ARTIGO

Novas Tecnologias em Patologia Clnica

AUTORES

Jos Firmino Nogueira Neto

Doutor em Fisiopatologia Clnica e Experimental pela UERJ. Professor Adjunto do Departamento de Patologia e Laboratrios da Faculdade de Cincias Mdicas da UERJ. Professor Coordenador e Orientador do Programa de Ps Graduao stricto-senso em Sade, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense da UERJ. Coordenador da disciplina de Patologia Clnica da Faculdade de Cincias Mdicas da UERJ. Coordenador do Laboratrio de Lpides LabLip da Faculdade de Cincias Mdicas da UERJ.

Ricardo Brito de Oliveira Junior

Mestrando do Curso de Mestrado Profissional em Sade, Medicina Laboratorial e Tecnologia Forense na UERJ. Professor dos mdulos de Bioqumica Clnica, Urinlise e Fludos Biolgicos na Especializao em Cincias do Laboratrio Clnico da UFRJ. Professor do mdulo de Bioqumica Clnica da Especializao em Anlises Clnicas da Fundao Tcnica Educacional Souza Marques. Professor do mdulo de Urinlise e Fludos Biolgicos da Especializao em Anlises Clnicas da Universidade Castelo Branco.

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1. INTRODUO 1.1 Caractersticas e funes principais do Laboratrio Clnico

O laboratrio clnico tem por funo as anlises na patologia clnica. Os profissionais nele alocados tm como objetivo fornecer subsdios laboratoriais aos mdicos para que executem as seguintes aes: - confirmar ou no determinado diagnstico; - elaborar diretrizes para a conduta; - determinar a realizao de novos exames; - estabelecer prognsticos; - detectar patologias (ou afeces ou doenas) pela triagem e monitorar a teraputica. A eficcia do laboratrio clnico obtida por meio do sistema da garantia da qualidade. Exige o mximo empenho dos seus colaboradores, seguindo os critrios estabelecidos pelas sociedades cientficas, para obteno da Acreditao. Esta, por meio do programa de educao continuada, proporciona benefcios aos pacientes e melhor capacitao do quadro de pessoal do laboratrio. Tambm ir gerar uma cooperao mutua entre os profissionais envolvidos nos procedimentos do dia-a-dia, de maneira eficaz, eficiente e econmica. Embora a exatido e a preciso tenham sido sempre pr-requisitos para um bom servio de laboratrio clnico, a rapidez/prontido ou tempo de liberao de um resultado laboratorial claro, igualmente decisivo para a excelncia geral do servio a ser prestado aos seus usurios. Automao o resultado dos avanos na tecnologia que levaram ao desenvolvimento de equipamentos de laboratrios mecanizados em interface com equipamentos e programas computadorizados como suporte (Felder, 1990). O emprego da automao pode aumentar a produtividade, reduzir a exposio ao risco biolgico, reduzir os custos operacionais, potencializar o tempo de liberao e oferecer um nvel de consistncia dos procedimentos. Estudos realizados buscando definir a operacionalizao dos processos laboratoriais, afirmam que, entre 50% a 70% do tempo consumido no laboratrio para anli-

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se de uma amostra, dedicado a manipular e aliquotar este material biolgico. (Schoeny, 1991).

1.2. Equipamentos do Laboratrio Clnico

Grande parte deste tempo, aproximadamente 70% a 80% envolve tarefas manuais repetitivas (Mountain, 1999). Os equipamentos modernos do laboratrio clnico incluem: - dispositivos de varredura - estaes de pipetagem - estaes de transferncia de amostras/alquotas. A implementao dos sistemas automatizados compreendendo alta tecnologia computadorizada de liberao das amostras e um sistema de processamento melhora a produtividade em at 66%, permitindo maior capacidade de volume, reduzindo o tempo de liberao em dois teros e o nmero de funcionrios em tempo integral (Mountain, 1999). Este ltimo aspecto crtico para o sucesso da funcionabilidade de um laboratrio clnico automatizado, em razo dos maiores gastos da sua estrutura envolverem o quadro de pessoal, compreendendo entre 50% a 60% do oramento anual (Smythe, 1997). O mundo da cincia laboratorial clnica est sempre em mudana e traz desafios maravilhosos. Como sabem os educadores e os profissionais de medicina laboratorial, as maiores tarefas so manter atualizados os avanos tecnolgicos, as novas patologias e os padres da prtica laboratoriais revisados. Os alunos devem acompanhar o desenvolvimento nestas reas. Embora o conhecimento crescente traga grandes consequncias, a educao tambm deve orientar e incentivar a aprendizagem automotivada e promover a curiosidade. A disponibilidade de instrumentos automatizados permite que os laboratrios clnicos processem maior nmero de testes sem aumento comparvel de funcionrios. A evoluo da automao no laboratrio clnico chegou ao

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patamar da automao na indstria manufatureira, progredindo da automao fixa, em que um instrumento realiza sozinha uma tarefa repetitiva, para a automao programvel, que permite que um instrumento desempenhe vrias tarefas diferentes. A automao inteligente tambm foi acrescentada em alguns instrumentos ou sistemas, permitindo que eles se automonitorem e que respondam de forma apropriada s condies variveis. Um benefcio da automao a reduo na variabilidade dos resultados e nos erros das anlises via eliminao das tarefas que so repetitivas e montonas para a maioria dos profissionais do laboratrio clnico. O aperfeioamento da reprodutibilidade obtido com a automao levou a uma melhora significativa na qualidade dos testes laboratoriais. Muitos laboratrios pequenos agora se consolidaram em entidades maiores e mais eficientes em resposta s tendncias do mercado no que diz respeito reduo de custos. O impulso para automatizar esses laboratrios de grande porte abriu novas portas na automao laboratorial. A automao no mais simplesmente usada para auxiliar o tcnico laboratorista na realizao do teste, mas ela agora inclui processamentos e transportes de amostras, injees de amostras em analisadores automticos e avaliao dos resultados dos testes realizados. Acreditamos que a automao dessas funes adicionais seja crucial para a prosperidade futura do laboratrio.

2. HISTRICO DA PATOLOGIA CLNICA

A patologia clnica tem seu marco histrico inicial por cerca de 1.550 a.C. de forma emprica que era predominante na poca com a filosofia. Relatos histricos dizem que 4.000 A.C. a urinlise j era praticada (de forma emprica) pelos egpcios e mesopotmicos. Existem trs profisses no mundo que sempre existiram desde sua criao que so: 1) Engenharia, no qual sempre foi feito construes para morada, caa, transporte, etc; 2) Direito, pois sempre havia

