METABOLISMO DE GLCIDOS

INTRODUCCIN El cuerpo humano tiene la necesidad continua de energa, la cual obtiene a partir del procesamiento de los combustibles metablicos, los que son captados en forma discontinua en las comidas. Durante la digestin se absorben suficientes nutrientes para cubrir las demandas energticas del organismo por un perodo de tiempo limitado. El exceso de nutrientes captados son transformados en compuestos almacenables que van a ser empleados durante los perodos posteriores a la ingesta y de ayuno. Estos compuestos de reserva energtica son principalmente el glucgeno (un polmero de D-glucosa), los triglicridos (una molcula de glicerol esterificada con tres molculas de cidos grasos) y en menor proporcin, las

protenas. Durante el ayuno estos compuestos son catabolizados para cubrir las demandas de energa celular. El consumo de cada uno de estos nutrientes ocurre segn el estado de ayuno en que se encuentre el individuo. La principal funcin del glucgeno y de los triglicridos es la constituir una reserva de combustible. Por el contrario, las protenas intervienen como componentes estructurales del cuerpo o en otros casos tienen funciones enzimticas, actan como receptores, hormonas, transportadores, etc. Por lo tanto, dado que el consumo de protenas como combustible metablico compromete funciones importantes del organismo, su utilizacin como tal se restringe a casos de ayuno extremo. Los componentes glucdicos de la dieta son digeridos en el intestino hasta monosacridos, se absorben en el intestino y a travs de la vena porta llegan al hgado. La digestin de una comida tpica conteniendo sacarosa, lactosa y almidn (azcar de mesa, leche y pan, por ejemplo en un desayuno) aporta D-galactosa, D-fructosa y D-glucosa. En el hgado estos monosacridos son fosforilados por la accin enzimtica de hexoquinasas: glucoquinasa, fructoquinasa, galactoquinasa (catalizan la fosforilacin de la D-glucosa, de la Dfructoquinasa y de la D-galactosa respectivamente). El destino final de estos metabolitos en el hgado ser la de degradarse para producir energa, o almacenarse, en forma de glucgeno,

para su utilizacin en un perodo de ayuno. Los monosacridos en exceso aportados por la dieta que no alcanzan a ser fosforilados- salen del hgado, como glucosa, para su utilizacin como combustible por otros tejidos. Con respecto a la galactosa y la fructosa, en el hgado luego de su fosforilacin, experimentan una serie de reacciones que se detallan en el punto siguiente. Como se observa en los esquemas indicados ambos monosacridos pueden formar D-glucosa-6 fosfato, de modo que por accin de una glucosa 6-fosfatasa pueden convertirse en glucosa y pasar a la circulacin general (los monosacridos fosforilados no atraviesan la membrana plasmtica, de modo que la presencia de la glucosa 6-fosfatasa en hgado es crtica para la liberacin a la circulacin de la glucosa por parte del hgado). Ciertos tejidos, entre ellos el hgado, tienen la capacidad de almacenar glucosa como glucgeno (GLUCOGENOGNESIS) en situaciones en las que hay un aporte excesivo de glucosa de la dieta. Por ejemplo, con un desayuno abundante parte de la glucosa consumida se convertir en el hgado en glucgeno, para reponer el glucgeno consumido durante el ayuno nocturno. El glucgeno almacenado puede degradarse a glucosa (GLUCOGENLISIS) cuando el aporte de glucosa se torne insuficiente para cubrir la demanda energtica de los distintos tejidos. Por otra parte tambin existe la posibilidad de sintetizar glucosa a partir de precursores no glucdicos, cuando el aporte de la dieta y el glucgeno almacenado no son suficientes para suplir las necesidades. Este ltimo proceso se denomina

GLUCONEOGNESIS. La produccin de energa metablica a partir de glucosa implica una serie de reacciones que en conjunto constituyen la GLUCLISIS.

METABOLISMO DE LA D-FRUCTOSA EN EL HGADO En el hgado, la D-fructosa es convertida a fructosa-1-fosfato por accin de la fructoquinasa y posteriormente se cliva por accin de una aldolasa produciendo dos triosas: D-gliceraldehdo y dihidroxiacetona. El D-gliceraldehdo, que proviene de los tomos de carbono 4,5 y 6 de la molcula de D-fructosa, es fosforilado por una triosa quinasa a D-gliceraldehdo-3-fosfato. Este ltimo compuesto tambin se obtiene a partir de la dihidroxiacetona fosfato por accin de una isomerasa. De modo que a partir de una molcula de D-fructosa se obtienen dos

molculas de D-gliceraldehdo-3-fosfato, las cuales se condensan para formar D-fructosa-1,6 di fosfato. Este compuesto, por accin de una fosfatasa especfica que elimina el grupo fosfato unido a travs del hidroxilo del carbono 1 de la D-fructosa, produce D-fructosa-6 fosfato. Este compuesto se isomeriza a glucosa-6-fosfato, el cual puede ser hidrolizado por una glucosa 6 fosfatasa para producir D-glucosa, o puede ser convertido a D-glucosa-1-fosfato por accin de una fosfoglucomutasa. La D-glucosa-1-fosfato puede ser utilizada en la sntesis de glucgeno.

Como se ver ms adelante, el metabolismo de la D-fructosa en el hgado esta relacionado con la gluclisis y con otra va metablica que lleva a la degradacin de la glucosa: la va de las pentosas.

METABOLISMO DE LA D-GALACTOSA EN EL HGADO El siguiente esquema ilustra el metabolismo de la D-galactosa en el hgado.

La accin de la enzima galactoquinasa permite convertir la D-galactosa en D-galactosa-1fosfato. Este metabolito se transforma, mediante las reacciones indicadas en el esquema, en D-glucosa-1-fosfato (el cual puede ser utilizado en la sntesis de glucgeno). Por accin de la una fosfoglucomutasa se convierte en glucosa- 6-fosfato (este compuesto puede producir glucosa por accin de la glucosa -6 fosfatasa).

LA INTERRELACIN ENTRE LA CONCENTRACIN DE D-GLUCOSA Y DE INSULINA Y GLUCAGON EN PLASMA Luego que la glucosa sale del hgado se distribuye por la circulacin general a todo el cuerpo. El pncreas monitorea la concentracin de glucosa y otros nutrientes en la circulacin y a travs de la secrecin de insulina o glucagon regula el uso de estos combustibles por los distintos tejidos del organismo.

Altos niveles de glucosa Insulina estimula la recapatacin y consumo de Dglucosa Insulina

PANCREAS

Glucagon Bajos niveles de glucosa Glucagon estimula la sntesis y liberacin de D-glucosa

GLUCOGENO D- Glucosa Piruvato CO2

MUSCULO

GLUCOGENO D-glucosa D-Glucosa Piruvato

HIGADO

Insulina estimula el consumo de D-glucosa

La insulina es una hormona anablica que estimula la sntesis de componentes macromoleculares de las clulas y activa el almacenaje de stos cuando existe un exceso de combustibles. El glucagon, en cambio, es una hormona catablica cuya funcin principal radica en limitar la sntesis de macromolculas y en incrementar los nutrientes en circulacin a partir de aquellos previamente almacenados. Un incremento en la concentracin de Dglucosa en la circulacin conduce a un aumento en la secrecin de insulina y a una disminucin en la secrecin de glucagon. Por el contrario, la disminucin de la glucemia

provoca una disminucin en la secrecin de insulina y un aumento en los niveles de glucagon, como se indica en el esquema anterior.

