PROYECTO DE INVESTIGACIN

GENERALIDADES TTULO: 1. PERSONAL INVESTIGADOR: 1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5. Nombres y Apellidos Departamento Facultad Categora Nmero matrcula : : Ciencias Agroindustriales : Ciencias Agropecuarias : Bachiller (o exalumno) :

2. ASESOR: 2.1. Apellidos y Nombres 2.2. Facultad 2.3. Escuela

: : :

Ciencias Agropecuarias Ingeniera Agroindustrial

3. TIPO DE INVESTIGACIN: 5.1. De acuerdo a la orientacin 5.2. De acuerdo a la tcnica de contratacin 4. RGIMEN DE INVESTIGACIN: Libre

: Aplicada (o Bsica). : Experimental (o Descriptiva).

5. INSTITUCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO: Escuela de Ingeniera Agroindustrial de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de Trujillo. 6. LOCALIDAD E INSTITUCIN DONDE SE EJECUTAR EL PROYECTO: 8.1 Institucin : UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO Ubicacin: Ciudad Universitaria Av. Juan pablo II s/n, Trujillo, Per.

7. CRONOGRAMA DE EJECUCIN DEL PROYECTO:

ETAPAS MESES 1 X 2 X X 3 X X X X X X X 4 5

Recoleccin y revisin de informacin Formulacin y sustentacin del proyecto Pruebas experimentales (o Revisin Bibliogrfica) Evaluacin e interpretacin de resultados Redaccin y correccin del informe Presentacin y sustentacin

8.

DURACIN FECHA DE INICIO FECHA DE TRMINO

: (en meses) : :

9.

HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO: a. Semanas : b. Horas/Semana : c. Total de horas : RECURSOS

10.

10.1

Personal: Autor Asesor : :

10.2

Locales : Laboratorio Multifuncional, Laboratorio de Tecnologa de los Productos Agroindustriales de la Facultad de Ciencias Agropecuarias de la Universidad Nacional de Trujillo

10.3

Materiales y Equipos Materiales: Equipos:

11.

PRESUPUESTO:

(Organizar en una tabla, clasificador de gastos pblicos del congreso) 12. FINANCIAMIENTO:

Propio

PLAN DE INVESTIGACIN
I. MARCO TEORICO CONCEPTUAL

(Incluir estudios previos respecto al tema derivados de artculos de investigacin o tesis) II. JUSTIFICACIN (Justificar el estudio que se est proponiendo, usando referencias bibliogrficas) III. PROBLEMA (Redactado como pregunta) IV. HIPTESIS (Solucin tentativa al proyecto-Implcita en el caso de trabajos descriptivos) V. OBJETIVO GENERAL (y/o especficos) VI. MATERIALES Y METODOLOGA 3.1. Materiales

3.1.1. Materias Primas Se debe incluir el nombre cientfico y el lugar de procedencia (si fuera el caso) de la materia prima. 3.1.2. Material Biolgico 3.1.3. Material de Vidrio 3.1.4. Equipos 3.1.5. Reactivos 3.1.6. Otros (Utensilios, menaje, tiles de escritorio, etc.)

3.2.

Metodologa

3.2.1. Esquema experimental 3.2.2. Descripcin de Procesos Flujogramas de produccin Marchas analticas resumidas y referenciadas en los anexos en su totalidad. 3.2.3. Diseo experimental y anlisis estadstico Diseo del experimento Anlisis Estadstico
Ejemplo: La secuencia experimental se muestra en la figura 9.

Arracacha

pH Acidez Contenido de slidos solubles Contenido de humedad

% Almidn

Almidn

Hidrlisis Enzimtica

Temperatura (C) [ ] Sustrato (azcares) [ ] Inculo (S. cerevisiae) pH

Fermentacin

Rendimiento de etanol (g etanol/100 g de almidn)

Lmites de las variables Temperatura : 24-33C [ ] Sustrato :4-14% [ ] Inculo :2-8% pH :3.5-5.5

Bioetanol

Densidad Grado alcohlico

Figura 9. Esquema experimental para optimizar el Rendimiento de Bioetanol de Arracacha morada (Arracada xanthorrhiza).

