Prctica No. 3.

Preparacin de medios de cultivo Objetivos: Identificar las caractersticas de los medios de cultivo para su preparacin y uso Aplicar el mtodo de esterilizacin por calor hmedo para la preparacin de los medios de cultivo. INTRODUCCIN Un medio de cultivo es un sustrato que proporciona los nutrientes necesarios para el desarrollo del microorganismo a probar. Los microorganismos presentan grandes diferencias en sus requerimientos nutricionales que son reflejo de la extrema diversidad bioqumica y fisiolgica; el agua, sales inorgnicas, fuentes de carbono y fuentes de nitrgeno, son necesarios a todos. Un medio de cultivo debe reunir las siguientes condiciones: El medio de cultivo debe contener nutrientes necesarios adecuados para el microorganismo Contener humedad suficiente Poseer un pH especfico Ser estril inicialmente Revisar la Norma NMX-AA-065-SSA Marco terico Para estudiar debidamente los microorganismos se necesita como requisito previo el cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para lograr eso es preciso cuales son los nutrientes y las condiciones fsicas que requieren mediante investigaciones extensas se ha determinado las necesidades nutricionales de las bacterias, y esta informacin ha sido la causa del desarrollo de numerosos medios de cultivo. Ya que las necesidades nutricionales de las bacterias varan de manera muy amplia, existen diferencias muy importantes en cuanto a la composicin de los medios empleados. Las bacterias tambin tienen diferencias notables o que respecta a las condiciones del ambiente que favorece su proliferacin. Por ejemplo algunas bacterias prosperan bajo 0C, otras necesitan temperaturas superiores a 45C y pueden reproducirse aun a 70 C. Algunas necesitan atmosfera de oxgeno, en cambio otras se inhiben con el oxgeno o bien este elemento les es indiferente. Necesidades nutricionales Desde los hombres hasta los microorganismos, todas las formas de vida, tienen en comn determinadas necesidades nutricionales en trminos de necesidad qumica para llevar acabo su crecimiento y sus funciones normales. Preparacin de los medios E la preparacin de medios de cultivo se debe de seguir los siguientes pasos. 1. Cada ingrediente, o medio deshidratado completo, se debe disolver en un volumen adecuado de agua destilada. 2. Se determinara el PH del medio y si se es necesario de ajustar. El PH se determina por medio de indicadores o potencimetros. 3. El medio se pondr en recipientes adecuados, como, tubos, matreces,botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodn, plstico o cubiertas de metal. 4. Los medios de esterilizan generalmente en autoclaves.

Los medios se clasifican dependiendo de las exigencias en las que se cultivara los microorganismos. Medios enriquecidos: la adicin de componentes como sangre, suero o extractos de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar, les proporciona sustancias nutritivas complementarias para que el medio pueda soportar el crecimiento de los hetertrofos exigentes. Medios selectivos: la adicin al agar nutritivo de ciertas sustancias qumicas especficas, no permitir el desarrollo de un grupo de bacterias, sin inhibir al mismo tiempo el crecimiento de otros grupos. Medios diferenciales: la adicin de ciertos reactivos o sustancias qumicas a los medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento bacteriano o de cambios, despus de la siembra e incubacin del medio, lo cual permite al observador diferenciar distintos tipos de bacterias. Medios de prueba: para el ensayo de vitaminas, aminocidos, antibiticos, se utilizan medios de cultivo de composicin conocida. As mismo, recurre a medios de composicin especial para probar desinfectantes. Medios para cuarentena de bacterias: para determinar el contenido bacteriano de sustancias tales como la leche y el agua, se emplean ciertos tipos especficos de medio de cultivo. Se debe de sealar su frmula, as como las especificaciones prescritas. Medio para caracterizar bacterias: para determinar el tipo de crecimiento producido por los organismos, as como la capacidad de las bacterias para producir cambios qumicos, se utilizan de manera convencional una amplia variedad de medios de cultivo. Medios de mantenimiento: para preservar satisfactoriamente las caractersticas fisiolgicas y la viabilidad de un cultivo. El crecimiento rpido y prolfico suele ocasionar la muerte rpida de las clulas, por esta razn se suprime el uso de la glucosa. MATERIALES Y REACTIVOS. Materiales de laboratorio Reactivos 1 mechero Agar MacConkey 1 Matraz Erlenmeyer de 500 ml Agar verde brillante 1 agitador Agar Eosina azul de metileno Agar Dextrosa Sabouraud Agar ss Agar infusin cerebro corazn 1 Probeta de 250 ml Agua destilada 1 Vaso de precipitados de 500 ml Material individual 15 campanas Durham Cuaderno de laboratorio 10 Cajas de Petri estriles desechables Cubrebocas 1 Esptula Guantes de ltex estriles 15 Tubos de ensaye 18 x150 mm tapn de rosca 1 Gradilla Material por equipo 2 Pipetas de 1 ml Franela 2 Pipetas 10 ml Marcador indeleble punta delgada

