Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Ingeniera Escuela de Ingeniera Qumica

LIXIVIACIN DE COLORANTES DEL TIPO FLAVONOIDES CONTENIDOS EN LA CORTEZA DE LA ESPECIE FORESTAL ALISO (Alnus arguta (Schltdl.) Spach), UTILIZANDO DOS SOLVENTES PARA SU EXTRACCIN, A NIVEL LABORATORIO

Genaro Francisco Barrera Garca Asesorado por: Inga. Telma Maricela Cano Morales

Guatemala, noviembre de 2008.

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

FACULTAD DE INGENIERA

LIXIVIACIN DE COLORANTES DEL TIPO FLAVONOIDES CONTENIDOS EN LA CORTEZA DE LA ESPECIE FORESTAL ALISO (Alnus arguta (Schltdl.) Spach), UTILIZANDO DOS SOLVENTES PARA SU EXTRACCIN, A NIVEL LABORATORIO

TRABAJO DE GRADUACIN PRESENTADO A JUNTA DIRECTIVA DE LA FACULTAD DE INGENIERA POR

GENARO FRANCISCO BARRERA GARCA

ASESORADO POR INGA. TELMA MARICELA CANO MORALES AL CONFERRSELE EL TTULO DE

INGENIERO QUMICO
GUATEMALA, NOVIEMBRE DE 2008

UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA FACULTAD DE INGENIERA

NMINA DE JUNTA DIRECTIVA

Decano Vocal I Vocal II Vocal III Vocal IV Vocal V Secretaria Ing. Murphy Olympo Paiz Recinos Inga. Glenda Patricia Garca Soria Inga. Alba Maritza Guerrero de Lpez Ing. Miguel ngel Dvila Caldern Br. Jos Milton De Len Bran Br. Isaac Sultn Meja Inga. Marcia Ivnne Vliz Vargas

TRIBUNAL QUE PRACTIC EL EXAMEN GENERAL PRIVADO

Decano Examinador Examinador Examinador Secretaria Ing. Murphy Olympo Paiz Recinos Ing. Jos Eduardo Caldern Garca Ing. Jos Manuel Tay Oroxom Ing. Jorge Emilio Godinez Lemus Inga. Marcia Ivnne Vliz Vargas

HONORABLE TRIBUNAL EXAMINADOR

Cumpliendo con los preceptos que establece la ley de la Universidad de San Carlos de Guatemala, presento a su consideracin mi trabajo de graduacin titulado:

LIXIVIACIN DE COLORANTES DEL TIPO FLAVONOIDES CONTENIDOS EN LA CORTEZA DE LA ESPECIE FORESTAL ALISO (Alnus arguta (Schltdl.) Spach), UTILIZANDO DOS SOLVENTES PARA SU EXTRACCIN, A NIVEL LABORATORIO,

tema que me fuera asignado por la Direccin de la Escuela de Ingeniera Qumica, con fecha 29 de mayo de 2008.

__________________________________ Genaro Francisco Barrera Garca

AGRADECIMIENTOS A:

DIOS

M creador y salvador.

MIS PADRES

Genaro e Iris, gracias por su ayuda incondicional y confianza depositada en m.

MIS HERMANOS

Estuardo y Belbeth, por su apoyo y cario recibidos.

MIS TOS Y PRIMOS

Por su ayuda y cario en todos los momentos de mi vida.

MIS AMIGOS

Por su amistad y apoyo brindado durante todo este tiempo. Por todo el apoyo brindado para la realizacin del presente informe.

INGA. TELMA CANO

ING. CESAR GARCA

Por su colaboracin y paciencia en la revisin del presente informe.

DEDICATORIA A:

DIOS

Fuente inagotable de virtud y sabidura

MIS PADRES

Genaro Oswaldo Barrera Molina Iris del Carmen Garca Melndez

MIS HERMADOS

Estuardo y Belbeth

Todos los integrantes de m familia Garca.

Todos los integrantes de mi familia Barrera.

NDICE GENERAL

NDICE DE ILUSTRACIONES LISTA DE SMBOLOS GLOSARIO RESUMEN HIPTESIS OBJETIVOS INTRODUCCIN

V XI XII XV XVII XIX XX

1. ANTECEDENTES 2. MARCO TERICO 2.1 Color 2.2 Colorantes 2.2.1 Colorantes naturales 2.2.2 Sinopsis histrica 2.3 Las plantas como colorantes 2.3.1 Flavonoides 2.4 Caractersticas fisicoqumicas de los colorantes 2.4.1 Colorantes sustantivos 2.4.2 Colorantes mordientes 2.4.3 Colorantes a la tina 2.4.4 Colorantes directos 2.5 Tipos de extraccin de colorantes naturales 2.6 Identificacin de colorantes 2.7 Cromatografa 2.7.1 Principios de la cromatografa 2.7.2 Clasificacin de la cromatografa I

4 5 6 8 9 9 9 9 9 10 11 12 12 13

2.7.2.1 Cromatografa de reparto 2.7.2.2 Cromatografa de adsorcin 2.7.2.3 Cromatografa de exclusin 2.7.2.4 Cromatografa de capa fina 2.7.2.4.1 Historia 2.7.2.4.2 Proceso de adsorcin 2.7.2.4.3 Adsorbentes 2.7.2.4.4 Preparacin de la placa cromatogrfica 2.7.2.4.5 Aplicacin de la muestra 2.7.2.4.6 Desarrollo de la placa 2.7.2.4.7 Cmaras para desarrollo 2.7.2.4.8 Evaluacin de un cromatograma de capa fina 2.8 ndice de refraccin 2.9 Descripcin de la especie forestal Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) 2.9.1 Taxonoma 2.9.1.1 Nombre cientfico 2.9.1.2 Sinonimia 2.9.1.3 Nombre (s) comn (es) 2.9.1.4 Origen 2.9.1.5 Forma biolgica 2.9.1.5.1 Forma 2.9.1.5.2 Copa/hojas 2.9.1.5.3 Tronco /ramas 2.9.1.5.4 Corteza 2.9.1.5.5 Flor 2.9.1.5.6 Fruto 2.9.1.6 Fenologa 2.9.1.6.1 Follaje 2.9.1.6.2 Floracin

13 13 14 14 14 14 15 15 15 16 16 16 17 18 18 18 18 18 18 19 19 19 20 20 21 21 21 21 21

II

2.9.1.6.3 Fructificacin 2.9.2 Distribucin 2.9.3Usos 2.10 Secado de plantas 2.10.1 Almacenamiento de plantas secas 2.11 Lixiviacin 2.11.1 Procesos de lixiviacin 2.11.2 Preparacin de los slidos para la lixiviacin 2.11.3 Temperatura de lixiviacin 2.11.4 Mtodos de operacin 2.11.4.1 Operacin en estado no estacionario 2.11.4.2 Operacin en estado estacionario (continuo) 2.11.4.2.1 Tanques con agitacin 3. METODOLOGA 3.1 Localizacin 3.2 Recursos humanos 3.3 Obtencin de las muestras 3.4 Diseo de tratamientos 3.5 Metodologa experimental 3.5.1 Materiales y equipo a utilizar en la experimentacin 3.5.1.1 Materia prima 3.5.1.2 Cristalera 3.5.1.3 Equipo 3.5.1.4 Otros 3.5.1.5 Reactivos 3.5.2 Mtodo de extraccin del tinte natural a nivel laboratorio 3.5.3 Mtodos para la caracterizacin de los tintes naturales, determinacin de las propiedades fisicoqumicas de los extractos colorantes 3.5.3.1 Determinacin de densidad III

21 22 22 23 24 25 25 26 27 27 28 28 28 29 29 29 30 30 30 30 31 31 32 33 33

34 34

3.5.3.2 Determinacin del ndice de refraccin 3.5.4 Identificacin de flavonoides 3.5.4.1 Reacciones coloridas: 3.5.5 Anlisis cromatogrfico en capa fina 3.5.5.1 Preparacin de la muestra 3.5.5.2 Preparacin de las soluciones estndar 3.5.5.3 Preparacin de la fase mvil 3.5.5.4 Preparacin de la placa cromatogrfica 3.5.5.5 Desarrollo de la placa cromatogrfica 3.5.5.6 Preparacin de las soluciones reveladoras

34 35 35 35 35 36 36 36 37 37

4. RESULTADOS 5. DISCUSIN DE RESULTADOS 6. ANLISIS ESTADSTICO

38 45 49

CONCLUSIONES RECOMENDACIONES REFERENCIA BIBLIOGRFICAS BIBLIOGRAFA APNDICES

61 62 63 64 65

IV

NDICE DE ILUSTRACIONES

FIGURAS

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11.

Estructura bsica de un flavonoide Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Hoja y fruto de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Tronco de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Corteza de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Distribucin Potencial de Alnus arguta (Schltdl.) Spach Plancha de calentamiento Bomba de vaco Balanza Rotavapor Grfico del porcentaje de rendimiento de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para la primera etapa de extraccin sucesiva

8 19 19 20 20 22 31 31 32 32

39

12.

Grfico del porcentaje de rendimiento de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para la segunda etapa de extraccin sucesiva 39

13.

Grfico del porcentaje de rendimiento de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para la tercera etapa de extraccin sucesiva 40

14.

Grfica de comparacin del porcentaje de rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin sucesivas en funcin de la solucin extractora utilizada con el porcentaje de rendimiento a agotamiento en un equipo de extraccin Sohxlet 40

15.

Grfica para el modelo matemtico polinomial V

de la forma %R= a(%Et)3+b(%Et)2+c(%Et)+d para cada una de las etapas de extraccin sucesivas realizadas, y el rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin 16. Grfico de densidades promedios al final del perodo de extraccin de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada solucin extractora utilizada y el nmero de extracciones sucesivas a 20C 17. Grfico del ndice de refraccin promedio al final del perodo de extraccin de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada solucin extractora utilizada y el nmero de extracciones sucesivas a 20C 18. 19. 20. 21. 22. 23. Corteza molida de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach Sistema de maceracin dinmica con reflujo Filtracin de los extractos tintreos Extracto tintreo lquido de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach Rotaevaporacin de los extractos tintreos Extracto tintreo de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach rotaevaporado para tamizaje fitoqumico. 24. 25. 26. 27. Secado de los extractos tintreos Extracto tintreo en polvo de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach Rendimientos obtenidos para los distintos Tamices y Solventes Anlisis Fitoqumico, de izquierda a derecha: solucin estndar, Prueba de Shinola, Prueba con Cloruro Ferrico, Prueba de cido Sulfrico 28. 29. 30. 31. 32. Desarrollo de la placa cromatogrfica Cromatografa en capa fina para la determinacin de flavonoides Determinacin de la densidad del extracto tintreo Determinacin del ndice de refraccin del extracto tintreo Diagrama requerimientos acadmicos para la elaboracin de 74 74 75 75 75 73 73 73 74 43 71 71 72 72 72 43 41

VI

trabajos de graduacin de Ingeniera Qumicas de extraccin de Colorantes Naturales 33. Diagrama Ishikawa para el proceso de extraccin de colorante del Aliso, mediante lixiviacin 77 76

TABLAS

I II

Longitud de onda correspondiente a cada color Clasificacin de los colorantes naturales, segn su composicin qumica

7 23

III IV

Secado de las diferentes partes de una planta Rendimiento promedio de extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach), porcentaje de rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin sucesiva, para un sistema de maceracin dinmica a reflujo con relacin corteza molida/solucin extractora de 1/10, con un tamao de partcula de 248- 297 m, con periodo de extraccin de 2 horas a temperatura de ebullicin de la solucin extractora y Porcentaje de rendimiento a agotamiento utilizando equipo de extraccin Sohxlet para una muestra de corteza seca de 10 g y utilizando etanol al 95% como solucin extractora.

38

Coeficientes de correlacin para el modelo matemtico de la forma %R=a(%Et)3+b(%Et)2+c(%Et)+d para cada una de las etapas de extraccin sucesivas realizadas, y el rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin 41

VI

Propiedades fisicoqumicas promedios de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) a 20C, para un sistema de maceracin dinmica a reflujo con relacin corteza molida/solucin extractora de 1/10, con un

VII

tamao de partcula de 248- 297 m, con periodo de extraccin de 2 horas a temperatura de ebullicin de la solucin extractora VII 42

Reaccin coloridas de Acido Sulfrico y Shinoda para la identificacin de Flavonoides en el extracto tintreo del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) 44

VIII

Anlisis cromatogrfico en capa fina para la determinacin de la presencia de Quercitina, Rutina, cido Clorognico e Hipersido en los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) 44 49 50

IX X XI

Organizacin de datos de ANOVA ANOVA Organizacin de datos ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva

51

XII

ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva 52

XIII

Organizacin de datos ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva 52

XIV

ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva 53

XV

Organizacin de datos ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva 53

XVI

ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva 54

XVII

Organizacin de datos ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva 54

VIII

XIII

ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva 55

XIX

Organizacin de datos ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva 55

XX

ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva 56

XXI

Organizacin de datos ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva 56

XXII

ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva 57

XXIII

Organizacin de datos ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva 57

XXIV

ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva 58

XXV

Organizacin de datos ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva 58

XXVI

ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva 59

XXVII

Organizacin de datos ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva 59

XXVIII

ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva 60

XXIX

Porcentaje de rendimiento del extracto tintreo del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) 65

IX

XXX

Porcentaje de rendimiento a agotamiento del extracto tintreo del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Utilizando equipo de extraccin Sohxlet 66

XXXI

Densidad de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) a 20 C. 66

XXXII

ndice de refraccin de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach). 67

XXXIII

Anlisis granumtrico de la corteza molida del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) 67

LISTA DE SMBOLOS

Smbolo C CF Et 35% Et 70% g Ho Hi inHg mL msnm nm rpm %R SST SSA SSE s2 1

2 S

Descripcin Grados Celsius Cromatografa en capa fina Etanol al 35 % en peso Etanol al 70% en peso Gramos Hiptesis nula Hiptesis alternativa Pulgadas de Mercurio Mililitros Metros sobre el nivel del mar Nanometro Revoluciones por minuto Desviacin estndar Constante dielctrica Porcentaje de rendimiento Suma total de cuadrados Suma de cuadrados en tratamiento Suma de cuadrados del error Cuadrado medio del tratamiento Cuadrado medio del error Volumen Masa

v w

XI

GLOSARIO

Auxocromos

Son los responsables de la fijacin al sustrato a teir, son capaces de fijar la molcula del colorante y en algunos casos intensificar la labor de los cromforos.

