Regulao da imunidade inata por miRNAs As clulas do sistema imune inato, tais como granulcitos, moncitos (que se diferenciam

em mielide-derived dendritic clulas (DCs) ou macrfagos) e natural killer (NK) clulas, fornecem uma importante linha de defesa contra infeco. Dados emergentes tem identificado um importante contribuio de miRNAs para o desenvolvimento e a funo de clulas imunes inatas (FIG. 3). Alm disso, os estudos investigando desenvolvimento de clulas mielides e funo identificaram um tema comum de uma interao dinmica entre linhagem especficos fatores de transcrio e miRNAs. Granulcitos. Granulcitos surgem de granulcitosmoncitos progenitores, sob a influncia da transcrio factor de crescimento independente 1 (GfI1). GfI1 Recentemente, foi demonstrado que se ligam s regies promotoras pri-miR-21 e primiR-196b e reprimem a sua expresso. Alm disso, sobreexpresso, de miR-21 e miR-196 na linhagem de esgotamento de clulas da medula ssea bloqueado granulopoiese in vitro, um fentipo observado tambm em Gfi1-/ - camundongo. O nosso grupo verificou que a expresso sustentada de miR-155 pode aumentar o nmero de granulcitos imaturos in vivo, e que vrios dos seus alvos, incluindo domnio SH2 -contendo inositol-5fosfatase 1 (SHIP1, tambm conhecido como INPP5D) esto provavelmente envolvidos neste processo. Alm de regular o desenvolvimento de granulcitos, miRNAs tambm regulam a funo de granulcitos. miR-223 induzida por fatores de transcrio mielides PU.1 CCAAT / enhancer ligante da protena -(C / EbP) 41, e que regula negativamente tanto a proliferao e ativao de neutrfilos. neutrfilos deficientes de miR-223 aumentou a capacidade de se submeter o burst oxidativo e mortas de forma mais eficaz do que a Candida albicans clulas de tipo selvagem. Mielide Elf1-como o fator 2C (MEF2C) demonstrou ser um alvo direto de miR-223, embora esta era apenas responsvel pela proliferao de neutrfilos mais observado em miR-223 em camundongos deficientes e no o estado mais elevado de ativao

de neutrfilos. Isto indica que diferentes miR-223 alvos regulam aspectos distintos de biologia de neutrfilos. Moncitos, macrfagos e clulas dendrticas. Ambos os macrfagos e clulas dendrticas derivadas de mielides tm papis importantes na resposta inata imunitria da infeco. Semelhante a granulopoiese, vrios estudos tm mostrado que os fatores de transcrio envolvido na monocitopoiese so regulados por, e / ou regulam miRNAs especficos, o que indica uma conexo entre as duas espcies moleculares durante o desenvolvimento. Os nveis de expresso de miR-17-5p, miR-20a e miR- 106A, membros do miR-17-92 e miR-106a relacionado -92 famlias, tm mostrados diminuir durante a diferenciao de clulas humanas progenitoras hematopoiticas em moncitos. Isto levou desrepresso do seu alvo runt relacionada com um fator de transcrio (RUNX1, tambm conhecido como AML1). O aumento resultante na expresso de RUNX1 promoveu a diferenciao de moncitos, presumivelmente aumentando a expresso de um fator receptor de estimulao de colnia (RFCE). RUNX1 tambm foi encontrado para vincular as regies promotoras miR-17-92 e miR-106-92 e reprimir as suas expresses, o que sugere que o miR-17-92 e RUNX1 esto envolvidos em um ciclo de retroalimentao negativa mtua. PU.1 outro fator de transcrio que fundamental para moncitos e diferenciao de macrfagos e tem sido mostrado que a regulao positiva dos nveis de miR-424 durante 12-O-tetradecanoil 13acetato de forbol (TPA) mediaram a diferenciao de moncitos das clulas NB4. A expresso forada de miR-424 em clulas NB4 promoveu a diferenciao monoctica, aumentando os nmeros de clulas CD11b+ e CD14+ induzindo consistentes modificaes morfolgicas compatveis com a maturao monoctica. miR-424 promoveu diferenciao monoctica inibindo a expresso do factor nuclear I / A, (NFIA) que importante para a diferenciao de clulas mielides e tambm tinha sido mostrado previamente para ser alvo de miR-223 durante a diferenciao de granulcitos in vitro. A resposta inflamatria de macrfagos infeco envolve a supraregulao de vrios miRNAs, tal como miR-155, miR-146, miR-147, miR-21 e miR-9. Na verdade, a expresso de miR-155 induzida nos macrfagos derivados da medula ssea de camundongos em