Equipo de laboratorio Refrigerador 1 Balanza granataria Autoclave Estufa para incubacin 1 parrilla METODOLOGA

Masking Tape o cinta testigo Papel manila Algodn, suficiente para tapones para medios de cultivo 1 Frasco o bote forrado con papel Manila capacidad 1000 ml

Procedimiento Las formas de preparacin de los medios de cultivo vienen indicadas en cada etiqueta y dependen del fabricante. La tcnica a emplear es la siguiente: 1. Utilizar un recipiente de volumen dos veces mayor al que se prepara 2. Colocar la mitad del volumen total de agua destilada en el recipiente en que se va a preparar el medio de cultivo 3. Pesar cada uno de los medios. Cada vez que se pese un reactivo lavar la esptula para evitar la contaminacin de los medios de cultivo 4. Adicionar el medio de cultivo en el matraz correspondiente y disolverlo 5. Adicionar la otra mitad del agua, procurando bajar el agar que queda adherido en la pared del matraz, y homogeneizar el contenido 6. Calentar el medio de cultivo para lograr su completa disolucin con agitacin constante (si as lo indica la casa comercial), esto evita que el agar se queme. Se debe evitar el calentamiento prolongado 7. El medio est listo cuando se observa transparente, sin grumos de agar 8. Colocar un tapn de algodn y cubrirlo con papel manila correctamente doblado 9. Etiquetar el medio de cultivo cuidando de no pegar el masking tape sobre el vidrio 10. Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presin (121 C) a. Verificar la limpieza del autoclave, si no se encuentra limpia asegurarse de que est desconectada y lavarla con agua y jabn y enjuagar con agua destilada b. Agregar agua destilada en el autoclave hasta el nivel indicado c. Colocar el material a esterilizar dentro del autoclave, el autoclave no debe llenarse a ms de sus tres cuartas partes d. Cerrar el autoclave e iniciar el proceso de esterilizacin e. Observar el funcionamiento del autoclave y hacer las anotaciones correspondientes 11. Concluido el tiempo de esterilizacin, sacar cuidadosamente los medios de cultivo dejndolos enfriar a una temperatura de aproximadamente 45 C 12. Preparar el rea estril y verter los medios, dejar gelificar y someter a prueba de esterilidad por 24 horas a 37 C 13. Concluido el tiempo de prueba de esterilidad, si los medios cumplen el requisito, guardarlos en bolsas de plstico limpias y refrigerar hasta la realizacin de la siguiente prctica, si la prueba result negativa, desechar los medios: 14. Los medios que resultaron contaminados se meten a esterilizar antes de su desecho (NOM-087-ECOL-SSA1-2002. Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos Peligrosos Biolgico Infecciosos. Clasificacin y especificaciones de manejo)

15. Una vez inactivados, se entregaran al responsable del laboratorio para continuar con el proceso de desecho 16. Resultados AGAR DE INFUCION DE CEREBRO CORAZN Requisitos de la norma NOM-065-SSA1-1993