Colorantes naturales

Aquellas sustancias naturales que aaden o devuelven algn color, y se encuentran presentes como pigmentos en plantas, hojas y frutos.

Cromatografa

Es una tcnica de separacin basada en la diferente velocidad con que se mueven los solutos a travs de un medio estacionario.

Cromatofolio

Placa cromatogrfica hecha a base de slica gel, utilizada en la cromatografa en capa fina.

Cromrfos

Son todos aquellos compuestos que tienen electrones resonando a determinada

frecuencia y por eso absorben luz al unirse refuerzan la absorcin de radiacin.

XII

Extraccin

Procedimiento por el cual se obtienen los principios qumicos de una planta, al colocarla en contacto con un solvente apropiado.

Extracto seco

Producto de la extraccin de los principios qumicos de una planta, libres de solvente.

Flavonoides

Son metablitos secundarios que se ubican dentro del grupo de compuestos aromticos y fenlicos, su estructura qumica se basa en el anillo flavano sustituido.

Lixiviacin

La lixiviacin es un proceso en el cual se extrae uno o varios solutos de un slido, mediante la utilizacin de un disolvente lquido.

Maceracin

Operacin que consiste en sumergir un slido vegetal en un lquido para extraer de l sus partes solubles.

Secado

Operacin unitaria que consiste en la eliminacin de agua interior de ciertos productos mediante un gradiente de

temperatura entre el interior del producto con el medio de calefaccin.

XIII

Sinergia

Integracin de elementos que da como resultado algo ms grande que la simple suma de stos, es decir, cuando dos o ms elementos se unen sinrgicamente crean un resultado que aprovecha y maximiza las cualidades de cada uno de los elementos.

Tamiz

Cedazo de malla tupida, usado para separar las partes menudas de las gruesas de una masa pulverulenta.

Tamizaje Fitoqumico

El tamizaje fitoqumico es una tcnica que se utiliza para detectar metabolitos secundarios presentes en especies vegetales, desde el punto de vista cualitativo y se basa en la realizacin de reacciones qumicas con diferentes reactivos, donde la aparicin de determinado color o precipitado coloreado o no, es indicativo de la presencia de un determinado metabolito.

XIV

RESUMEN

El presente trabajo de graduacin tiene como objetivo general evaluar el rendimiento extractivo a tres etapas de extraccin sucesivas y caracterizar el extracto tintreo de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) proveniente de un bosque comunal del municipio de Momostenango, Totonicapn. Para llevar a cabo este objetivo se recolect y se sec la corteza del aliso en un secador de bandejas para luego ser molida utilizando un molino de martillos, luego se tamiz la corteza finamente molida y luego se procedi a su extraccin mediante el mtodo de maceracin dinmica con reflujo.

Se realiz la extraccin y caracterizacin de los extractos tintreos de la especie forestal guatemalteca Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach), para ello se utilizaron 2 solventes y 5 soluciones extractoras (agua, etanol al 35%, etanol al 50%, etanol al 70% y 3 etapas de extracciones sucesivas, con 3 repeticiones para cada una, resultando 36 extracciones en total.

El tamao del tratamiento de maceracin dinmica a reflujo fue constante, en funcin de la relacin corteza seca/solvente de 1:10 (w/v), con tiempo de extraccin de dos horas y a temperatura de ebullicin de la solucin, 95C para el agua, 82C para el etanol al 35%, 80C para el etanol al 50%, 78C para el etanol al 70%, a presin atmosfrica (640 mmHg).

Los extractos fueron concentrados al vaco a 12 inHg y a temperaturas menores de 45C. Luego de obtenerlos, se colocaron en refrigeracin y protegidos de la luz directa hasta el momento de su anlisis. Los anlisis que se realizaron fueron: pruebas

XV

colorimtricas (reaccin de Shinoda y reaccin con cido sulfrico concentrado), prueba cromatogrfica (cromatografa en capa fina). El mayor rendimiento se obtuvo al utilizar la solucin etanlica al 35%, teniendo un rendimiento promedio del 22.82% para la primera extraccin sucesiva, 9.87% para la segunda extraccin sucesiva y 4.32% para la tercera extraccin sucesiva.

Como parte complementaria se realiz una extraccin Sohxlet a la corteza del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) con el objetivo de determinar el porcentaje mximo de rendimiento del extracto tintreo que se puede obtener y compararlo con el rendimiento total a 3 etapas de extraccin sucesivas, para esto se utilizaron 10 g de materia prima utilizando como solucin extractora etanol al 95%, llevando la materia prima hasta agotamiento obteniendo as el rendimiento mximo posible, se obtuvo un rendimiento del 40.02%.

De igual manera se logr determinar cromatogrficamente que el tipo de pigmento colorante encontrado fue del tipo flavonoide, especficamente la quercitina, la presencia de flavonoides, no se ve afectada por el tipo de solvente ni el numero de extracciones sucesivas, ya que todos lo extractos presentaron los mismos resultados.

XVI

HIPTESIS

Es factible extraer y caracterizar el extracto tintreo obtenido de la corteza de aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para propsitos de obtencin de colorantes naturales.

HIPTESIS ESTADSTICA Hiptesis nula No existe diferencia significativa en las propiedades fisicoqumicas del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. 1 = 2 = 3

Hiptesis alternativa Existe diferencia significativa en las propiedades fisicoqumicas del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. 1 2 3

Hiptesis nula No existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. 1 = 2 = 3

XVII

Hiptesis alternativa Existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. 1 2 3

XVIII

OBJETIVOS

GENERAL Evaluacin del rendimiento extractivo a tres etapas de extraccin sucesivas y caracterizacin del extracto tintreo de la corteza del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach).

ESPECFICOS

1. Evaluar el rendimiento del extracto tintreo de la corteza de aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de las tres etapas de extracciones sucesivas que se realicen.

2. Caracterizar, fisicoquimicamente, el extracto tintreo obtenido de la corteza de aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach).

3. Caracterizar, por medio de un tamizaje fitoqumico y cromatografa en capa fina, el extracto tintreo obtenido de la corteza de aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach).

4. Evaluar la existencia de diferencia significativa mediante el tratamiento estadstico para la evaluacin de rendimientos y propiedades fisicoqumicas del extracto tintreo obtenido de la corteza de aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) mediante un anlisis de varianza

XIX

INTRODUCCIN

Los colores son utilizados de diferentes maneras por los seres vivos. Por ejemplo, con la absorcin de la luz solar, a travs de la fotosntesis, se produce alimento a partir de aire, agua y nutrientes del suelo. Las flores atraen al insecto polinizador; y estos los usan para clamuflajearse y pasar inadvertidos.

Por ms lejos que nos remontemos en la historia, se sabe que la especie humana ha tenido un inmenso aprecio por la belleza; a partir de lo anterior fue que surgi la idea de extraer de la naturaleza sus colores brillantes y bellos, con la finalidad de plasmarlos en ciertos lugares y objetos creados por el hombre. Dichos colorantes eran extrados principalmente de las plantas. Los compuestos colorantes que se encuentran en la planta se localizan prcticamente en todas sus partes. Los colorantes naturales se usaron en su mayora para teir telas, fibras, hilos y en la elaboracin de vasijas o utensilios y de esa manera expresar sus creencias y sentimientos. Actualmente, tambin se usan en la industria de alimentos y en la farmacutica.

Segn estudios realizados los flavonoides poseen una gran importancia en la utilizacin de las plantas como colorantes naturales. Los flavonoides en forma natural se encuentran en forma libre como glicsidos o derivados metilados en las clulas vivas de las plantas.

El objetivo general del presente estudio es extraer, a nivel laboratorio, los pigmentos colorantes del tipo flavonoides contenidos en la corteza del Aliso (Alnus arguta, (Schltdl.) Spach) provenientes de los bosques de Momostenango, Totonicapn, con la finalidad de su uso en la industria textil en el teido de fibras. Actualmente en las comunidades del altiplano guatemalteco y en especial en Momostenango se utiliza la

XX

corteza del Aliso (Alnus arguta, (Schltdl.) Spach) para obtener un extracto tintreo acuoso utilizado para el teido de fibras que se usan en la confeccin de diversidad de prendas de vestir, ropa de cama, artesanas, etc. Los mencionados extractos tintreos acuosos son obtenidos de una manera emprica por lo que tienen una vida media muy baja; por lo que con los resultados del presente trabajo de investigacin se podr asesorar a pequeos empresarios de la industria textil en la extraccin, secado, preservacin y aplicacin de tintes naturales.

A lo largo de este trabajo de graduacin se encontrarn diferentes secciones en donde se dar respuesta a varias interrogantes que haban surgido antes de realizar la parte experimental, tales como: Qu solvente ofrece un mayor rendimiento en cuanto a la obtencin de extractos colorantes del Aliso?, Qu solvente ofrece extractos con el mayor nmero de pigmentos colorantes del tipo flavonoides contenidos en el Aliso, mediante la cromatografa en capa fina?, etc.

XXI

1. ANTECEDENTES

En el marco del proceso de Investigacin que se realiza en la Seccin de Qumica Industrial del Centro de Investigaciones de Ingeniera, se tienen proyectos de investigacin en extractos vegetales como aceites esenciales, oleorresinas, taninos y colorantes. Especficamente en la temtica de colorantes naturales se han realizado los siguientes trabajos de investigacin: En 1987, Domnguez M, de la Facultad de Ingeniera de la Universidad de San Carlos de Guatemala, realiz la investigacin de tesis titulada Extraccin de los

pigmentos colorantes del tipo xantofilas contenidos en la flor de Tagetes erecta (Marigold), en esta investigacin se determin el contenido de xantofilas totales en la flor de Tagetes erecta. Se utiliz como mtodo de extraccin la saponificacin en fro y en caliente. Donado Miranda, asesorado por la Inga. Telma Cano, en mayo del 2000 en el Centro de Investigaciones de la Facultad de Ingeniera de la USAC realiz la investigacin de tesis denominada Extraccin de carotenoides de la calndula para su utilizacin como colorante natural en productos de consumo humano. La extraccin se realiz a nivel laboratorio, utilizando 2 mtodos de extraccin, con el fin de determinar el mtodo donde se obtiene el mejor rendimiento. En el ao 2001, el Ing. Jos Eduardo Caldern en el Centro de Investigaciones de la Facultad de Ingeniera de la USAC, ejecut el proyecto FODECYT 13-99,

EXTRACCIN DEL COLORANTE ACUOSO, A PARTIR DE LOS RECHAZOS DE EXPORTACION DE LA PRODUCCION NACIONAL DE DOS VARIEDADES DE PITAHAYA, A NIVEL DE PLANTA PILOTO En este proyecto se evalu la obtencin del extracto acuoso de pitahaya por cuatro diferentes mtodos y la factibilidad de industrializacin del extracto a partir de los rechazos de la exportacin.

Del Cid Vsquez, asesorado por la Inga. Telma Cano, en marzo de 2004 en el Centro de Investigaciones de la Facultad de Ingeniera de la USAC, realiz el estudio de trabajo de graduacin denominado Extraccin a nivel laboratorio, de los pigmentos colorantes del tipo flavonoides contenidos en la flor del subn (Acacia farnesiana L. Willd) proveniente de un bosque silvestre guatemalteco, en el mencionado estudio se utilizaron tres diferentes solventes: metanol, etanol y acetona. Ac Santa Cruz, asesorado por la Inga. Telma Cano, en noviembre de 2004, en el Centro de Investigaciones de la Facultad de Ingeniera de la USAC, realiz el estudio de tesis Extraccin a nivel de laboratorio de aceite esencial crudo de pericn (Tagetes lucida Cav), y utilizacin del desecho slido para la extraccin del colorante natural, para su uso en el teido de fibras naturales. Los solventes utilizados fueron: acetona, metanol, etanol. Roberto Caldern, asesorado por la Inga. Telma Cano, en Julio de 2007, en el Centro de Investigaciones de la Facultad de Ingeniera de USAC, realiz el estudio de tesis Extraccin y caracterizacin fisicoqumica del extracto colorante de la corteza de aliso comn (Alnus jorullensis humboldt, bonpland & kunth), proveniente de la organizacin no gubernamental FUNCEDESCRI, en San Lucas Sacatepquez, Guatemala. Los solventes utilizados fueron: agua y etanol y utilizo tres tamaos de partculas diferentes.

2. MARCO TERICO

2.1 Color

El color de una sustancia depende de la capacidad de la misma de absorber o reflejar las radiaciones lumnicas correspondientes al espectro visible. Se llama espectro visible a la zona del espectro electromagntico a la que es sensible el ojo humano. Las longitudes de onda de las radiaciones correspondientes a este espectro van desde los 4.000 a los 7.500 . (Wall, 2003) Un compuesto que absorba luz en todas las longitudes de onda excepto la del azul (4.900 5.100 ) reflejar la luz azul y podr ser percibido de ese color. Al contrario, si absorbiese slo la luz en la longitud de onda del azul y reflejase todo el resto, aparecer del color complementario a la luz absorbida, percibindose ahora de color naranja. La siguiente tabla muestra la longitud de onda correspondiente a cada color y lista los colores complementarios correspondientes. Las longitudes de onda menores a 4.000 pertenecen a la regin espectral del ultra-violeta, mientras que las que superan los 7.500 corresponden a la regin del infrarrojo.

