Determinacin de Hemoglobina, Hematocrito, y Constantes Corpusculares

Lic. T.M. Justo T. Alegre Torres

Determinacin de Hemoglobina

Hemoglobinometra
Mtodo recomendado por el ICSH: Medicin fotomtrica de HiCN

Otros mtodos deben ser ajustados con ste

La determinacin de Hb es:
Requerida para la calibracin. Necesaria para asignar valores a materiales control. Necesaria para evaluar instrumentos o mtodos alternativos. Aplicable en el laboratorio de rutina para diagnstico y monitoreo de enfermedades.

MTODO DE CIANMETAHEMOGLOBINA
Fundamento: Hb(Fe+2) + K3Fe(CN)6 Hi(Fe+3) + K4Fe(CN)6 Hi(Fe+3) + CN- Hi(Fe+3)CN Tcnica: Dilucin 1/ 200 - 1/ 251 20 L de sangre en 5 ml de reactivo Lectura a absorbancia a 540 nm.

METODOS
Mtodo de Oxihemoglobina: H lisa los GR liberando la Hb, el oxgeno El compuesto convierte Hb en oxiHb, la cual se puede medir por el color mediante ptica o fotocolormetro. Mtodo de Lovibond. 0.05 ml de sangre en 10ml de solucin Diluyente (carbonato de sodio o de amoniaco) . Si se utiliza espectofotmetro la densidad de la solucin es medida a 540 nm utilizando blanco de agua. Si la medicin es ptica usar el comparador de Lovibond.

Mtodos (secundarios) Haldane y Sahli: Mtodos pticos, la primera convierte el monxido de carbono en carboxihemoglobina por accin de una solucin de amonio la variacin de color es comparada con una tabla. El segundo mtodo convertir la Hb en hematina cida por accin del cido clorhdrico produciendo variacin de color en una tabla.

HEMATOCRITO

Determinacin del Hematocrito

Mtodo recomendado por CLSI(H7-A2): Microhematocrito

Volumen ocupado por los glbulos rojos en relacin al volumen total de sangre en una muestra de sangre capilar o venosa.

Determinacin del hematocrito

PCV: volumen ocupado por los glbulos rojos en relacin al volumen total de sangre en una muestra de sangre capilar o venosa. La relacin es medida luego de una correcta centrifugacin y expresada en fraccin decimal

La medicin del PCV por centrifugacin es:

Requerida para procesos de calibracin. Aplicable a la evaluacin de otros mtodos alternativos. Aplicable en el laboratorio de rutina para propsitos diagnsticos y teraputicos.

Medicin del PCV por centrifugacin

VENTAJAS: Tiempo de determinacin corto Requiere de poca cantidad de sangre Menor atrapamiento de plasma gracias a la mayor fuerza de centrifugacin

Medicin del PCV por centrifugacin

DESVENTAJAS: Riesgos de infecciones: - ruptura de los microcapilares con formacin de aerosoles - contaminacin con sangre del exterior del capilar

Medicin del PCV por centrifugacin

Muestra: Aproximadamente 50 L de sangre venosa en EDTA (1,5 - 1,8 mg/ml) Sangre recolectada directamente en capilares con heparina (< 7 unidades por tubo capilar) La sangre debe ser centrifugada dentro de las 6 hs de recolectada, almacenada a 22 4C

Medicin del PCV por centrifugacin

Tcnica: 1. Cargar los tubos, por duplicado, por capilaridad, 5,5 a 6,0 cm (long = 7,5 cm). Limpiar. 2. Sellar con selladores comerciales a tal fin, no con calor. 3. Centrifugar 5 minutos en centrifugas de: radio > de 8 cm, alcance velocidades de 10000 a 15000 g sin exceder en ese tiempo los 45C.

Medicin del PCV por centrifugacin

Tcnica:
4. Realizar duplicados que no deben diferir en ms de 0,015 5. Las lecturas deben realizarse dentro de los 10 minutos de la centrifugacin, el mtodo de lectura puede variar, pero verificar la reproducibilidad de las lecturas ( 0,0025). 0,0025) 6. Calcular el PCV como: long de la columna de GR (mm) longitud de las clulas + el plasma (mm)

Medicin del PCV por centrifugacin

Expresin de resultados: Como fraccin decimal

Intervalo de referencia:
HOMBRES RAZA INTERVALO NEGRA 0,341 0,477 BLANCA 0,360 0,482 MUJERES RAZA INTERVALO NEGRA 0,335 0,431 BLANCA 0,347- 0,447

Medicin del PCV por centrifugacin

Causas de error: En la toma de muestra:
xtasis prolongado del torniquete hemoconcentracin Dilucin con lquido intersticial o formacin de cogulo Hemlisis Mezcla inadecuada del anticoagulante En la tcnica: Incorrecto sellado o llenado de los capilares

Medicin del PCV por centrifugacin

Causas de error: En la lectura:
Errores de paralaje o por inclusin de la capa de blancos y plaquetas como parte de la columna de glbulos rojos

Medicin del PCV por automatizacin

A partir del VCM y del recuento de GR:

PCV = VCM (fL) x N glbulos rojos (x1012/L)

Hematocrito
Calculado VCM x Nmero de GR

Medido como sumatoria de volmenes en una cantidad de muestra fija.

Plasma Atrapado: El mito?

Hematocrito Manual- Anteriormente se explicaba la diferencia entre el hematocrito reportado por un analizador y el hematocrito manual por medio del concepto de plasma atrapado en la columna capilar Pero se encontr que en realidad slo hay aproximadamente 1% de plasma atrapado en la columna capilar

Plasma Atrapado: Realidad

El tipo de vidrio utilizado y el dimetro del tubo utilizado en el hematocrito manual son suficientes para producir la cantidad de deshidratacin de las clulas en el fondo del tubo para compensar el atrapamiento que ocurre en la parte superior

CONSTANTES CORPUSCULARES

EL ERITROCITO

GRACIAS
Justo T. Alegre Torres jusaleto@hotmail.com