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uma lei local que os indivduos deviam cumprir, essa lei pode ser espiritual ou no; 3) Medicina, onde sempre que ocorria alguma leso visvel (cortes, queimaduras, mordidas, perfuraes, etc.), pessoas supostamente preparadas para determinada situao, tratavam o paciente de forma emprica, como havia tambm as parteiras. Quando algo de errado ocorria com a sade do indivduo de forma no visvel como um corte, ou uma queimadura, mas sim uma doena metablica, alguns povos acreditavam que o doente estava possudo por demnios ou algo parecido, cujo objetivo desta crena, era dar explicao publica do que estava acontecendo com o indivduo. Iremos relatar um pouco da histria evolutiva enfatizando o Hemograma, a Bioqumica e Urinlise, pois no mundo contemporneo so os exames mais solicitados na medicina laboratorial, lembrando que a urinlise no passado e em algumas literaturas atuais faz parte do conhecimento da bioqumica clnica. A patologia clnica propriamente dita tem seu incio por uma curiosidade em uma endocrinopatia chamada Diabete, onde o paciente tinha uma poliria e esta no tinha uma causa visvel. Os supostos mdicos da poca achavam que a patologia ocorria na urina do paciente e comearam a fazer uma anlise emprica obrigando os escravos a beberem a urina do paciente e estes, aps beberem a urina relatavam que a mesma possua um sabor adocicado. Os mdicos observaram ento que, na maioria dos pacientes com poliria, a urina possua sabor adocicado, passando a chamar este fenmeno de Diabetes Mellitus que quer dizer cachoeira de mel. Com o passar do tempo, os mdicos foram observando que em alguns pacientes com poliria, a urina no possua sabor adocicado, a mesma possua sabor semelhante gua, dando o nome a esta doena de Diabetes Insipidus que significa cachoeira sem sabor. O exame de urina uma das formas mais antigas de diagnstico (4.000 A.C.). Cerca de 400 A.C. , Hipcrates fez o primeiro relato racional das observaes da urina. Por volta do sc. XVII, a uroscopia foi usada fraudulentamente por charlates que prediziam todo tipo de doena e tambm eventos futuros. Por mais de 500 anos pinturas renascentistas retrataram mdicos inspecio-

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nando frascos de urina chamados na poca de balaustres, como em um quadro clssico de Sir Samuel Luke Fildes de 1884 que fica localizado em Tatte Gallery, Londres (Figura 1 A e Figura 1 B). Paracelsus (1493-1541) utilizou seus conhecimentos de alquimia para adicionar uma dimenso qumica anlise de urina. Atualmente a urina um dos lquidos biolgico mais utilizado na maioria dos propsitos diagnsticos. A urinlise foi introduzida na prtica clnica pela primeira vez em Paris no ano de 1837 por Franois Rayer e Eugene N. Vigla. Em 1920, Thomas Addis implanta o hemocitmetro na urinlise para realizar a contagem de hemcias e leuccitos, conhecida at hoje como contagem de Addis.

Figura 1A (esquerda) - Quadro de Sir Samuel Luke Fildes. Figura 1B (direita): Quadro de Sir Samuel Luke Fildes

No passado, o conceito de bioqumico cabia ao profissional que realizava um repertrio vasto de testes laboratoriais. Este conceito foi dado em 1907 pelo professor emrito de biologia da universidade de Harvard Otto Folin. Entre 1904 e 1922, Folin desenvolveu mtodos analticos quantitativos para vrias pesquisas de vrios elementos na urina, incluindo ureia, amnia, creatinina, cido rico, cido de azoto total, fsforo, cloreto, sulfato total e acidez. Ele

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tentou tambm dosar estes elementos no sangue e com isso introduziu o mtodo de Jaffe para dosagem da creatinina. Folin tambm mostrou o efeito das drogas uricosricas em sangue e a hiperuricemia na artrite gotosa, introduziu o mtodo colorimtrico para dosagem da epinefrina e publicou os primeiros valores de referncia para os metablitos nitrogenados no proteicos e protenas totais no sangue. Folin tambm responsvel por estabelecer a relao dos metablitos nitrogenados no proteicos com a funo renal. O reagente Cicalteu Folin, entre outros desenvolvidos por Folin, ainda usado at hoje para certas determinaes proteicas. Quando se observa o breve histrico na patologia clnica, comeamos a dar conta na evoluo dos mtodos e da automao, ressaltando desde os mtodos obsoletos aos mtodos mais atualizados. Como estamos exemplificando com a urinlise, lembramos que o exame de urina no laboratrio clnico durava horas, no qual cada mtodo era feito individualmente com reagentes apropriados para cada pesquisa. Relacionando o exame de urina obsoleto com o atual pelo mtodo da tira reativa, observamos a anlise qumica da urina que hoje dura cerca de 2 minutos e no mtodo obsoleto durava em torno de 2 horas. A anlise qumica da urina era feita por mtodos como de Benedict para glicose, Robert para protenas, Rothera para corpos cetnicos, Erlich para urobilinognio, Fouchet para bilirrubina, Joahnensen para hemoglobina, entre outros. Atualmente, estes mtodos foram substitudos pelo mtodo da tira reativa que impregnada pelo processo de qumica seca (produzida no incio para utilizao do mdico em seu prprio consultrio ou na beira do leito) que libera os resultados pelo princpio da refletncia. A tira reativa utilizada somente nos laboratrios de pequeno porte com nmero pequeno de amostras na rotina diria. Os laboratrios de grande porte j possuem automao que permite realizar o exame dos Elementos Anormais e Sedimentoscopia urinria - EAS, no qual o profissional s realiza o cadastramento da amostra, enquanto o aparelho automatizado realiza todas as fases da urinlise que so: exame fsico, exame qumico e sedimentoscopia.

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Figura 2 A Leitora de tiras reagente.

Figura 2B Analisador automtico do EAS

A anlise bioqumica do sangue era semelhante ao da urina (muito demorado em relao aos mtodos) em que para cada anlise era realizado um mtodo diferente como, por exemplo, mtodos da ortoluidina, glicose-oxidase e hexoquinase para glicose, mtodo de Huang para o colesterol total, mtodo de Soloni para triacilglicerol, mtodo de biureto para protenas totais, mtodo do verde de bromocresol para albumina, mtodo de Owen para creatinina, mtodo da diacetilmonoxima para ureia, mtodo de Caraway para cido rico e amilase, mtodo de Vogel e Zieve para lpase, e assim por diante. A automao bioqumica chegou com tima aceitao dos laboratrios, onde a anlise era manual, passou a ser semi-automatizada e hoje totalmente automatizada por aparelhos que realizam at 800 testes por hora. Ao longo destes anos, o laboratrio clnico vem mostrando a crescente evoluo deste importante segmento na rea de diagnostico clinico laboratorial. Em 1900, H.G. Hopinks descobriu o triptofano; Otto Folin torna-se o primeiro bioqumico clnico integral nos Estados Unidos da Amrica. Em 1902, Dubosq introduziu o colormetro visual no laboratrio clnico pela primeira vez. No ano de 1904, Christian Bohr descobre a relao recproca entre o pH e o teor de oxignio da hemoglobina, at hoje conhecido como efeito Bohr. A imunodifuso foi descoberta em 1905 por HJ Bechtold, utilizada at hoje.