Tabla I. Longitud de onda correspondiente a cada color Longitud de Onda [Unidades Amstrong] 4,000 4.200 4,200 4,450 4.450 4,900 4,900 5,100 5,100 5,300 Color absorbido Violeta ndigo Azul Azul Verdoso Verde Color Complementario Amarillo Verdoso Amarillo Naranja Rojo Prpura

5,300 5,450 5,450 5,800 5,800 6,300 6,300 7,200 7,200 7,500
Fuente: Wall, 2003

Amarillo Verdoso Amarillo Naranja Rojo Prpura

Violeta ndigo Azul Azul Verdoso Verde

2.2 Colorantes

Un colorante se define como Cualquiera de los productos qumicos pertenecientes a un extenso grupo de sustancias, las cuales son capaces de teir las fibras vegetales y animales.. Para que un colorante sea til, debe ser capaz de unirse fuertemente a la fibra, y por lavado no debe perder su color. Debe ser relativamente estable qumicamente y soportar bien la accin de la luz. (Lock, 1997) 2.2.1 Colorantes naturales Los colorantes naturales son aquellas sustancias obtenidas a partir de algunas partes especficas de alguna planta empleando un mtodo de extraccin fsica qumica que ocasiona una seleccin de los pigmentos que se usan como componentes nutritivos o aromticos. (Lock, 1997) Para que una sustancia coloreada, sea considerada un colorante, deber contener grupos cromrfos llamados auxcromos, los que dan a la sustancia afinidad con la fibra. Los colorantes naturales se dividen en varios grupos, a saber: colorantes naturales, tintes naturales y pigmentos naturales. Los colorantes naturales son productos que se adicionan a los alimentos para proporcionarles un color en especfico y hacerlos ms agradables a la vista. Los tintes naturales se usan para teir telas, madera y cuero. Finalmente, los pigmentos naturales son los compuestos responsables del color visible de una planta; adems de ser utilizados por la industria farmacutica.

2.2.2 Sinopsis histrica Hasta mediados del siglo XIX, las plantas, animales y minerales fueron las nicas fuentes como agentes colorantes para teir o pigmentar. Las primeras fibras teidas fueron usadas en tiempos prehistricos alrededor del ao 1000 a.C. Estos teidos simples fueron los primeros ejemplos de la aplicacin de los llamados colorantes directos o colorantes sustantivos, los que resultaron de muy pobre solidez, pobre resistencia al lavado y a la luz. De la planta ndigo se obtiene un colorante azul denominado ail, que ha sido utilizado en la India por cerca de 4000 aos. Los comerciantes fenicios y los migrantes, introdujeron estos colorantes en el Mediterrneo; otro colorante azul, glasto, ha estado en uso desde la Edad de bronce (2500-800 A.C). El ndigo tena que ser fermentada y tratada con orina, luego la fibra era introducida para conseguir un color azul insoluble. Muchos tonos de rojo pudieron obtenerse con la raz de rubia. Las plantas as como los antiguos procedimientos de teido han sido registrados por dos historiadores del primer siglo despus de Cristo. El naturalista romano Plinio El Viejo se refiere en sus escritos tanto al ndigo como al glasto, dos colorantes comunes usados por las tribus Glicas. El griego Dioscrides describe los colorantes de la rubia para el rojo, del azafrn, y gualda para amarillos, glasto para azul, entre otros. Durante la Edad Media, alrededor de 1250 d.C., los procedimientos de tintura fueron registrados por los monjes medioevales. En aquellos tiempos, a menudo, las mismas plantas eran usadas para teir y para fines medicinales. Y as fueron desarrollndose gremios que perfeccionaron los procesos de teido, conservndose estos guardados como secretos. Guatemala, desde la poca colonial y hasta finales del siglo XIX fue uno de los principales productores y exportadores de materias colorantes naturales en el mundo entero, los principales colorantes que se producan eran la cochinilla, el ail y el palo amarillo. A partir de 1771, los colorantes qumicos empiezan a ser una fuerte competencia para los tinte naturales.

Las propiedades de estos productos se ampliaron, muchsimo tiempo despus, a la tincin de productos farmacuticos. En alimentacin su uso ha sido recurrente y slo se ha visto parcialmente desplazado tras la aparicin de colorantes artificiales en el mercado. El primer colorante sinttico obtenido fue el cido porico, preparado por Woulfe en 1771, mediante la accin del cido ntrico sobre el ndigo natural. En el ao 1856 se inici la era de los colorantes sintticos, a partir del descubrimiento de William Henry Perkin (1838 - 1907), quin logr obtener el colorante prpura por oxidacin de la anilina con cido crmico. En 1855 se encontr la forma tcnica de prepararlo a partir del alquitrn de hulla. A partir del alquitrn de hulla se prepar la Aurina, fabricado por Friedlich Ferdinand Runge, en el ao 1834. Una de las caractersticas de un colorante natural es que no causa efectos adversos para la salud, caracterstica con la cual puede competir con xito con los de origen qumico. Los colorantes naturales han sido ampliamente utilizados en la preparacin de alimentos y bebidas, y siguen siendo a nivel mundial una contribucin significante en la preparacin y procesamiento de los mismos.

2.3 Las plantas como colorantes

Los colorantes naturales pueden ser clasificados segn su naturaleza qumica en diversos grupos. Como fuentes naturales de estos colorantes se pueden considerar las plantas superiores, las algas, hongos y lquenes, algunos insectos, as como algunos organismos marinos vertebrados. (Lock, 1997) Son muchas las plantas superiores que producen colorantes; a pesar de su universalidad no estn suficientemente concentrados para permitir una rpida y econmica extraccin, y en consecuencia son escasas las que tienen gran importancia comercial como fuente de colorantes.

La siguiente tabla muestra una clasificacin de colorantes naturales propuesta por Lock en 1997.

Tabla II. Clasificacin de los colorantes naturales, segn su composicin qumica NATURALEZA QUMICA Tetrapirroloe Carotenoides Clorofila Carotenoides Flavonas Flavonales Flavonoides Charconas Auronas Antocianinas Xantonas Naftoquinonas ndigo Betalanas Perinas Flavinas Pirimidinas sustituidas Fenoxanizinas Fenazinas
Fuente: Lock, 1997

EJEMPLOS Ficobilinas

COLOR PREDOMINANTE Azul-verde Verde Amarillo-Anaranjado Blanco-Crema Amarillo-Blanco Amarillo Amarillo Rojo-Azul Amarillo Rojo-Azul-Verde Azul-Rosado Amarillo-Rojo Blanco-Amarillo Amarillo Amarillo-Rojo Amarillo-Prpura

Xantonas Quinonas Derivados indigoides e ndoles

2.3.1 Flavonoides Los flavonoides son pigmentos vegetales que poseen un esqueleto carbonado C6C3-C6 como se encuentra en la flavonona, aurona, charcona, flavona, flavanonol, flavonol, flavandiol-3,4, antocianidina, catequina, isoflavona y neoflavona. Se conocen unos 200 flavonoides naturales. Se encuentran distribuidos entre las plantas, tanto libres como glicsidos; estos ltimos contribuyen a darle color a las flores, frutos y hojas. Los flavonoides presentan todos los matices de solubilidad, desde totalmente solubles en agua hasta insolubles en ella pero solubles en ter etlico (las agliconas muy eterificadas), pasando por los solubles en etanol (agliconas). Por regla general los flavonoides son insolubles en ter de petrleo, lo que permite desengrasar un material antes de extraerlos. Segn estudios realizados los flavonoides representan una gran importancia para la utilizacin de las plantas como colorantes naturales. Los flavonoides en forma natural se encuentran libres como glicsidos o derivados metilados en las clulas vivas de las plantas. Como glicsidos, uno o ms grupos hidroxilos fenlicos estn combinados con residuos de mono o disacridos. La principal funcin de los flavonoides es que desempean un papel importante en las relaciones ecolgicas entre las plantas y con otros organismos insectos benficos, depredadores y de otros animales. Los flavonoides son metabolitos secundarios que se ubican dentro del grupo de compuestos aromticos y fenlicos, su estructura qumica se basa en el anillo flavano sustitudo. Poseen dos anillos bencnicos (A y B) que estn juntos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que en caso de existir es llamado anillo C. Figura 1. Estructura bsica de un flavonoide
O

Fuente: Lock, 1997

Los flavonoides son producidos por una sntesis mixta, ya que el anillo B se forma por la ruta del cido shiqumico, en tanto que el anillo A se sintetiza por la unin cabeza-cola de tres molculas de acetato. As A y B se unen en una relacin de condensacin. Investigaciones suponen que todos los anillos aromticos que tienen grupo hidroxilo en posicin orto, tienen como precursor al cido shiqumico, mientras que los anillos aromticos con grupos hidroxilo en posicin meta, vienen del acetato. 2.4 Caractersticas fisicoqumicas de los colorantes 2.4.1 Colorantes sustantivos Son colorantes que pueden teir directamente las fibras de algodn. 2.4.2 Colorantes mordientes El mordiente es un producto que se adiciona a la fibra y es absorbido por ella, pudiendo consecutivamente atraer el colorante. Este trmino, se usa principalmente para los colorantes que se adicionan usando xidos metlicos como mordiente. Especialmente se emplean como mordientes los xidos de aluminio y cromo por formar precipitados insolubles. 2.4.3 Colorantes a la tina Son sustancias insolubles que se pueden reducir a materiales alquil-solubles. El colorante se aplica en su forma reducida y se re-oxida en presencia de la fibra. 2.4.4 Colorantes directos Se absorbe directamente por las fibras en soluciones acuosas. Hay colorantes cidos y bsicos de este tipo. Estos dos tipos de colorantes se emplean especialmente en el teido de lanas y en poliamidas sintticas.

a. Los colorantes bsicos son sales amnicas o complejos formados por cloruro de cinc o aminas. Algunos colorantes bsicos, de elevado peso molecular, son absorbidos por el algodn y el rayn. b. Los colorantes cidos son sales de los cidos sulfricos o carboxlicos que se precipitan sobra la fibra. La familia de los colorantes cidos se llama as, porque en la constitucin qumica del colorante se encuentran molculas de grupos cido. Son colorantes solubles en agua y se aplican generalmente en fibras de lana, nylon y fibras acrlicas. Otros usos importantes son el teido de la piel y papel. 2.5 Tipos de extraccin de colorantes naturales

La extraccin de colorantes de las plantas, depende bsicamente de la parte de la planta que se utilice y la cantidad de agua que contenga. Para la utilizacin de las plantas la poblacin usa tcnicas sencillas, dependiendo del nivel tcnico del curandero, los medios disponibles y la tradicin. Sin embargo, para la investigacin fitoqumica y farmacolgica es necesario realizar extracciones que sean reproducibles, cuantitativas, estables y eficientes par el efecto que se desea demostrar. Desde el punto de vista general podemos realizar tres tipos de extracciones de las plantas: La preparacin popular consiste en una extraccin en agua de la planta fresca o seca con la ayuda de calor (infusin o decoccin) o en alcohol (tintura, vino), en algunos casos se usa la planta fresca machacada, ya sea como cataplasma, jugo o polvo de la planta seca administrado directamente. La extraccin para tamizaje consiste en realizar una extraccin por maceracin a temperatura ambiente con uno a tres disolventes con diferentes polaridades, generalmente diclorometano o hexano, ter o etanol y agua. La extraccin para eludidacin estructural consiste en una maceracin o extraccin Soxhlet usando inicialmente un disolvente de amplio espectro (metanol o etanol) y luego un fraccionamiento con diferentes disolventes o mezclas de disolventes

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que permitan separar las diferentes fracciones por particin. Idealmente el fraccionamiento debe ser guiado por un bioensayo que permita llegar a la estructura qumica responsable de la actividad en un tiempo relativamente corto. (Domnguez, 1987)

2.6 Identificacin de colorantes

La reaccin ms usual para la deteccin de los flavonoides en un extracto de planta es la reaccin de Shinoda; al extracto incoloro o ligeramente amarillo se le coloca un pequeo trozo de magnesio y una pocas gotas de HCl concentrado, el desarrollo inmediato de coloracin es indicativo de la presencia de flavonas y flavonoles (amarillo a rojo), flavanonoles (rojo a magenta), flavanonas (rojo, magenta, violeta, azul), isoflavonas (amarillo); isoflavononas, chalconas y auronas no dan coloracin Otras reacciones de color usuales son:

Reaccin con lcalis: los extractos acuosos pueden mostrar variaciones de color con el agregado de un lcali, si hay presencia de flavonas, flavanonoles e isoflavonas se ponen amarillas, flavanonas y flavonoles cambian de amarillo a naranja; chalconas de naranja a rojizo.

Reaccin con H2SO4 concentrado las flavonas y flavonoles dan coloracin fuertemente amarilla, las flavanonas, anaranjadas o guindas; auronas, rojo, guinda o rojo azulado. las chalconas y

Reaccin con solucin acuosa o etanlica de FeCl3; aunque hay coloracin en presencia de cualquier compuesto fenlico, la aparicin de un color verde sugiere la presencia de un derivado de catecol y de un color azul de un derivado de pirogalol.

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Las tcnicas cromatogrficas usadas para la separacin de flavonoides o su deteccin en un extracto de plantas son tambin muy variadas en cuanto a las tcnicas mismas, as como las condiciones en las cuales ellas pueden realizarse. La cromatografa en papel es la ms antigua y an usada desde su introduccin en 1948 por Bate Smith. Otra tcnica es la cromatografa en capa fina (cp). La

deteccin de los flavonoides por stas dos tcnicas puede hacerse por el color que desarrollan en el espectro visible y en el UV, apareciendo como manchas fluorescentes azules, rosadas, naranjas prpuras y otras, las cuales se intensifican o cambian de color luego de su exposicin a vapores de amoniaco, y comparndolas con relaciones conocidas de color y estructura. Otra tcnica es la cromatografa en columna (cc), actualmente muy usada para purificaciones preliminares y para separaciones a escala preparatoria de grandes cantidades de flavonoides de extractos crudos de plantas.