Uso Adecuado para el cultivo de microorganismos exigentes entre los cuales se encuentran diversos tipos de bacterias, hongos y levaduras. Mtodo de preparacin: Suspender 52g del polvo en un litro de agua purificada. Mezclar perfectamente. Calentar agitando con frecuencia y hervir durante un minuto. Esterilizar a 121C por 15 minutos. En ocasiones se forma un ligero sedimento el cual debe ser distribuido a travs del medio por agitacin. Determinar la funcionalidad del medio de cultivo con microorganismos tpicos. Infusin de cerero corazn Peptona de carne Peptona de casena Cloruro de sodio Dextrosa Fosfato disdico Agar PH 8.0g 5.0g 16.0g 5.0g 2.0g 2.5g 13.5g 7.4 + 0.2

Funcin de los componentes del medio de cultivo Componentes del medio de cultivo Infusin de cerero corazn Peptona de carne Peptona de casena Cloruro de sodio Dextrosa Fosfato disdico Agar Funcin Fuete de protena Fuente de nitrgeno y protena Fuente de nitrgeno y protena Regula la presin osmtica de la pared celular Fuete de energa por carbono Agente regulador de PH Agente gelificante

Clculos: (Volumen de 1 placa: 35 ml)*(13 cajas a preparar)= 455 ml 455ml+10 ml= 465 ml 100 ml 52g 465 ml-- X X=24.18g de medio de agar infusin de cerebro corazn. Nota: Este fue el agar que a mi equipo le toc preparar. Comparacin con la norma Especificaciones Criterio Contenido de humedad Composicin del medio. Mtodo de preparacin. Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados. Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. pH del medio preparado. Etiquetado Criterio Nombre comercial del producto. Uso La leyenda "Agente de Diagnstico". Presentacin. Datos de conservacin y almacenaje. Fecha de caducidad. Nmero de lote. Nmero de Registro SSA. Nombre y domicilio del fabricante. Nombre y domicilio del distribuidor. Mtodo de preparacin y pH final. Frmula. Si X X X X N/A X X X X X No

Si X X X X X X X X X X X

No

Agar verde brillante Mtodo selectivo para el aislamiento de salmonella excepto. Mtodo de preparacin Rehidratar 58 g del medio en un litro de agua destilada calentar y agitar frecuentemente hasta el punto de ebullicin esterilizar a 121 c (15 libras de presin ) durante 15 min y distribuir en cajas Petri. Extracto de levadura Mezcla de peptonas Cloruro de sodio Lactosa peptona especial rojo de fenol Sacarosa verde brillante Agar Ph 3.0g 10.00g 5.0g 10.0g 10.0g 0.08g 10.0 g 0.0125g 20.00g 6.9+- 0.2

Funcin de los componentes del medio de cultivo Componentes del medio de cultivo Tracto de levadura Mezcla de peptonas Cloruro de sodio Lactosa peptona especial rojo de fenol Sacarosa verde brillante Agar Comparacin con la norma Especificaciones Criterio Contenido de humedad Composicin del medio. Mtodo de preparacin. Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. Si X X X X X No X Funcin Fuente de nitrgeno y protenas Regula la presin osmtica de la pared celular Fuente de carbono e indicador de bacterias fermentadoras de lactosa. Fuete de nitrgeno y protenas En medio cido el medio se colora de amarillo y en medio alcalino, este se torna rojo. Fuente de carbono e indicador de miembros de grupo coliformes Inhibidor de bacterias gram positivo Agente gelificante

Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados. Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. pH del medio preparado. Etiquetado Criterio Nombre comercial del producto. Uso La leyenda "Agente de Diagnstico". Presentacin. Datos de conservacin y almacenaje. Fecha de caducidad. Nmero de lote. Nmero de Registro SSA. Nombre y domicilio del fabricante. Nombre y domicilio del distribuidor. Mtodo de preparacin y pH final. Frmula.

