TCNICAS PARA VISUALIZACIN DE CROMOSOMAS.

El bandeo cromosmico consiste en someter los cromosomas a desnaturalizacin, digestin enzimtica o ambos, seguido de la incorporacin de un colorante especfico de DNA, que origina que los cromosomas se tian como una serie de bandas claras y obscuras. Las tcnicas ms comunes son: BANDAS G Mtodo ms comn. Primero se tratan los cromosomas con tripsina y luego se tien con la tcnica de Giemsa, obtenindose el patrn caracterstico de bandas claras y oscuras que distinguen zonas de DNA con alto contenido de pares de bases de adenina timina (A-T). BANDAS Q. Tincin con mostaza de quinacrina. Las preparaciones se ven con microscopia de fluorescencia. Los

cromosomas se tien con un patrn especfico de bandas brillantes y oscuras. Las bandas Q brillantes se corresponden casi exactamente con las Bandas G oscuras. Las Bandas Q, as como las Bandas C, son particularmente tiles para detectar variantes ocasionales de la morfologa o la tincin de los cromosomas denominadas heteromorfismos. Estas variantes son generalmente benignas y reflejan diferencias en la cantidad o el tipo de secuencia de DNA satlite en una determinada localizacin del cromosoma. BANDAS R. Los cromosomas reciben un tratamiento con calor antes de la tincin, las bandas oscuras y claras resultantes son las inversas de la obtenidas mediante el mtodo de bandas G o Q, ya que las bandas R ofrecen un patrn ms fcil de analizar cuando se examinan

regiones que se tien mal con otros mtodos BANDAS C

Esta tcnica tie especficamente la regin centromrica de cada cromosoma y otras regiones que contienen heterocromatina constitutiva, es decir, las secciones de los cromosomas 1q, 9q, 16q, adyacentes al centrmero y la parte distal de Yq. La heterocromatina es el tipo de cromatina que permanece en el estado condensado y que se tie de oscuro en las clulas en metafase. BANDAS T Identifican un subgrupo de bandas concentradas sobre todo en los telmeros. se tien de modo ms intenso y se observan mediante tratamiento de calor intenso al cromosoma, antes de teirlo con Giemsa o con una combinacin de colorante y fluorocromos.

 SITIOS FRGILES Son zonas que no se tien y que ocasionalmente se observan en determinadas localizaciones de varios cromosomas. Para visualizar estos sitios suelen ser necesarios exponer las clulas a condiciones de crecimiento o qumicos que alteran o inhiben la sntesis de DNA. La deteccin del sitio frgil en el cromosoma X es un mtodo diagnstico especfico para el sndrome del cromosoma X frgil. Bandas de cariotipo convencional La obtencin de este tipo de bandas se realiza en cromosomas metafsicos, aunque tambin se puede realizar en cromosomas prometafsicos, incluso en profsicos. El cromosoma metafsico est condensado y el cariotipo humano en haploide presenta unas 400 bandas, mientras que en prometafase

podemos ver hasta 2000 bandas porque es un cromosoma ms largo.

Bandeo de alta resolucin. Tcnica basada en la tincin de los cromosomas en profase o prometafase, incrementando as el nmero de bandas visibles al microscopio. El bandeo tpico suele oscilar entre 400 500 bases por cariotipo, aunque pueden ser desde 1 par de bases a miles de bases. Las clulas se pueden obtener de un cultivo de linfocitos sincronizado mediante el agregado de los reactivos 5'-fluoro-2'-desoxiuridina y 5'-bromo-2'-desoxiuridina con lo que se obtiene una elongacin de los cromosomas y as detectar alteraciones estructurales como microdeleciones y translocaciones. Importante: pueden existir falsos negativos debido a deleciones muy pequeas. Cualquier delecin que se sospeche citogenticamente debe ser confirmada por FISH u otra tcnica citogentica.

Bandas que tien solo determinados puntos del cromosoma Bandas C: solo heterocromatina: tien la

Centrmeros. Zonas heterocromatnicas de los cromosomas 1, 9, 16, de los brazos cortos de los cromosomas acrocntricos (13, 14, 15, 21 y 22) as como de gonosoma Y.

Bandas NOR, que tien los satlites de los cromosomas acrocntricos. Bandas T, que marcan los telmeros para ver si falta alguno.