3.1.1. Descripcin de Procesos

Flujogramas de produccin El flujograma debe ir titulado como una figura y luego cada operacin ser descrita. Marchas analticas resumidas y referenciadas en los anexos en su totalidad.
Ejemplo: 3.1.2. 3.1.3. Obtencin de Almidn de arracacha (Arracada xanthorrhiza) La extraccin de almidn de arracacha morada se realiz siguiendo el diagrama de flujo que se muestra en la figura 10. - Materia Prima Las races de arracacha morada fueron procedentes del Casero de Coipn, Distrito de Sanagorn, Provincia de Snchez Carrin. - Seleccin y Clasificacin Se procedi a hacer una seleccin y clasificacin de las races, esto se realiz teniendo en cuenta lo siguiente: Color, caracterstico, siendo ste un morado fuerte Textura: lisa y firme sin arrugas en la superficie de la raz Grado de madurez de la planta: entre 11 y 12 meses Tamao de la raz: entre 15 y 25 cm de longitud y un dimetro entre 5 y 8 cm de grosor. Eliminando aquellas que no cumplan con stas condiciones requeridas para nuestro proceso. La arracacha, tambin fue pesada con el objeto de determinar su rendimiento en almidn. - Lavado y Desinfeccin Las races de arracacha fueron lavadas para eliminar impurezas y residuos de tierra, utilizando agua muy limpia y usando desinfectante (cloro al 0.05%) para eliminar algunos microorganismos que estas hubiesen tenido durante su manejo pos cosecha y transporte. - Raspado o molienda Seguidamente las races de arracacha fueron sometidas a un rallado mecnico para convertirlo en una pasta fina (crema). - Dilucin La pasta obtenida del rallado se diluy en agua destilada en una proporcin de 1:2. Descripcin de Procesos

Figura 10. Diagrama de Flujo del proceso de obtencin de almidn de arracacha. Se procedi a pasar la solucin a travs de un tamiz para retener los fragmentos de fibra y de esta manera obtener un producto que contenga slo almidn y agua. Lavado

La fibra separada fue lavada tres veces con el objeto de recuperar pequeas cantidades de almidn que se hubiesen podido quedar en ella. Sedimentado La lechada obtenida fue sedimentada en un depsito (de acero) con la finalidad de obtener almidn, el cual por gravedad cay al fondo del depsito formando una masa slida y compacta de color blanco, para que despus de 2 horas se proceda a separarla del agua que se encuentra en la parte superior del depsito. Secado El almidn hmedo obtenido de la etapa anterior, se procedi a secarlo a una temperatura de 50 C por un tiempo de 6 horas, con la finalidad de obtener un almidn con poca humedad final (de 8 a 10%). Molienda El almidn seco pas a un proceso de molienda (en un molino mecnico), para uniformizar los granulos y dejar una harina suave. Tamizado Luego el almidn se tamiz (tamiz de malla N 100) con la finalidad de eliminar residuos de fibra y obtener un producto de caractersticas homogneas. Envasado Finalmente el almidn se pes y luego se envas en un frasco de vidrio estril, a fin de evitar la contaminacin por agentes fsicos, qumicos y microbiolgicos, quedando listo para su posterior uso. 3.2.3 Proceso de Obtencin de Bioetanol La obtencin del Bioetanol para el presente trabajo se realiz siguiendo el proceso que se detalla a continuacin y en la figura 11.

Figura 11. Diagrama del Proceso de obtencin de Bioetanol.

Hidrlisis Enzimtica El almidn de arracacha fue diluido con agua destilada a una concentracin de 15 % (p/v) de almidn en el biorreactor de tanque agitado utilizado para la etapa de hidrlisis (Figura 12), el cual tenia una capacidad de 1.5 litros; posteriormente, el almidn se llev a ebullicin (95C) para gelatinizar los granulos de almidn; el gelatinizado se enfri a 90C, estando ste a un pH de 7.0 se aadi la enzima a-amilasa (BIALFA T), adems se le agreg iones de Ca++ en cantidades de 400 mg/L para activar el funcionamiento de dicha enzima, luego se dejo que la enzima trabaje a estas condiciones durante 60 minutos. Una vez terminada esta primera fase de la hidrlisis, se pas al proceso de sacarificacin utilizando la enzima glucoamilasa (GLUCOZYME), la cual trabaj a una temperatura de 55 C y un pH de 4.5 el mismo que fue ajustado utilizando HCl 1.0 N, teniendo estas condiciones se controlo para esta enzima un tiempo de hidrlisis de 48 horas. Luego de todo esto se da por finalizada la etapa de hidrlisis.

Figura 12. Esquema del equipo experimental utilizado para la hidrlisis enzimtica. Inactivacin de Enzimas El hidrolizado obtenido fue sometido nuevamente a ebullicin por espacio de 5 minutos para poder inactivar las enzimas presentes en el medio. Fermentacin Alcohlica Se realiz esta etapa segn los rangos de las variables de concentracin de inoculo (Saccharomyces Cerevisiae CECT 1319), concentracin de sustrato (glucosa), pH y temperatura de fermentacin, establecidos para nuestro estudio (figura 09). Las muestras preparadas para la fermentacin alcohlica se llevaron a cabo en matraces de vidrio como reactores con una capacidad de 500 mL de la cual se us solamente 300 mL de muestra (<75% de su

capacidad), las muestras se fermentaron sin agitacin (estticos). Se coloc dentro de un ambiente donde podamos controlar la temperatura de fermentacin; las cuales consistan en unas estufas de programacin automtica que trabajan con una temperatura mnima de 20 C y que adems de esto cuentan con ventilacin para mantener temperaturas menores a la temperatura ambiente (Figura 13). El tiempo de fermentacin alcohlica para todas las muestras de nuestro experimento fue de 48 horas, debido a que al transcurrido este tiempo ya no hubo burbujeo dentro de las muestras (liberacin de CO 2), esto quiere decir que tampoco hubo consumo de sustrato (glucosa).