resposta a vrios ligantes de TLR e por citocinas pr-inflamatria fator de necrose tumoral (TNF) e interferon-. Interferes no induzem diretamente a expresso de miR-155 por macrfagos, mas em vez disso indiretamente atravs de sinalizaes autcrinas e parcrunas. A codificao do transcrito primrio miR-155, conhecida como o conjunto de integrao de clulas b (BIC), foi mostrado para ser transcricionalmente ativado pelos fatores ativadores da transcrio da protena 1 (AP1) e fator nuclear kB-(NF-kB). Certos ligantes cognatos para os TLRs e sensores citoplasmticos de gene induzvel do cido retnoico I (RIG-I; tambm conhecido como DDX58) tambm induzem a expresso de miR-146 em uma maneira dependente de NF-kB. Em moncitos e neutrfilos humanos perifricos, miR-9 similarmente suprarregulado por sinais pr-inflamatrios em uma diferenciao mielide da protena de resposta primria 88 (MyD88) e de maneira dependente NFkB. Por conseguinte, certos miRNAs inflamatrios so regulados transcricionalmente de uma maneira semelhante de outros genes inflamatrios. A resposta inflamatria a infeco deve ser robusto o suficiente para erradicar patgenos microbianos, mas resolvido em tempo hbil para evitar dano excessivo para o hospedeiro. Foram mostrados que miRNAs influenciam ambos aspectos da inflamao. H evidncias de que muitos dos miRNAs induzidos por TLR, como miR-146, miR-9, miR-147, miR-21 e miR-155, pode negativamente regular a ativao de vias inflamatrias em clulas mielide. Por exemplo, o miR-146 diretamente reprime vrias molculas de sinalizao, que esto a down-stream de TLRs, incluindo IL-1Rassociada a kinase 1 (IRAK1), IRAK2 e TNFR associado ao fator 6 (TRAF6), todos os quais promovem inflamao. miR-9 reprime a subunidade NF-kB 1 (NFKB1) e ajuda a manter um constante nvel da expresso da protena Nf-b1 durante a ativao mediada por TLR4 de moncitos e neutrfilos. Em clulas dendriticas humanas derivadas de mielide, o knockdown da expresso do miR-155 aumentou significativamente a expresso de protena da citocina pr-inflamatria IL-1 (IL-1). Alm disso, a adio de um mmico miR-155 diminuiu a expresso de um reportador plasmdeo de NF-kB em linhagem celular.