Por otro lado, el espectro de absorcin UV-V del compuesto aislado es til para determinar el tipo de flavonoide. El espectro tpicamente consiste de dos mximos de absorcin en los rangos, 240-285 nm (banda ll y Bll), y 300-550 nm (banda l, Bl). Se puede encontrar tablas de rangos para determinadas estructuras en Lock, 1997

2.7 Cromatografa

2.7.1 Principios de la cromatografa

Es una tcnica de separacin basada en la diferente velocidad con que se mueven los solutos a travs de un medio estacionario mediante el flujo en un disolvente llamado eluente. F. Runge qumico alemn, describi el proceso de separacin que actualmente se conoce como cromatografa en papel. Al ruso Mijail Tswett corresponde el haber establecido las ventajas de la cromatografa y la adopcin parcial de la terminologa, tambin fue quien sent las bases de los principales procedimientos experimentales relativos a esta tcnica. A pesar de que

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el mtodo cromatogrfico prometa simplificar la separacin de sustancias de mezclas complejas, no fue sino hasta finales de la dcada de los 30 y principios de los 40 cuando se empez a desarrollar la tcnica, teniendo este mtodo diversas aplicaciones. Las nicas sustancias que no pueden ser examinadas por cromatografa son las insolubles y aquellas que se descomponen con el solvente o con la fase estacionaria.

2.7.2 Clasificacin de la cromatografa

La cromatografa se clasifica en; cromatografa de reparto, cromatografa de adsorcin, cromatografa de exclusin, cromatografa de permeacin y cromatografa de intercambio inico.

2.7.2.1 Cromatografa de reparto

La separacin de una mezcla de solutos es funcin de la distribucin de las molculas de estos entre una fase estacionaria lquida, soportada sobre un slido, y la fase mvil o eluente del sistema. La fase mvil puede ser un lquido o un gas segn sea el caso de la cromatografa; en caso de que la cromatografa sea lquida-lquida la fase mvil ser un lquido, o de un gas en cuyo caso es cromatografa gas-lquido.

2.7.2.2 Cromatografa de adsorcin

La adsorcin se manifiesta por un aumento de la concentracin del soluto en la interfase que rodea el medio estacionario. La separacin est basada en las diferencias en el comportamiento, adsorcin, desercin de sustancias contenidas en las fases mvil sobre un slido estacionario y pueden ser sistemas lquido-slido y gas-slido. En cualquier fenmeno de adsorcin influyen tres variables: adsorbente, eluente y solutos. El trmino adsorcin en trminos cromatogrficos se refiere a interacciones dbiles.

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2.7.2.3 Cromatografa de exclusin

La separacin est basada en los diferentes volmenes moleculares de los solutos. El tiempo de elusin es proporcional al peso molecular de los mismos, lo que da como resultado que no sea muy usada con compuestos de alto peso molecular. En este proceso principalmente, se emplean geles no inicos de partculas uniformes y porosos, como fase estacionaria.

2.7.2.4 Cromatografa de capa fina

2.7.2.4.1

Historia

El botnico ruso Mikhail Tswett estableci las ventajas de la cromatografa y fue el primero en utilizar este trmino. Es recordado como el Padre de la cromatografa. Ismailov y Scraiber utilizaron lminas de vidrio para colocar capas muy delgadas de almina y luego aplicaron extractos vegetales, se produjo as la primera forma de Cromatografa de Capa Fina. Sin embargo, fue Egon Stahl (1956), quien le dio el nombre de Cromatografa de Capa Fina. Estandariz los procedimientos, equipos y adsorbentes y dio un auge a la tcnica simple, a bajo costo y eficiente.

2.7.2.4.2 Proceso de adsorcin

La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie del material por la accin de fuerzas electrostticas (fuerzas de Van der Waals, puentes de Hidrgeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a un flujo por accin capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios activos del adsorbente y la sustancia con el solvente.

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2.7.2.4.3 Adsorbentes

Los adsorbentes ms utilizados en la cromatografa de capa fina son: Slica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones) xido de Aluminio o Almina (cida, neutra o bsica) Tierra Silcea o Kieselguhr Celulosa (Nativa o micro-cristalina) Estos adsorbentes deben tener las siguientes caractersticas: Tamao de Partcula Volumen de Poro Dimetro de Poro rea Superficial Homogeneidad Pureza

2.7.2.4.4 Preparacin de la placa cromatogrfica

Se usan como soporte del adsorbente lminas de vidrio, plstico o metlicos, como el aluminio. Los tamaos de la placa para TLC convencional son: 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2 cm Hay placas que contienen un indicador de Fluorescencia: F254 o F366. El nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del indicador utilizado.

2.7.2.4.5 Aplicacin de la muestra

La muestra se aplica en la placa segn el objetivo: Banda Punto o mancha

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2.7.2.4.6 Desarrollo de la placa

Es un proceso mediante el cual son transportados a travs de la fase estacionaria por la fase mvil.

2.7.2.4.7 Cmaras para desarrollo

Existen varios tipos de cmaras: Normal Doble compartimiento Sandwich Horizontal Vario KS U Deteccin o visualizacin Si la muestra (mancha) no es coloreada se requiere de mtodos que nos permitan visualizar el(los) componente(s) presentes. Tambin se conoce este procedimiento como revelado. Estos mtodos son: Qumicos (por inmersin). Se obtienen derivados coloreados o fluorescentes Fsicos (pticos). Generalmente se utiliza radiacin UV

2.7.2.4.8 Evaluacin de un cromatograma de capa fina

La evaluacin puede ser realizada por los siguientes mtodos: Anlisis cualitativo Medida de Rf Comparacin visual de color/intensidad Propiedades UV/IR/MS/NMR

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 Anlisis semi-cuantitativo Comparacin visual del dimetro y la intensidad del color de la mancha contra una serie de manchas patrones de concentracin conocida.

Anlisis cuantitativo Indirecta Directa Densitometra Medida de transmisin. Medida de luz transmitida a travs de la sustancia. Medida de emisin. Medida de luz reflejada desde la sustancia. Espectrofotometra Fluorescencia Fluorescencia con quenching.

2.8 ndice de refraccin

El ndice de refraccin, de una sustancia o un medio transparente, es la relacin entre la velocidad de la luz en el vaco y la velocidad de la luz en la sustancia o el medio transparente. Este nmero, mayor que la unidad y sin unidades, es una constante caracterstica de cada medio y representa el nmero de veces que es mayor la velocidad de la luz en el vaco que en ese medio. El ndice de refraccin se mide con un aparato llamado refractmetro en el que se compara el ngulo de incidencia con el ngulo de refraccin de la luz de una longitud de onda especfica. Como el ndice de refraccin es sensible a los cambios de temperatura y vara con la longitud de onda de la luz, deben especificarse ambas variables al expresar el ndice de refraccin de una sustancia.

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2.9 Descripcin de la especie forestal Aliso

2.9.1 Taxonoma

2.9.1.1 Nombre cientfico

Alnus arguta (Schltdl.) Spach

2.9.1.2 Sinonimia

Betula arguta (Schltdl.) Spach, Alnus acuminata H.B.K., Alnus pringlei Fern., Alnus arguta var. cuprea Bartlett, Alnus arguta (Schltdl.) Spach var. subserica Bartlett.

2.9.1.3 Nombre(s) comn(es)

Aliso (Solola, Totonicapn, Quetzaltenango, Huehuetenango, San Marcos), Ilamo (Guatemala, Sacatepquez, Chimaltenango), Aile (Jalisco, Morelos, Oaxaca; del Nahuatl, ailitl); abedul (Veracruz, Oaxaca); olmo del pas (Veracruz, Hidalgo), palo de guila (Oaxaca), yaga-bizie (Oaxaca, Zapotec, Reko); labrn (Per), cerezo (Colombia), y Jal (Costa Rica), ilite en algunas regiones de Mxico.

2.9.1.4 Origen

Nativo de Mxico, aunque numerosas especies de Alnus se localizan en Norte Amrica, Centro Amrica y en algunas regiones de Sudamrica (Argentina). Los que se localizan en Mxico han sido frecuentemente determinados como A. acuminata H.B.K., y existen muchas referencias en la literatura para el nombre, pero esas especies, descritas desde los Andes de Per, no se localizan en Mxico. (OFI/CATIE)

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2.9.1.5 Forma biolgica

2.9.1.5.1 Forma

rbol o arbusto perennifolio / caducifolio, de 10 a 25 m (hasta 30 m) de altura, con un dimetro a la altura del pecho de 35 a 40 cm (hasta 1 m). Algunos individuos llegan a superar los 42 m de altura en plantaciones Figura 2. Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach)

Fuente: OFIE/CATIE, rboles de Centro Amrica

2.9.1.5.2 Copa/Hojas

Copa estrecha (angosta) y piramidal (en plantaciones), en bosquetes sucesionales toma formas irregulares. Hojas con la lmina ovada, de 6 a 15 cm de largo y 3 a 8 cm de ancho, margen agudamente biserrado; el haz y el envs glabros en la madurez. Figura 3. Hojas y Fruto del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach)

Fuente: OFIE/CATIE, rboles de Centro Amrica

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2.9.1.5.3 Tronco / Ramas

Tronco cilndrico aligeramente ovalado. Generalmente con varios troncos. En campo abierto desarrolla ramas gruesas desde la base mientras que en bosque denso alcanza una mayor proporcin de tronco libre de ramas y nudos por una poda natural.

Figura 4. Tronco del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach)

Fuente: OFIE/CATIE, rboles de Centro Amrica

2.9.1.5.4 Corteza

Corteza lisa o ligeramente rugosa, escamosa en individuos viejos, con frecuencia marcada con arrugas transversales o constricciones circundantes.

Figura 5. Corteza de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach)

Fuente: OFIE/CATIE, rboles de Centro Amrica

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2.9.1.5.5 Flor

Inflorescencias masculinas en amentos de 5 a 10 cm de largo, generalmente en agrupaciones de 3; inflorescencias femeninas 3 a 4 en racimos, de 3 a 8 mm de largo en antesis; conos de 11 a 28 mm de largo y de 8 a 12 mm de dimetro.

2.9.1.5.6 Fruto

Fruto elptico a ovalado, papirceo a coriceo, con el margen alado y estilo persistente. Las alas angostas de 2 a 2.3 mm de largo y 0.2 a 1 mm de ancho, el cuerpo de 1.5 a 3 mm de largo y 1.5 a 1.8 mm de ancho.

2.9.1.6 Fenologa

2.9.1.6.1 Follaje

Perennifolio / Caducifolio. Los rboles llegan a tirar sus hojas en forma total o parcial durante la poca seca.

2.9.1.6.2 Floracin

Florece de febrero a abril.

2.9.1.6.3 Fructificacin

Fructifica de junio a diciembre (marzo).

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2.9.2 Distribucin

Es una especie pionera de crecimiento rpido que necesita luz, y regenera en reas abiertas. Tolera un amplio rango de climas y tipos de suelo. Crece desde los 1500 hasta cerca de los 3100 msnm. Forma rodales puros en la regin central del pas, en una gran variedad de condiciones ecolgicas. En Guatemala se encuentra en bosques naturales en asociacin con Pinus, Quercus y Abies. Coloniza suelos desnudos, expuestos y perturbados, como deslizamientos. Muy sensible a la sequa, por lo que crece en laderas hmedas, cerca de quebradas y caminos en montaas, normalmente en suelos hmedos a lo largo de cursos de agua y humedales donde forma tpicamente densos rodales puros. Tambin se asocia a llanuras de inundacin o pendientes de montaa hmedas. Puede adaptarse a climas ms secos, aunque aqu se restringe a zonas con abundante humedad del suelo.

Figura 6. Distribucin potencial de Alnus arguta (Schltdl.) Spach

Fuente: OFIE/CATIE, rboles de Centro Amrica

2.9.3 Usos

Las caractersticas fsicas de la madera de rboles adultos permiten su fcil manejo. Se reporta que es usada en la fabricacin de cajas para transporte de hortalizas,

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hormas para zapatos, palillos de fsforos, en carpintera, ebanistera y muebles de corte recto as como para lea, carbn, aserro y pulpa para papel. La corteza es astringente y rica en taninos por lo que se usa como curtiente, adems, la infusin que se obtiene de la corteza se utiliza en medicina casera en enfermedades cutneas y venreas, y las hojas son usadas como cataplasmas para heridas de piel, y los extractos del fruto para inflamacin de garganta.

2.10 Secado de plantas

El secado es el paso ms importante para lograr un producto de ptima calidad, ya que de ste depende que el producto est en condiciones de comercializarse, consumirse y conservarse por perodos prolongados (1-2 aos las hojas y flores y 2-3 aos las cortezas). Lo ptimo es secar el material a un 10% de humedad. (Cervantes, 2005) De acuerdo con los datos generados por productores de plantas medicinales, a continuacin se muestra el contenido de humedad de diferentes partes de la planta fresca y la prdida de humedad despus del secado partiendo de 1 kg de peso de material fresco.

Tabla III. Secado de las diferentes partes de una planta Parte Semillas y frutos Races y rizomas Corteza y tallos Frutos carnosos Flores Hojas
Fuente: Cervantes, 2005

Humedad (%) 5 a 10 70 a 85 80 a 90 80 a 90 20 a 30 70 a 95

Peso seco (g) 900 a 950 100 a 300 300 a 400 300 a 400 100 a 200 100 a 300

Prdida (%) 5 a 10 70 a 90 60 a 70 60 a 70 80 a 90 70 a 90

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El secado debe hacerse en condiciones especiales ya que la humedad, el sol directo y el polvo pueden deteriorar el material y destruir sus propiedades medicinales. La experiencia demuestra que el secado puede hacerse a cuatro niveles dependiendo del volumen. Las condiciones y recursos disponibles, casero, familiar, microindustrial e industrial.