CONCENTRACIN DE D-GLUCOSA SANGUNEA Un factor importante en el ciclo de almacenaje y consumo de las reservas energticas es el requerimiento estricto de D-glucosa por ciertos tejidos como ser los eritrocitos y el cerebro. Este ltimo depende por completo de un suministro continuo de D-glucosa, ya que es incapaz de captar cidos grasos como combustible alternativo a la glucosa, slo puede utilizar cuerpos cetnicos cuando alcanzan una concentracin elevada en sangre (ayuno prolongado). Para cubrir los requerimientos energticos de los tejidos que dependen de D-glucosa, la concentracin de este monosacrido en sangre se mantiene dentro de los lmites de 3 a 7 mM (54 mg%- 126 mg%). Existen varias razones importantes por las que la concentracin de la D-glucosa sangunea se regula en lmites tan estrechos. Si la concentracin de glucosa baja hasta 1,5 mM, el cerebro recibe un suministro inadecuado, por lo que las concentraciones de ATP comienzan a disminuir y la funcin cerebral se altera, lo que puede llevar al coma y la muerte. El lmite superior seguro de D-glucosa sangunea se establece por sus propiedades osmticas y qumicas. Concentraciones de D-glucosa sanguneas elevadas aceleran uno de los procesos relacionados con el envejecimiento de protenas, por la glicosilacin no enzimtica de protenas que se produce cuando la concentracin de glucosa es elevada. En su forma de cadena abierta la D-glucosa reacciona en forma no enzimtica con los grupos amino expuestos de las protenas. Esta modificacin de las protenas puede modificar en forma notoria la actividad cataltica de enzimas. La hemoglobina, el colgeno, las protenas del cristalino y otras protenas sufren esta modificacin (glicosilacin) en una magnitud que se correlaciona directamente con la concentracin de D-glucosa en sangre. Los mecanismos de control de la concentracin de D-glucosa sangunea permiten que cuando esta concentracin se eleva, por ejemplo despus de una ingesta rica en glcidos, se estimula la utilizacin de D-glucosa, ya sea favoreciendo las rutas metablicas que llevan a la

degradacin de la misma (por ejemplo GLUCLISIS), o bien derivndola a los circuitos de almacenamiento: sntesis de glucgeno (GLUCOGENOGNESIS) y luego lpidos (lipognesis). Cuando la concentracin de glucosa sangunea "tiende" a descender, por ejemplo en un estado de ayuno, para mantener los niveles de glucosa dentro de los lmites fisiolgicos, los mecanismos de control determinan un incremento de la utilizacin de los nutrientes almacenados (por ejemplo glucgeno, lpidos, cuerpos cetnicos): se activan procesos como GLUCOGENLISIS, liplisis, cetlisis. Al mismo tiempo estos mecanismos determinan que la utilizacin de la D-glucosa se limite a aquellos tejidos que dependen exclusivamente de sta y al mismo tiempo, que se active la va metablica que conduce a la sntesis de glucosa a partir de precursores no glucdicos (GLUCONEOGNESIS). Durante la ingesta, los niveles circulantes de D-glucosa aumentan. El aumento concomitante en los niveles de insulina produce la remocin de la D-glucosa de la circulacin, esta hormona acelera la velocidad con que la D-glucosa es transportada al interior de las clulas e incrementa las velocidades de las vas que consumen D-glucosa. En algunos tejidos, como cerebro, eritrocitos y tejido heptico, el transporte de la D-glucosa al interior de las clulas NO depende de la insulina. En otros tejidos, como el tejido adiposo y el muscular, este transporte es activado por insulina. La D-glucosa penetra a la clula de manera eficiente slo cuando es transportada por una protena transportadora especfica localizada en la superficie de la membrana plasmtica. Existen distintos tipos de transportadores de glucosa, en el tejido adiposo est presente el transportador GLUT4, cuya sntesis es activado por insulina. Por lo tanto, los tejidos que tienen transportadores de D-glucosa dependientes de insulina captan la D-glucosa slo cuando sta es abundante (por ejemplo el tejido adiposo). Adems de consumir D-glucosa para la produccin de energa en forma de ATP, la mayor parte de las clulas convierte el exceso del azcar en molculas de reserva. El hgado, el msculo y otros tejidos polimerizan la D-glucosa para formar glucgeno

(GLUCOGENOGNESIS). Adems el hgado y el tejido adiposo convierten la D-glucosa a cidos grasos (lipognesis), que se almacenan como triglicridos.

Cuando la dieta no aporta una cantidad suficiente de D-glucosa los niveles en sangre comienzan a declinar. En este momento el consumo de D-glucosa por aquellos tejidos insulino dependientes se reduce de manera radical y slo aquellos tejidos que dependen de este azcar exclusivamente son capaces de captar la glucosa circulante. En estas condiciones los tejidos que no captan glucosa comienzan a catabolizar los cidos grasos. Conforme el ayuno progresa, para mantener la concentracin de D-glucosa en sangre, el hgado degrada glucgeno (GLUCGENOLISIS) y biosintetiza D-glucosa (GLUCONEOGNESIS). Por el contrario, cuando los niveles de D-glucosa se encuentran elevados luego de una ingesta de hidratos de carbono, los niveles de insulina aumentan y ejercen su accin sobre los tejidos a fin de aumentar su captacin estimulando adems aquellas vas metablicas que llevan a una reduccin en la concentracin de D-glucosa intracelular.

INTERRELACIONES METABLICAS Es importante enfatizar que a pesar que para facilitar el estudio de las reacciones qumicas que ocurren dentro de la clula se suele agrupar un conjunto de reacciones en lo que llamamos va metablica, estas vas no ocurren aisladamente en el interior de la clula sino que se encuentran altamente interrelacionadas entre s. Por ejemplo la D-glucosa-6 fosfato intracelular est vinculada con una serie de reacciones acopladas dentro de lo que llamamos metabolismo de hidratos de carbono, como se ve en el diagrama siguiente.

GLUCGENO

D-Glucosa sangunea D- Glucosa

Glucogenognesis D-Glucosa 6-Fosfato

Gluclisis Piruvato

Va de las pentosas D-Ribosa- 5 Fosfato

ATP

Acetil CoA

La direccin o el camino metablico a seguir por este azcar depender de las caractersticas del tejido, del estado metablico general y, principalmente, de los mecanismos de homeostasis involucrados. Esto quiere decir que la D-glucosa-6 fosfato no va a seguir simultneamente caminos metablicos opuestos. Si esto sucediera implicara una falla en los sistemas de control. As, la sntesis de glucgeno heptico no ocurre al mismo tiempo en que, respondiendo a un estado de hipoglucemia, en este tejido se encuentre activada la va degradacin de este polmero (glucgenolisis). Otro ejemplo: la sntesis de D-glucosa en el hgado a partir de piruvato no se produce en un estado de hiperglucemia, en el cual los mecanismos de homeostasis permiten los niveles de D-glucosa plasmtica. Estos mecanismos de "encendido" y "apagado" de las vas metablicas quedan ejemplificados claramente en la regulacin coordinada de la glucgenolisis y glucogenognesis, como se ver posteriormente. Con respecto a las caractersticas del tejido, el mejor ejemplo se da en el hgado. Considerando una de sus funciones, la que se relaciona con la homeostasis de la D-glucosa sangunea, la presencia en este tejido de la enzima llamada D-glucosa-6-fosfatasa hace que las molculas de D-glucosa-6-fosfato producidas por la degradacin de glucgeno sean rpidamente hidrolizadas a D-glucosa y liberadas al torrente sanguneo lo que permite aumentar los niveles de este azcar en el plasma. En otros tejidos donde esta enzima no est presente o su actividad es muy baja, como ocurre en el msculo, si bien la degradacin de glucgeno aporta D-glucosa -6 fosfato, esta no puede generar D-glucosa para ser liberada a circulacin. La D-glucosa-6 fosfato producida en estos tejidos a partir de la degradacin de glucgeno se deriva a otras vas como la gluclisis, para producir energa en ese tejido. En los puntos siguientes se tratarn las distintas vas metablicas relacionadas con los glcidos.

GLUCOLISIS La gluclisis es la secuencia de reacciones que convierten glucosa en piruvato con la concomitante produccin de ATP. Todas las enzimas involucradas son citoplasmticas. La conversin de una molcula de glucosa en dos de piruvato est acompaada por la produccin neta de dos molculas de ATP. La reaccin neta de la gluclisis incluye la reduccin de dos molculas de NAD+ a NADH:

D-Glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 NAD+---> 2 Piruvato + 2 NADH + + 2 H+ + 2 ATP + 2 H2O

En condiciones anaerbicas, el piruvato es reducido a lactato en presencia de NADH, lo cual permite la regeneracin de NAD+. Este proceso es sumamente importante ya que permite la continuidad de la gluclisis en ausencia de oxgeno. El eritrocito por ejemplo, que carece de mitocondrias y por lo tanto no tiene las enzimas necesarias para reoxidar las coenzimas reducidas, metaboliza la glucosa por esta va produciendo lactato como producto final. El msculo puede contraerse en anaerobiosis ya que la energa necesaria es aportada en estas circunstancia por la metabolizacin de la glucosa por va glucoltica hasta la formacin de lactato. Esto explica porqu los niveles de lactato en sangre aumentan luego de un ejercicio intenso. En presencia de oxgeno el piruvato es degradado completamente a CO2 y H2O, para esto el piruvato primeramente experimenta una descarboxilacin oxidativa produciendo CO2 y un resto acetilo liberado como acetil CoA, reaccin catalizada por la enzima piruvato deshidrogenasa (PDH). El acetil CoA ingresa luego al ciclo de Krebs y all es degradado a CO2. Ambos procesos, oxidativos, generan coenzimas reducidas que finalmente son reoxidadas en la cadena de transporte de electrones, con la concomitante produccin de ATP. La presencia de oxgeno en estos procesos es indispensable. El siguiente esquema ilustra lo discutido.

