DISCIPLINA: Bioqumica II CURSO de FARMACIA E BIOQUMICA Turma: 4A1 /Memorial - 2 Semestre/2012

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AULA 04 Gliclise aerbica: Descarboxilao do piruvato e Ciclo de Krebs Tpicos da aula: Balano energtico da respirao celular aerobica Descarboxilao do piruvato em um processo aerbico
Ciclo de Krebs (Funo, mecanismo e regulao)

Roteiro de Estudos:
1. Descreva de forma sucinta as cinco etapas da descarboxilao do piruvato em acetilCoA. Em relao a descarboxilao oxidativa do piruvato, responda: 2. Neste processo ocorre produo de ATP. Explique. 3. Quem realiza a reduo do NAD+. Equacione a reao. 4. Qual o papel da vitamina B1 neste processo. Em relao ao ciclo de Krebs, responda: 5. Onde ocorre e sua principal funo. 6. Quem o aceptor da acetilCoA? Explique. 7. Equacione a 1 reao do ciclo, explicando a importncia da enzima citrato sintetase. 8. Equacione o balano energtico global da glicose aerobica at CO2 e H2O 9. Comparar a energia armazenada (ATP) pela oxidao celular de 1,0 mol de glicose at CO 2 e H2O, com a energia liberada pela oxidao calorimtrica (-2840 kJmol/mol) e calcular o rendimento energtico (percentagem de energia armazenada). 10. Qual a importncia das reaes anaplerticas para a regulao do ciclo do cido ctrico? 11 . Comente as principais funes anablicas do ciclo de krebs 12. Como os tomos de carbono provenientes de aminocidos, carboidratos e cidos graxos entram no ciclo de krebs? 13. Nas LACUNAS 1-10, preencha os espaos com os nomes dos intermedirios do Ciclo de Krebs ou Ciclo dos cidos Tricarboxlicos, ou Ciclo do Citrato, que faltam no diagrama.

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GABARITO DE ALGUMAS QUESTES DO ROTEIRO 4 A vitamina B1 - Tiamina - participa na primeira etapa da produo de acetil CoA que envolve a descarboxilao oxidativa do piruvato, o qual reage com uma timina fosfato (TPP) ligada a enzima piruvato desidrogenase. O CO2 liberado e o acetil liga-se a vit. B1 como um grupo hidroxietila, que numa segunda fase transferido da vitamina B1 para o cido lipico da diidroxilipoil-transacetilase. 5 Nas mitocndrias. Uma das funes primordiais do ciclo gerar equivalentes redutores que so empregados na produo de energia como ATP na cadeia respiratria. Nas reaes enzimticas do ciclo tricarboxlico, a introduo de unidade de 2 carbonos no ciclo - o acetil CoA - produz , aps uma volta completa, 2 CO2, 1 ligao fosfato de alta energia (GTP), 4 equivalentes redutores (3 NADH e 1 FADH 2). A partir do GTP, numa fosforilao a nvel do substrato convertido em ATP: GTP + ADP GDP + ATP A completa oxidao do grupo acetil produz de 10 a 12 ATP (dependo do tipo de clula) 7 - Temos na fase inicial do ciclo do cido tricarboxlico a condensao do acetil CoA com o oxaloacetato para formao de citrato e coenzima A, em reao irreversvel catalisada pela citrato sintetase. A condensao aldlica ocorre entre o grupo metlico da acetil CoA e o grupo carboxlico do oxaloacetato, com hidrlise da ligao tioster e a produo de coenzima A livre. A enzima inibida pelo ATP, NADH, succinil CoA e steres acil CoA graxos. A velocidade da reao determinada pela disponibilidade de acetil CoA e oxaloacetato. O citrato resultante age como regulador em outras vias metablicas e como fonte de carbono e os equivalentes redutores e os equivalentes redutores para vrios processos de sntese. 8Mecanismo de reao Fosforilao da D-glicose (glicose glicose-6P) Fosforilao da D-frutose 6-fosfato 2 (gliceraldeido-3-P 1,3-difosfoglicerato ) (2NAD+ 2NADH) 2 (1,3-difosfoglicerato 3-fosfoglicerato) 2 (fosfoenolpiruvato piruvato) 2 (piruvato acetil CoA + CO2) (2NAD+ 2NADH) 2 (acetilCoA CO2 + H2O) (3NAD+ 3NADH)/ (FAD+ FADH2) (GTP) Saldo de ATP - ATP - ATP + 5 ATP + 2 ATP + 2 ATP +5 ATP +10 ATP=32ATPs

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C6H12O6 + 6 O2 + 32 ADP ===> 6 CO2 + 6 H2O + 32 ATP (6glicose 6CO2 + 6 H2O) energia dissipada G =- 2840 kJ/mol (32 ADP 32 ATP ) energia armazenada G = 992 kJ/mol Saldo 35 % de energia armazenada