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Todd e Sanford publicaram a primeira edio do jornal Diagnstico por mtodos laboratoriais em 1908. A descoberta acidental da penicilina por Sir Alexander Fleming em 1928, foi fundamental para iniciar a era do antibitico. No mesmo ano, GN Papanicolau, relatou pela primeira vez a capacidade de reconhecer alteraes celulares que viriam a serem malignas, iniciando desta forma os estudos que originaram a citologia clnica. A microscopia fluorescente foi descoberta em 1911 por Oskar Heimstadt. No ano de 1916, Sigbahn desenvolve a espectrometria por raios-X e PA Kohler desenvolve colormetro nefelmetro. Na mesma dcada em 1919 FW Aston desenvolve o espectrgrafo de massa (assim chamado por ele). O primeiro mtodo de laboratrio clnico para dosagem de fsforo foi estabelecido em 1920 no mesmo ano em que a puno venosa tornou-se generalizada para fins diagnsticos. No ano seguinte foi estabelecido um mtodo para dosagem srica de magnsio. Cinco anos mais tarde, Arne Tiselius desenvolve a eletroforese de protenas e no mesmo ano, Theodor Svedberg determinou o peso molecular da hemoglobina pelo mtodo da ultracentrifugao. Em 1929 Folin acrescenta o famoso filtro de luz no colormetro, at hoje utilizado no foto colormetro. Esse filtro uma das diferenas entre o fotocolormetro e o espectrofotmetro. No ano de 1930, Kay desenvolveu o primeiro mtodo para deteco de fosfatase alcalina srica no laboratrio clnico. Cherry e Crandall desenvolveram o primeiro mtodo de anlise da lpase no laboratrio clnico em 1932. Dois anos aps iniciou-se a comercializao do microscpio eletrnico. Em 1935, Beckman introduz o primeiro medidor de pH no laboratrio clnico. 1937 o marco do primeiro banco de sangue hospitalar, que foi estabelecido no Cook County Hospital em Chicago. A dosagem da amilase urinria e sangunea veio em 1938 com Somogyi

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aplicando ao laboratrio clnico e no mesmo ano foi desenvolvido o primeiro ensaio de fosfatase cida no laboratrio clnico por Gutman. No ano anterior, Conway e Cook desenvolveram o mtodo de anlise para amnia sangunea no laboratrio clnico. A dcada de 40 tambm foi marcante para a bioqumica clnica com a evoluo da automao, onde o colormetro visual foi substitudo pelo fotocolormetro eltrico. Continuando na dcada de 40, especificamente em 1941, Papanicolau e Trau provaram a importncia da anlise do esfregao vaginal e cervical para o diagnstico clnico. No mesmo ano, AJP Martin e RLM Synge conseguem separar aminocidos e peptdeos por meio da cromatografia. Em 1943, a penicilina foi utilizada com sucesso na terapia. A refratometria de protenas foi aplicada no laboratrio por William Sunderman em 1944. S. Borgstrom desenvolveu o teste de tempo de coagulao de sangue total um ano aps. O comrcio laboratorial comea a se desenvolver em 1946 com a vacutainer introduzindo os tubos a vcuo para realizao da coleta sangunea que foi produzido pela Becton Dickinson Co. e no mesmo ano, Arne Tiselius separa protenas por cromatografia. Na dcada de 40 tambm houve fundaes importantes como a Associao Americana de Qumica Clnica em 1948. As dosagens bioqumicas deram um importante salto na dcada de 50. A imunoeletroforese foi descoberta em 1952 por MD Poulik; Kuby desenvolveu o mtodo de anlise da creatinina utilizando a enzima fosfoquinase em 1954, no mesmo ano em que foi descoberto o espectrofotmetro de massa atmica por Walsh. 1955 foi um ano de grandes descobertas como o desenvolvimento do mtodo para anlise do lactato srico por Wroblewski e Ladue, desenvolvimento do mtodo para anlise da aspartato aminitransferase por Karmen, Leonard Skegges desenvolveu o conceito de dilise de fluxo contnuo em ligao com o tratamento de doena renal e para finalizar o ano, Severo Ochoa sintetiza RNA. Continuando na dcada de 50, em 1956, Wroblewski e Ladue

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desenvolveram o mtodo de anlise srico para alanina aminotransferase e reconheceram a sua maior especificidade para hepatopatias em comparao com aspartato aminotransferase. Em 1956, J. Edwards estabelece um protocolo de triagem pr-natal para doenas genticas. Van Handel e Zilversmit desenvolveram um mtodo qumico direto para determinao do triacilglicerol.

3. PATOLOGIA CLNICA NO HUPE

No final dos anos setenta, iniciou-se no Laboratrio Central e de Urgncias do ento Hospital das Clnicas da UERJ, hoje Hospital Universitrio Pedro Ernesto, um verdadeiro movimento de aprimoramento tcnico, docente e assistencial na Patologia Clnica, visando integrar este servio, com a Faculdade de Cincias Mdicas FCM, atravs do Departamento de Patologia e Laboratrios DPL. Para isto, foi convidado um mdico patologista clnico professor da FCM, para reestruturar estes laboratrios. Inicialmente, foram revistas todas as tcnicas utilizadas, algumas substitudas, e as demais aprimoradas. Este era o primeiro passo que se dava, de forma at mesmo involuntria para se implantar o sistema de qualidade, at ento muito pouco conhecido e ainda em fase de desenvolvimento. Isto contribuiu de grande forma, para que a assistncia laboratorial prestada tanto aos ambulatrios do HUPE, quanto nas enfermarias e demais setores de pacientes internados fossem beneficiados tanto na qualidade dos exames realizados, quanto no tempo de execuo e entrega dos resultados aos respectivos solicitantes. Com isto, o Servio do Laboratrio Central e de Urgncias do HUPE como assim ficou conhecido, passou a ter visibilidade externa, alm de respeitado por todos os segmentos da patologia clinica no Rio de Janeiro. Era incio das conquistas tecnolgicas nos laboratrios clnicos, com a chegada dos aparelhos automatizados. Continuando este trabalho inovador, foi instalado o primeiro aparelho automatizado de grande porte no setor de bioqumica, agilizando a rotina laboratorial, sendo uma grande novidade no Rio

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de Janeiro. Recebemos muitas visitas de profissionais de outros laboratrios do servio pblico e tambm dos grandes laboratrios da iniciativa privada, e at mesmo de fora do Rio de Janeiro. Estava selada a implantao tcnica da mais moderna tecnologia do momento, que iria beneficiar a formao de pessoal na rea das anlises clnicas e patologia clnica. Este Servio passou a ser referencia tanto na parte tcnica, como na formao de profissionais desta rea. Em razo de todas estas conquistas, foram formados vrios mdicos residentes em patologia clnica, atravs do programa nacional de residncia mdica, assim como farmacutico-bioqumicos, bilogos, biomdicos e tcnicos de patologia clnica, os quais eram facilmente absorvidos tanto pelo servio publico, quanto pelos laboratrios particulares. Os cursos profissionalizantes foram sem dvida, um dos grandes beneficiados, pois era oferecido estgio supervisionado com carga horria que variava entre quatrocentas e oitenta a seiscentas horas. Foi dada grande contribuio nos programas de educao continuada e, sobretudo, na melhoria da qualidade da formao em todos os nveis dos profissionais desta rea. Era oferecido ao curso mdico da FCM / UERJ, disciplina eletiva de bioqumica clnica e estagio com o objetivo de inserir o aluno na pratica da coleta de material biolgico destinado realizao de exames, os conceitos bsicos e fundamentos da realizao dos exames e a interpretao dos mesmos, atravs da correlao clnica-laboratorial. Paralelas a toda estas mudanas inovadoras, j existia na Faculdade de Cincias Mdicas, e em varias outras do Centro Biomdico, os professores pesquisadores que realizavam seus estudos experimentais utilizando o Laboratrio Central como assim ficou conhecido, para a realizao dos experimentos na parte laboratorial, tanto na pesquisa clnica como na pesquisa experimental. Entretanto, isto trouxe muitas dificuldades e at mesmo prejuzos em determinadas situaes, pois no havia um suporte tcnico preparado para esta finalidade. Cabe ressaltar que o objetivo principal era o compromisso com a assistncia mdica ao paciente, e no com a pesquisa. A falta de aparelhos des-

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tinados a esta funo, a falta de material de consumo suficiente para realizar todos os exames de um determinado projeto de pesquisa, a padronizao de metodologias e a falta de pessoal com envolvimento e conscientizao, eram os principais motivos para que esta importante atividade acadmica tivesse serias dificuldades.