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GLUCLISIS
D-GLUCOSA 2 PIRUVATO

PDH
2 ACETIL-CoA

CO2 2 lactato

Ciclo de Krebs

4CO2
No se requiere O2 Se requiere O2 para reoxidar las coenzimas producidas en las reacciones catalizadas por la PDH y en el ciclo de Krebs.

PDH= Piruvato deshidrogenasa.

El conjunto de reacciones de la gluclisis puede dividirse en dos fases. La primera de ellas concluye en la escisin de la glucosa en dos molculas de triosas-fosfato. En esta fase se invierte energa: 2 molculas de ATP por molcula de glucosa. En la segunda fase se produce la oxidacin de la triosa fosfato y la formacin de intermediarios con alta energa que finalmente se escinden y transfieren al grupo fosfato del ADP, junto con la energa suficiente para su sntesis. Estudiaremos ahora las reacciones de la gluclisis.

1- Fosforilacin de la glucosa: En el interior de la clula la glucosa es fosforilada a glucosa 6-fosfato, segn la reaccin que se indica a continuacin. Aunque en esta etapa se consume energa, la formacin de un ster de glucosa (que no atraviesa las membranas celulares) permite "atrapar" la glucosa en el citoplasma donde se localizan las enzimas glucolticas.

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Glucoquinasa Hexoquinasa

Glucosa

Glucosa 6 P

Consumo de ATP

Esta reaccin, irreversible, es catalizada por las enzimas hexoquinasa y glucoquinasa. Ambas enzimas presentan distintas propiedades cinticas. La hexoquinasa fosforila distintas hexosas. La glucoquinasa es especfica para la glucosa.

Glucoquinasa
Parmetros cinticos KM Vmax Distribucin celular Regulacin A corto tiempo Por cambios en la concentracin de glucosa Sntesis inducida por insulina Alto: 10 mM Alta Hgado, clulas pncreas

Hexoquinasa
Baja, <100 M Baja Mayora de los tejidos

Inhibida por glucosa 6P

A largo plazo

Constitutiva

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En el grfico siguiente se comparan las velocidades de fosforilacin de la glucosa por ambas enzimas:

v Hexoquinasa Glucoquinasa

KM de la hexoquinasa KM de la glucoquinasa

10

20

30

[Glu] s (mM)

Del anlisis del mismo se deduce que una pequea variacin en la [Glu]s se traduce en una variacin de la actividad de la glucoquinasa. Por ejemplo, si aumenta la concentracin de glucosa, la tasa de fosforilacin de glucosa se incrementa por la actividad de esta enzima, en tanto que la actividad de la hexoquinasa no se ver modificada porque est funcionando con concentracin de sustrato saturante (ver las flechas a la izquierda). Ante una disminucin de la glucosa sangunea, la tasa de fosforilacin no se modifica en aquellos tejidos con hexoquinasa, porque la enzima est saturada.

2- Isomerizacin de la glucosa 6-fosfato a fructosa 6-fosfato: La siguiente reaccin de la va consiste en la isomerizacin de la glucosa 6-P a fructosa 6-P: La forma cclica de seis eslabones de la glucopiranosa se convierte en el anillo de cinco eslabones de la fructofuranosa.

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Fosfoglucoisomerasa Glucosa 6 P Fructosa 6 P

La enzima fosfoglucoisomerasa cataliza esta reaccin reversible. Este paso no est sujeto a regulacin.

3-Fosforilacin de la fructosa 6-fosfato a fructosa 1,6 di fosfato: Se requiere ATP para la fosforilacin de la fructosa 6-P a fructosa 1,6 diP de acuerdo a la siguiente reaccin:

Fosfofructoquinasa I

Fructosa 6 P

Fructosa 1, 6 bi P

Consumo de ATP

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Esta reaccin irreversible constituye un punto de control importantsimo de la va glucoltica. Es catalizada por la enzima alostrica fosfofructoquinasa I (FFQ I) que se activa por AMP, ADP y fructosa 2,6 di fosfato e inhibida por ATP, citrato y H+ . La inhibicin causada por niveles altos de ATP es revertida por niveles altos de ADP y AMP, de modo que una relacin ATP/AMP alta, lo que indica que la carga energtica de la clula es elevada, causar una inhibicin de la va glucoltica. Dado que en condiciones anaerbicas el cido lctico constituye el producto final de la va, el efecto inhibitorio de los protones sobre la FFQ I es importante para evitar un brusco descenso del pH sanguneo en situaciones en las cuales el aporte de oxgeno a los tejidos no es suficiente.
ATP ADP FRUCTOSA 1,6 BI - P
Regulacin coordinada Con la gluconeognesis

FRUCTOSA 6 P

ATP FRUCTOSA 2,6 DI P

CITRATO

AMP, ADP

La fructosa 2,6 di P no es un intermediario de la va glucoltica, es un efector alostrico de la FFQ I que se forma en hgado a partir de fructosa 6 P en una reaccin catalizada por la enzima fosfofructoquinasa II (FFQ II):

FRUCTOSA 6 P ATP ATP ADP ADP

FRUCTOSA 1,6 Di P

FOSFOFRUCTOQUINASA I

FFQ II

+
FRUCTOSA 2,6 DI P

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La actividad de esta enzima es regulada por mecanismos de fosfo y desfoforilacin, regulando los niveles de fructosa 2,6 di P. Volveremos a tratar esta enzima luego de discutir la gluconeognesis. 4- Formacin de triosas fosfato: Este paso reversible de la va glucoltica es catalizado por la enzima aldolasa. La fructosa 1,6 di fosfato se cliva para dar dos triosas fosfato: dihidroxiacetona fosfato (DHA-P), (una cetona) y gliceraldehdo 3 fosfato (G 3P) (un aldehdo).

Aldolasa

Fructosa 1, 6 bi P

Dihidroxiacetona P (DHAP)

Gliceraldehdo 3 P (G3P)

5- Interconversin de triosas: El gliceraldehdo 3 P es sustrato de la enzima que acta en el paso siguiente de la va glucoltica, en cambio el compuesto dihidroxiacetona fosfato no, pero ste es rapidamente convertido a gliceraldehdo 3 P por una triosa fosfato isomerasa:

Triosa fosfato isomerasa Dihidroxiacetona P (DHAP) Gliceraldehdo 3 P (G3P)

En el equilibrio, el 96% de las triosas fosfato lo constituye el compuesto DHA P, pero la remocin rpida del gliceraldehdo-3 P por la reaccin siguiente, desplaza el equilibrio hacia la formacin de ste.