2.10.1 Almacenamiento de plantas secas

Al llegar a este nivel y de haberse seguido cuidadosamente los pasos anteriores para asegurar un producto vegetal seco de buena calidad, es necesario y de suma importancia su adecuada conservacin que puede muchas veces ser por un perodo prolongado. Se recomienda que no sea mayor de 18-24 meses para flores y hojas y hasta 24-36 meses para races, cortezas y semillas. Lo anterior se lograr nicamente si el producto se almacena adecuadamente, lo cual garantizar su estabilidad y permitir conservar las propiedades fsicas, qumicas, organolpticas y teraputicas que le dan valor. Del almacenamiento depende que el producto no vuelva a absorber humedad del ambiente, lo que favorecera el crecimiento de moho. Por otro lado, el almacenamiento adecuado contribuir a que el producto no est en contacto con otros factores que lo arruinen como sol, polvo, roedores e insectos y garantizar que no haya prdida de sus propios aceites voltiles. Puede usarse sacos de manta, brin o kenaf, pero con cuidado en la forma de guardarlos para evitar el contacto con el suelo, humedad y animales domsticos. Cuando el volumen es mayor y se dispone de recurso econmico para invertir en infraestructura, se aconseja adquirir barriles plsticos (no es recomendable el PVC), de fibra de vidrio o cartn piedra con tapadera a presin o rosca o bien de cierre plstico con argolla de metal.

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2.11 Lixiviacin

Muchas sustancias biolgicas, as como compuestos inorgnicos y orgnicos, se encuentran como mezclas de diferentes componentes en un slido. Para separar el soluto deseado o eliminar un soluto indeseable de la fase slida, sta se pone en contacto con una fase lquida. Ambas fases entran en contacto ntimo y el soluto o los solutos se difunden desde el slido a la fase lquida, lo que permite una separacin de los componentes originales del slido. Este proceso se llama lixiviacin lquido-slido o simplemente, lixiviacin. (Geankoplis, 2004) Esta operacin unitaria, una de las ms antiguas en la industria qumica, ha recibido muchos nombres, segn la tcnica ms o menos compleja utilizada para llevarla a cabo. La colada se refera originalmente a la percolacin del lquido a travs de un lecho fijo del slido, pero en la actualidad se utiliza para describir la operacin en forma general, sin importar la forma en que se rea1ice. Lixiviacin se utiliza con menos frecuencia como sinnimo para colada, aunque al principio se refera especficamente a la colada de lcali a partir de cenizas de madera. El trmino extraccin tambin se emplea por lo comn para describir esta operacin particular, aunque tambin se aplica a todas las operaciones de separacin, que utilicen mtodos de transferencia de masa o mecnicos. La decoccin se refiere especficamente al uso del disolvente a su temperatura de ebullicin. Cuando el material soluble est sobre todo en la superficie de un slido insoluble y simplemente se lava con el disolvente, la operacin algunas veces recibe el nombre de elucin.

2.11.1 Procesos de lixiviacin

En la industria de procesos biolgicos y alimenticios, muchos productos se separan de su estructura natural original por medio de una lixiviacin lquido-slido. Un proceso importante es la lixiviacin de azcar de la remolacha con agua caliente. En la produccin de aceites vegetales, se emplean disolventes orgnicos como hexano,

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acetona y ter, para extraer aceite de cacahuate, soya, semillas de lino, semillas de ricino, semillas de girasol, semillas de algodn, harina, pasta de palo e hgado de hipogloso. En la industria farmacutica se obtiene una gran diversidad de productos por lixiviacin de races, hojas y tallos de plantas. En la produccin de caf instantneo soluble, el caf tostado y molido se somete a una lixiviacin con agua pura. El tanino se extrae de las cortezas de rboles por lixiviacin con agua.

2.11.2 Preparacin de los slidos para la lixiviacin

El xito de una lixiviacin y la tcnica que se va a utilizar dependen con mucha frecuencia de cualquier tratamiento anterior que se le pueda dar al slido. El mtodo de preparacin del slido depende en alto grado de la proporcin del constituyente soluble presente, de su distribucin en el material slido original, de la naturaleza del slido, que puede estar constituido por clulas vegetales o el material soluble estar totalmente rodeado por una matriz de materia insoluble, y del tamao de partcula original. Si la materia soluble est rodeada de una matriz de materia insoluble, el disolvente se debe difundir hacia el interior para ponerse en contacto y disolver el material soluble, y despus difundirse hacia afuera. En estos casos se procede a una trituracin y molienda previa de los materiales para aumentar la velocidad de lixiviacin, pues de esta manera las porciones solubles quedan ms accesibles a la accin del disolvente. Si la sustancia soluble est en solucin slida o ampliamente distribuida en la totalidad del slido, la accin de lixiviacin del disolvente forma canales pequeos. Esto hace que el paso de disolvente adicional resulte ms fcil, por lo cual se puede prescindir de la molienda a tamaos muy pequeos. Los materiales biolgicos tienen estructura celular y los constituyentes solubles suelen estar dentro de las clulas. En ocasiones, la velocidad de lixiviacin es bastante baja, debido a que las paredes celulares constituyen una resistencia adicional a la difusin. (Treybal, 1994)

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Para lixiviar productos farmacuticos de hojas, tallos y races, el secado del material antes de la extraccin ayuda a romper las paredes celulares. De esta manera, el disolvente ataca directamente al soluto. Las paredes celulares de las semillas y de otros vegetales sufren bastantes rupturas cuando la materia se reduce de tamao, por medio de un proceso de laminacin para formar pequeas escamas. Las clulas son de tamao ms pequeo, por lo que sus paredes se rompen y el soluto queda ms accesible a la accin del disolvente.

2.11.3 Temperatura de lixiviacin

Por lo general, se desea realizar la lixiviacin a temperaturas lo ms elevadas posible. Las temperaturas elevadas producen la mayor solubilidad del soluto en el disolvente y, en consecuencia, concentraciones finales mayores en el licor de lixiviacin. A temperaturas elevadas la viscosidad del lquido es menor y mayores las difusividades; esto incrementa la rapidez de lixiviacin. (Treybal, 1994)

2.11.4 Mtodos de operacin

Las operaciones de lixiviacin se realizan por lotes o semilotes (estado no estacionario) y tambin en condiciones totalmente continuas (estado estacionario). En cada categora se encuentran equipos del tipo de etapas y de contacto continuo. Se utilizan dos tcnicas principales de manejo: la aspersin o goteo del lquido sobre el slido y la completa inmersin del slido en el lquido. En cualquier caso, la eleccin del equipo que se va a utilizar depende bastante de la forma fsica de los slidos y de las dificultades y costo de manejo. (Treybal, 1994)

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2.11.4.1 Operacin en estado no estacionario

Las operaciones en estado no estacionario incluyen aquellas en que los slidos y los lquidos se ponen en contacto nicamente en forma de lotes y tambin aquellas en que un lote del slido se pone en contacto con una corriente que fluye continuamente del lquido (mtodo por semilotes). Las partculas slidas gruesas generalmente se tratan en lechos fijos mediante mtodos de percolacin, mientras que los slidos finamente divididos, que pueden mantenerse ms fcilmente en suspensin, pueden dispersarse en todo el lquido con la ayuda de algn tipo de agitador.

2.11.4.2 Operacin en estado estacionario (continuo) El equipo para las operaciones en estado estacionario continuo puede clasificarse en dos grandes categoras principales: operado por etapas o en contacto continuo. Algunas veces, el equipo por etapas puede montarse en unidades mltiples, para producir efectos de varias etapas; el equipo de contacto continuo puede proporcionar el equivalente a muchas etapas en un nico aparato. 2.11.4.2.1 Tanques con agitacin Los slidos finamente molidos que son fciles de suspender en lquidos por medio de la agitacin, pueden lixiviarse continuamente en cualquiera de los muchos tipos de tanques con agitacin. stos pueden utilizarse para el flujo continuo del lquido y del slido en y fuera del tanque y deben disearse con cuidado para que no haya acumulacin del slido. (Treybal, 1994) Debido al mezclado completo que se obtiene, estos aparatos funcionan en una sola etapa; adems, el lquido y el slido tienden a alcanzar el equilibrio en el tanque. Pueden utilizarse los tanques agitados mecnicamente, para los cuales es probable, que el agitador de tipo de turbina sea generalmente el ms adecuado.

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3. METODOLOGA

3.1 Localizacin

La parte experimental de la investigacin se realiz en las siguientes instalaciones: 1. Laboratorio de la Seccin de Qumica Industrial del Centro de Investigaciones de la Facultad de Ingeniera de la USAC. 2. Laboratorio del rea de Qumica de la Escuela de Ingeniera Qumica de la Facultad de Ingeniera de la USAC. 3. Laboratorio de Investigacin de productos naturales, LIPRONAT, de la Facultad de Ciencias Qumicas y Farmacia de la USAC.

3.2 Recursos humanos

Investigador: Asesora:

Br. Genaro Francisco Barrera Garca Inga. Qca. Telma Maricela Cano Morales

3.3 Obtencin de las muestras

La corteza de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) se obtuvo directamente en los bosques comunales del municipio de Momostenango, Totonicapn. Momostenango est a una altura de 2,204.46 msnm. Latitud 14 02' 40, longitud 91 24' 30. Es un lugar de clima templado hmedo. Los bosques cuentan con una precipitacin pluvial de 1,057-1.588 mm, la biotemperatura es de 15- 23 C, con una altura de 1,500 2,400 msnm. Se colecto toda la corteza del rbol en general y se coloco en recipientes apropiados, para luego ser llevados hacia el secador elctrico de flujo

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transversal con bandejas, controlndose la humedad relativa y temperatura en el proceso de secado. La corteza seca se moli utilizando en un molino de martillos.

3.4 Diseo de tratamientos

Para la evaluacin estadstica se utilizo un diseo completamente al azar con un arreglo combinatorio, en el cual se aplico un experimento factorial sobre la especie de estudio evaluando 1 corteza y utilizando la tcnica de maceracin dinmica a reflujo constante, 5 tipos de soluciones extractoras (agua, etanol al 35%, etanol al 50%, etanol al 70% y etanol al 95%) y 3 etapas de extracciones sucesivas para una muestra obtenida de un tamao de partcula de 248 - 297 m con un porcentaje del 3% segn el anlisis granumetrico realizado a la corteza molida (Apndice A), con 3 repeticiones para cada solucin extractora, resultando 9 unidades experimentales, y un total de 45 tratamientos. El tamao del tratamiento de maceracin dinmica a reflujo constante en funcin de la relacin corteza seca/solucin extractora de 1:10 (w/v), con tiempo de extraccin de 2 horas y a temperatura de ebullicin de la solucin extractora, 95C para el agua, 82C para el etanol al 35%, 80C para el etanol al 50%, 78C para el etanol al 70%. Obtenidos los extractos slidos se procedi a realizarles los anlisis fisicoqumicos correspondientes y cromatografa en capa fina.

3.5 Metodologa experimental

3.5.1 Materiales y equipo a utilizar en la experimentacin

3.5.1.1 Materia prima Corteza de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) molida y tamizada a 248 - 297 m

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3.5.1.2 Cristalera

Balones aforados de 1 L Matraces de cuello corto de fondo plano con esmeril 24/40 de 500 mL Condensadores de bolas con esmeril 24/40 Varillas de agitacin Probetas graduadas de 100 mL y 500 mL Beacker de 500 mL Kitasato de 500 mL Embudo Buchner

3.5.1.3 Equipo

Plancha de calentamiento

o Marca: WWR o Modelo: PC-620 o Voltaje: 120 V o Frecuencia: 60 Hz. o Potencia: 1113 W. Hecha en Estados Unidos

Bomba de vaco

o Marca: Gast o Voltaje: 100 -115 V o Frecuencia: 50 Hz. o Potencia: Hp. o Revoluciones: 1725/1425 rpm Hecha en Michigan, USA

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Balanza

o Marca: Adventurer o Voltaje: 8 -14.5 V o Frecuencia: 50/60 Hz. o Mxima Capacidad: 150 g. o Lectura Mnima: 0.001 g o Precisin: 0.0005 g Hecha en USA

Rotavapor

o Marca: Bchi o Modelo: R-200 o Voltaje: 120 V o Frecuencia: 50/60 Hz. o Potencia: 120 W Hecho en Flawil, Suiza.

3.5.1.4 Otros

Agitadores magnticos de 2 pulgas Papel filtro Catalogo No. 1450070 Placas cromatogrficas o Marca: Merck o Modelo: Kieselgel 60 F254 o Dimensiones: 20 x 20 cm

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3.5.1.5 Reactivos

Etanol 95% Grado Industrial marca Merck Agua desmineralizada marca Salvavidas

3.5.2 Mtodo de extraccin del tinte natural a nivel laboratorio

1. La corteza de Aliso previamente tamizada se coloca en un matraz de fondo plano y de cuello corto con esmeril 24/40 de 500 mL de capacidad; la relacin de corteza seca y el solvente es de 1:10 (w/v). Se utilizaran 30 g de materia tamizada.

2. Se utilizo el mtodo de maceracin dinmica a reflujo. Se coloca el condensador de bolas en el cuello del matraz, se arma todo el equipo, colocndolo en una plancha de calentamiento con agitacin a 400 rpm durante 2 horas a ebullicin.

3. Terminada las dos horas de calentamiento, se procede a filtrar, utilizando el filtrado al vaco a presin de vaci de 12 inHg.