Tambm foi mostrado que a miR-155 reprimi a expresso da protena de sinalizao pro-inflamatoria (?) ( ou protena sinalizante pro-inflamatoria?) TAK1- binding protein 2 (TAb2; tambm conhecida como MAP3K7IP2), sugerindo um mecanismo bsico para este efeito anti-inflamatrio em certas configuraes. Por outro lado, tem sido demonstrado que, em algumas situaes miR-155 pode regular positivamente vias inflamatorias, aumentando-os em vez de diminu-los. Entretanto, a expresso forada de miR-155 no compartimento da medula ssea de camundongos adultos conduz a um fentipo mieloproliferativo que semelhante ao que ocorre transitoriamente depois de injeo lipopolissacardeo (LPS). miR155 foi mostrado que regula negativamente SHIP1, um importante regulador negativo de fosfatidilinositol 3-quinase (PI3K) e downstream via AKT. SHIP1 um negativo regulador da sinalizao de TLR4, e, portanto, a represso de SHIP1 por miR-155 podem contrariar esta negativa regulao e aumenta downstream de AKT sinalizao. Curiosamente, a sinalizao AKT foi recentemente mostrada para reprimir a expresso de miR-155 em macrfagos, sugerindo a existncia de um feedback negativo. LPS-stimulated Akt-/ macrfagos expressaram maiores nveis de miR-155 e miR-125b nveis e tambm menores leveis de Let-7e e miR-181C do que os do tipo selvagem. Akt-/ - macrfagos foram mais sensveis aos LPs, um efeito mediado em parte pelo aumento miR-155 e diminuio dos nveis de Let -7e. Notavelmente, miR-155 diretamente reprimiu nveis do supressor de citocina sinalizante 1 (SOCS1), a qual, semelhante ao SHIP1, um regulador negativo da via TLR. Let-7e diretamente downregulated (poderia ser regulou nagativamente ou regulao baixa??) a expresso do receptor TLR4 LPS. A relevncia in vivo desta via suportado pela descoberta que Akt-/ - ratos tm uma menor tolerncia ao sistemicamente LPS do que camundongos selvagens. Tomados em conjunto, claro que miRNAs especficos esto envolvidos na regulao da inflamao, provavelmente para ajudar a criar uma resposta adequada e equilibrada a patgenos e estmulos nocivos. No entanto, o papel do miR-155 parece ser complexo, possivelmente devido sua ampla gama de mRNAs alvo relevantes

e os contextos celulares em que expressa. Tambm h relatos que indicam que os miRNAs regulam aspectos distintos da DC biologia, e assim esto envolvidos na ligao crucial entre as respostas imunes inata e adaptativa. miR-34 e miR-21 mostraramser importantes para a diferenciao mieloide-derivado DC em humanos visando a codificao mRNAs Jagged1 e WNT1 (REF. 60). Mielide derivados DCs de Bic-/ - (miR-155- deficiente) camundongos mostraram defeitos na apresentao de antgenos para as clulas T, apesar de nveis normais de expresso de MHC classe II e molculas co-estimuladoras, por isso, o mecanismo por trs desse defeito permanece indefinido. Alm disso, outro estudo descobriu que miR-155 downregulares (Regulao baixa? Ou regulao negativa??) a expresso do DC-specific ICAM3 grabbingnon-integrina (DC-SIGN; tambm conhecido como CD209) por derivados de moncitos humanos DCs atravs da supresso da expresso de PU.1. DC-SIGN uma superfcie celular de lectina tipo C que liga patgenos, implicando na regulao de miRNAs da captao de patgeno pela DCs. As clulas NK e NKT. As clulas NK so componentes importantes vigilncia imunolgica contra o cncer e infeco viral, e miRNAs tm sido implicados no seu desenvolvimento e funo. Clulas NK expressam o receptor natural killer (assassino natural acho que isso no se deve traduzir) do grupo 2, do membro D (NKG2D), que reconhece os ligantes - MHC class I polypeptiderelated sequence A (MICA) e MICB - que so expressos por clulas submetidas a estresse desencadeado por eventos tais como infeco viral ou transformao celular. O envolvimento do NKG2D em clulas NK leva a eliminao direta da clula alvo. Um estudo recente mostrou que um conjunto de miRNAs, muitos dos quais esto sobre-expressos (overexpressed acho que seria expressados alm do limite) por vrias clulas cancerosas, poderia downregulate (de acordo com o contexto, creio que seja regulado negativamente) a expresso de MICA e MICB em uma linhagem de clulas humanas. O tratamento de clulas com antagomirs (oligodesoxinucletidos anti-sentido) que inibem os miRNAs especficos que esto sendo testados levou a