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6- Conversin de gliceraldehdo 3-P en 1,3 di fosfoglicerato: Con la reaccin anterior concluye la primera etapa de las dos en las cuales suele dividirse para su estudio la va glucoltica. En esta primera etapa, la degradacin de la glucosa no produce energa en forma de ATP. Por el contrario, se han consumido 2 moles de ATP por mol de glucosa. En las etapas siguientes veremos cmo la degradacin de la glucosa produce un rendimiento neto de energa en forma de ATP. La conversin de gliceraldehido 3-P a 1,3 di P glicerato es catalizada por la enzima gliceraldehdo 3-P deshidrogenasa. La formacin del compuesto 1,3 difosfoglicerato (1,3 DPG) implica la oxidacin del gliceraldehdo -3 P como paso previo. Esta reaccin transforma el grupo en
C O OH
C O H

del C1

, inmediatamente un grupo fosfato del medio es incorporado en el cido, para

C O O P

formar un anhdrido fosfrico

(se forma un anhdrido mixto entre un cido

carboxlico y cido fosfrico : 1,3 di P glicerato) . La reaccin catalizada por la enzima gliceraldehdo 3 fosfato deshidrogenasa utiliza NAD+ como cofactor. La reaccin global es la siguiente:

NAD

NADH + H+

Gliceraldehdo 3P Gliceraldehdo 3 PFosfato inorgnico deshidrogenasa (G3P)

1,3 Glicerato 1,3 diDi-P P Glicerato

La unin del fosfato al carbono 1 del cido formado luego de la oxidacin del aldehdo constituye una unin de alta energa (unin anhdrido fosfrico). La energa necesaria para la

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formacin de esta unin proviene de la reaccin previa de oxidacin del grupo aldehdo a cido. De modo que la reaccin global puede considerarse como resultado del acople de dos reacciones:
NAD+ NADH + H+

1) Gliceraldehdo 3 P O C H O 2) Acido Glicrico + P O O C OH O

Acido Glicrico O C OH

1,3 Di P Glicerato O C O-Pi

La reaccin 1, fuertemente exergnica se acopla a la reaccin 2, endergnica. La sumatoria de ambas reacciones da como resultado la reaccin global sealada, una reaccin reversible. Los crculos indican las transformaciones que ocurren en el C 1 en ambas reacciones.

7- Formacin de ATP a partir de 1,3 di P glicerato: La energa almacenada en el anhdrido fosfrico es liberada permitiendo la formacin de ATP, reaccin reversible catalizada por la enzima fosfoglicerato quinasa. Dado que un mol de glucosa rinde dos moles de 1,3 di P glicerato y que por cada mol de 1,3 di P glicerato se forma 1 mol de ATP, en esta etapa se recuperan los dos moles de ATP/mol de glucosa consumidos en las etapas anteriores. La reaccin catalizada por la fosfoglicerato quinasa es la siguiente:

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El sistema de la fosfoglicerato quinasa es un ejemplo de fosforilacin a nivel de sustrato, una expresin que se utiliza para describir reacciones enzimticas que ocurren con la produccin de ATP o GTP: la energa necesaria para la sntesis de ATP (o GTP) se halla almacenada en un sustrato que se transforma en el curso de la reaccin. En contraste, en la fosforilacin oxidativa la energa que se utiliza para la sntesis de ATP proviene de la reoxidacin de las coenzimas reducidas en la cadena de transporte de electrones.

8- Conversin de 3 P glicerato a 2 P glicerato: En esta reaccin el grupo fosfato que forma una unin ster con el OH del C3 se une al C2 mediante una unin ster. Es una reaccin reversible catalizada por al enzima fosfoglicerato mutasa.
Fosfoglicerato mutasa

Mg2+

3 P Glicerato

2 P Glicerato

9- Formacin de fosfoenolpiruvato: La deshidratacin del 2 P glicerato genera el compuesto fosfoenolpiruvato. Un enol es un compuesto en el cual la funcin alcohol se halla en un carbono insaturado, de modo que presenta la estructura general -CC-OH .Esta reaccin reversible es catalizada por la enzima enolasa. La deshidratacin de la molcula, lo cual implica un reordenamiento de los tomos que conforman la molcula, determina que el enlace fosfato en el fosfoenolpiruvato adquiera una elevada energa de hidrlisis:

Enolasa
2- P Glicerato 2- Fosfoglicerato P Enol piruvato Fosfoenolpiruvato

19

10- Formacin de piruvato: La transferencia del grupo fosfato del P enolpiruvato al ADP es catalizada por la enzima piruvato quinasa. La hidrlisis del fosfoenolpiruvato libera la energa suficiente para la sntesis de ATP. Es una reaccin irreversible . El producto de la reaccin es enolpiruvato, el cual espontneamente se transforma en piruvato:

CH2 C C
O O O
_

CH2
P

ADP
Mg2+

ATP

C C

O O O
_

Piruvato Quinasa

P enolpiruvato

enolpiruvato

CH2 C C
O O O
_

Reaccin espontnea

CH3 C C
O O O
_

enolpiruvato

piruvato

La reaccin catalizada por la piruvato quinasa es otro ejemplo de fosforilacin a nivel de sustrato: la conversin del compuesto de alta energa fosfoenolpiruvato se transforma en enolpiruvato y libera energa permitiendo la sntesis de ATP. Esta reaccin es tambin otro punto importante de regulacin de la va glucoltica. Esta enzima es inhibida por ATP lo que permite disminuir la velocidad de la va glucoltica cuando la carga energtica de la clula es alta. La alanina tambin inhibe su actividad. La fructosa 1,6 di fosfato, producto de la reaccin irreversible precedente de la va glucoltica, es un activador de esta enzima, lo que evita el acumulo de intermediarios de la va cuando se produce la activacin de las enzimas regulatorias de los pasos previos.
ADP PEP Piruvato quinasa ATP PIRUVATO

ATP ALANINA

Fructosa 1,6 bi fosfatasa

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La actividad de la enzima est tambin regulada por modificacin covalente bajo control hormonal. Se han caracterizado tres isoenzimas de la piruvato quinasa en mamferos: La de tipo L predomina en hgado, la tipo M en msculo y cerebro y la de tipo A, en otros tejidos. La fosforilacin de la isoenzima L de la piruvato quinasa por una quinasa dependiente de AMPc, la inactiva. Desfosforilada es activa. Cuando la glucosa sangunea es baja, se incrementa en sangre el nivel de la hormona glucagon, una hormona que se une a un receptor de la membrana plasmtica y produce activacin de la adenilato ciclasa y consecuentemente un incremento en los niveles intracelulares de AMPc y activacin de la protena quinasa AMPc dependiente. Esta cascada de eventos desencadenada por accin hormonal conduce a la fosforilacin de la isoenzima L, la cual predomina en hgado, y lleva a su inactivacin. De manera que una disminucin de la glucemia lleva a la inactivacin de la va glucoltica en el hgado, evitando de esta manera el consumo de glucosa por este tejido cuando esta es ms necesaria por ejemplo para el cerebro.

Piruvato Quinasa -OH ATP

Protena quinasa

ACTIVA

Pi
Protena fosfatasa

ADP

INACTIVA
Piruvato Quinasa Quinasa O-P O-P Piruvato

H2O

11- Formacin de lactato: Esta reaccin reversible est catalizada por la enzima lactato deshidrogenasa, que utiliza NADH como cofactor. Como ya se discuti, esta reaccin ocurre en situaciones anaerbicas.

CH3 C O O O
_ Lactato deshidrogenasa NADH + H+ NAD+

CH3 C C OH O
O
_
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Piruvato

Lactato

DESTINO DEL NADH PRODUCIDO EN LA GLUCOLISIS El NADH producido en la gluclisis en la reaccin catalizada por la enzima gliceraldehdo 3 P deshidrogenasa, tiene dos destinos posibles, segn las condiciones:

- En aerobiosis, se reoxida en la cadena respiratoria

- En anaerobiosis, se reoxida mediante la conversin de piruvato en lactato, reaccin catalizada por la enzima lactato deshidrogenasa.
GLUCOSA GLICERALDEHDO 3 P
ANAEROBIOSIS

1, 3 DI P GLICERATO

O2

2H+
S OSI OBI AER

NAD+

NADH+ H

CADENA DE TRANSPORTE DE e

LACTATO H2O ATP

PIRUVATO

REACCIONES DE LA GLUCOLISIS
ATP ADP Glucosa Glucosa 6 P ATP ADP ADP Fructosa 1, 6 di P Fructosa 6 P
G= -3,4 Kcal/mol G= +5,73 Kcal/mol