Figura 13. Esquema del equipo experimental utilizado para la fermentacin alcohlica. Destilacin Luego se procedi a la destilacin de la solucin para recuperar el alcohol producido durante la fermentacin, mediante un destilador simple (Figura 14); aprovechando que el etanol tiene un punto de ebullicin menor (78.3C) que el agua (100C), la mezcla se calent hasta que el alcohol empez subir a la parte superior del destilador, donde lo esperaba el condensador que vuelve a enfriar a la solucin para luego terminar esta en una perilla de recojo. Luego medimos el volumen del destilado, su densidad, el grado alcohlico del destilado y el rendimiento final de cada una de las muestras.

Figura 14. Esquema del equipo experimental utilizado para la destilacin. 3.2.4 Anlisis Fsico-Qumicos

3.2.4.1 En la raz de arracacha La caracterizacin de la arracacha que sirvi de materia prima para la obtencin del Bioetanol (Ver anexos del 11 al 19), comprendi la determinacin de los siguientes parmetros: - Determinacin de humedad y materia seca - Determinacin de carbohidratos - Determinacin de almidn - Determinacin de protenas - Determinacin de grasa - Determinacin de cenizas - Determinacin de fibra cruda - Determinacin de azucares solubles totales - Determinacin del valor calrico Adems de ello se realizaron otros anlisis fisicoqumicos (ver anexo del 21 al 23), tales como: - Contenido en slidos solubles (Brix) del jugo de la raz de arracacha morada. - Determinacin del pH del jugo de la raz de arracacha morada. - Determinacin de Acidez del jugo de la raz de arracacha morada. - Temperatura de gelatinizacin del almidn de arracacha morada. 3.2.4.2. En el producto final (Bioetanol) Una vez obtenido el producto final (Bioetanol), se procedi a realizar algunos anlisis fisicoqumicos (ver anexos 24 y 25): - Densidad. - Grado alcohlico. - Rendimiento alcohlico. Ejemplo: Diseo Experimental Se trabaj con un Diseo Experimental para cuatro (4) variables independientes, en dos (2) etapas: Screening y Optimizacin final (Figura 15).

Figura 15. Esquema resumido del diseo experimental. 3.2.5.1 Primera Etapa (Screening)

Se utiliz un DCCR fraccionado de 24-1 con 4 puntos centrales. Es un planeamiento que nos ofreci informacin en cuanto a la importancia de los efectos sobre la respuesta y si el intervalo o rango escogido del estudio fue el ms adecuada, y an, en qu direccin debimos seguir el prximo planeamiento. La tabla 6 presenta los niveles y los correspondientes valores superiores e inferiores originales utilizados en el planeamiento 24-1. Tabla 6. Valores superiores e inferiores de las variables independientes utilizadas para la primera etapa.

Nivel Concen tracin de Inoculo (%) Concen tracin de Sustrato (%) pH Temper atura (C)

-1 2

0 5

+1 8

14

3.5 24

4.5 28.5

5.5 33

Esta estrategia nos permiti reducir el nmero de ensayos que hubiese sido necesario en un DCCR (Diseo Compuesto Central - Rotacional) completo. Esta opcin es muy importante pues nos permiti evaluar los efectos de las variables principales con la misma seguridad en relacin a un planeamiento compuesto con los 16 ensayos. En la tabla 7 se presenta el diseo factorial 24-1 para la variable respuesta. Tabla 7. Valores codificados para la variable respuesta (Rendimiento de Bioetanol).