4. Toda la materia prima del filtrado, se vuelve a recuperar, colocndola de nuevo al matraz, siendo la relacin de corteza y solvente la misma que en el inciso 1. Repetir incisos dos y tres.

5. Realizar incisos 1-4 hasta obtener tres extracciones sucesivas de una misma muestra.

6. La mezcla de slidos solubles en la solucin extractora se seca por evaporacin a temperatura de ebullicin de la solucin extractora (95 C para el agua, 82 C para el et. 35%, 80C para el et. 50%, 78 C para el et. 70%) a presin atmosfrica (640 mmHg), el extracto solid obtenido se pesa para evaluar el rendimiento de

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extraccin y luego se guarda en frascos PET para su caracterizacin y uso en el proceso de teido de fibras.

7. Para determinar la calidad de los solidos solubles obtenidos se procede de la siguiente manera: la mezcla de solidos solubles en la solucin extractora se concentra a presin de vaci de 12 inHg en un rotavapor, a temperatura no mayor de 45C y girando a una velocidad constante de 60 rpm. El periodo de extraccin de solvente es continuo, hasta que la muestra no tenga presencia de solucin extractora. El extracto concentrado obtenido se almacenado en refrigeracin, en frascos color mbar de vidrio.

8. Despus de obtener el extracto concentrado se le realizan pruebas fisicoqumicas para ndice de refraccin y densidad, pruebas fitoqumicas para la identificacin de flavonoides y cromatografa en capa fina.

3.5.3 Mtodos para la caracterizacin de los tintes naturales, Determinacin de las propiedades fisicoqumicas de los extractos colorantes

3.5.3.1 Determinacin de densidad

La densidad del extracto de la corteza de aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) se obtiene por medio de un picnmetro de 10 mL a una temperatura de 20C.

3.5.3.2 Determinacin del ndice de refraccin

Se utiliza un refractmetro Abbe. Se limpiar el lente con Xilol y se vierte una gota del extracto tintreo a temperatura de 20C en el prisma, tomando nota de la lectura del equipo.

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3.5.4 Identificacin de flavonoides Para identificar flavonoides se utilizan pruebas fitoqumicas (reacciones colorimtricas), cromatografa en capa fina.

3.5.4.1 Reacciones coloridas:

a.

Reaccin con H2SO4 conc. : al extracto obtenido del rotavapor se le agrega una gota de cido sulfrico. Se observa si hay cambio de color: las flavonas y flavonoles dan coloraciones fuertemente amarillas, las flavanonas, anaranjadas o guindas; las chalconas y auronas, rojo guinda o rojo azulado.

b.

Reaccin de Shinoda: al extracto obtenido del rotavapor, se le coloca un trozo pequeo de magnesio y unas pocas gotas de HCl concentrado, el desarrollo inmediato de coloracin es indicativo de la presencia de flavonas y flavonoles (amarillo a rojo), flavanonoles (rojo a magenta) flavanonas (rojo, magenta, violeta, azul), isoflavonas (amarillo), isoflavononas, chalconas y auronas no dan coloracin.

3.5.5 Anlisis cromatogrfico en capa fina

La caracterizacin del extracto se hace por medio de un anlisis cromatogrfico, utilizando cromatografa de capa fina. sta se divide en varias etapas, como lo son la preparacin de la muestra, de las soluciones estndar, la fase mvil, la placa cromatogrfica y preparacin de soluciones reveladoras.

3.5.5.1 Preparacin de la muestra

Se coloca, en un tubo de ensayo, 100 mg de extracto en 1 mL de metanol. La solucin se somete a fuerte agitacin en un vortex. Se filtran las soluciones y el filtrado se coloca en un tubo de ensayo con tapn.

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3.5.5.2 Preparacin de las soluciones estndar

Se colocan, en un beacker, 5 mg del estndar a utilizar y se mezclan con 10 mL de metanol, se agita para homogenizar la solucin. Estas soluciones deben ser guardadas en recipientes cerrados y debidamente identificados.

3.5.5.3 Preparacin de la fase mvil

Mezclar 50 mL de acetato de etilo, 5.5 mL de cido frmico, 5.5 mL de cido actico glacial y 13.5 mL de agua (la mezcla debe estar siempre tapada para evitar evaporacin). La mezcla se agita durante 5 minutos con un agitador magntico, luego se traslada la mezcla a la cmara cromatogrfica la cual debe permanecer tapada.

3.5.5.4 Preparacin de la placa cromatogrfica

Para la placa cromatogrfica, se corta una placa de 10 cm x 18 cm de un cromatofolio de aluminio de slice gel 60F254 y se realiza lo siguiente:

1. Trazar con lpiz, una lnea horizontal un centmetro arriba de la parte inferior de la placa. 2. Marcar a lo largo de la lnea horizontal 17 puntos, dejando 1 cm de separacin entre cada uno. 3. Inyectar con ayuda de un capilar 5 L de cada solucin preparada (muestra + metanol), en cada punto. Hacer lo mismo con las soluciones estndar. Debe tenerse cuidado de que la mancha sea lo ms pequea posible.

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3.5.5.5 Desarrollo de la placa cromatogrfica

Se introduce la placa dentro de la cmara cromatogrfica que contiene la fase mvil. Dejar que las lneas que aparecen y lleguen a una distancia de 2 cm abajo del borde superior de la placa. Se retira la placa y se coloca en la campana de extraccin, para que seque la fase mvil.

3.5.5.6 Preparacin de las soluciones reveladoras

Se le aplica a la placa un revelador, esto hace que se observen de mejor manera los colores que se forman en la placa al introducirla a una cmara de luz ultravioleta, el revelador se prepara con:

Difenilboriloexietilamina en 1% de metanol: se pesa 0.2 g de difenilboriloexietilamina y se mezcla con 20 mL de metanol. Polietilenglicol 4000 en 5% de etanol: se pesa 1 g de polietilenglicol y se mezcla con 20 mL de etanol.

Luego de preparar las soluciones se debe rociar la placa con cierta cantidad de cada solucin reveladora. Se observa con luz ultravioleta los puntos que coinciden con los puntos de las soluciones estndar, identificando de esta manera la presencia de colorantes del tipo flavonoides.

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4. RESULTADOS

Tabla IV. Rendimiento promedio de extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach), porcentaje de rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin sucesiva, para un sistema de maceracin dinmica a reflujo con relacin corteza molida/solucin extractora de 1/10, con un tamao de partcula de 248- 297 m, con periodo de extraccin de 2 horas a temperatura de ebullicin de la solucin extractora y Porcentaje de rendimiento a agotamiento utilizando equipo de extraccin Sohxlet para una muestra de corteza seca de 10 g y utilizando etanol al 95% como solucin extractora. No. Etapa % Rendimiento de Promedio Extraccin 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 14.16 0.69 6.72 0.57 2.13 0.55 22.82 0.58 9.87 0.55 4.32 0.49 23.01 0.35 10.83 0.41 4.51 0.34 17.63 0.57 7.33 0.52 3.53 0.30 %R Acumulado 1-2 20.88 32.69 24.97 1-2-3 23.01 37.01 39.25 28.50 14.16 7.43 4.59 22.82 12.96 5.54 23.01 13.09 6.32 17.63 10.30 3.80 R% %R Agotamiento

Solvente

Agua

Et 35%

40.02 0.16

Etanol

Et 50%

Et 70%

Fuente: Datos Originales

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Figura 11. Grfico del porcentaje de rendimiento de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para la primera etapa de extraccin sucesiva

Fuente: Tabla IV

Figura 12. Grfico del porcentaje de rendimiento de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para la segunda etapa de extraccin sucesiva

Fuente: Tabla IV

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Figura 13. Grfico del porcentaje de rendimiento de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) para la tercera etapa de extraccin sucesiva

Fuente: Tabla IV

Figura 14. Grfica de comparacin del porcentaje de rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin sucesivas en funcin de la solucin extractora utilizada con el porcentaje de rendimiento a agotamiento obtenido en un equipo de extraccin Sohxlet.

Fuente: Tabla IV

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Tabla V. Coeficientes de correlacin para el modelo matemtico polinomial de la forma %R= a(%Et)3+b(%Et)2+c(%Et)+d para cada una de las etapas de extraccin sucesivas realizadas, y el rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin Coeficientes No. Etapa a b de Extraccin -0.0001 0.0057 1 -9.00E-05 0.0071 2 -1.00E-05 -9.00E-05 3 Acumulado -0.0002 0.0127 a tres etapas
Fuente: Apndice F

C 0.1812 -0.0496 0.0787 0.2103

d 14.156 6.7222 2.1333 23.011

R2 1 1 1 1

%R %Et Mximo 24.967 50 10.751 48.830 4.598 48.306 40 49.424

Figura

15.

Grfica

para

el

modelo

polinomial

de

la

forma

%R=

a(%Et)3+b(%Et)2+c(%Et)+d para cada una de las etapas de extraccin sucesivas realizadas, y el rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin

Fuente: Tabla V

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Tabla VI. Propiedades fisicoqumicas promedios de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) a 20C, para un sistema de maceracin dinmica a reflujo con relacin corteza molida/solucin extractora de 1/10, con un tamao de partcula de 248- 297 m, con periodo de extraccin de 2 horas a temperatura de ebullicin de la solucin extractora

Solvente

No. Etapa de Extraccin 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3 0 1 2 3

Densidad [g/ml] 0.9982 1.02430.0045 1.00830.0023 0.99870.0012 0.9449 0.98570.0025 0.96600.0026 0.95190.0014 0.9138 0.96120.0021 0.95030.0017 0.92290.0024 0.8677 0.89700.0030 0.88530.0012 0.87040.0010

[g/ml]

ndice de Refraccin

IR 0.0064 0.0040 0.0019 0.0085 0.0056 0.0035 0.0097 0.0070 0.0039 0.0077 0.0043 0.0025

Agua

Et 35%

Etanol

Et 50%

Et 70%
Fuente: Datos Originales

1.3341 0.0261 1.3405 0.0015 0.0101 1.33810.0002 0.0004 1.33600.0002 1.3511 0.0407 1.35960.0013 0.0211 1.35670.0001 0.0070 1.35470.0004 1.3591 0.0474 1.36880.0001 0.0365 1.36610.0007 0.0090 1.36300.0004 1.3632 0.0293 1.37090.0023 0.0177 1.36750.0004 0.0027 1.36570.0002

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Figura 16. Grfico de densidades promedios al final del perodo de extraccin de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada solucin extractora utilizada y el nmero de extracciones sucesivas a 20C

Fuente: Tabla VI

Figura 17. Grfico del ndice de refraccin promedio al final del perodo de extraccin de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada solucin extractora utilizada y el nmero de extracciones sucesivas a 20C

Fuente: Tabla VI

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Tabla VII. Reacciones coloridas de cido Sulfrico y Shinoda para la identificacin de Flavonoides en los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach)

Solvente Agua

Et 70% Etanol Et 35%

No. Etapa de Extraccin 1 2 3 1 2 3 1 2 3

Flavonoide Identificado Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles Flavonas y Flavonoles

Fuente: Anlisis experimental

Tabla VIII. Anlisis cromatogrfico en capa fina para la determinacin de la presencia de Quercitina, Rutina, cido Clorognico e Hipersido en los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach)

Solvente

No. Extraccin Sucesiva 1 2 3 1 2 3 1 2 3

Rutina -

Quercitina + + + + + + + + +

Acido Hipersido Clorgenico -

Agua

Et 70% Etanol Et 35%

Fuente: Anlisis experimental

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5. DISCUSIN DE RESULTADOS

El objetivo general del presente trabajo es evaluar el rendimiento a tres etapas de extraccin sucesivas y caracterizar el extracto tintreo de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach).

Para obtener los datos necesarios se realizaron extracciones con el mtodo de maceracin dinmica a reflujo constante en funcin de la relacin corteza seca/solucin extractora de 1:10 (w/v), con perodo de extraccin de dos horas a temperatura de ebullicin de cada solucin extractora, a una presin atmosfrica de 640 mmHg. Para ello se utilizaron 4 soluciones extractoras (agua, etanol al 35%, etanol 50% y etanol 70%) y un tamao de partcula de corteza seca de 248-298 m, con 3 repeticiones para cada una y 3 tres extracciones sucesivas, resultando 36 extracciones en total.

Los resultados mostraron que de las cuatro soluciones extractoras, con la que se tuvo un mayor rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin sucesiva, en cuanto a la obtencin de extractos tintreos, fue el etanol al 50% con un rendimiento acumulado de 39.25%; seguido del etanol al 35% con un rendimiento de 37.01% y por ltimo el agua con un rendimiento de 23.01%, en comparacin con el rendimiento a agotamiento obtenido utilizando un equipo de extraccin sohxlet de 40.02%.

En la Tabla IV se muestra el rendimiento del extracto tintreo obtenido segn la extraccin sucesiva realizada y el solvente utilizado. En ella se puede apreciar que la especie presenta un valor de rendimiento promedio ms alto en la primera etapa de extraccin sucesiva utilizando etanol al 50% con un valor obtenido de 23.01% as como tambin para la segunda y tercera etapa de extraccin siendo de 10.83% y 4.51% respectivamente.

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Con base a los resultados obtenidos en la Tabla IV se concluye que el etanol al 50% produce un mayor rendimiento en los extractos que con el agua o el etanol al 70%. En la tabla IV se encuentra el R% que es la diferencia de rendimientos entre cada etapa de extraccin, se puede observar que la solucin extractora que posee un mayores R% es el etanol al 50%, con estos valores se puede observar como se da el efecto sinrgico en la solucin extractora, encontrando una relacin optima de concentracin de solucin extractora equitativa 1/1 (etanol/agua) para obtener un mayor rendimiento de extraccin.