X X X X

Si X X X X X X

No

X X X X X X

BD Bioxon agar dextrosa Sabouraud Mtodo De preparacin: Suspender 65 gr del polvo en 1l de agua purificada mezclar perfectamente, calentar con agitacin frecuente y hervir durante un minuto hasta disolucin. Esterilizar a 121C durante 15min. Uso: Cultivo y conservacin de hongos Agar Dextrosa Peptona de carne Peptona de casena 5.0g PH 15.0g 40. 0g 5.0g 5.0g 5.6 +- 0.2

Funcin de los componentes del medio de cultivo Componentes del medio de cultivo Peptona de carne Peptona de casena Dextrosa Agar Funcin Puente de nitrgeno y protena Puente de nitrgeno y protena Fuete de energa por carbono Agente gelificante

Comparacin con la norma Especificaciones Criterio Contenido de humedad Composicin del medio. Mtodo de preparacin. Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados. Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. pH del medio preparado. Etiquetado Criterio Nombre comercial del producto. Uso La leyenda "Agente de Diagnstico". Presentacin. Datos de conservacin y almacenaje. Fecha de caducidad. Nmero de lote. Nmero de Registro SSA. Nombre y domicilio del fabricante. Nombre y domicilio del distribuidor. Mtodo de preparacin y pH final. Frmula. Si X X X N/A X X X X X No X

Si X X X X X X X X X X

No

AGAR EOSINA Y AZUL DE METILENO (EMB) Mtodo de preparacin: Suspender 36g del polvo en un 1L de agua purificada. Mezclar perfectamente, calentar con agitacin frecuente y hervir durante un minuto hasta disolucin esterilizar a 121C durante 15 minutos USO: Para identificacin y diferenciacin de enterobacterias

Peptona de gelatina Lactosa Sacarosa Fosfato dipotasico Agar Eosina y Azul de metileno PH final

10.0 g 5.0 g 5.0 g 2.0 g 13.5 g 0.4 g 0.065 g 7.2 0.2

Funcin de los componentes del medio de cultivo Componentes del medio de cultivo peptona de gelatina Sacarosa Lactosa Eoisina y azul de metileno Dextrosa Fosfato disdico Agar Comparacin con la norma Especificaciones Criterio Contenido de humedad Composicin del medio. Mtodo de preparacin. Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados. Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. pH del medio preparado. Etiquetado Criterio Nombre comercial del producto. Uso La leyenda "Agente de Diagnstico". Presentacin. Datos de conservacin y almacenaje. Si X X X X N/A X X X X X No Funcin Fuete de nitrgeno y protena Fuente de carbono e indicador del grupo coliformes. Puente de carbono e indicador de bacterias fermentadoras de lactosa Inhibidor de bacterias gram positivas e indicador de gram negativas. Fuete de energa por carbono Agente regulador de PH Agente gelificante

Si X X X X

no

Fecha de caducidad. Nmero de lote. Nmero de Registro SSA. Nombre y domicilio del fabricante. Nombre y domicilio del distribuidor. Mtodo de preparacin y pH final. Frmula. Agar SS Mtodo de preparacin

X X X X X X X

Suspender 60 g en un litro de agua recin destilada o completamente desmineralizada, dejar remojar durante 15 minutos y hervir agitando continuamente hasta su completa disolucin. Cualquier calentamiento posterior del medio debe evitarse. Despus de un enfriamiento rpido y en tanto el medio se conserve lquido vaciar a cajas Petri y dejar solidificar por posterior enfriamiento secar las cajas Petri antes de usarse.

USO: Salmonella y shigella para microbiologa

Extracto de carne Peptona especial Lactosa Bilis de buey Deshidratada Sodio citrado Sodio tiosulfato Hierro (III) citrato Verde brillante Rojo neutro Agar-agar

5.0g 5.0g 10.0g 8.5g 10.0g 8.5g 1.0g 0.0003g 0.025g 12.0g

Funcin de los componentes del medio de cultivo Componentes del medio de cultivo Extracto de carne Peptona especial Lactosa Bilis de buey Deshidratada Sodio citrado Sodio tiosulfato Hierro (III) citrato Funcin Fuete de protena Puente de nitrgeno y protena Fuente de carbono Inhibidor de bacterias gram positivas y evita el efecto swarming permiten la deteccin de la produccin de H2S permiten la deteccin de la produccin de H2S permiten la deteccin de la

Verde brillante Rojo neutro Agar-agar Comparacin con la norma Especificaciones

produccin de H2S Inhibidor de bacterias gram positivas Es un indicador de PH en medio cido el color es rojo y en medio alcalino el color es amarillo. Agente gelidificante

Criterio Contenido de humedad Composicin del medio. Mtodo de preparacin. Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados. Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. pH del medio preparado. Etiquetado Criterio Nombre comercial del producto. Uso La leyenda "Agente de Diagnstico". Presentacin. Datos de conservacin y almacenaje. Fecha de caducidad. Nmero de lote. Nmero de Registro SSA. Nombre y domicilio del fabricante. Nombre y domicilio del distribuidor. Mtodo de preparacin y pH final. Frmula.