um aumento da expresso da superfcie da clula de MICA e MICB e aumentou a capacidade de matar da NK (rapaz, no entendi direito essa parte, traduzi pelo contexto); overexpression (acho que expresso alem dos limites) destes miRNAs teve o efeito oposto. Apesar do choque trmico induzido pelo stress celular aumentou a expresso de MICA e MICB na linhagem de celulas HCT-116, a expresso dos miRNAs relevantes no concomitantemente diminuiu. Em vez disso, estes miRNAs parecem definir um limite para expresso de MICA e MICB o que impede a sua expresso durante condies de no-stress. interessante notar que certos membros da famlia de herpesvrus, ou seja, citomegalovrus, vrus Epstein-Barr e Kaposis sarcoma-associado herpesvirus (KSHV), produzem miRNAs que tem como alvo MICB mRNA, e isto foi proposto como um mecanismo de evaso imunolgica por estes virus. Clulas invariantes NKT (iTNK) so uma classe de inatocomo as clulas T que expressam um receptor de clulas T invariante (TCR) que reconhece lpidos apresentados pela molcula MHC class I-like CD1d. Dois estudos recentes identificaram um requisito para Dicer no desenvolvimento de clulas iTNK. Ambos os estudos observaram uma perda quase completa das clulas iNKT no timo e na periferia, na ausncia do Dicer. Clulas iNKT em desenvolvimento de animais condicionais (no entendi, srio...) Dicer-knockout exibiram um aumento da apoptose e diminuio da diferenciao, enquanto que as clulas maduras iNKT tinham graves defeitos de ativao. Os estudos descritos acima indicam claramente os miRNAs esto envolvidos na regulao de vrios aspectos da imunidade inata. Isso inclui a regulao da morte microbiana direta, a produo de citocinas e da apresentao do antgeno por molculas MHC. Todos esses mecanismos so importantes para a defesa e so fundamentais para iniciar a resposta antgeno-especfico por clulas do sistema imunitrio adaptativo. Regulamento da imunidade adaptativa por miRNAs As clulas T. Semelhante ao desenvolvimento das clulas da imunidade inata, o desenvolvimento de clulas T no timo e sua ativao da periferia tambm so controladas por um complexo

proteico que so objeto para regulao de miRNAs. A expresso proliferativa de clulas T identificou uma ampla gama de espcies de miRNA expressos e verificaram que os padres de expresso variam entre populaes de clulas T e seus estgios de desenvolvimento. Somando-se essa complexidade, diversas variantes de um dado espcie de miRNA pode ser encontrado nas clulas T, com as miRNAs maduros variando em comprimento de 3 ou no final 5 ou que contenham sequencias mutantes. Alm disso, clulas T proliferantes expressam genes com 3 UTRs mais curtos do que aqueles nas clulas T restantes, tornando esses mRNAs menos suscetveis a regulao por miRNAs devido perda dos stios de ligao do miRNA. Estes achados sugerem que o miRNA media a regulao de alvos de mRNA em clulas T, e provavelmente outros clulas do sistema imunolgico, um processo dinmico que influenciado por uma vasta gama de fatores. Deleo especifica do Dicer em celulas T revelou um requisito para a via de miRNA no desenvolvimento de clulas T maduras, o nmero total so menores em ratinhos mutantes do que no do tipo selvagem. Dois especficos miRNAs tm sido implicados em desenvolvimento de clulas T, e provavelmente so levados em considerao em alguns fentipos de Dicer deficiente em clulas T. Um aglomerado de miR-17-92 prejudica a expresso de mRNA que condificam protenas pr-apoptticas (????), incluindo bCl-2interacting mediator of cell death (bIM; tambm conhecido como bCl2l11) e phosphatase e tensin homologue (PTEN). Esse aglomerado de miRNA foi feito para aumentar a sobrevivncia das clulas T durante o desenvolvimento e expresso durante a fase negativa de thymopoiesis (no tem traduo para esse nome, creio que seja algo relacionado a biogenese do timo?). Alm disso, a fora de sinalizao TCR influencia os timcitos que so tanto positivamente ou negativamente selecionados durante o desenvolvimento do timo, e miRNAs especficos tm sido implicadas neste processo. miR-181, que aumentado durante o desenvolvimento de clulas T, aumenta a fora da sinalizao de TCR diretamente visando um grupo de protenas fosfatases, incluindo dual-specificity protein phosphatase 5 (DUSP5), DUSP6, SH2-domain-containing protein tyrosine phosphatase 2 (SHP2;