En la Tabla XXIV, XXVI, XXVIII en la seccin de Anlisis Estadstico, se determinaron los efectos en el rendimiento en funcin de la extraccin sucesiva y la solucin extractora utilizado; por los resultados obtenidos se observa que no hay interaccin entre cada etapa de extraccin sucesiva.

Con base a los resultados obtenidos en la Tabla IV se concluye que el etanol al 50% produce un mayor rendimiento en los extractos que con el agua o el etanol al 70%.

En el apndice B se calcul el valor de las constantes dielctricas de las soluciones extractoras, agua, etanol al 35%, etanol al 50% y etanol al 70% siendo estos valores de 78.5, 69.24, 63.24 y 52.34 respectivamente, el valor de la constante dielctrica en una medida de las propiedades de un solvente para mantener cargas opuestas, esto indica que las partculas de los slidos solubles de la corteza del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) tienen una mejor solubilidad con un solvente que tenga un valor de constante dielctrica entre 60-70 y una baja solubilidad con solventes con valores cercanos a la constante dielctrica del agua y el etanol.

En la tabla V se muestran los promedios de propiedades fisicoqumicas de los extractos colorantes. Para los valores de densidad obtenidos, hay un efecto significativo

46

de la solucin extractora utilizada as como del nmero de etapa de extraccin sucesiva realizada. Se puede observar el que indica cuantos gramos extrae cada mililitro de solucin extractora, lo mayores se obtuvieron utilizando como solvente extractor etanol al 50% y los menores utilizando agua y etanol al 70%.

Al realizarse el anlisis de varianza en la Tabla XII, XIV y XVI, se estableci que existe diferencia significativa en las densidades obtenidas en cada y segn la extraccin sucesiva realizada y segn la solucin extractora utilizada.

Para los valores obtenidos del ndice de refraccin, hay efectos significativos segn la solucin extractora utilizada y su etapa de extraccin sucesiva realizada. Se observan valores de ndice de refraccin mayores en los extractos colorantes al utilizar como solvente etanol que agua, ndices mayores utilizando etanol al 50%. Y en general los ndices mayores obtenidos se obtuvieron en la primera extraccin sucesiva.

Al realizarse el Anlisis de varianza en la Tabla XVIII, XX, XXII, se estableci que existe diferencia significativa en los ndices de refraccin obtenidos en cada nmero de etapa de extraccin sucesiva realizada y la solucin extractora utilizada.

La presencia de pigmentos colorantes del tipo flavonoides en los extractos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) se demostr mediante pruebas colorimtricas y cromatogrficas. Se realizaron dos pruebas colorimtricas: la reaccin de Shinoda (Tabla VI, resultados) y la reaccin con cido sulfrico concentrado (H2SO4) (Tabla VII, resultados). En todas las corridas de las dos pruebas se presentaron cambios de colores (Figura 23, apndice B), con esto se demuestra la presencia de flavonoides, debido a que eran pruebas que demostraran la presencia de los mismos.

47

En cuanto a la prueba de shinoda. En todas las corridas se present el cambio de color de una solucin amarilla a una solucin roja. Con ello se demostr la presencia de flavonas y flavonoles.

La prueba de reaccin con cido sulfrico concentrado (H2SO4) arroj como resultado que todas las corridas presentaron un cambio de color de una solucin amarilla clara a una solucin amarilla fuerte. Con ello se demostr la presencia de flavonas y flavonoles.

Con lo que respecta a la prueba cromatogrfica, se puede observar claramente en la figura 25 del apndice B, que las marcas en la placa cromatogrfica demuestran la presencia de flavonoides. En todas las corridas se identific la presencia de un solo flavonoide (quercetina).

48

6. ANLISIS ESTADSTICO

En el presente trabajo se realiz un anlisis estadstico de varianza, con la finalidad de comprobar cul hiptesis estadstica es la que mejor se ajusta a la parte experimental del estudio, ya sea, la hiptesis nula o la hiptesis alternativa planteada segn sea el caso. La idea de este mtodo es expresar una medida de la variacin total de un conjunto de datos como una suma de trminos, que se pueden atribuir a fuentes o causas especficas de variacin; en su forma ms simple, se aplica a experimentos que se planifican como diseos completamente aleatorios. (Walpole, 1999) El anlisis de varianza tendr entonces que tomar en cuenta los siguientes factores: 5. La solucin extractora 5. El numero de extracciones sucesivas

En la prctica se suele utilizar la tabla de organizacin de datos y la tabla de anlisis de varianza representada por lo siguiente:

Tabla IX. Organizacin de datos de ANOVA

Tratamientos

1
Repeticiones

2 Y21 Y22 Y23 T2*

3 Y31 Y32 Y33 T3* T**

1 2 3 Total
Fuente: Walpole, 1999

Y11 Y12 Y13 T1*

49

Tabla X. ANOVA Fuente de Variacin Tratamientos Error Total

Fuente: Walpole, 1999

Grados de Libertad

Suma de Cuadrados

Cuadrados Medios
S12 =
2

calculada tabulada

k-1
k(n - 1) nk 1

SSA
SSE SST

SSA k 1 S12 S2

SSE S = k (n 1)

En donde k representa el nmero de tratamientos y n el nmero de experimentos por cada tratamiento. Las frmulas empleadas descritas con letras maysculas arriba son las siguientes:
T*2 * kn

FC =

[ec. 1]

SSA =
k

Ti 2 FC i =1 ni
k ni

[ec. 2]

SST = Yij2 FC
i =1 j =1

[ec. 3]

SSE = SST SSA

S12 = SSA k 1

[ec. 4]

[ec. 5]

S2 =

SSE k (n 1)

[ec.6]

50

Y la Regla de decisin: Si F calculada > F tabulada Si F calculada F tabulada f tabulada: Tabla de f con nivel de confianza del 95 %, f(v1,v2) Donde: v1 = k-1 v2 = k(n-1) se rechaza Ho se acepta Ho

6.1 Propiedades fisicoqumicas de los extractos tintreos en funcin del nmero de etapas de extracciones sucesivas y la solucin extractora utilizada.

6.1.1 Densidad de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva

Tabla XI. Organizacin de datos ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35% 0.986 0.988 0.983 2.957

Et 50% 0.959 0.964 0.961 2.884

Et 70% 0.897 0.894 0.900 2.691 11.605

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

1.029 1.020 1.024 3.073

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en la densidad del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la primera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

51

Hi:

Existe diferencia significativa en la densidad del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la primera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XII. ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Suma de cuadrados Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 0.008569 0.000010 853.47 4.07

Tratamientos 0.025706 Error Total 0.000080 0.025787

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

6.1.2 Densidad de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva

Tabla XIII. Organizacin de datos ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35% 0.968 0.967 0.963 2.898

Et 50% 0.952 0.949 0.950 2.851

Et 70% 0.886 0.884 0.886 2.656 11.430

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

1.008 1.011 1.006 3.025

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en la densidad del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la segunda etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

52

Hi:

Existe diferencia significativa en la densidad del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la segunda etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XIV. ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Suma de cuadrados Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 0.007816 0.000004 1777.30 4.07

Tratamientos 0.023447 Error Total 0.000035 0.023482

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

6.1.3 Densidad de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva

Tabla XV. Organizacin de datos ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35% 0.951 0.952 0.954 2.856

Et 50% 0.921 0.923 0.925 2.769

Et 70% 0.869 0.870 0.871 2.611 11.231

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

1.000 0.999 0.998 2.996

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en la densidad del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la tercera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

53

Hi:

Existe diferencia significativa en la densidad del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la tercera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XVI. ANOVA de densidad de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Suma de cuadrados Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 0.008660 0.000003 3389.48 4.07

Tratamientos 0.025980 Error Total 0.000020 0.026001

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

6.1.4 ndice de refraccin de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva

Tabla XVII. Organizacin de datos ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35%

Et 50%

Et 70%

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

1.3421 1.3402 1.3391 4.0214

1.3588 1.3688 1.3683 1.3611 1.3689 1.3721 1.3590 1.3688 1.3723 4.0789 4.1065 4.1128 16.3195

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en el ndice de refraccin del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la primera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

54

Hi:

Existe diferencia significativa en el ndice de refraccin del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la primera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XVIII. ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Suma de cuadrados Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 0.000578 0.000002 252.04 4.07

Tratamientos 0.001735 Error Total 0.000018 0.001754

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

6.1.5 ndice de refraccin de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva

Tabla XIX. Organizacin de datos ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35%

Et 50%

Et 70% 1.3671 1.3675 1.3679 4.1025 16.2852

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

1.3381 1.3382 1.3379 4.0142

1.3569 1.3668 1.3566 1.3663 1.3567 1.3653 4.0701 4.0984

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en el ndice de refraccin del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la segunda etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

55

Hi:

Existe diferencia significativa en el ndice de refraccin del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la segunda etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XX. ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Suma de cuadrados Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 0.000552 3089.64 4.07 8.00 0.000000 11.00 se rechaza Ho

Tratamientos 0.001655 0.000001 Error 0.001656 Total

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

6.1.6 ndice de refraccin de los extractos tintreos tercera etapa de extraccin sucesiva

Tabla XXI. Organizacin de datos ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35%

Et 50%

Et 70% 1.3654 1.3657 1.3659 4.0970 16.2579

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

1.3362 1.3360 1.3358 4.0079

1.3548 1.3635 1.3550 1.3629 1.3542 1.3627 4.0640 4.0891

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en el ndice de refraccin del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la tercera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

56

Hi:

Existe diferencia significativa en el ndice de refraccin del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la tercera etapa de extraccin sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XXII. ANOVA del ndice de refraccin de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Suma de cuadrados Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 0.000540 5689.54 4.07 8.00 0.000000 11.00 se rechaza Ho

Tratamientos 0.001619 0.000001 Error 0.001620 Total

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

6.2 Rendimientos de los extractos tintreos en funcin del nmero de etapa de extraccin sucesiva y la solucin extractora utiliza.

6.2.1 Rendimiento de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva

Tabla XXIII. Organizacin de datos ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35% 22.83 23.40 22.23 68.47

Et 50% 23.56 24.26 23.92 71.74

Et 70% 17.47 17.17 18.27 52.90 235.57

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

14.77 14.30 13.40 42.47

57

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la primera etapa de extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. Hi: Existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la primera etapa de extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XXIV. ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la primera etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Tratamientos Error Total Suma de cuadrados 187.48 2.54 190.02 Grados Cuadrados f f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 62.49 0.32 197.01 4.07

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

6.2.2 Rendimiento de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva

Tabla XXV. Organizacin de datos ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35% 10.43 9.83 9.33 29.60

Et 50% 11.23 10.41 10.84 32.48

Et 70% 7.93 7.00 7.07 22.00 104.25

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

6.63 7.33 6.20 20.17

58

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la segunda etapa de extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. Hi: Existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la segunda etapa de extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XXVI. ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la segunda etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Tratamientos Error Total Suma de cuadrados 34.99 2.14 37.13 Grados Cuadrados F f de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 11.66 0.27 43.61 4.07

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

6.2.3 Rendimiento de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva Tabla XXVII. Organizacin de datos ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva
Tratamientos

Agua
Repeticiones

Et 35% 3.87 4.27 4.83 12.97

Et 50% 4.14 4.47 4.87 13.48

Et 70% 3.20 3.63 3.77 10.60 43.45

1 2 3 Total
Fuente: Datos Originales

2.67 2.17 1.57 6.40

59

Hiptesis: Ho: No existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la tercera etapa de extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada. Hi: Existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en la tercera etapa de extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

Tabla XXVIII. ANOVA del rendimiento de los extractos tintreos para la tercera etapa de extraccin sucesiva Fuente de variacin Tratamientos Error Total Suma de cuadrados 10.42 1.52 11.94 Grados Cuadrados F F de medios Calculada Tabulada libertad 3.00 8.00 11.00 3.47 0.19 18.27 4.07

Fuente: Anlisis estadstico

F calculada > F tabulada

se rechaza Ho

60

CONCLUSIONES

1. Existe diferencia significativa en el rendimiento del extracto tintreo, el cual quedan plasmadas en un modelo matemtico polinomial de orden 3 con un mximo al 50% de contenido acua-etanolico.

2. Existe un efecto sinrgico que se da en la solucin acua-etanolica en donde se obtiene un valor mximo de rendimiento de extractos tintreos cuando se utiliza un porcentaje de etanol al 50%.

3. Se observ que el efecto sinrgico es desarrollado por la accin que tiene la solucin extractora en una constante dielctrica intermedia entre la del agua y la del etanol.

4. Pruebas colorimtricas como la reaccin de Shinoda y la reaccin con cido sulfrico concentrado (H2SO4), demostraron la presencia de flavonas e isoflavonas.

5. La presencia de flavonoides no se ve afectada por el tipo de solucin extractora o el nmero de etapa de extraccin sucesiva. 6. Al utilizar como solucin extractora etanol al 50% se obtuvieron IR y mayores.

5. Existe diferencia significativa en las propiedades fisicoqumicas del extracto tintreo obtenido de la corteza del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) en funcin de cada extracciones sucesiva y segn la solucin extractora utilizada.

61

RECOMENDACIONES

1. Realizar la extraccin de extractos tintreos del aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) a nivel planta piloto y aplicarlo a diferentes fibras naturales y sintticas.

2. Para obtener la mayor cantidad del extracto tintreo de la corteza del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) utilizar etanol al 50% y como mximo realizar una cuarta etapa de extraccin sucesiva.

3. Realizar estudios que contemplen una 4ta y 5ta etapa de extraccin sucesiva de la corteza de Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) u otra corteza para determinar su porcentaje de rendimiento total agotando la materia prima utilizada.

4. Optimizar el proceso de lixiviacin, determinando la relacin ptima de solvente y materia prima que se debe utilizar as como el periodo ptimo de extraccin para la obtencin de extractos tintreos.