Si X X

no X

X X X X X X X

Si X X X X X X X X X X X

no

Agar MacConkey Medio empleado para aislar e identificar enterobacterias y coliformes a partir de heces fecales, orinas, aguas negras y diversos alimentos. Mtodo de preparacin: Suspender 50g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a

121C (15 libras de presin) durante 15 minutos. Enfriar a una temperatura entre 45-50C y vaciar en placas de Petri estriles. Peptona de casena Peptona de gelatina Peptona de carne Lactosa Sales biliares Cloruro de sodio Agar Cristal violeta Rojo neutro PH 1.5 17.0g 1.5g 10.0g 1.5g 5.0g 13.5g 0.001g 0.03g. 7.2+- 0.2

Funcin de los componentes del medio de cultivo Componentes del medio de cultivo Peptona de casena Peptona de gelatina Peptona de carne Lactosa Sales biliares Cloruro de sodio Agar Cristal violeta Rojo neutro Funcin Fuente de nitrgeno y protenas Fuente de nitrgeno y protenas Fuente de protenas Fuete de carbono e indicador de bacterias fermentadoras de lactosa. Inhibidor de bacterias gram positivas Regulador de la presio osmtica de la pared celular agente gelidificante Inhibidor de bacterias gram positivas Indicacior de PH en medio cido el color es rojo y en medio alcalino es amarillo.

Comparacin con la norma Especificaciones Criterio Contenido de humedad Composicin del medio. Mtodo de preparacin. Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados. Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. pH del medio preparado. Si X X X N/A X X X X X no X

Etiquetado Criterio Nombre comercial del producto. Uso La leyenda "Agente de Diagnstico". Presentacin. Datos de conservacin y almacenaje. Fecha de caducidad. Nmero de lote. Nmero de Registro SSA. Nombre y domicilio del fabricante. Nombre y domicilio del distribuidor. Mtodo de preparacin y pH final. Frmula.

Si X X X X X X X X X X

no

Prueba de esterilidad No se cumpli por completo ya que de trece placas que vertimos, cuatro no pasaron pruebas de esterilidad, y se dejaron a temperatura ambiente para corroborar que los medios fueron contaminados por una mala tcnica o mala manipulacin del medio de cultivo al momento de verter en las cajas Petri. Anlisis de los resultados. La prueba de esterilidad en algunas placas no se pudo llevar a cabo con xito, debido que en el momento de verter el medio a las cajas, el mechero se apag, pero tambin los factores que pudieron afectar an ms fue que todos los compaeros hablaban mucho y la puerta se abri en varias ocasiones durante el vertido, ocasionando corrientes de aire, adems de que se formaron rpidamente grumos de agar, esto fue debido a que no calentamos correctamente el medio de cultivo. Cuestionario: 1. Qu es un medio de cultivo y para qu sirve? Es una mezcla de diferentes nutrientes capaces de dar lugar al crecimiento de bacterias y hongos. 2. Cules son las condiciones que debe reunir un medio de cultivo? Una consistencia adecuada ya sea para un medio slido, semislido o lquido, temperatura, luz, control del PH mediante los buffers contenidos en el medio, esterilidad del medio y condiciones de humedad. 3. Escribe el nombre de 5 nutrientes de un medio y explica su funcin. a) Lactosa.- fuente de carbono e indicador de bacterias fermentadoras de lactosa. b) Sacarosa.- Fuente de carbono e indicador de miembros de grupo coliformes. c) Peptona de casena.- fuente de nitrgeno. d) Peptona de carne.- fuente de nitrgeno y protenas. e) Extracto de carne.- fuete de protenas.