3.1. O Laboratrio de Lpides LabLip

No final da dcada de oitenta e durante toda a dcada de noventa, dada insistncia dos pesquisadores e consciente da importncia da pesquisa na produo cientifica na UERJ, o Laboratrio Central no mediu esforos para continuar colaborando com a realizao dos exames solicitados dos mais diversos trabalhos realizados para a pesquisa. Porm, no havia condies adequadas que permitisse o pleno atendimento aos anseios da comunidade cientfica da UERJ. Desta realidade, surgiu no inicio dos anos dois mil, um projeto para a criao de um Laboratrio Clnico voltado exclusivamente para a pesquisa clnica e experimental. Atravs de um convnio da UERJ com a Secretaria de Ensino Superior SESU, do Ministrio da Cultura, foram angariados recursos para criao do Laboratrio de Lpides LabLip. Este laboratrio deu inicio a suas atividades em abril de 2006, apresentando a seguinte produo cientifica (Figura 3).
LabLip Produo Cientfica
2012
31 projetos em andamento

2011

2006
3 projetos concludos

2007
8 projetos concludos

2008
6 projetos concludos

2009
10 projetos concludos

2010
07 projetos concludos

05 projetos concludos

Figura 3 Produo cientfica do LabLip

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A informatizao e interfaceamento (descrito abaixo) do LabLip, da Faculdade de Cincias Mdicas da UERJ, que um laboratrio voltado exclusivamente para a pesquisa clnica e experimental, tem por objetivo prover a comunidade cientfica que utiliza este servio, de agilidade nos seus processos, confiabilidade e registro dos resultados laboratoriais possibilitando a produo cientfica com base de dados gerados pelo seu sistema. Podemos descrever em linhas gerais, as etapas de anlise dos exames: Utilizamos um sistema onde as amostras dos participantes voluntrios, dos pacientes e dos animais de experimento, so cadastradas e os exames solicitados para cada projeto, so processados em todas as suas etapas no LabLip. Aps o registro inicial dos dados, este sistema imprime todas as etiquetas de cdigo de barras que iro identificar os materiais biolgicos de forma clara e segura. A partir desta etapa, o sistema em ao est apto a realizar a programao dos equipamentos laboratoriais. Esta programao se d, na maioria das vezes, atravs de uma porta serial cujo protocolo de comunicao fornecido pelo fabricante do equipamento laboratorial. Aps esta etapa podemos ver os exames solicitados para cada amostra programada no aparelho sem nenhuma interveno humana neste processo. A etapa da anlise dos exames propriamente dita realizada pelos equipamentos laboratorial, geram resultados para os diversos exames solicitados. Na sequencia em que cada um dos exames vai ficando pronto, o equipamento disponibiliza os resultados atravs da porta serial e o sistema fica encarregado de resgat-los e repass-los ao sistema laboratorial. Este processo totalmente automatizado, excluindo qualquer possibilidade de erro entre os resultados produzidos pelo equipamento e os registros armazenados pelo sistema. Aps a disponibilizao dos resultados na base de dados, este possibilita o envio para os pesquisadores, para que os mesmos utilizem as informaes das anlises realizadas em cada projeto.

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Para que todo este processo esteja funcionando de acordo com a expectativa do sistema da qualidade, implantamos os seguintes servios: Instalao e configurao do servidor de banco de dados e das estaes de trabalho, treinamento da equipe laboratorial responsvel pela operao dos sistemas, realizao da interface dos seguintes equipamentos: aparelho analisador automtico de microplacas para Imunologia e Hormnios, aparelho analisador para Bioqumica (figura 4), aparelho analisador de eletrlitos (figura 5), contador de clulas automatizado para Hematologia (figura 6) e aparelho automatizado para determinao dos fatores da Coagulao (figura 7).

Figura - 4 Analisador bioqumico automatizado Aparelho: A-25 240 testes/hora Mtodos: Imunoturbidimetria, turbidimetria, colorimtrico, enzimtico e cintico.

Figura-5 Aparelho: AVL 9180 Aparelho para determinao Eletrlitos Mtodo: Eletrodo seletivo.

Figura 6 Contador de clulas automatizado Aparelho: XS 1000i 60 testes /hora Mtodo: Impedncia e Processo ptico

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Figura 7 Aparelho automatizado para determinao dos fatores da coagulao. Aparelho: ACL-200 Mtodo: Nefelometria

Como principais resultados desta importante ferramenta, podemos destacar: Construo de um banco de dados: O armazenamento dos dados de forma ordenada em um banco de dados possibilitar a construo de uma base cientfica para as pesquisas clnicas e experimentais, permitindo aos pesquisadores, utilizarem estes resultados de maneira mais eficiente. Introduo da tecnologia de cdigo de barras: Esta tecnologia permite uma automatizao dos processos ganhando em eficincia e eliminando o fator erro nas identificaes das amostras, alm de ser condio fundamental para o processo de interfaceamento. Aumento da produtividade: Com a automatizao das tarefas, o processo torna-se muito mais gil, refletindo na reduo do tempo de entrega de laudos, contribuindo para aumentar o ndice de satisfao dos pesquisadores e a produtividade do laboratrio. Reduo do nvel de erros na digitao dos laudos: Uma vez que as tarefas so automatizadas, o nvel de erros de digitao reduzido zero, contribuindo para os programas de qualidade nacional atravs do Programa Nacional de Controle de Qualidade PNCQ, da Sociedade Brasileira de Anlises Clnicas SBAC, e internacional atravs do Programa de Evalucion Externa de La Calidad - PREVCAL, Barcelona - Espanha, praticados pelo LabLip.

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4. CONCEITOS BSICOS DAS TCNICAS UTILIZADAS NO LABORATRIO CLNICO

Muitas determinaes realizadas em um laboratrio clnico baseiam-se em medies de energia radiante emitida, transmitida, absorvida, dispersa ou refletida sob condies controladas. As principais tcnicas sero descritas a seguir de forma resumida.

4.1. Fotometria e espectrofotometria:

A fotometria a medida da intensidade luminosa ou a quantidade de luminosidade incidente em uma superfcie. A espectrofotometria a medida da intensidade da luz em comprimentos de ondas selecionados. O termo medida fotomtrica foi originalmente definido como o processo utilizado para medir a intensidade de luz independente do comprimento de onda. Os instrumentos modernos, no entanto, isolam uma faixa estreita do comprimento de onda do espectro para as medies. Aqueles que utilizam filtros para este fim so referidos como fotmetros de filtro (figura 8), enquanto aqueles que utilizam prismas ou grades so chamados espectrofotmetros (figura 9). A principal utilidade analtica dos fotmetros de filtro ou espectrofotmetros o isolamento e a utilizao de regies discretas do espectro para fins de medio.