tambm conhecido como PTPN11) and protein tyrosine phosphatase, non-receptor type 22 (PTPN22) (... no tentei traduzir esse rooio ai). Dados recentes tambm indicam que os miRNAs tem papel na diferenciao de clulas T em subconjuntos de clulas efetoras distintas da clulas T helper. Isto melhor exemplificado por camundongos deficientes em miR-155, em que as clulas T so tendenciosas na direo de T helper 2 (TH2) cell differenciation (melhor no traduzir...) , indicando que o miR-155 promove diferenciao em clulas TH1. Certos miRNAs, tais como o aglomerado miR-17-92, tambm podem estar envolvidos no desenvolvimento e na funo de clulas ajudantes foliculares T (TFH), que so clulas T especializadas que se dedicam para suporte de celulas B em centros germinativos e facilitando maturao de afinidade de anticorpos e mudana de classe. Clulas TH17 foram identificadas como importantes mediadores de doenas inflamatrias. Um estudo recente descobriu que miR-326 promove o desenvolvimento de clulas TH17 tanto in vitro e in vivo, visando ETS1. A gerao de ratinhos com uma deleo condicional de Dicer ou Drosha em clulas T reguladores (Treg) mostrou um requisito para a via de miRNA em forkhead P3 caixa (Foxp3) + clulas Treg (no entendi). Esses camundongos desenvolvem uma doena autoimune inflamatria letal, que consiste num desenvolvimento prejudicado ou funo prejudicada de clulas Treg. Especificamente, demonstrou-se que o miR-155 importante para homeostase das celulas Treg e sua sobrevivncia, e isto est envolvido diretamente visando o Socs1. No entanto, devido ausncia de miR-155 que no reproduziu a grave doena que ocorre em ratinhos com uma deleo condicional de Dicer, miRNAs adicionais provavelmente esto envolvidos na biologia celular de Treg. De nota, a expresso de miR-142-3p, foi recentemente mostrado que reprimido por Foxp3, levando ao aumento da produo de AMP cclico e de funo supressora de clulas Treg. Vrios outros miRNAs so expressos pelas clulas Treg e aguardam avaliao funcional. As clulas B. A gerao de clulas B que expressam highaffinity receptores de antgeno envolve duas etapas principais:

antignio independente de desenvolvimento na medula ssea e antignio dependente de seleco no linfide secundrio rgos; ambos dos quais esto associados dinmica regulao por miRNAs (figura 5). miRNA estudos de perfil durante o desenvolvimento inicial de clulas b No foram realizados grupos de fora, mas vrias analisaram a expresso de miRNAs no centro, ingnuo germinativo e ps-germinativo b cells86 centro-88. Regulao temporal de vrios diferentes miRNAs foi observado e nova clula putativa especficos do tipo miRNAs foram identificados, o que sugere a envolvimento de muitos, mas indefinido, vias regulatrias b em desenvolvimento e maturao celular. O controlo de b desenvolvimento celular na medula ssea depende do compromisso de clulas progenitoras para a linhagem de clulas b pela ativao do fator de transcrio redes, V (D) J eventos de recombinao e seleo para receptores de antignios eficazes. Os papis de miRNAs em controlar o desenvolvimento precoce de clulas b so pensados envolver a modulao de factores proteicos principais que controlam estes aspectos da clula b development89. Um estudo inicial descobriu que a superexpresso de miR-181 causa uma distoro dos hematopoiese para o desenvolvimento de clulas B, levando a uma de duas a trs vezes superior ao nmero de clulas b e nenhum aumento de clulas T ou mielides cells90. por outro lado, camundongos com deleo condicional de Dicer em clulas B teve um bloco completo em b clula development91. Este bloco pensado para relacionar a expresso desregulada do proapoptotic Bim protena, provavelmente durante a seleo de receptores de antignios eficazes. O bloco no desenvolvimento da clula b nestes ratinhos pode ser superada por transgnico expresso de b linfoma de clulas 2 (BCL-2), mas o madura clulas B tinha uma distribuio anormal de rearranjos V (D) J, indicando que existe um defeito na regulao b de seleco celular. Notavelmente, as alteraes observadas por gene perfil de expresso de Dicer deficientes em precursores de clulas b foram geralmente semelhantes aos observados em clulas B que faltam o miR-17-92 family92, que tem sido associada com condies patolgicas em humanos linfoproliferativas e mice74. Assim, os efeitos principais de excluso condicional Dicer em clulas B podem

ser principalmente devido ausncia de tais cruciais, miRNAs agrupados em clulas B precoce. Em adio aos efeitos sobre a seleco do receptor de antignio, miRNAs tambm regular os fatores de transcrio envolvidos no incio do desenvolvimento da clula b. Expresso constitutiva de miR-150, que tem um perfil de expresso dinmica no linhagem celular precoce b, faz com que um bloco numa fase proximal b desenvolvimento da clula, a clula prob a pr-b transition93, e esta inibio depende da desregulao Myb expresso. Por outro lado, camundongos deficientes em miR150 tm uma acumulao de clulas B-1 B no bao e a cavidade peritoneal, com uma diminuio relativa na nmero de B-2, B cells94. Descobrimos que constitutiva expresso de miR-34a desenvolvimento de clulas perturba b pela causando um aumento de clulas no pro-b a pr-b clula transio. Isto principalmente o resultado de miR-34a segmentao do fator de transcrio FOXP1, que regulamenta a expresso dos genes activadores de recombinao- (RAG1 e RAG2) (DSR e Db, observaes no publicadas). porque miR-34a uma p53 induzida miRNA95, este efeito pode vincular a regulamentao de danos no DNA respostas com regulao de protenas RAG. Um envolvimento para miRNAs no antignio-driven as fases da resposta humoral em linfide secundrio rgos tambm tem sido descrita. Apesar de uma diminuio no nmero total de clulas B-2-B (acima mencionado), miR-150 em camundongos deficientes tm nveis aumentados de anticorpos secreo, tanto na linha de base e T seguintes celldependent estimulao antignica, o mecanismo da antignio dependente do defeito no understood94. Talvez a melhor caracterizada miRNA durante esta fase do b a resposta das clulas miR-155, a qual regulada a seguir b activao de clulas no centro germinal. miR-155-clulas b deficientes tm defeito a troca de classe de anticorpos e diferenciao em clulas do plasma, resultando em um resposta humoral prejudicada de T antignica das clulas dependentes de stimulation51, 61,96. Estes efeitos so provavelmente a conseqncia de miR-155-mediada regulao da muitas metas: na verdade, duas protenas que so importantes para as respostas de clulas T dependentes de anticorpos - PU.1 e ativao induzida-citidinadesaminase (AID) - so diretamente

reprimida por miR-155 (refs 96-98). A represso de A ajuda tem sido investigada por mutao germinativa do miR-155 seqncia alvo na 3 UTR do mouse AICDA (Que codifica AID) 98. a partir destes estudos, claro miRNAs que so importantes para o desenvolvimento normal de clulas b, o que implica que os defeitos na regulao do miRNA poderiam estar associado a clulas B doenas mediadas.