G= -4,0 Kcal/mol

G=+ 0,4 Kcal/mol

Dihidroxiacetona P
G=1,83 Kcal/ mol

Gliceraldehdo 3P

NAD

Pi

Lactato

G=1,5 Kcal/mol NADH + H

NADH +H

1,3 di P Glicerato ADP

NAD

ATP Piruvato

ADP P- Enol piruvato

G=-4,5 Kcal/mol

ATP 2 P Glicerato 3 P Glicerato

G=0,44 Kcal/mol G=1,06 Kcal/mol

G= - 7,5 Kcal/mol

22

REGULACION DE LA VIA GLUCOLITICA: Consideraciones generales

La regulacin de la va es ejercida por distintos mecanismos. Fue mencionada la importancia de las enzimas fosfofructoquinasa I y piruvato quinasa en este aspecto. Distintos efectores modulan la actividad de estas enzimas. Por ejemplo, si la carga energtica celular se eleva, ATP/ADP, se produce la inhibicin de ambas enzimas lo cual determina la disminucin de la velocidad de la va. La accin hormonal se refleja en el control de los mecanismos de fosforilacin. La piruvato quinasa y la fosfofructoquinasa II se inactivan por fosforilacin dependiente de AMPc. Por lo tanto la fosforilacin de la FF Quinasa II impide la formacin de fructosa 2,6 di P, modulador alostrico positivo de la FF Quinasa I. Esto significa que cuando se incrementa el nivel de AMPc los niveles de fructosa 2,6 di P descienden y cesa la activacin de la FF Quinasa I. La induccin enzimtica de las enzimas FF quinasa I, piruvato quinasa y glucoquinasa por accin de la insulina es otro mecanismo de regulacin. Es importante destacar que en muchos casos la induccin de protenas - en este caso

enzimas- tambin involucra la fosforilacin de protenas. Ciertas hormonas al unirse a su receptor desencadenan una cascada de fosforilaciones que impacta sobre factores de transcripcin. Estos factores de transcripcin, en su forma fosforilada, son capaces de

promover la expresin de determinados genes. Por ejemplo la insulina, al unirse a su receptor, desencadena una serie de fosforilaciones que promueven la fosforilacin de uno o ms factores de transcripcin involucrados en la expresin de genes que codifican por ejemplo para determinadas enzimas de la gluclisis. En algunos casos la fosforilacin promovida por una hormona puede conducir a la fosforilacin de un represor que regula la expresin de un determinado gen. La fosforilacin de un represor determinado determina que ste pueda bloquear la transcripcin de uno o ms genes.
Promotor FACTORES DE TRANSCRIPCIN ADN ARNm Factores de transcripcin Factores de transcripcion: Creb, CREM, cfos,

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Actualmente se conoce que el mecanismo de accin de hormonas que actan va la activacin de receptores de membrana comprende la activacin de una compleja red de molculas de sealizacin, lo cual involucra la activacin de diferentes quinasas. Un grupo de quinasas de reconocida participacin en los mecanismos de sealizacin a travs de membrana son las MAP quinasas. Por ejemplo se sabe que la unin del glucagon a su receptor de membrana no slo promueve la activacin de la protena quinasa A (PKA), sino tambin la activacin de la MAP quinasas ERK1/2. La insulina tambin activa miembros de la familia de estas enzimas. Las MAP quinasas (MAPK) (por ejemplo las quinasas ERK1/2) son serina/treonina quinasas que a su vez se activan por fosforilacin en serina y tirosina, a travs de una cascada de fosforilaciones en la que participan diferentes quinasas (ver esquema siguiente). Las MAP quinasas cumplen un papel muy importante en la transmisin de seales extracelulares al ncleo, promoviendo por ejemplo la expresin de genes. Asi por ejemplo un estmulo extracelular (Ej. Una hormona) puede activar una determinada MAP quinasa, la cual fosforila y activa uno o ms factores de transcripcin que participan en la expresin de un determinado gen. El concomitante aumento en los niveles del ARNm correspondiente lleva luego a un aumento en los niveles de la protena correspondiente.
Factores de crecimiento

Ras MEKK (Raf 1)

Citoquinas, factores ambientales MEKK (ASK1, TAK1)

MAPKKK (Ser/Tre quinasa)

MAPKK (Quinasa dual) MAPK (Ser/Tre)

MEK1/MEK2

MKK4/ MKK7

MKK 3,6,4

ERK1,2

JNK

p38

Ncleo

c fos Elk 1

c jun, ATF-2 Elk-1

CREB

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La induccin de muchas de las enzimas de las vas de metabolizacin de la glucosa (por ejemplo gluclisis) por accin de insulina o glucagon se realiza a travs de un mecanismo como el descripto, es decir con la participacin de las MAPKs.

BALANCE ENERGETICO DE LA GLUCOLISIS La ecuacin siguiente expresa la conversin de glucosa en piruvato:

Glucosa + 2 Pi + 2 ADP + 2 NAD+ 2 Piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 H+ + 2 H2O

G= - 17,44 Kcal/mol
De acuerdo a la ecuacin, dos moles de ATP son generados por mol de glucosa transformada en piruvato. Dos reacciones ocurren con formacin de ATP, catalizadas por las enzimas piruvato quinasa y fosfoglicerato quinasa, las cuales producen cuatro moles de ATP/ mol de glucosa, en tanto que dos moles de ATP/ mol de glucosa se invierten en la primera parte de la va glucoltica: en las reacciones catalizadas por las enzimas glucoquinasa y fosfofructoquinasa I. En aerobiosis, la reoxidacin de los dos moles de NADH producidos en la reaccin catalizada por la enzima gliceraldehdo 3 P deshidrogenasa rendirn 5 moles de ATP (a razn de 2,5 moles de ATP por cada mol de NADH que se reoxida en la cadena de transporte de electrones ( 3, segn la lanzadera utilizada para la transferencia de los equivalentes de reduccin desde el citoplasma hacia la matriz mitocondrial, a razn de 1,5 moles de ATP por cada mol de FADH2 que se reoxida en la cadena de transporte de electrones). La descarboxilacin oxidativa del piruvato generar otro NADH por mol de piruvato, de manera que considerando la oxidacin del piruvato (que no forma parte de la gluclisis), en la conversin de glucosa a AcetilCoA se forman 9,5 moles de ATP por mol de glucosa. El acetil Co A formado por descarboxilacin del piruvato ingresa al ciclo de Krebs y rinde an mayor energa como veremos ms adelante. En estas condiciones, la produccin neta de ATP por combustin completa de la glucosa a CO2 y H2O ser de: 32 moles de ATP/mol de glucosa ( 30 moles de ATP/mol de glucosa para otra lanzadera, como veremos ms adelante). La oxidacin de los

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dos restos acetilo producidos por mol de glucosa en Krebs, es la etapa ms importante desde el punto de vista energtico: 20 moles de ATP/ mol de glucosa. Al realizar la combustin completa de 1 mol de glucosa a CO2 y H2O en un calormetro se produce la liberacin de aproximadamente 700 Kcal/mol. Teniendo en cuenta que la energa libre de hidrlisis del ATP es de 7,3 Kcal/mol, la produccin de 32 moles de ATP/mol de glucosa que experimenta la gluclisis aerbica es equivalente a aproximadamente 233,6 Kcal / mol (7,3 x 32 ), es decir la combustin de la glucosa en el organismo funciona con un 33 % de rendimiento (233.6/700 x100).

CICLO DEL 2,3 di P GLICERATO EN ERITROCITOS La gluclisis se lleva a cabo de la misma manera en todas las clulas. Sin embargo, algunas de ellas, como los eritrocitos, presentan ciertas particularidades. En estas clulas, en relacin con la gluclisis, se lleva a cabo el ciclo del 2,3 di P glicerato. Este metabolito se produce en todas las clulas, pero su concentracin es mucho ms elevada en los eritrocitos, donde constituye un efector alostrico de la hemoglobina, disminuyendo su afinidad por el oxgeno. La conversin de 1,3 di fosfoglicerato en 2,3 di fosfoglicerato implica la disminucin del rendimiento energtico de la gluclisis, pues como se observa en el esquema, esta reaccin evita el pasaje a travs de la reaccin catalizada por la fosfoglicerato quinasa. El grfico siguiente ilustra su formacin.

