em Portugal no se fazem autpsias quando h suspeita (porque no h condies de segurana) Actualmente h cerca de 100 casos de DCJ-V Critrios para a definio de casos suspeitos deDCJ-V: - Ausncia de histria de exposio iartrognica, - Durao clnica > 6 meses, - Idade de incio < 50 anos, - Ausncia de mutao no gene PrP - EEG sem o perfil tpico de forma espordica, - Investigao mdica no sugere outro diagnstico - Ressonncia magntica mostra a lteraes sugestivas - No existe mutao no codo 129 Instrumentos cirrgicos utilizados em doentes com DCJ devem ser: destrudos, se reutilizados devem ficar 1 h em hipoclorito de sdio, concentrado ou em NaOH 1N, limpos e autoclavadas a 134C durante 1 h.

Paradoxos das EET 1. A mesma doena pode ser espontnea, gentica ou infecciosa. 2. Mesmo quando a origem no infecciosa, a doena transmissvel 3. O agente produzido durante a infeco pode ser diferente do agente infectante 4. O agente tem caractersticas genticas mas desprovido de cido nucleico.