Figura 8: Aparelho fotmetro de filtro; utilizado para bioqumica clnica.

Figura 9: Aparelho espectrofotmetro; utilizado para bioqumica clnica.

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4.2. Fotometria de reflexo:

Na fotometria de reflexo, a luz difundida incide em uma mistura de reao localizada em um carreador e a luz refletida medida. Alternativamente, o carreador iluminado e a mistura de reao gera uma luz refletida difusa, que medida. A intensidade da luz refletida a partir do reagente carreador comparada com a intensidade da luz refletida de uma superfcie de referncia. Em virtude de a intensidade da luz refletida no ser linear em relao concentrao da substncia analisada, a equao de Kubelka-Munk ou a transformao de Clapper-Willians so comumente utilizadas para converter os dados de um formato linear. Os componentes eletropticos utilizados na fotometria de reflexo so essencialmente os mesmos exigidos para a fotometria de absorbncia. A fotometria de reflexo utilizada para medidas em sistemas qumicos com pelcula seca.

4.3. Espectrofotometria de absoro atmica:

A espectrofotometria de absoro atmica amplamente utilizada no laboratrio clnico tanto para diagnstico como para pesquisas para medir diversos analticos, dentre eles, o sdio, potssio, clcio, magnsio, fsforo, zinco, ltio, chumbo, cobre e alumnio. A espectrofotometria de absoro atmica uma tcnica de emisso em que um elemento na amostra excitado e a energia radiante, obtida ao longo do processo, medida enquanto o elemento retorna ao nvel energtico mais baixo. No entanto, o elemento no apreciavelmente excitado pela chama, mas meramente dissociado das respectivas ligaes qumicas (atomizado) e transferido para o estado no excitado ou fundamental (tomo neutro). Assim, o tomo est em um nvel de energia baixo e capaz de absorver radiao em largura de banda muito estreita, correspondente prpria linha espectral. A lmpada de catodo oco com o catodo constitudo do material a ser analisado, utilizada para produzir um comprimento de onda de

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luz especfico do material. Dessa forma, se o catodo composto de sdio, a luz de sdio, predominantemente de 589 nm, ser emitida pela lmpada. Quando a luz da lmpada de catodo oco penetra na chama, parte dessas absorvida pelos tomos no estado fundamental, resultando em uma reduo lquida de intensidade dos raios na chama. Este processo designado absoro atmica. Em geral, esse mtodo aproximadamente 100 vezes mais sensvel que o mtodo da fotometria de chama (figura 10). A troca no laboratrio clnico do fotmetro de chama pela espectrofotometria de absoro atmica ocorreu em funo da maior especificidade e sensibilidade e tambm por causa da biossegurana que proibiu a utilizao de botijo de gs no laboratrio clnico.

Figura 10: Aparelho fotmetro de chama; utilizado no passado para dosagem de eletrlitos.

4.4. Fluorimetria:
A fluorescncia ocorre quando uma molcula absorve luz em um comprimento de onda e reemite essa luz em comprimento de onda maior. Um tomo ou molcula que apresenta fluorescncia considerado um fluorforo. A fluorometria definida como a medio da fluorescncia da luz emitida. A anlise fluorimtrica um mtodo muito sensvel e amplamente utilizado em anlises quantitativas na bioqumica clnica.

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4.5. Fosforimetria:
a medio da fosforescncia, um tipo de luminescncia produzida por certas substncias aps a absoro de energia radiante ou outros tipos de energia. A fosforescncia distingue-se da fluorescncia na medida em que continua presente mesmo aps o desaparecimento da radiao. O tempo de decaimento de emisso de luz da fosforescncia mais longo que o tempo de decaimento de emisso da fluorescncia. Tempos de decaimento so expressos em intervalos de vrias ordens de grandeza e variam de acordo com a molcula e as caractersticas da soluo. A fosforescncia apresenta maior alterao no comprimento de onda da luz emitida que a fluorescncia.

4.6. Luminometria:
A quimioluminescncia, bioluminescncia e eletroquimioluminescncia so tipos de luminescncia nos quais o evento excitatrio provocado por uma reao qumica, bioqumica ou eletroqumica, e no por fotoiluminao. Instrumentos para medir esse tipo de emisso de luz so conhecidos, genericamente, como luminmetros. O evento fsico emisso de luz na quimioluminescncia, bioluminescncia e eletroquimioluminescncia semelhante aquele da fluorescncia, na medida em que ocorre a partir de um estado excitado singleto, e a luz emitida quando o eltron retorna ao estado fundamental.

4.7. Quimioluminescncia e Bioluminescncia:

A quimioluminescncia a emisso de luz quando um eltron retorna de um nvel excitado ou superior de energia a um nvel energtico mais baixo. O evento excitatrio causado por uma reao qumica e envolve a oxidao

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de um composto orgnico, como luminol, isoluminol, steres de acridina ou luciferina, com o auxlio de um oxidante, como perxido de hidrognio, hipoclorito ou oxignio. A luz emitida a partir de um produto excitado, formado pela reao de oxidao. Estas reaes ocorrem na presena de catalisadores, tais como enzimas (fosfatase alcalina, peroxidase, etc.), ons metlicos ou de metais complexos e hemina. A bioluminescncia uma forma especial de quimioluminescncia encontrada em sistemas biolgicos. Na bioluminesccnia, uma enzima ou uma fotoproteina aumenta a eficincia da reao de luminescncia. A luciferase e a aquorina so dois exemplos desses catalisadores biolgicos. O rendimento quntico (total de ftons emitidos por molculas reativas totais) de cerca de 0,1% a 10% para quimioluminescncia e de 10% a 30% para a bioluminescncia. Os ensaios de quimioluminescncia so ultra-sensveis (limites de deteco de atomole a zeptomole), apresentando uma faixa dinmica ampla. Eles so agora frequentemente utilizados em imunoensaio automatizado e em ensaios envolvendo sonda de DNA.

4.8. Eletroquimioluminescncia:
A eletroquimioluminescncia difere da quimioluminescncia porque as espcies reativas que produzem quimioluminescncia so geradas eletroquimicamente, por precursores estveis, na superfcie de um eletrodo. O quelato tris (bipiridil) rutnio o marcador de eletroquimioluminescncia mais comumente utilizado e a eletroquimioluminescncia gerada, em um eletrodo, a partir de um tipo de reao de oxidao-reduo com tripropilamina. Este quelato muito estvel e relativamente pequeno e tem sido utilizado para marcar haptenos ou grandes molculas (protenas ou oligonucleotdeos). O processo de eletroquimioluminescncia tem sido utilizado em ensaios imunolgicos e de cidos nucleicos. A vantagem desse processo consiste na prepara-

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o simples, na alta estabilidade dos reagentes em uma grande sensibilidade. A utilizao desse processo proporciona limites de deteco de 200 fmol/L e uma escala dinmica, que se estende por seis ordens de magnitude.