1,3 Di P Glicerato ADP Fosfoglicerato quinasa ATP

Di fosfoglicerato mutasa 2,3 Di P -Glicerato 2,3 di fosfoglicerato fosfatasa

3 P Glicerato

Pi
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DATOS DE INTERS CLINICO RELACIONADOS CON LA GLUCLISIS

CANCER Y GLUCLISIS Se conoce que en los tumores malignos estn incrementadas las velocidades de captacin de glucosa y de degradacin de la glucosa por la va glucoltica. Dado que las clulas cancerosas crecen ms rapidamente que los vasos sanguneos que las irriga, a medida que los tumores slidos crecen, la disponibilidad de oxgeno se dificulta. Esto significa que el tejido experimenta hipoxia, por lo cual el metabolismo se torna fundamentalmente de tipo anaerobico. El estado de hipoxia favorece la activacin de un factor de transcripcin que se denomina HIF-1 (Hipoxia inducible transcription factor) el cual interviene en la induccin de transportadores de glucosa y de enzimas de la va glucoltica. La induccin de estas enzimas es un mecanismo de adaptacin que permite a la clula cancerosa sobrevivir en condiciones adversas (baja disponibilidad de oxgeno), hasta que se desarrolle la vascularizacin. Por otra parte, HIF 1 tambin participa en la expresin del factor de

crecimiento endotelial de vasos (VEGF, vascular endotelial growth factor), que es fundamental para el desarrollo de los vasos sanguneos. El desarrollo de frmacos apunta a producir frmacos que impidan la vascularizacin para evitar asi el desarrollo del tumor.

ACIDOSIS LCTICA La acidosis lctica se presenta cuando los niveles de lactato en sangre son superiores a 5mM y el pH sanguneo est por debajo del valor normal. Puede darse por una sobreproduccin de lactato o por una disminucin en el consumo de lactato o por ambas causas. La causa ms comn de la acidosis lctica es una produccin exacerbada de lactato, por ejemplo durante el

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ejercicio. Como ya discutimos, el lactato se produce por gluclisis anaerbica. Cuando la oxidacin de la glucosa ocurre por gluclisis anaerbica, el rendimiento energtico es mucho menor que el obtenido por gluclisis aerbica. Esto significa que para generar la energa necesaria, el organismo debe incrementar la velocidad de consumo de glucosa, y por ende la produccin de lactato. Adems, el hecho que en condiciones anaerbicas est disminudo el consumo de lactato incrementa an ms la concentracin de lactato en sangre. Esto se explica porque los dos procesos que consumen el lactato, es decir su oxidacin a CO2 y H2O o bien su reconversin a glucosa, ambos procesos requieren oxgeno. La oxigenacin de los tejidos permite controlar este tipo de acidosis.

ANEMIA HEMOLTICA POR DFICIT DE PIRUVATO QUINASA La produccin de ATP en los eritrocitos maduros depende exclusivamente de la va glucoltica. Cuando la produccin de ATP no es suficiente, ciertas actividades enzimticas se alteran, en particular las bombas inicas como Na/K ATPasa. La actividad de esta bomba es importante porque contribuye a mantener la forma del eritrocito, permitiendo su deslizamiento por los capilares sin llegar a romperse. Esto explica porque cuando no hay suficiente produccin de ATP en el eritrocito ste se torna frgil y se rompe fcilmente. La anemia que caracteriza a este cuadro se denomina anemia hemoltica. Ciertos pacientes tienen una actividad deficiente de la enzima piruvato quinasa. Los afectados tienen una actividad de piruvato quinasa en eritrocitos que suele ser slo del 25% del valor registrado en individuos sanos. Esta falla enzimtica es poco frecuente, pero su ocurrencia est asociada con anemia hemoltica.

GLUCONEOGENESIS

La sntesis de glucosa a partir de precursores no glucdicos es un proceso denominado GLUCONEOGENESIS. Este camino metablico es de suma importancia ya que la glucosa es

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el principal combustible metablico en ciertos tejidos, como el nervioso. La reserva de glucosa del organismo, como glucgeno, es slo suficiente para cubrir la demanda de glucosa por el trmino de un da aproximadamente, de manera que esta va es de suma importancia en los perodos de ayuno. Los precursores no glucdicos son el glicerol, lactato, piruvato, aminocidos. Los tejidos gluconeogenticos son fundamentalmente el hgado y el rin. El lactato, producido continuamente por los eritrocitos, llega al hgado y en determinadas condiciones es convertido en glucosa (Ciclo de Cori). Ciclo de Cori

Despus de un ejercicio intenso, tambin el msculo aporta una cantidad significativa de lactato que el hgado convierte en glucosa reponiendo la glucosa degradada durante el ejercicio. El msculo tambin libera a sangre alanina, sustrato gluconeogentico que cumple el siguiente ciclo: Ciclo de la alanina
Hgado
GLUCOSA

Sangre
GLUCOSA

Msculo
GLUCOSA
2NAD

ATP O2

6ATP 2 PIRUVATO UREA 2 NH2 2 ALANINA ALANINA UREA

2 NADH + H

2 PIRUVATO
AMINO ACIDOS

2 NH2 2 ALANINA

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GLICEROL COMO SUSTRATO GLUCONEOGENTICO El tejido adiposo almacena triglicridos, ya que en situacin de ayuno son hidrolizados, produciendo glicerol y cidos grasos. El glicerol liberado llega al hgado por sangre y all es convertido en glucosa. Los cidos grasos no son sustratos gluconeogenticos (al menos los de cadena de nmero par de tomos de carbono), sin embargo cumplen una funcin importante en el ayuno porque ellos son degradados ( oxidacin ) para producir energa y cubrir la demanda energtica en esas situaciones.

REACCIONES DE LA GLUCONEOGNESIS

Al describir las reacciones de la va glucoltica se mencion la irreversibilidad de tres de ellas, las catalizadas por las enzimas glucoquinasa, fosfofructoquinasa I y piruvato quinasa. Se deduce entonces que la gluconeognesis no puede ocurrir como la mera inversin de los pasos de la gluclisis. Al menos los pasos catalizados por las tres enzimas mencionadas deben transcurrir en la gluconeognesis por caminos diferentes, como se observa realmente.

Sntesis de glucosa a partir de piruvato

1- Conversin de piruvato a fosfoenolpiruvato: Este proceso requiere la participacin de dos enzimas. Una de ellas, piruvato carboxilasa, cataliza la conversin de piruvato a oxaloacetato, en la matriz mitocondrial. La otra reaccin ocurre en citosol y es catalizada por la enzima fosfoenolpiruvato carboxiquinasa.

PIRUVATO CARBOXILASA 1) Piruvato + ATP + CO2 Oxaloacetato + ADP + Pi

FOSFOENOLPIRUVATO CARBOXIQUINASA 2) Oxaloacetato + GTP Fosfoenolpiruvato + GDP + CO2

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La reaccin catalizada por la piruvato carboxilasa es una reaccin de carboxilacin y requiere como cofactor biotina, una vitamina del complejo B. La hidrlisis de ATP aporta la energa para la unin del C del CO2 al piruvato:
C CH3 C C
Piruvato O O OCO2
Biotina

O O-

PIRUVATO CARBOXILASA

CH2 C C

O O Ooxaloacetato

ATP

ADP + Pi

La actividad de la piruvato carboxilasa es regulada alostricamente (en forma positiva) por acetil-CoA. En ausencia de este metabolito la enzima es inactiva. La enzima fosfoenolpiruvatocarboxiquinasa cataliza la conversin de oxaloacetato a fosfoenolpiruvato en citoplasma. El grupo fosfato lo aporta el GTP:
C CH2 C C
O O-

FOSFOENOLPIRUVATO CARBOXIQUINASA

CH2 C C
O O OFosfoenolpiruvato P

O O OGTP GDP CO2

Oxaloacetato

En la va glucoltica, el pasaje de fosfoenolpiruvato a piruvato produce un mol de ATP/mol de piruvato. La reversin de este paso en la va gluconeogentica implica un costo energtico equivalente a la hidrlisis de dos moles de ATP/ mol de piruvato (1 ATP y 1 GTP). El oxaloacetato no atraviesa la membrana mitocondrial interna, razn por lo cual el oxaloacetato formado en la reacccin catalizada por la piruvato carboxilasa debe convertirse

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en malato, un metabolito capaz de atravesar la membrana mitocondrial, en la reaccin catalizada por la enzima malato deshidrogenasa (mitocondrial).

