DNA FORENSE :

DNA MITOCONDRIAL

DNA nuclear
E DO CROMOSSOMO Y

TIPOS DE ANLISE
INVESTIGAO DE PATERNIDADE IDENTIFICAO DE CADVERES CRIMES SEXO-RELACIONADOS CONFRONTOS GENRICOS

 Identificao humana por anlise comparativa

de DNA. O objetivo da anlise de DNA diferenciar um indivduo de outro, atravs de um grande nmero de caractersticas, dandolhe uma identidade absoluta como pessoa, podendo assim ser diferenciado dentre bilhes de outras;

 Aplicaes prticas da anlise do DNA na

atividade pericial forense:

Identificao de suspeitos em casos de

violncia sexual, estupros, atentado violento ao pudor e atos libidinosos; Identificao de cadveres carbonizados ou em decomposio; Identificao de corpos mutilados;

 Identificao de peas sseas e rgos humanos; Investigao de paternidade nos casos de

gravidez resultante de estupro;

Produo de perfis de material gentico recuperado a partir de evidncias de natureza biolgica presente em suportes diversos encontrados em locais de crimes (mancha de sangue, mancha de esperma, manchas de saliva,

plos e outros);

 Investigao e identificao de cadveres

abandonados nos casos de aborto provocado, em casos de infanticdio e de falta de assistncia aps parto;
Estudo de vnculo gentico, investigando a

paternidade, anulaes de registros civis de nascimento, raptos e seqestros de crianas, assim como trfico de menores.

O EXAME DE DNA FORENSE PODE SER REALIZADO COM ENFOQUE EM TRS OBJETOS DE ESTUDO

O DNA NUCLEAR OU GENMICO

O DNA MITOCONDRIAL O DNA do CROMOSSOMO Y

Sistemas Genticos auxiliares dos autossmicos

DNA mitocondrial (linhagem materna) DNA dos hapltipos do cromossomo Y (linhagem paterna)

DNA MITOCONDRIAL:
mtDNA x nucDNA localizao dentro da clula

mitocndrias

quantidade

cada mitocndria possui 2-10 cpias de DNA, sendo que cada clula apresenta centenas de mitocndrias
HAPLIDE

modo de herana matrilinear

DNA mitocondrial
linhagem materna

O DNA DO CROMOSSOMO Y

Identifica a linhagem paterna

Em vivos DNA nuclear

Colheita de amostras, identificao das partes e confirmao de excluses

Figura 1 - Colheita de amostra de sangue. Figura 2 - Colheita de amostra de Swab Bucal.

ANLISE DE DNA:

CONFRONTOS GENRICOS

Estritamente Comparativa Amostra-Questionada (fonte biolgica desconhecida) X Amostra-Referncia [fonte(s) biolgica(s) conhecida(s)]

Procedimentos para Anlise Forense de DNA

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. COLETA DO MATERIAL EXTRAO DE DNA DAS AMOSTRAS QUANTIFICAO DA EXTRAO AMPLIFICAO DO DNA ANLISE COMPARATIVA CLCULOS ESTATSTICOS ELABORAO DO LAUDO PERICIAL

1. COLETA DO MATERIAL RESOLUO SSP 194/99

Estabelece normas para , CONSERVAO e ENVIO de materiais biolgicos para realizao de Exames de DNA e garante a cadeia de custdia.
Vestgios encontrados em locais de crime Amostras biolgicas colhidas nos IMLs necropsia Vivos suspeito(s) vtima(s) parentes consangneos

Verificao da presena do DNA

Leitura sob a luz ultravioleta

Gel de agarose

Amplificao do DNA PCR Multiplex

Os sistemas comerciais mais utilizados atualmente possuem 9 ou 15 marcadores do tipo microssatlites amplificados em multiplex

Termociclador

Figura 3 - Incluso de paternidade (RFLP) com sondas MS1, MS31, MS43 e MS621. Na coluna 1, 2 e 3 observam-se as bandas de DNA da me, do filho e do suposto pai, respectivamente. Facilmente detectamos as bandas maternas(M), presentes no filho, sendo que as bandas paternas (P) esto tambm presentes no investigado. Os marcadores de peso molecular encontram-se nas laterais.

Figura 4 - Incluso de paternidade (STRs) com a sondas D3S1358, vWA31 e FGA, utilizando a amplificao dos locos de STR pelo mtodo de PCR kit Profiler Plus -ABI e anlise por seqenciador automtico (ABI 310). Identificamos que o filho (NS) herdou alelos de sua me (FG) (alelo 15 no loco D3S1358; alelo 16 no vWA31 e 24 no FGA), sendo que os demais (18, 17 e 21 respectivamente) so de origem paterna e tambm existentes no suposto pai (AS). Outros 10 locos foram tambm analisados sem que se encontrasse uma nica excluso de paternidade.