11 -O fluxo de metablitos atravs do ciclo do cido ctrico est sob regulao estrita, porm no complexa. Trs fatores governam a velocidade do fluxo atravs do ciclo: disponibilidade de substratos, inibio por acmulos de produtos e inibio alostrica retroativas das primeiras enzimas da via pelos ltimos intermedirios. No ciclo, trs passos so altamente exergnicos; aqueles catalisados pela citrato sintase, isocitrato desidrogenase e a-cetoglutarato desidrogenase. Sob determinadas circunstncias, cada um deles pode se tornar o passo limitante da velocidade global . A disponibilidade de substratos para a citrato sintase varia com as condies metablicas e algumas vezes limita a velocidade de formao do citrato. O NADH, um produto do oxidao do citrato e do a-cetoglutarato, acumula-se sob determinadas condies, e quando a relao [NADH]/[NAD+] torna-se grande, as duas reaes de desidrogenao so severamente inibidas pela lei da ao das massas. De forma similar, a reao da malato desidrogenase est essencialmente em equilbrio na clula , e quando [NADH] grande, a concentrao de oxaloacetato pequena, desacelerando o primeiro passo do ciclo: a succinil-CoA inibe a a-cetoglutarato desidrogenase (e tambm a citrato sintase); o citrato bloqueia a citrato sintase; enquanto o produto final, ATP, inibe ambas: a citrato sintase e a isocitrato desidrogenase. A inibio da citrato sintase aliviada pelo ADP, um ativador alostrico desta enzima. Os ons clcio , que nos msculos dos vertebrados do sinal para contrao e o aumento da demanda por ATP, ativam ambas as enzimas, isocitrato desidrogenase e a-cetoglutarato desidrogenase, assim como o complexo da piruvato desidrogenase. Brevemente as concentraes de substratos e intermedirios do ciclo do cido ctrico regulam o fluxo atravs desta via em uma velocidade que fornece concentraes timas de ATP e NADH. 13- piruvato ,isocitrato,CO2 + NADH ,alfa-cetoglutarato + CoA-SH,,CO2 + NADH,succinil-CoA + GDP ,succinato + GTP ,FADH2 ,NADH ,oxaloacetato Obs: Todas as notas de aula cedidas pelo professor devem ser utilizadas APENAS como ORIENTAO para uma pesquisa mais detalhada, de acordo Bibliografia indicada, para cada aula ministrada.

Prof MsC Gisele Ribeiro Felix

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1 Descarboxilao do piruvato O piruvato, em condies aerbias, ser desidrogenado e descarboxilado, originando o grupo acetil da acetil-CoA e dixido de carbono, que ir posteriormente entrar no ciclo de Krebs. Esta descarboxilao oxidativa catalisada pelo complexo piruvato-desidrogenase Complexo piruvato desidrogenase - matriz das mitocndrias nas clulas eucariontes e citoplasma nas clulas procariontes (elevadas concentraes no msculo cardaco e rim). Constitudo: Enzimas distintas - E1 (piruvato desidrogenase), E2 (dihidrolipoilo transacetilase) e E3 (dihidrolipoilo desidrogenase) Coenzimas: tiamina pirofosfato (TPP), flavina adenina dinucletido (FAD), Coenzima A (CoA), nicotinamida adenina dinucletido (NAD) e Lipoato. So tambm componentes vitais deste sistema em cada um destes grupos prostticos as vitaminas tiamina (no TPP), riboflavina (no FAD), niacina (no NAD) e pantotenato (na CoA).

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- Mecanismo da descarboxilao

1 Passo; Descarboxilao do piruvato pelo TPP da enzima E1, formando-se hidroxietilo TPP e CO2.

2 Passo; Oxidao do grupo hidroxietilo a acetato que se liga a um dos grupos tiol do lipoato E2, ficando o outro reduzido a SH, liberando a enzima E1.

3 Passo; O lipoato transporta ento o acetato at coenzima A, ligando-se este ao grupo tiol desta coenzima e retornando a forma E2(reduzida)

4 Passo; Reoxidao dos grupos tiol do lipoato E 2,, para iniciar nova ronda de oxidao do piruvato. Esta reoxidao dos grupos tiol d-se por reduo do FAD a FADH2 (presente na E3)

5 Passo; O FADH2 da E3 oxida o NAD+ NADH liberando a produo da acetil-CoA. A reao de oxidao do piruvato ativada em situaes de maior exigncia energtica, encaminhando mais acetil-CoA para o Ciclo de Krebs. (2 mols de piruvato produzem 2 mols de NADH 5 mols de ATP)