C CH2 C C

C
NADH + H+ NAD+

O-

CH2
HO

O-

O O O-

CH C
O OMalato

Oxaloacetato

El malato atraviesa la membrana mitocondrial y en el citoplasma se produce su conversin a oxaloacetato, por la accin de la enzima malato deshidrogenasa citoplasmtica. Las reacciones siguientes son catalizadas por las mismas enzimas de la va glucoltica que catalizan reacciones reversibles. Se llega a la formacin de fructosa 1,6 di fosfato cuya posterior transformacin debe proceder por un camino diferente.

2- Formacin de fructosa 6 P : Esta reaccin est catalizada por la enzima fructosa 1,6 di fosfatasa. Se produce la hidrlisis del ester fosfrico del C 1.

H2O

Pi

Este paso es importante desde el punto de vista regulatorio de la va. La enzima es inhibida por AMP y fructosa 2,6 di P. Este metabolito es activador de la fosfofructoquinasa I, de

FRUCTOSA 1,6 BI FOSFATASA FRUCTOSA 1,6 BI FOSFATO H2O FRUCTOSA 6 P

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Pi

FRUCTOSA 2,6 BI P

manera que atravs del mismo se regulan en forma coordinada ambas vas: gluclisis y gluconeognesis.

La fosfogluco isomerasa cataliza una reaccin reversible, de manera que por la accin de esta enzima la fructosa 6 fosfato se convierte en glucosa 6 fosfato.

3- Formacin de glucosa : La enzima glucosa 6 fosfatasa cataliza la hidrlisis del ster fosfrico de la glucosa 6 fosfato. Los productos de la reaccin son Pi y glucosa; dado que los esteres fosfricos de la glucosa no atraviesan las membranas celulares, esta reaccin es importante porque permite liberar glucosa desde los tejidos a la circulacin. La enzima glucosa 6 fosfatasa est presente en hgado, rin e intestino, lo que permite a estos tejidos liberar glucosa a sangre.
-P GLUCOSA 6 FOSFATASA

H2O Glucosa 6 Fosfato

Pi Glucosa

El msculo dispone de glucgeno que puede degradar hasta glucosa 6 P, pero como no tiene la enzima glucosa 6 fosfatasa no puede liberar glucosa a sangre, de manera que este tejido no puede aportar glucosa a sangre para regular la glucemia. El glucgeno muscular se degrada a glucosa 1 P , cuando este tejido requiere energa (por ejemplo en ejercicio) y luego se convierte a glucosa 6 P, metabolito que ingresa a la va glucoltica. La glucosa 6 fosfatasa es una enzima unida a membranas. Se localiza en el retculo endoplsmico, con el sitio activo en la superficie de la cisterna. Una tranlocasa mueve la glucosa 6 fosfato desde el citosol hasta el interior del retculo, para la hidrlisis.

33

ESQUEMA DE LA VIA GLUCONEOGENETICA

(Considerando la sntesis de glucosa a partir de piruvato)

Matriz mitocondrial

citoplasma

malato Piruvato carboxilasa Piruvato CO2 ATP ADP + PI NAD+ NADH +H+ malato NADH + H+ oxaloacetato GTP GDP CO2 Fosofenolpiruvato carboxiquinasa NAD+

Oxaloacetato

fosfoenolpiruvato 2-P- Glicerato

3-P Glicerato G3P

1,3 D PG PDHA

Fructosa 1,6 Di Fosfatasa Fructosa 6 P Pi H2O Fructosa 1,6 Di P G3P

PDHA

Glucosa 6 Fosfatasa Glucosa 6 P GLUCOSA

H2O

Pi

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COSTO ENERGETICO DE LA GLUCONEOGENESIS La estequiometra de la gluconeognesis es:

2 Piruvato + 4 ATP + 2 GTP + 2 NADH + 6 H2O

Glucosa + 4 ADP + 2 GDP + 6 Pi + 2 NAD + + 2 H+

G= - 9 cal/mol En contraste, la estequiometra de la gluclisis revertida es:

2 Piruvato + 2 ATP + 2 NADH + 2 H2O ---------> Glucosa + 2 ADP + 2 Pi + 2 NAD+

G= + 20 Kcal/mol Notese que seis enlaces fosfato de alta energa se usan en la sntesis de glucosa a partir de dos moles de piruvato en la gluconeognesis, mientras que solamente dos moles de ATP son generados en la gluclisis, en la conversin de un mol de glucosa en piruvato. Los cuatro enlaces fosfato de alta energa " extra" son necesarios para transformar un proceso energticamente desfavorable ( G= + 20 Kcal/mol) en un proceso favorable ( G= - 9 Kcal/mol).

REGULACION DE LA GLUCONEOGENESIS. Consideraciones generales. El control de la va por efectores alostricos se efecta sobre: - Piruvato carboxilasa: la actividad de esta enzima depende de la presencia de acetil CoA. En ausencia de este metabolito no se produce la carboxilacin del piruvato. En situaciones de ayuno, la oxidacin de cidos grasos produce este metabolito que activa la gluconeognesis lo

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que permite proveer de glucosa a los tejidos que utilizan glucosa exclusivamente. La enzima requiere adems biotina como cofactor. - Fructosa 1,6 di fosfatasa: es inhibida por AMP y fructosa 2,6 di fosfato. Los niveles de fructosa 2,6 di fosfato estn determinados por la actividad de la enzima fosfofructoquinasa II, cuya actividad a su vez est controlada por mecanismos de fosforilacin. En situacin de ayuno, aumentan los niveles de glucagon, lo cual produce en hgado un incremento de los niveles de AMPc, con la concomitante activacin de la protena quinasa AMPc dependiente (PKA). La PKA cataliza la fosforilacin de la fosfofructoquinasa II y su inactivacin. Esto determina un descenso en los niveles de Fructosa 2,6 di fosfato y por ende una inhibicin de la va glucoltica y una activacin de la gluconeognesis.

Induccin y represin de enzimas Otro mecanismo regulatorio de esta va y de la gluclisis implica la induccin y la represin de enzimas claves de ambas vas. Estos procesos son desencadenados por distintas hormonas e implican una accin a nivel nuclear. Por ejemplo: Las hormonas glucagon, adrenalina y glucocorticoides regulan la gluconeognesis por induccin de las enzimas claves de la va: Piruvato carboxilasa, PEP carboxiquinasa, fructosa 1,6 di fosfatasa y glucosa 6 fosfatasa. El mecanismo por el cual el glucagon promueve la induccin de estas enzimas implica la fosforilacin y activacin de factores del transcripcin especficos, por ejemplo el factor CREB (cAMP-response element binding protein). La unin del glucagon a su receptor promueve el incremento intracelular de AMPc y la activacin de la PKA. Esta quinasa cataliza la fosforilacin del CREB, el cual se dirige al ncleo donde interviene en la transcripcin del gen que codifica por ejemplo para la piruvato carboxilasa. Ya se mencion adems que el glucagon activa miembros de la familia de las MAP quinasas. Ciertos factores de transcripcin que intervienen en la induccin de los genes que codifican para las enzimas claves de la gluconeognesis se activan por fosforilacin mediada por las MAP quinasas.

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El mecanismo involucrado en la expresin gnica por accin de los glucocorticoides ha sido descripto en el captulo correspondiente a mecanismo de accin de hormonas esteroideas. Las enzimas Piruvato carboxilasa, PEP carboxiquinasa, fructosa 1,6 di fosfatasa y glucosa 6 fosfatasa son reprimidas por insulina.

El mecanismo de represin implica una accin de la insulina a nivel nuclear, desencadenada por unin de la hormona al receptor y transmitida por una cascada de fosforilaciones que convergen por ejemplo en la activacin de un factor que reprime la transcripcin. La insulina induce mucha de las enzimas claves de la gluclisis (ya se mencion este tema en secciones anteriores). De este modo, una relacin glucagon/insulina alta, la que se establece cuando el organismo requiere sintetizar glucosa, favorece la gluconeognesis e inhibe la gluclisis. Este tipo de regulacin, en la cual existe induccin /represin de genes, constituye la

respuesta lenta a la accin hormonal. En cambio, la regulacin hormonal rpida no involucra eventos de induccin/represin (no cambia la cantidad de enzimas) sino que involucra la activacin/inhibicin enzimtica (cambia la actividad de las enzimas). La fosfo y desfosforilacin de enzimas promovida por las hormonas modifica la actividad de las mismas. Por ejemplo el glucagon, luego de unirse a sus receptores de membrana desencadena el incremento de los niveles intracelulares de AMPc y la activacin de la PKA, enzima que cataliza la fosforilacin de la fosfofructoquinasa II, entre otras protenas. La fosforilacin de esta enzima permite regular los niveles de fructosa 2, 6 di fosfato, un modulador alostrico de ambas vas (Tener presente que la enzima fosfofructoquinasa II no pertenece a la va glucoltica). En clases siguientes, cuando se expliquen los mecanismos que permiten regular la glucemia, se discutirn ms detalladamente estos procesos.