4.9. Nefelometria e Turbidimetria:

A disperso da luz um fenmeno fsico resultante da interao da luz com partculas em soluo. Nefelometria e turbidimetria so tcnicas analticas utilizadas para medir luz dispersa. Medio de luz dispersa aplicada a imunoensaios de protenas especficas e haptenos. A disperso da luz ocorre quando a energia radiante atravessando uma soluo colide elasticamente com uma molcula, o que resulta no espalhamento da luz por todas as direes. Ao contrrio da emisso de fluorescncia, o comprimento de onda da luz dispersa o mesmo que o da luz incidente. Fatores que influenciam na disperso da luz incluem o efeito do tamanho da partcula, a dependncia do comprimento de onda, distncia de observao, o efeito de polarizao da luz incidente, a concentrao das partculas e a massa molecular das partculas. A turbidez diminui a intensidade do feixe de luz incidente, enquanto este passa por uma soluo contendo partculas. A medida desta diminuio de intensidade chamada turbidimetria que anloga absorbncia da espectroscopia. A turbidimetria utilizada para medir a intensidade da luz dispersa. Fotmetros ou espectrofotmetros so frequentemente utilizados como turbidmetros, uma vez que medidas turbidimtricas so facilmente executveis nesses equipamentos, exigindo pouca otimizao. A principal preocupao relacionada s medidas turbidimtricas a relao entre o sinal e rudo de fundo. Sistemas fotomtricos com rudo eletroptico no intervalo d 0,0002 unidade de absorbncia ou inferiores so teis para medies de turbidez.

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A nefelometria definida como a deteco de energia da luz dispersa ou refletida em direo a um detector que no se encontra na trajetria direta da luz transmitida. Nefelmetros comumente medem luz dispersa em ngulo reto em relao luz incidente. Alguns nefelmetros so projetados para medir a luz dispersa em ngulos diferentes de 90, para aproveitar o aumento na intensidade para frente causada pela disperso da luz por partculas maiores. Os fluormetros so frequentemente utilizados para executar medies nefelomtricas. No entanto, a dependncia angular da intensidade de disperso resultou na concepo de nefelmetros especiais.

4.10. Potenciometria:
Sensores potenciomtricos so amplamente utilizados na clnica para medir pH, PCO2 e eletrlitos em sangue total, soro, plasma e urina e como transdutores para o desenvolvimento de biossensores de metablitos de interesse clnico. Potenciometria a medida de diferena de potencial eltrico entre dois eletrodos (semiclulas), em uma clula eletroqumica. Este tipo de clula eletroqumica galvnica consiste em dois eletrodos (eltron ou condutores metlicos), que esto conectados por uma soluo eletroltica que conduz ons. Um eletrodo, ou semiclula consistem em um nico condutor metlico, que est em contato com uma soluo de eletrlito. Os condutores de on consistem em uma ou mais fases que esto em contato direto uns com os outros ou separados por membrana permeveis unicamente a nions ou ctions especficos. Uma das solues de eletrlito a amostra contendo os analitos a serem medidos. Esta soluo pode ser substituda por uma soluo de referncia adequada para fins de calibrao.

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4.11. Eletrodo seletivo para ons:

Os potenciais de membrana so gerados pela permeabilidade de certos tipos de membranas a nios ou ctions selecionados. Essas membranas so utilizadas para fabricar eletrodos seletivos para ons (figura 5), que seletivamente interagem com uma nica espcie inica. O potencial produzido na interface da soluo membrana-amostra proporcional ao logaritmo da atividade inica ou concentrao do on em questo. Medidas com eletrodo seletivo so simples, muitas vezes rpidas, no destrutivas e aplicveis a uma vasta gama de concentraes. Este aparelho chegou ao laboratrio de forma inteligente para substituir o fotmetro de chama (figura 10). A membrana seletiva para os ons a parte mais importante de um eletrodo seletivo, uma vez que controla a seletividade do eletrodo. As membranas seletivas para ons tipicamente consistem em material de vidro, cristalino ou polimrico. A composio qumica da membrana concebida para alcanar uma tima qualidade de permeabilidade seletiva para um on de interesse. Na prtica, outros ons exibem interaes limitadas com as faces da membrana e iro apresentar certo grau de interferncia para a determinao de um on. Na prtica clnica laboratorial, se a interferncia excede um valor aceitvel, uma correo necessria.

4.12. Condutometria:
uma tcnica eletroqumica utilizada para determinar a quantidade de um analito presente em uma mistura, medindo o efeito dele sobre a condutividade eltrica da mistura. Essa a medida da capacidade dos ons em soluo de transportar corrente sob a influncia de uma diferena de potencial. Em uma clula condutomtrica, o potencial aplicado entre dois eletrodos metlicos inertes. No laboratrio clnico, a condutometria frequentemente utilizada para medir o hematcrito.

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Os eritrcitos agem como insufladores eltricos graas composio da membrana lipdica. Este fenmeno foi inicialmente utilizado na dcada de 1940 para medir o hematcrito por condutividade e atualmente utilizado para medir o hematcrito em instrumentos multianaliticos para anlises clnicas. Alm disso, geralmente concentraes de sdio e potssio tambm so medidas em conjugao com o hematcrito, em sistemas concebidos para o laboratrio clnico. Medidas do hematcrito baseadas em condutividade so limitadas, pois vrias situaes podem levar ao erro da anlise e liberao de um falso resultado. No entanto, a medida eletroqumica de hematcrito em conjugao com os gases do sangue e eletrlitos permanece em utilizao, principalmente, em funo da simplicidade e convenincia, apesar de algumas limitaes. Outra aplicao clnica de grande importncia na evoluo do laboratrio clnico envolvendo a condutncia a contagem eletrnica de clulas sanguneas em suspenso. Denominada princpio Coulter (figura 11), baseia-se no fato de que a condutividade de clulas sanguneas inferior da soluo salina utilizada como meio de suspenso. A suspenso de clulas forada atravs de um tubo com pequeno orifcio. Dois eletrodos so colocados em ambas s extremidades do tubo e uma corrente constante estabelecida entre os eletrodos. Cada vez que uma clula passa atravs dos orifcios, a resistncia aumenta isto causa uma mudana na diferena de potencial eltrico entre os eletrodos. Os pulsos so ento amplificados e contados.

Figura 11: Aparelho Coulter; utilizado para hematologia.

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4.13. Eletroforese:
Eletroforese (figura 12) um termo abrangente que se refere migrao de partculas ou solutos carregados em um meio lquido sob a influncia de um campo eltrico. Iontoforese um termo similar, mas se aplica somente migrao de ons pequenos. Eletroforese de zona a tcnica mais utilizada nos dias atuais em anlises clnicas. Nesta tcnica, as molculas carregadas migram em zonas, normalmente em um meio de suporte poroso, com um gel de agarose, aps a amostra ter sido misturada a uma soluo tampo. gerado um eletroferograma, uma representao de zonas proteicas, cada uma finamente separada das zonas vizinhas, sobre o material de suporte. As zonas de protena so visualizadas quando o meio de suporte corado com um corante especfico para protena, o meio ento seco, e as zonas so quantificadas em um densitmetro. O meio de suporte seco e mantido como um registro permanente.