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CICLO DE KREBS

2.1 Historico Em 1937 Hans Krebs propos o ciclo do acido tricarboxilico (1 estagio do catabolismo celular com a produo de acetilCoA) Em 1948 Albert Lehninger descobriu que o ciclo de krebs ocorria na matriz mitocondrial

( Degradao da acetilCoA) Importncia: Seqncia cclica de reaes enzimticas, que executada na matriz mitocondrial dos eucariontes e no citoplasma dos procariontes com a finalidade de fornecer substratos que sero desidrogenados e descaboxilados. O ciclo de Krebs uma rota anfiblica. Desidrogenao - ativao da cadeia respiratria - sntese de H2O e ATP (armazena energia liberada) Descarboxilao - liberao de CO2 - principal metablito do ciclo de Krebs. 2.2 -Mecanismo enzimtico 1 Etapa: O inicio do ciclo de krebs comea com a entrada de acetil-coA para dentro da mitocndria, que se condensa com o oxaloacetato atravs de uma enzima chamada de citrato sintetase, formando citrato e gua. A hidrlise do tioster intermedirio de alta energia faz com que a reao seja altamente exergnica neste sentido. ( G = 32 kJmol).

2 Etapa: O citrato isomerizado em isocitrato pela enzima cis-aconitase (uma hidratase).. ( G = 13,3kJmol)

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3 Etapa: A isocitrato desidrogenase catalisa a descarboxilao oxidativa do isocitrato para formar o alfacetoglutarato, CO2 e NADH. . ( G = 20,9 kJmol) 4 Etapa: O O -cetoglutarato sofre descarboxilao oxidativa, pela enzima O -cetoglutarato desidrogenase e adio da CoA, formando succinil-CoA, CO2 e NADH. A energia liberada na oxidao do O --cetoglutarato conservada na formao da ligao tioster do succinil-CoA. 5 Etapa: A converso reversvel do succinil-CoA em succinato catalisada pela succinil-CoA sintetase, 6 Etapa: O succinato oxidado em fumarato pela flavoprotena succinato desidrogenase. Os eltrons retirados do succinato reduzem um FAD a FADH 2. Nesta etapa o malonato inibidor competitivo da succinato desidrogenase. 7 Etapa: O fumarato hidrato em malato pela ao da enzima fumarase (fumarato hidratase). 8 Etapa: Na ltima reao do ciclo de Krebs, o malato oxidado a oxaloacetato pela malato desidrogenase, ligada ao NAD+. Como o oxaloacetato sempre regenerado a cada volta o ciclo pode continuar a oxidar a acetilCoA. A velocidade do ciclo controlada pela quantidade de ATPs formados, ATPs formados menor a velocidade do ciclo ATPs formados maior a velocidade do ciclo. Para cada volta no CK utiliza-se 1 molcula de acetil-coA.

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AcetilCoA + 3NAD+ + FAD++ GDP + Pi+ 2H2O 2CO2 + CoA-SH +3NADH + FADH2+ GTP

2.3 Regulao do Ciclo de Krebs Fatores: Disponibilidade de substratos, inibio por acmulos de produtos e inibio alostrica retroativas das primeiras enzimas da via pelos ltimos intermedirios. Vias secundrias: Esqueletos carbnicos dos acares e cidos graxos so degradados at o grupo acetila do
acetil-CoA (forma qumica atravs da qual o ciclo de krebs aceita o combustvel). Aminocidos so degradados metabolicamente em outros intermedirios do ciclo.

Reaes anapletrias: So reaes que permitem o restabelecimento do nvel do substrato de acordo a sua disponibilidade. Entre essas reaes anaplerticas a mais importante a que leva a formao de oxaloacetato a partir do piruvato pela ao da piruvato carboxilase para manuteno e regulao do ciclo de Krebs.

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2.4 Funes anablicas do Ciclo de Krebs Alguns compostos intermedirios do ciclo podem ser utilizados como precursores em vias biossinteticas: Oxaloacetato e Cetoglutarato vo formar respectivamente o aspartato e o glutamato.
succinil-coA precursores do grupo heme

A retirada desses intermedirios pode ser compensada por reaes anapletrias. Anexo 1 Principais enzimas e substratos reguladores do ciclo de Krebs.

Anexo 2 Estgios do ciclo de Krebs

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Anexo 3 Balano energtico final da gliclise aerobica

A oxidao calorimtrica de 1 mol de glicose at a liberao de CO 2 e H2O fornece energia de

G =- 2840 kJ/mol, porm no metabolismo oxidativo parte desta energia armazenada na forma de 32 ATP ( G =- 31 kJ/mol). C6H12O6 + 6 O2 + 32 ADP ===> 6 CO2 + 6 H2O + 32 ATP energia dissipada G =- 2840 kJ/mol energia armazenada G = 992 kJ/mol Saldo 35 % de energia armazenada