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REGULACION DE LA GLUCOLISIS Y DE LA GLUCONEOGENESIS. Efectores alostricos.

Glucosa ATP ADP Glucosa 6 P Fructosa 6 P ATP ADP Fructosa 1,6 bi P GTP GDP CO2 P-enolpiruvato ADP + Pi OA ADP ATP CO 2 Piruvato Acetil CoA ATP ATP, alanina

F2,6 bi P AMP

Pi

Pi, F2,6 biP, AMP ATP, citrato, H+

H2O

NADH + H+ NAD Lactato

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REGULACION DE LA GLUCOLISIS Y DE LA GLUCONEOGENESIS POR LA FRUCTOSA 2,6 di P .

La enzima fosfofructoquinasa II heptica se fosforila por un mecanismo AMPc dependiente. La fosforilacin de la enzima determina un cambio en la actividad de la enzima. Tiene dos actividades enzimticas: - Actividad quinsica, que se manifiesta cuando la enzima est desfosforilada. - Actividad fosfatsica, que se manifiesta cuando la enzima est fosforilada.

FOSFOFRUCTOQUINASA II - OH FOSFOFRUCTOQUINASA II-O- P

Quinasa Fosfatasa

ATP Fructosa 6P Pi

ADP

Actividad de quinasa

Fructosa 2,6 di P H2O

Actividad de fosfatasa

-Cuando FFQ II est desfosforilada ( FFQ II- OH ) quinasa. -Cuando FFQ II est fosforilada ( FFQ II- O P )

La enzima acta como una

La enzima acta como fosfatasa.

Cuando baja la glucemia, se incrementan en sangre los niveles de la hormona glucagon. Esta hormona dispara una cascada de eventos que lleva a la fosforilacin de esta enzima

bifuncional. Esta modificacin covalente lleva a la inhibicin de la actividad de quinasa y a la

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activacin de la actividad de fosfatasa, con lo cual los niveles de fructosa 2,6 di P descienden y consecuentemente se inhibe la gluclisis y se activa la gluconeognesis. Analizaremos los eventos que ocurren cuando varan los niveles de glucosa en sangre. En estado de ayuno la relacin insulina/ glucagon estar baja. Los niveles altos de glucagon promueven un incremento en los niveles intracelulares de AMPc en el hgado. Por lo tanto la PKA se activa, la FFQII se fosforila y pierde su actividad de quinasa. Ademas la enzima desfosforilada tiene actividad de fosfatasa. Todo esto determina un descenso en los niveles de fructosa 2,6 bi fosfato. Como consecuencia, se inhibe la gluclisis gluconeognesis. y se activa la

HIPOGLUCEMIA

AMPc

PKA

FFQII INACTIVA
(enzima fosforilada, quinasa inhibida)

F2,6 DI P

GLUCLISIS INHIBIDA GLUCONEOGENESIS ACTIVA

En un estado post ingesta la relacin insulina/ glucagon se eleva. Los niveles altos de insulina deteminan un descenso en los niveles de AMPc (porque la insulina activa la fosfodiesterasa que hidroliza al AMPc). En este caso la FFQII heptica esta desfosforilada y por lo tanto tiene actividad de quinasa: Se incrementan los niveles de F 2,6 biP. En este estado se activa la gluclisis y se inhibe la gluconeognesis.
HIPERGLUCEMIA

AMPc

PKA

FFQII ACTIVA (Enzima desfosforilada, quinasa activa)

F2,6 DI P

GLUCLISIS ACTIVA GLUCONEOGENESIS INHIBIDA

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La regulacin de la enzima fosfofructoquinasa II (FFQII) en el msculo cardaco es diferente. La isoforma cardaca tambin se fosforila, pero en un sitio diferente al que se fosforila en la isoforma heptica. La FFQII muscular, cuando se fosforila por PKA incrementa la actividad de quinasa. Por ejemplo un incremento de adrenalina dispara la activacin de PKA en corazn. Por lo tanto esto lleva a un incremento en los niveles de F2,6 biP y como consecuencia de esto se activa la gluclisis, que provee de energa al msculo cardaco .

Las isoformas heptica y cardaca de la FFQII se fosforilan en distintos sitios El esquema muestra potenciales sitios de fosforilacion de la enzima Isoforma heptica Fosforilada: INACTIVA Isoforma cardaca Fosforilada: ACTIVA

VIA DE LAS PENTOSAS Es un proceso multicclico que puede ser representado por la ecuacin: 3 Glucosa 6 P + 6 NADP+ ----------------> ---------> 3 CO2 + 2 Glucosa 6 P + Gliceraldehdo 3 P + 6 NADPH + 6 H+ La combustin de la glucosa por esta va tiene un bajo rendimiento energtico, por lo cual carece de importancia desde el punto de vista energtico. Tiene sin embargo dos funciones importantes: Genera NADPH para la sntesis reductoras y ribosa P para la sntesis de nucletidos. Esta va es activa en tejidos esteroidognicos, adiposo, glndula mamaria: tejidos que realizan sntesis dependientes de NADPH (sntesis de hormonas esteroides, cidos grasos) Tambin es importante en el eritrocito, donde el NADPH mantiene el hierro de la hemoglobina en estado ferroso y preserva su integridad evitando la oxidacin de los cidos grasos de la membrana.

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La primera reaccin involucra la oxidacin de la glucosa 6 fosfato por la enzima glucosa 6 P deshidrogenasa, la cual es inducida por insulina.
Glucosa 6 P deshidrogenasa

Una hidrolasa convierte la lactona en 6 fosfogluconato. Una nueva oxidacin dependiente de

+ H ribulosa 5 P: NADP+ convierte 6 fosfogluconatoNADP en unaNADPH pentosa,
+

6 P Gluconato DH 6 P Gluconato
Glucosa 6 P

Ribulosa 5 P CO2 NADPH + H+

6 P Gluconolactona

NADP+

A partir de ribulosa 5 P se forman dos ismeros: ribosa 5 P y xilulosa 5 P, los cuales reaccionan entre s en una serie de reacciones que se resumen en el esquema siguiente:
Glucosa 6-P CO2 Ribulosa 5-P Xilulosa 5 P (5 C) Gliceraldehido 3-P (3C) Fructosa 6 P (6C) Glucosa 6 P Glucosa 6-P CO2 Ribulosa 5-P Ribosa 5 P (5C) Sedoheptulosa 7P (7 C) Eritrosa 4 P (4C) Glucosa 6 P Gliceraldehido 3 P (3C) Fructosa 1,6 di P Glucosa 6 P mol de Se observa que dos moles de NADPH y un mol de ribosa 5 fosfato se forman por cada Glucosa 6-P CO2 Ribulosa 5-P Xilulosa 5 P (5 C)

glucosa 6 fosfato oxidado. En muchos tejidos se requiere ms NADPH para sntesis

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reductoras que ribosa 5 P para la snteis de nucletidos. En ellos fundamentalmente se dan las reacciones entre pentosas que se esquematizaron anteriormente.

DEFICIENCIA DE GLUCOSA 6P DESHIDROGENASA Ciertos frmacos como antipaldicos, antipirticos o antibiticos sulfamdicos suministrados a pacientes sensibles pueden producir en stos, en forma aguda, un tipo de de anemia hemoltica. La susceptibilidad de estos pacientes a esta anemia puede deberse a una actividad de glucosa 6 P deshidrogenasa deficiente. Como consecuencia de esta falla enzimtica las personas afectadas no puedan metabolizar correctamente la glucosa por la va de las pentosas. Por lo tanto no producen NADPH suficiente como para mantener el estado reducido de los eritrocitos: el glutation no puede reducirse y por ende aumenta la peroxidacin de los lpidos de membrana. Esto aumenta la fragilidad de las membranas, causante de la hemlisis.

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