Figura 12: Aparelho de eletroforese; utilizado para separao de protenas.

4.14. Cromatografia
A cromatografia utilizada no laboratrio clnico para separar e quantificar vrios analitos clnicos relevantes como a hemoglobina glicada (muito utilizada para acompanhamento do paciente diabtico).

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A cromatografia um mtodo fsico de separao no qual os componentes a serem separados so distribudos entre duas fases: uma delas estacionria, enquanto a outra se movimenta em uma direo definida (mvel). A fase estacionria pode ser um slido, um gel ou um lquido. Se for lquido, pode ser distribudo sobre um suporte slido. Esse suporte slido pode ou no contribuir para o processo de preparao. A fase mvel pode ser gs ou lquido que se infiltra atravs ou ao longo do leito estacionrio numa direo definida. Cromatografia de fase reversa um tipo de cromatografia de participao lquida na qual a fase mvel significativamente mais polar do que a fase estacionria. J a cromatografia de partio um modo de cromatografia no qual a separao baseada, principalmente, nas diferenas entre as solubilidades dos componentes da amostra na fase estacionria (cromatografia em fase gasosa) ou nas diferenas entre as solubilidades dos componentes nas fases mvel e estacionria (cromatografia lquida). Na cromatografia em colunas, realizada uma tcnica de separao na qual o leito estacionrio est dentro de um tubo. Na cromatografia gasosa temos uma coluna no qual a fase mvel um gs. Acrescentando a cromatografia de fase gasosa, temos a cromatografia de fase gasosa com espectrometria de massa, que um processo analtico que usa a cromatografia em fase gasosa acoplada a um espectrmetro de massa. A cromatografia lquida uma forma de cromatografia de coluna na qual a fase mvel um lquido. Existem dois tipos de cromatografia lquida que so: cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC) e cromatografia lquida com espectrometria de massa, esta primeira muito utilizada no laboratrio de anlises clnicas atualmente, ela um tipo de cromatografia lquida que usa uma eficiente coluna contendo pequenas partculas de fase estacionria. J a segunda exerce um processo analtico que usa um cromatgrafo lquido acoplado a um espectrmetro de massa.

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Cromatografia planar uma tcnica de separao na qual a fase estacionria um papel ou uma camada de partculas slidas dispersas em um suporte (cromatografia em camada fina). Um dos tipos de cromatografia mais utilizados na prtica laboratorial analtica no passado a cromatografia de troca inica, que um tipo de cromatografia em que a separao baseada, principalmente nas diferenas das afinidades de troca de ons dos componentes da amostra.

4.15. Sensores Qumicos pticos:

Um optodo um sensor ptico utilizado em instrumentos analticos para medir pH, gases sanguneos e ons. Optodos apresentam certas vantagens sobre eletrodos, incluindo a facilidade de miniaturizao, menos rumor eletrnico, estabilidade em longo prazo utilizando medidas do tipo radiomtricas em mltiplos comprimentos de onda e no exige um eletrodo de referncia em separado. Estas vantagens promoveram o desenvolvimento da tecnologia de sensores pticos inicialmente para concepo de sensores intravasculares de gases sanguneos. No entanto, os mesmos princpios bsicos de sensoriamento foram utilizados na instrumentao da bioqumica clnica projetada para medidas, in vitro, mais clssicas em amostras distintas. Nesses sistemas, a luz transmitida para o local de sensoriamento, e a partir dele, quer seja por fibras pticas ou simplesmente pelo posicionamento adequado das fontes luminosas, filtros e fotodetectores para acompanhar a absorbncia, fluorescncia ou fosforescncia.

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5. EVOLUO TCNICA NA PRTICA LABORATORIAL

A hematologia tambm sofreu grande avano na tecnologia automotiva, onde no passado uma das vidrarias mais utilizadas na hematologia era a cmara de Neubauer (figuras 13 A e B) conhecida tambm como hemocitmetro. O setor de hematologia o mais solicitado no laboratrio clnico pelos mdicos, seguida bem de perto pelos setores de urinlise e bioqumica.

Figura 13 A: Vidraria cmara de Neubauer; utilizada para contagem de clulas.

Figura 13 B: Vista superior da cmara de Neubauer; quadrantes.

A cmara de Neubauer utilizada at os dias atuais, sendo que prevalece na contagem celular dos lquidos biolgicos, levando-se em conta que a automatizao na hematologia levou a diminuio de seu uso. A Cmara de Neubauer, tambm conhecida como hemocitmetro, uma lmina grossa de uso microscpico, com formato retangular e normalmente de vidro, com uma depresso no centro, utilizada para fazer contagem de clulas por unidade de volume de uma suspenso. Podem ser contadas as clulas sanguneas, tais como hemcias e leuccitos, assim como clulas oriundas de outros procedimentos invasivos para investigao de determinadas patologias. Os procedimentos para contagem de clulas incluem trs etapas: diluio do material biolgico, amostragem da suspenso diluda em um volume determinado e contagem das clulas nesse volume. Para a contagem de hemcias deve-se realizar uma diluio 1:200 do sangue total num lquido diludo chamado Hayem, que permite a conservao dessas clulas. J na contagem

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de leuccitos, feita uma diluio 1:20 com o lquido de Turk, que tem a propriedade de lisar as hemcias, conservando os leuccitos. Na diluio para a contagem de plaquetas deve-se utilizar o lquido de Rees. A cmara de Neubauer deve ser preenchida corretamente, sem que haja transbordamento de lquido para os sulcos e nem passagem para o outro retculo. Aps seu enchimento, no se pode tocar a lamnula, pois isso causaria o arrastamento das clulas. Este instrumento possui dois retculos separados por um sulco (figura 13 B). Cada retculo possui quatro quadrados grandes (rea A), divididos em 16 quadrados mdios, utilizados para a contagem de leuccitos. Ao centro, o retculo possui 25 quadrados mdios, representados pela letra C. Cada quadrado desses possui ainda 16 quadrados pequenos, nessa regio feita a contagem de hemcias e leuccitos. A Pipeta de Thoma (figura 14) utilizada na realizao das diluies necessrias Cmara de Neubauer.

Figura 14: Pipeta de Thoma.

Figura 15: Pipeta de Sahli.

Para a dosagem da hemoglobina, utilizamos a pipeta de Sahli (figura 15) na qual aspiramos o sangue total at a marca de 20L e mistura-se com 5ml de soluo de Drabkin em um tubo de ensaio. Aps homogeneizar o tubo, esperamos 10 minutos para fazer a leitura em espectrofotmetro (540 nm) previamente zerado com o branco reativo (Lquido de Drabkin). A urinlise tambm merece destaque em sua evoluo na automao, pois como citado no breve histrico da patologia clnica, um exame de urina que durava cerca de 2h para ser realizado em tempo bem reduzido, atualmente

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existe uma vasta automao permitindo com que este procedimento seja realizado em poucos minutos. Os equipamentos automatizados para realizao de exames de urina e outros fluidos corporais podem ser automatizados (figura 16) ou semiautomticos (Figura 2 a). Praticamente todos os fabricantes de tiras reagentes desenvolveram seus prprios instrumentos. Alguns fabricantes tambm desenvolveram sistemas automatizados para realizao de anlises microscpicas de urina e/ ou fluidos corporais.