5. Optimizar el proceso de lixiviacin, utilizando diferentes solventes, como medios cidos o alcalinos y solventes polares y apolares, para observar la tendencia de los rendimientos, si stos aumentan o disminuyen.

6. Hacer estudios de extracciones de colorantes utilizando otras soluciones extractoras a diferentes concentraciones.

62

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Domnguez M., Augusto Alberto. Extraccin de los pigmentos colorantes del tipo xantofilas contenidos en la flor Tagetes Erecta (Marigold). Tesis Ing. Qumica. Guatemala, USAC, Facultad de Ingeniera, 1987. 50 pp.

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4. Lock O. Citado por Cecilia Valencia, Colorantes naturales. (Per: 1997)

5. OFI/CATIE,

rboles

de

Centro

Amrica.

http://herbaria.plants.ox.ac.uk/adc/downloads/capitulos_especies_y_anexos/lysiloma _auritum.pdf

6. Treybal, Robert E. Operaciones de Transferencia de Masa. Segunda Edicin, Editorial McGraw-Hill, Mxico 1994, 792 - 822 pp.

7. Walpole, Ronald, Probabilidad y estadstica para ingenieros. Sexta edicin, Editorial Pearson Educacin, Mxico 1999, 463-468 pp,

8. Wall, Joaqun Gabriel, Obtencin de colorantes, Editorial Universidad Nacional de Quielmes, Argentina 2003.

63

BIBLIOGRAFA

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APNDICE A

Datos originales
Tabla XXIX. Porcentaje de rendimiento del extracto tintreo del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Solvente No. Extraccin Sucesiva 1 2 3 %Rendimiento Acumulado 1 2 3 %Rendimiento Acumulado 1 2 3 %Rendimiento Acumulado 1 2 3 %Rendimiento Acumulado
Fuente: Datos Experimentales

% Corrida Corrida Corrida Rendimiento No. 1 No. 2 No. 3 Promedio 14.77 6.63 2.67 24.07 22.83 10.43 3.87 37.13 23.56 11.23 4.19 38.98 17.47 7.93 3.20 28.60 14.30 7.33 2.17 23.80 23.40 9.83 4.27 37.50 24.26 10.41 4.47 39.14 17.17 7.00 3.63 27.80 13.40 6.20 1.57 21.17 22.23 9.33 4.83 36.40 23.92 10.84 4.87 39.63 18.27 7.07 3.77 29.10 14.16 6.72 2.13 23.01 22.82 9.87 4.32 37.01 23.91 10.83 4.51 39.25 17.63 7.33 3.53 28.50

0.69 0.57 0.55 1.60 0.58 0.55 0.49 0.56 0.35 0.41 0.34 0.34 0.57 0.52 0.30 0.66

Agua

Et 35%

Et Etanol 50%

Et 70%

65

Tabla XXX. Porcentaje de rendimiento a agotamiento del extracto tintreo del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) utilizando equipo de extraccin Sohxlet Muestra Extracto %Rendimiento 1 2 3 3.99 4.02 4.00 39.87 40.19 40.01 %Rendimiento Promedio 40.02 0.16

Fuente: Datos experimentales

Tabla XXXI. Densidad de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) a 20 C. Corridas Solvente No. Etapa de Extraccin 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 1.0290 1.0080 0.9998 0.9860 0.9680 0.9507 0.9593 0.9523 0.9206 0.8970 0.8860 0.8694 2 1.0200 1.0110 0.9987 0.9880 0.9670 0.9515 0.9635 0.9492 0.9226 0.8940 0.8840 0.8703 3 1.0240 1.0060 0.9975 0.9830 0.9630 0.9535 0.9609 0.9495 0.9254 0.9000 0.8860 0.8714 Densidad promedio [g/mL] 1.0243 1.0083 0.9987 0.9857 0.9660 0.9519 0.9612 0.9503 0.9229 0.8970 0.8853 0.8704 0.0045 0.0025 0.0012 0.0025 0.0026 0.0014 0.0021 0.0017 0.0024 0.0030 0.0012 0.0010

Agua

Et 35%

Etanol

Et 50%

Et 70%
Fuente: Datos experimentales

66

Tabla XXXII. ndice de refraccin de los extractos tintreos del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach). Corridas Solvente No. Etapa de Extraccin 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 1.34212 1.33811 1.33615 1.35877 1.35685 1.35478 1.36876 1.36675 1.36345 1.36830 1.36712 1.36543 2 1.34018 1.33822 1.33597 1.36114 1.35656 1.35497 1.36889 1.36627 1.36289 1.37212 1.36746 1.36567 3 1.33913 1.33788 1.33581 1.35897 1.35673 1.35421 1.36883 1.36534 1.36272 1.37233 1.36789 1.36587 ndice de Refraccin promedio 1.3405 1.3381 1.3360 1.3596 1.3567 1.3547 1.3688 1.3661 1.3630 1.3709 1.3675 1.3657 0.0015 0.0002 0.0002 0.0013 0.0001 0.0004 0.0001 0.0007 0.0004 0.0023 0.0004 0.0002

Agua

Et 35%

Etanol

Et 50%

Et 70%
Fuente: Datos experimentales

Tabla XXXIII. Anlisis granumtrico de la corteza molida del Aliso (Alnus arguta (Schltdl.) Spach) Tamao de partcula [m] 838.2 419.1-838.2 297.18-419.1 248.92-297.18 248.92 Totales

No. Mesh 20 20-40 40-50 50-60 60

Peso [g] 7484.27 3111.64 1106.77 438.10 2485.69 14626.5

% Peso 51.17 21.27 7.57 3.00 16.99 100

Fuente: Datos experimentales

67

APNDICE B

Constante Dielctrica
La solubilidad depende de las propiedades de un solvente que le permitan interaccionar con un soluto de manera ms fuerte que como lo hacen las partculas del solvente unas con otras. La constante dielctrica, es una medida de las propiedades de un solvente para mantener cargas opuestas separadas.

1. Determinacin de la constante dielctrica de la solucin extractora de Etanol al 35 %. agua @ 20C = 78.5 etanol @ 20C = 24 Volumen total = 300 mL et35% @ 20C = 0.94494 g/mL Masa total = (300 mL) (0.94494 g/mL) = 283.48 g Masaetanol = (283.48 g) (0.35) = 99.22 g Masaagua = (283.48 g) (0.65) = 184.26 g PMetanol = 46 g/mol PMagua = 18 g/mol Fracciones molares:
Fraccin mol (x ) = moles a moles a + moles b

xagua =

184.26 g 1mol 184.26 g 1mol 18 g

18 g + 99.22 g 1mol

= 0.83 46 g = 0.17 46 g

xe tan ol =

99.22 g 1mol 184.26 g 1mol 18 g

46 g + 99.22 g 1mol

68

Constante Dielctrica:

solucion = e tan ol xe tan ol + agua xagua

et 35% = 24 0.17 + 78.5 0.83 = 69.24

2. Determinacin de la constante dielctrica de la solucin extractora de Etanol al 50 %. agua @ 20C = 78.5 etanol @ 20C = 24 Volumen total = 300 mL et50% @ 20C = 0.91384 g/mL Masa total = (300 mL) (0.91384 g/mL) = 274.152 g Masaetanol = (274.152 g) (0.5) = 137.076 g Masaagua = (274.152 g) (0.5) = 137.76 g PMetanol = 46 g/mol PMagua = 18 g/mol Fracciones molares:
x agua = 137.076 g 1mol 137.076 g 1mol 18 g 18 g 46 g = 0.28 46 g = 0.72

+ 137.076 g 1mol 46 g

xe tan ol =

137.076 g 1mol 137.076 g 1mol 18 g

+ 137.076 g 1mol

Constante Dielctrica:

solucion = e tan ol xe tan ol + agua xagua et 50% = 24 0.28 + 78.5 0.72 = 63.24

69

3. Determinacin de la constante dielctrica de la solucin extractora de Etanol al 70 %. agua @ 20C = 78.5 etanol @ 20C = 24 Volumen total = 300 mL et70% @ 20C = 0.86766 g/mL Masa total = (300 mL) (0.86766 g/mL) = 260.3 g Masaetanol = (260.3 g) (0.70) = 182.21 g Masaagua = (260.3 g) (0.30) = 78.09 g PMetanol = 46 g/mol PMagua = 18 g/mol Fracciones molares:

xagua =

78.09 g 1mol 78.09 g 1mol 18 g

18 g + 182.21g 1mol

= 0.52 46 g = 0.48 46 g

xe tan ol =

182.21g 1mol 78.09 g 1mol 18 g

46 g + 182.21g 1mol

Constante Dielctrica:

solucion = e tan ol xe tan ol + agua xagua

et 70% = 24 0.48 + 78.5 0.52 = 52.34

70

APNDICE C

Figura 18. Corteza Molida de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 19. Sistema de maceracin dinmica con reflujo

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

71

Figura 20. Filtracin de los extractos tintreos

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 21. Extracto tintreo lquido de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 22. Rotaevaporacin de los extractos tintreos

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

72

Figura 23. Extracto tintreo de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach rotaevaporado para tamizaje fitoqumico.

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 24. Secado de los extractos tintreos

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 25. Extracto tintreo en polvo de Alnus arguta ((Schltdl.) Spach

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

73

Figura 26. Rendimientos obtenidos para los distintos Tamices y Solventes

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 27. Anlisis Fitoqumico, de izquierda a derecha: solucin estndar, Prueba de Shinoda, Prueba con Cloruro Ferrico, Prueba de Acido sulfrico

Fuente: Laboratorio de Investigacin de Productos Naturales LIPRONAT

Figura 28. Desarrollo de la placa cromatogrfica

Fuente: Laboratorio de Investigacin de Productos Naturales LIPRONAT

74

Figura 29. Cromatografa en capa fina para la determinacin de flavonoides

Fuente: Laboratorio de Investigacin de Productos Naturales LIPRONAT

Figura 30. Determinacin de la densidad del extracto tintreo

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

Figura 31. Determinacin del ndice de refraccin del extracto tintreo

Fuente: Laboratorio de Qumica Industrial

75

APNDICE D
Figura 32. Requerimientos acadmicos para la elaboracin de trabajos de graduacin de Ingeniera Qumica de extraccin de colorantes naturales

Fuente: Anlisis Experimental

76

APNDICE E
Figura 33. Diagrama Ishikawa para el proceso de extraccin de colorante del Aliso, mediante lixiviacin

Fuente: Anlisis Experimental

77

APNDICE F

Valor Mximo del Modelo Polinomal por el Mtodo de extremos en un Intervalo

Para encontrar los mximos o mnimos en un funcin f(x) se deben de encontrar sus nmeros crticos estos se encuentran igualando la primera derivada df(x)/dx a cero y resolvindola para x. (Larson, 2002).

Valor mximo del polinomio de grado 3 para el modelo matemtico de la Primera etapa de extraccin:

Encontrar el Mximo de la ecuacin:

% R = 0.0001(% Et ) + 0.0057(% Et ) + 0.1812(% Et ) + 14.156
3 2

Intervalo admisible: [0%-70%]

1er Paso: Encontrar la primera derivada de la ecuacin con respecto a la variable %Et
d %R 2 = 0.0003(% Et ) + 0.0114(% Et ) + 0.1812 d % Et

2do. Paso: Igualar la ecuacin de la primera derivada a cero y resolverla para %Et 0.0003(% Et ) + 0.0114(% Et ) + 0.1812 = 0 % Et = 50% % RMax = 24.967
2

El valor encontrado de %Et es el valor al cual la funcin tiene un valor mximo, este valor se encuentra evaluando %Et en la %R

78

Valor mximo del polinomio de grado 3 para el modelo matemtico de la Segunda etapa de extraccin:

Encontrar el Mximo de la ecuacin:

% R = 9 x10 5 (% Et ) + 0.0071(% Et ) 0.0496(% Et ) + 6.722
3 2

Intervalo admisible: [0%-70%]

1er Paso: Encontrar la primera derivada de la ecuacin con respecto a la variable %Et
d %R 2 = 2.7 x10 4 (% Et ) + 0.0142(% Et ) 0.0496 d % Et

2do. Paso: Igualar la ecuacin de la primera derivada a cero y resolverla para %Et 2.7 x10 4 (% Et ) + 0.0142(% Et ) 0.0496 = 0 % Et = 48.830% % RMax = 10.751%
2

Valor mximo del polinomio de grado 3 para el modelo matemtico de la Tercera etapa de extraccin:

Encontrar el Mximo de la ecuacin: % R = 1x10 5 (% Et ) 9 x10 5 (% Et ) + 0.0787(% Et ) + 2.133

3 2

Intervalo admisible: [0%-70%]

1er Paso: Encontrar la primera derivada de la ecuacin con respecto a la variable %Et d %R 2 = 3 x10 4 (% Et ) 1.8 x10 4 (% Et ) + 0.0787 d % Et

79

2do. Paso: Igualar la ecuacin de la primera derivada a cero y resolverla para %Et

3x10 4 (% Et ) 1.8 x10 4 (% Et ) + 0.0787 = 0 % Et = 48.306% % RMax = 4.598%

2

Valor mximo del polinomio de grado 3 para el modelo matemtico del porcentaje de rendimiento acumulado a tres etapas de extraccin:

Encontrar el Mximo de la ecuacin:

% R = 0.0002(% Et ) + 0.0127(% Et ) + 0.2103(% Et ) + 23.011
3 2

Intervalo admisible: [0%-70%]

1er Paso: Encontrar la primera derivada de la ecuacin con respecto a la variable %Et
d %R 2 = 0.0006(% Et ) + 0.0254(% Et ) + 0.2103 d % Et

2do. Paso: Igualar la ecuacin de la primera derivada a cero y resolverla para %Et 0.0006(% Et ) + 0.0254(% Et ) + 0.2103 = 0 % Et = 49.424% % RMax = 40%
2

80