C oncentr acin de inculo (%) E n s a y o C d i g o R e a l C d i g o

C oncentr acin de sustrato (%) R e a l C d i g o R e a l C d i g o R e a l g eta nol / 10 H p T emperat ura en di mi ent o

0g al 1 + 1 1 + 1 1 + 1 1 + 1 1 1 + 1 + 1 1 1 + 1 + 1 1 1 1 1 + 1 + 1 + 1 + 1 3 . 5 3 . 5 3 . 5 3 . 5 5 . 5 5 . 5 5 . 5 5 . 5 4 9 0 5 0 9 0 . 5 1 0 5 0 9 0 . 4 0 0 mi 1 + 1 + 1 1 + 1 1 1 + 1 2 4 3 3 3 3 2 4 3 3 2 4 2 4 3 3 2 8 . 5 2 8

1 4 1 4

1 4 1 4

5 4 0 5 0 9 0 . 5 4 0 5 0 9 0 . 5 0 0

. 5 2 8 . 5 2 8 . 5

1 1

1 2

Los valores reales de las variables independientes (Concentracin de Inculo, oncentracin de Sustrato, pH y Temperatura) y los resultados de la respuesta (Rendimiento de Bioetanol) se ingresaron al programa estadstico STATISTICA 6.0 para ver los efectos de cada variable en la respuesta, se analiz el valor-p "significancia" (Tabla 8). Tabla .8 Anlisis de los efectos de las variables.

E f. Media [ ] de Inoculo [ ] de Sustrato pH Temp eratura (C) .E.

p C95%

L C+ 95%

Este anlisis permiti definir las variables que tienen efecto significativo sobre el rendimiento de bioetanol. 3.2.5.2 Segunda Etapa (Optimizacin Final) Para buscar optimizar el rendimiento de Bioetanol en funcin de las variables significativas de la primera etapa, se utiliz un Diseo Compuesto Central Rotable (DCCR) 2 k, incluido 2xk puntos xiales y un nmero arbitrario de puntos centrales (4 en este trabajo), donde k es el nmero de variables (Tabla 9). Tabla 9. Valores de a (cdigo del axial) segn el nmero de variables.

Donde:

A. Niveles de las variables significativas del proceso y respuesta En la tabla 10 se muestran los niveles de las variables independientes que salieron significativas en la primera etapa (Concentracin de Inculo y temperatura) y que fueron utilizadas en el segundo planeamiento experimental. Segn Rodrguez y lemma (2005), la mejor alternativa para dos variables es un Delineamiento Compuesto Central Rotacional (DCCR) y siguiendo la metodologa de superficie de respuesta. Tabla 10. Valores utilizados en DCCR para dos factores.

As fue realizado un factorial completo de 2 2, ms 4 puntos axiales y 4 repeticiones en el punto central, haciendo un total de 12 ensayos (Tabla 11).

Tabla 11. Valores codificados y reales para la variable respuesta (Rendimiento de Bioetanol).

3.2.6 Anlisis Estadstico 3.2.6.1. Anlisis Estadstico mediante el software STATISTICA 6.0 Los valores reales de las variables independientes ms significativas (Concentracin de Inoculo y Temperatura) y los resultados de la respuesta (Rendimiento de Bioetanol) se ingresaron al programa estadstico y se analizaron los parmetros requeridos para esta investigacin. 3.2.6.2 Anlisis de Correlacin Con los resultados (Ys) de la Segunda Etapa y utilizando el software STATISTICA 6.0, se determinaron los coeficientes de regresin identificando los parmetros significativos, con lo que se elabor un modelo polinmco. 3.2.6.3 Anlisis de Varianza Luego se realiz un ANVA (Tabla 12) para verificar si el modelo es significativo (p<0.05) y el R 2. La significancia del modelo y valores R 2 1 indicaron la concordancia entre los valores experimentales y previstos para el modelo. Tabla 12. ANVA para la respuesta Y1.

Finalmente se construyeron superficies de respuesta para definir las regiones de inters y buscar el mximo del rendimiento de bioetanol de almidn de arracacha morada. 3.2.7 Confirmacin Experimental de la Condiciones Optimizadas Se realiz una corrida experimental con valores ptimos de las variables de fermentacin para comprobar que tan lejos o cerca se encuentran de los valores reales.

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS Ejemplos de cmo referenciar: Revistas y Journals Sokal, R., Oslo, J., Gonzales, A., Vargas, C. (2003). Effect of several methods in osmodehydratation of asparagus. Journal of Science and Techology 134: 26-30. Libros Fellows, P. (1994). Tecnologa del procesado de los Alimentos. Principios y Prcticas. Editorial Acribia S.A. Zaragoza, Espaa. Pginas Web OBrien, T.; Daz, A. (2004). El ejemplo del esprrago Peruano. Inter-American Institute for Cooperation on Agriculture IICA y Comisin para la Promocin de Exportaciones PROMPEX. Disponible en: http://infoagro.net/shared/docs/a3/esparrago_peru.pdf. (Accesado dd/mm/aa) ANEXOS Todos los anexos colocados deben estar citados en el cuerpo del informe.

Definiciones de trminos usados Marchas analticas completas Datos de resultados muy extensos que ya se resumieron en el captulo de resultados y discusiones. Material fotogrfico Otros