4. Investiga y obtn una copia de la NOM-065-SSA1-1993, QUE ESTABLECE LAS ESPECIFICACIONES SANITARIAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO. GENERALIDADES. 02-27-95 NORMA Oficial Mexicana NOM-065-SSA1-1993, Que establece las especificaciones sanitarias de los medios de cultivo. Generalidades. Al margen un sello con el Escudo Nacional, que dice: Estados Unidos Mexicanos.- Secretara de Salud. LUIS MOUREY VALDES, Director General de Control de Insumos para la Salud, por acuerdo del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, con fundamento en los artculos 39 de la Ley Orgnica de la Administracin Pblica Federal; 38 fraccin II, 45, 46 fraccin II, 47 de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin; 8o. fraccin IV y 12 fraccin II del Reglamento Interior de la Secretara de Salud. CONSIDERANDO Que con fecha 15 de diciembre de 1993, en cumplimiento de lo previsto en el artculo 46 fraccin I de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, la Direccin General de Control de Insumos para la Salud present al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario el anteproyecto de la presente Norma Oficial Mexicana. Que con fecha 20 de abril de 1994, en cumplimiento del acuerdo del Comit y de lo previsto en el artculo 47 fraccin I de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin, se public en el Diario Oficial de la Federacin el proyecto de la presente Norma Oficial Mexicana, a efecto de que dentro de los siguientes noventa das naturales posteriores a dicha publicacin, los interesados presentaran sus comentarios al Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario. Las respuestas a los comentarios recibidos por el mencionado Comit fueron publicadas previamente a la expedicin de esta Norma en el Diario Oficial de la Federacin, en los trminos del artculo 47 fraccin III de la Ley Federal sobre Metrologa y Normalizacin. Que en atencin a las anteriores consideraciones, contando con la aprobacin del Comit Consultivo Nacional de Normalizacin de Regulacin y Fomento Sanitario, se expide la siguiente: NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-065-SSA1-1993, QUE ESTABLECE LAS ESPECIFICACIONES SANITARIAS DE LOS MEDIOS DE CULTIVO. GENERALIDADES. INDICE PREFACIO 1. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACION 2. REFERENCIAS 3. DEFINICIONES, SIMBOLOS Y ABREVIATURAS 4. CLASIFICACION 5. ESPECIFICACIONES 6. MUESTREO

7. METODOS DE PRUEBA 8. ETIQUETADO 9. CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES 10. OBSERVANCIA DE ESTA NORMA 11. VIGENCIA Prefacio Participaron en la elaboracin de esta Norma Oficial Mexicana: Direccin General de Control de Insumos para la Salud de la Secretara de Salud, Instituto Mexicano del Seguro Social, Cmara Nacional de la Industria Farmacutica (CANIFARMA): Seccin de Productos Auxiliares para la Salud, y las siguientes empresas: Merck Mxico, S.A., Becton Dickinson, S.A. de C.V., Anachem, S.A. de C.V., Alfonso Marx, S.A. de C.V., Dibico, S.A. de C.V. 1. Objetivo y campo de aplicacin 1.1 Objetivo. Esta Norma tiene por objeto determinar las especificaciones mnimas que deben tener los medios de cultivo para microorganismos en general. 1.2 Campo de aplicacin. Esta Norma es de observancia obligatoria en todas las industrias, laboratorios y establecimientos dedicados al proceso de estos productos en el territorio nacional. 2. Referencias La presente Norma se complementa con las siguientes normas oficiales mexicanas: NOM Z-13 "Gua para la redaccin, estructuracin y presentacin de las Normas Oficiales Mexicanas". NOM-008-SCFI-93 "Sistema General de Unidades de Medida". 3. Definiciones, smbolos y abreviaturas 3.1 Definiciones. 3.1.1 Medio de cultivo es el material nutritivo en el que se pueden recuperar, multiplicar y aislar los microorganismos, as como efectuar pruebas de susceptibilidad. 3.1.1.1 Generalmente se presenta desecado en forma de polvo fino o granular. 3.1.1.2 Puede presentarse tambin hidratado y preparado. 3.1.2 Se entiende por proceso el conjunto de actividades relativas a la obtencin, elaboracin, fabricacin, preparacin, conservacin, mezclado, acondicionamiento, envasado, manipulacin, transporte, distribucin, importacin, exportacin, almacenamiento y expendio o suministro al pblico de los dispositivos mdicos. 3.2 Smbolos y abreviaturas. ATCC Coleccin Americana de Cultivos Tipo NOM Norma Oficial Mexicana SI Sistema Internacional de Unidades SSA Secretara de Salud ENCB Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas IMSS Instituto Mexicano del Seguro Social 4. Clasificacin 4.1 Por su aspecto fsico, los medios de cultivo preparados pueden ser: Lquidos, Semislidos, Slidos. 4.1.1 Medios lquidos. Se emplean fundamentalmente para:

- Cultivar los microorganismos y obtener grandes cantidades de los mismos o bien la produccin de metabolitos especficos. - Estimular y promover la seleccin de algn o algunos microorganismos e impedir que otros se multipliquen. - Identificar al microorganismo estudiado mediante pruebas bioqumicas. 4.1.2 Medios semislidos. - Se utilizan para identificaciones bioqumicas y averiguar si el germen estudiado es mvil. Los medios semislidos tienen una consistencia blanda. 4.1.3 Medios slidos. - Se utilizan para obtener colonias aisladas de microorganismos. Los medios slidos constituyen la mayor parte de los medios de cultivo que se emplean en Microbiologa. 4.2 Por su uso, se clasifican en: 4.2.1 Medios selectivos. Son medios que contienen sustancias que impiden el desarrollo de algunos microorganismos, pero en una flora mixta permiten el aislamiento y recuperacin del germen o grupo de grmenes de inters. 4.2.2 Medios selectivos de enriquecimiento. Son medios lquidos que estimulan la multiplicacin de algn germen determinado e impiden o inhiben la reproduccin de otros. 4.2.3 Medios diferenciales. Son aquellos que contienen indicadores de cido base, redox o sustancias que detectan cambios en el medio o en las caractersticas tpicas de las colonias. 4.2.4 Medios para cultivar grmenes anaerbicos. Son medios de cultivo para aquellos grmenes que requieran condiciones de anaerobiosis o de microaerofilia. 4.2.5 Medios de cultivo para medir la potencia de los antibiticos. 4.2.6 Medios de transporte. Sirven para transportar los especmenes que contienen a los microorganismos, del sitio de la toma del producto hasta el laboratorio donde va a efectuarse el estudio. Estos medios impiden que se altere la proporcin original de la flora microbiana en los especmenes. 4.2.7 Medios para filtracin a travs de membrana. Pueden ser lquidos o slidos. En el primer caso, se preparan a la concentracin usual y permiten el crecimiento de microorganismos presentes en la membrana. Los medios slidos tienen un contenido mnimo de agar para favorecer la difusin de nutrientes del medio de la membrana. 4.2.8 Medios especiales para cultivo de hongos y levaduras. 4.2.9 Medios especiales para cultivo de protozoarios. 5. Especificaciones El fabricante debe especificar en cada medio: 5.1 Contenido de humedad (medio deshidratado). 5.2 Composicin del medio. 5.3 Mtodo de preparacin. 5.4 Condiciones de presin y temperatura para la esterilizacin del medio preparado (en autoclave). 5.5 Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso. 5.6 Caractersticas de desarrollo de los microorganismos en el medio. 5.7 Advertencia sobre la conservacin de los medios preparados.