Figura 16: Modelo: Urisys 2400; Aparelho automatizado de Urinlise. Metodologia aplicada: Fotometria e refratometria. Capacidade de realizao de 240 Testes/hora.

Importantes achados do sedimento urinrio podem passar sem a ateno devida quando protocolos laboratoriais direcionam os profissionais a no realizarem exames microscpicos em casos de obteno de resultados negativos com o uso de fitas reativas. As tiras reagentes de uso corrente no dispem de indicadores qumicos que detectem cristais, clulas tubulares epiteliais, parasitas e leveduras. Esses achados nem sempre apresentam outras alteraes que indiquem a necessidade da realizao de uma sedimentoscopia. Alm disso, substncias interferentes ainda tm papel no mascaramento ocasional da presena de clulas de interesse clnico. A automao da etapa de microscopia do exame de urina no s auxilia na deteco de sedimentos inesperados, como permite a padronizao da identificao e da quantificao do sedimen-

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to urinrio. As eliminaes de imprecises no controle manual da durao de reaes e na subjetividade visual na interpretao do padro de cores dos reagentes tornam o exame de urina mais confivel e menos dependente do profissional que o realiza. Com a implantao da automao, um exame de urina completo pode ser realizado em tempo equivalente quele necessrio para realizar apenas a anlise qumica. Inmeras marcas de sistemas automatizados de urinlise encontram-se atualmente disponveis. As possibilidades atuais de escolha incluem os leitores de tiras reativas, leitores semiautomticos de tiras reativas, analisadores de qumica urinria totalmente automticos, analisadores automticos de sedimento urinrio e analisadores de urina totalmente automticos, com capacidade de realizar ambas, anlises qumicas e do sedimento. Aos instrumentos semiautomatizados requerem a imerso manual da tira reagente na urina, seguida da colocao da amostra no equipamento. A identificao da amostra realizada antes da coleta. Instrumentos que realizam a leitura automtica da tira reagente usam espcimes identificados com cdigos de barras. Embora a coleta da amostra seja automtica, os tubos devem ainda ser abertos antes de sua colocao nesses equipamentos. Analisadores automticos de sedimento urinrio empregam sistemas similares de identificao por cdigo de barras e das necessidades de manejo da amostra. Os leitores de tiras reagentes e os analisadores de sedimento podem utilizados em conjunto para um exame de urina completamente automatizado.

6. INTERFACEAMENTO NO LABORATRIO CLNICO

Acompanhando a evoluo tecnolgica no campo da Patologia Clnica, surgiu uma ferramenta importantssima, que veio contemplar todas as fases dos procedimentos laboratoriais, trazendo valores de excelncia aos sistemas da qualidade interno e externo (CQI e CQE). O interfaceamento (Figura 17),

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utilizado no primeiro instante em que as amostras so recebidas e cadastradas na recepo onde so identificadas com etiquetas de cdigo de barras antes de qualquer manipulao do material. Em seguida, aps a identificao de todo o material biolgico, as amostras so encaminhadas a rea tcnica, que confirma eletronicamente o recebimento das mesmas.

Figura 17: Interfaceamento. Modelo: MPA/EVO, cobas 6000 Sistema Pr Analtico totalmente integrado ao analisador Hbrido (Bioqumica/Imunologia/Hormnio) Velocidade estimada de processamento (Centrifugao, destampamento, aliquotagem, etiquetagem, tapamento, distribuio e armazenamento) de 500 tubos/hora Velocidade final de anlise pr e ps-analtica com todos os mdulos possveis integrados de 3510 testes/hora.

Este procedimento permite a identificao, em cada etapa do processo, do operador, data e hora da operao e o material manipulado. As anlises das amostras so realizadas com a integrao entre o sistema de anlise e o sistema de interface com os equipamentos laboratoriais que confere ao processo de diagnstico um nvel de segurana fundamental para garantirmos a qualidade, confiabilidade e eficincia necessria aos resultados obtidos em cada anlise. As interfaces so baseadas em tecnologia de cdigo de barras para fazer a integrao entre o sistema de anlise e os equipamentos laboratoriais. O sistema trabalha com os tubos primrios identificados com etiqueta de cdigo de barra no ato do recebimento das amostras. Este procedimento evita troca de

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amostras alm de eliminar a necessidade de aliquotar (fracionar) material com identificao manual. O corpo tcnico do laboratrio clnico, no intervm com o equipamento para program-lo e principalmente para transcrever os resultados para as planilhas de trabalho. Todo o processo de programao dos equipamentos e obteno dos resultados eletrnico e sem interveno dos funcionrios do laboratrio. Aps obteno do resultado no sistema de anlise, feita a liberao eletrnica do laudo que impresso, entregue ou enviado ao solicitante. As informaes dos resultados no so manipuladas, todos os resultados so extrados do banco de dados garantindo consistncia e segurana. Como todos os resultados esto armazenados em um banco de dados de forma estruturada, outro diferencial importante que esta base de dados poder ser posteriormente utilizada para consulta e cruzamento de dados. Esta ferramenta vem auxiliar o laboratrio clnico no sistema da qualidade, evitando erros que possam comprometer a credibilidade e envolvimento em possveis aes punitivas.

7. FUTURO DA PATOLOGIA CLNICA

Este progresso segue em quatro direes, a saber: 1) diagnstico por patologia molecular (reao em cadeia da polimerase [PCR], sondas de DNA, polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrio [RFLP], ensaios baseados em sequncia, testes genticos) (Inhorn, 1994); 2) testes rpidos que so os testes no local de atendimento (Friedman, 1994; Wilkinson, 1997); 3) automao por meio da ampliao da informtica e da robtica (O Bryan, 1994, 1998); 4) telemedicina. As tcnicas moleculares fornecem sensibilidade extraor-

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dinria para a deteco precoce e mais precisa das doenas, assim reduzindo a morbidade e os custos por meio do melhor monitoramento do paciente. A capacidade de oferecer aos pacientes exames mais confiveis propicia informaes crticas de maneira diligente e conveniente. Os avanos na tecnologia incluem computadores menores e mais rpidos, reduo no tamanho do equipamento tcnico e maior capacidade de processamento das amostras. A unio do computador com o laboratrio clnico por meio da biotecnologia disponvel adicionar a resoluo genmica, protemica, etc. aos cuidados com o paciente. Isso acarreta maiores informaes aos servios de sade que podero diagnosticar tratar e monitorar o paciente de maneira mais adequada. O apoio do laboratrio clnico em transplantes de tecidos e rgos j de fundamental importncia para o controle da doena.

8. COMENTRIOS FINAIS:
Como vimos ao longo da historia da humanidade, a curiosidade sempre aliada procura pelo bem estar do homem, buscou recursos embora primitivos para beneficiar a sade. Com a Patologia clnica, no foi diferente. Este importante segmento da cincia, teve grande evoluo tecnolgica e de inovao, contribuindo de forma muito crescente no auxilio a investigao clnica. Isto vem proporcionando diagnstico e melhor conhecimento das patologias que sempre perseguiram o homem durante sua existncia. Portanto, hoje contamos com os mais modernos e eficazes sistemas de automao que fazem a diferena no cenrio da medicina laboratorial.

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