Figura 5 - Excluso de paternidade (RFLP) com sondas MS31, MS43, MS205 e G3 (RFLP). Na coluna 1, 2, e 3, observam-se as bandas de DNA da me, do filho e do suposto pai, respectivamente. Facilmente detectamos as bandas maternas (M), presentes no filho, sendo que as demais so obrigatoriamente de origem paterna. O investigado no apresenta essas ltimas. A coluna 4 representa a mistura do DNA do filho e do suposto pai. O marcador de peso molecular encontra-se na lateral esquerda.

Figura 6 - Excluso de paternidade utilizando-se os STR. Verticalmente podemos observar os resultados dos locos D8S1179, D21S11 e D18S51. No loco D21S11, o filho apresenta o alelo 31 em comum com sua me, sendo que o loco 28 ser obrigatoriamente de origem paterna. O suposto pai no apresenta esse alelo, mas sim o 29 e 30. Outra excluso pode ser identificada no loco D18S51, no qual o filho herdou o alelo 13 de sua me, sendo que o 14 de origem paterna. O suposto pai no apresenta esse alelo, mas o 18 e 21.

Figura 7 - Investigao de maternidade entre filha e suposta me pelos STR, usando o kit Profiler Plus e seqenciador ABI 310 (Applied Biosystems, USA). possvel a identificao do sexo feminino das participantes pelo teste da amelogenina (X), assim como a incluso da maternidade, pois em cada loco existe sempre um alelo em comum entre as duas. Outros 12 locos foram analisados sem nenhuma excluso.

Figura 8 - Investigao de troca em maternidade. Na coluna 1, pode-se observar o DNA de uma das crianas analisado com as sondas unilocais ( RFLP ) MS205, MS1, MS31 e G3. Na coluna 2, o DNA de uma das mes, casada com o possvel pai com DNA presente na coluna 4. Na coluna 3, encontramos o DNA da me verdadeira, que no estava de posse da criana, podendo-se facilmente observar que uma das suas bandas est sempre presente na criana (coluna 1). O possvel pai (coluna 4) e sua esposa (coluna 2) foram excludos da paternidade e da maternidade por no apresentarem alelos ou bandas de DNA em comum com a criana (coluna 1). A probabilidade de maternidade para a me da coluna 3 foi de 99,9%. A outra criana estava desaparecida.

Figura 9 - Investigao de paternidade com possvel pai falecido (minissatlites RFLP).

Figura 10 - Investigao de paternidade com possvel pai falecido e anlise comparativa com os avs paternos, usando os STR ( Identifiler ). Podemos observar na vertical os locos D19S433, vWA31, TPOX e D18S51. Os resultados mostram a incluso de paternidade, sendo que outros 12 locos demonstraram o mesmo padro de alelos paternos do autor, presentes ora na av, ora no av. O autor herdou os alelos 14 (loco D19S433), 17 (vWA31), 8 (TPOX) e 12 (D18S51) de sua me, sendo que os alelos 13, 18, 8 (homozigose) e 18 respectivamente so de origem paterna e presentes entre os alelos dos avs.

Figura 11 - Investigado falecido. Nas colunas 1, 2, 3, 4, 5 e 6, observam-se as amostras de DNA da me, filho (autor), viva e seus trs filhos com o falecido. Nota-se facilmente a banda materna (M), presente no autor, sendo que a banda (P) de origem paterna, e tambm encontrada entre as de origem paterna dos filhos da viva com o investigado.

Figura 12 - Investigado falecido (excluso de paternidade). Anlise da autora, viva e dois de seus filhos com o suposto pai falecido. A excluso se identifica no loco D21S11 pelo qual a viva transmite o alelo 31,2 a sua filha, sendo que esta apresenta o alelo paterno 31, inexistente na autora, que apresenta os alelos 30 e 33,2. No mesmo loco, a viva transmite o alelo 29 para seu filho, sendo que este apresenta o alelo 28 de origem paterna e inexistente na autora.

RESULTADOS DO EXAME DE VNCULO GENTICO

Inconclusivo Excluso

Incluso

LAUDO PERICIAL
Fornecer subsdios aos Peritos Criminais, Mdicos Legistas, Delegados de Polcia ou outras autoridades que o solicitaram

Pea cientfica
PROVA PROBABILSTICA

LABORATRIO DE DNA INSTITUTO DE CRIMINALISTICA SP