5.8 Resultados de las pruebas de estabilidad del medio. 5.9 Resultado de las pruebas de viabilidad del medio. 5.10 pH del medio preparado. 5.11 Fuerza de gel (si procede). 6. Muestreo 6.1 El muestreo del producto debe estar de acuerdo a la Norma Oficial Mexicana NOM-Z-12 "Muestreo para la Inspeccin por Atributos", partes 1 y 2. 7. Mtodos de prueba 7.1 La viabilidad de los medios debe probarse con cultivos tipo de microorganismos de la ATCC (Coleccin Americana de Cultivos Tipo) u otras cepas certificadas. Centros de Referencia de Cultivos Tipo de la SSA, ENCB o IMSS. 8. Etiquetado 8.1 El etiquetado sobre el envase del medio de cultivo debe ser en idioma espaol, con caracteres claros y legibles, de conformidad con lo establecido en la Ley General de Salud, su Reglamento en Materia de Control Sanitario de Actividades, Establecimientos, Productos y Servicios y las normas oficiales mexicanas que se emitan al efecto, debiendo incluir adems: - Nombre comercial del producto. - Uso. - La leyenda "Agente de Diagnstico". - Presentacin. - Datos de conservacin y almacenaje. - Fecha de caducidad. - Nmero de lote. - Nmero de Registro SSA. - Nombre y domicilio del fabricante. - Nombre y domicilio del distribuidor. - Mtodo de preparacin y pH final. - Frmula. 9. Concordancia con normas internacionales Esta Norma no concuerda con ninguna norma internacional. 10. Observancia de esta Norma La vigilancia del cumplimiento de la presente Norma corresponde a la Secretara de Salud, cuyo personal realizar la verificacin y la vigilancia que sean necesarias. 11. Vigencia Esta Norma entrar en vigor al da siguiente de su publicacin en el Diario Oficial de la Federacin. Sufragio Efectivo. No Reeleccin. Mexico, D.F., a 5 de septiembre de 1994.- El Director General de Control de Insumos para la Salud, Luis Mourey Valds.- Rbrica.

5. Cul es el o los criterios para establecer la clasificacin de los medios de cultivo? Explica. Los medios de cultivo pueden clasificarse en lquidos, slidos y semislidos. Por su uso, se clasifican en: Medios selectivos. Medios selectivos de enriquecimiento. Medios diferenciales.

Medios de transporte Medios para filtracin a travs de membrana Medios especiales para cultivo de protozoarios. Medios especiales para cultivo de hongos y levaduras. Conclusin.

Bibliografa 1. Microbiologa. Michael J. Pelczar, Jr. Roger D. Reid. Edit. McGraw-Hill 2. Diagnstico microbiolgico. Texto y atlas a color. Elmer W. Koneman, Stephen D. Allen, William M. Janda. Editorial Mdica Panamericana 3. NMX-065-SSA1-1993, que establece las especificaciones sanitarias de los medios de cultivo. Generalidades 4. NOM-087-ECOL-SSA1-2002. Proteccin ambiental-Salud ambiental- Residuos Peligrosos Biolgico Infecciosos. Clasificacin y especificaciones de manejo

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PUEBLA CARRERA QUMICA REA AMBIENTAL RBRICA PARA EVALUAR REPORTES DE PRCTICAS DE LA ASIGNATURA DE QUMICA ORGNICA CUATRIMESTRE: ENERO-ABRIL/2011 No. 1. 2. Concepto El Marco terico fundamenta los temas sustantivos de la prctica. Ponderacin 1 punto Calificacin

La Metodologa contempla con detalle: los requerimientos en 0.5 puntos materiales, equipos y reactivos, el procedimiento Los resultados se expresan frmulas adecuadamente utilizando nombres y 1 punto

4. 5.

La discusin de los resultados es congruente con el objetivo

1 punto

La conclusin describe la evidencia y tiene una aplicacin con el perfil 2 puntos profesional. La bibliografa consultada y reportada es acorde al tema El trabajo se elabor respetando reglas ortogrficas y redaccin. 0.5 puntos 1 punto

6 7. 8

Las respuestas del cuestionario tienen congruencia con el desarrollo de 1 punto la prctica y las observaciones registradas durante la misma. La entrega del reporte de la prctica fue en tiempo y forma. 1 punto

9. 10.

Durante la prctica se condujo con las medidas pertinentes y adecuados 1 punto de seguridad e higiene 10

Total

Observaciones.

UNIVERSIDAD TECNOLGICA DE PUEBLA

CARRERA DE QUMICA REA TECNOLOGA AMBIENTAL

Microbiologa

REPORTE: No. 3 Preparacin de medios de cultivo NOMBRE DEL ALUMNO: ORTIZ ZATARAIN FERNANDO DANIEL

grado: 3 grUPo a

PROFRESOR: MARA ONEIDA ROSADA GARCA

FECHA: 14/Mayo/ 2013