CONCEPTOS Y TCNICAS DE BIOTECNOLOGA I 2010

BIORREACTORES
Dra. Marina de Escalada Pl

Biotecnologa
El uso integrado de la ingeniera, la bioqumica y la microbiologa para conseguir la aplicacin tecnolgica de las capacidades de los microorganismos, clulas de tejido cultivado y sus partes (Federacin Europea de Biotecnologa)

Esencia multidisciplinaria de la biotecnologa

Biotecnologa: historia y evolucin

Alimentos y bebidas fermentadas: ej. Cerveza, sumerios 6000 AC y egipcios 4000 AC. Pasteur (1865):
Etanol, butanol, acetona, glicerol. Acidos orgnicos. Ej. Ctrico. Tratamiento aerobio de aguas residuales.

Antibiticos (1940):
Penicilina:
Descubrimiento Alexander Fleming (1928). 1939 Produccin en batch, concentracin final alcanzada: 0,001 g penicilina/litro caldo sesenta aos ms tarde alcanzaba los 50 g/l.

Tecnologa de la estructura de la clula animal: vacunas.

Era post antibiticos (1960-1975):

Aminocidos. Protena celular (SCP). Enzimas (detergentes). Tecnologa de las clulas y las enzimas inmovilizadas. Tratamiento anaerbico de aguas de desecho (biogas). Polisacridos bacterianos (goma xantn).

Nueva Biotecnologa (1975-):

Tecnologa de los hibridomas: pruebas diagnsticas con anticuerpos monoclonales (1980) Ingeniera gentica (1974). Insulina humana (1982)

Bibliografa
Bioprocess Engineering. Basic concepts. Michael Shuler & Fikret Kargi. Prentice Hall International Series. Bioprocess Engineering Principles. Pauline Doran. Academic Press.

Metabolitos primarios -Molculas generalmente sencillas, que participan de los caminos metablicos esenciales. Son casi idnticos en todos los organismos. -Son ms baratos y sencillos de producir, tienen bajo contenido de actividad biolgica y frecuentemente son commodities. 1. Componentes esenciales de las clulas/microorganismos: protenas, cidos nuclicos, polisacridos (gelanos, xantanos) y polisteres, cidos grasos (insaturados), esteroles. 2. Derivados del metabolismo intermedio: azcares (fructosa, ribosa), cidos orgnicos (gluconato, cido lctico, ctrico, actico, propinico, succnico, fumrico), alcoholes (xilitol, etanol, glicerol, sorbitol, butanol), aminocidos (Lys, Thr, Glu, Trp, Phe), vitaminas (B2, B12), nucletidos saborizantes (cidos inocnico y guanlico), polisacridos y polisteres de reserva. Microorganismos productores: bacterias, levaduras y hongos

Metabolitos secundarios -Molculas mas complejas, que participan de caminos metablicos no-esenciales, pero confieren capacidades de supervivencia en situaciones de stress. -Son muy variados y su estructura es fuertemente dependiente de la especie y variedad utilizada para su produccin. Se generan en condiciones particulares y son ms valiosos y complicados de producir , alto contenido de actividad biolgica -Generalmente son productos especiales (alto precio). Funcionan en los organismos que los producen como: - Armas contra otros microorganismos (antibiticos, toxinas, inhibidores enzimticos, pesticidas) -Factores de crecimiento (hormonas)

Reactores Biolgicos
Reactores que emplean enzimas
Homogneos Heterogneos (Enzima inmobilizada)

Equivalente a reactores qumicos. Valen expresiones para reactores homogneos CatalizadorEnzima se desactiva fcilmente con la TC

Hay que considerar las limitaciones al transporte

Reactores que emplean microorganismos

Homogneos Heterogneos
(microorganismos inmobilizados)

Cintica enzimtica

G<0condicin termodinmica. Energa de activacin: (Ea) energa necesaria para formar el complejo activado. Catalizadordisminuye la Ea al buscar una ruta alternativaacelera la velocidad de reaccin

 Enzimas: Catalizadores biolgicos protenas. Deben unirse al substrato para lograr su accin cataltica mediante: Puentes de Hidrgeno. Interacciones inicas Interacciones hidrofbicas o fuerzas de van der Waals

TEMPERATURA: S/Arrhenius a>T, >velocidad OJO!! Con la temperatura de desnaturalizacin

pH DEL MEDIO: influye sobre la estructura terciaria de la enzima La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima depende INHIBIDORES

Competitivos No-Competitivos Acompetitivos CONCENTRACION DE SUBSTRATO: [S]

a > [S] > posibilidad de unin E-S favorece la reaccin

Ecuacin de Michaelis-Menten
[S]>>Km
Se comporta como una reaccin de Orden cero

VMax [S ] r [S ] Km
VMax: mx velocidad que se puede alcanzar para una dada concentracin. (saturacin). Cuando [E-S][E0]r k3 [E0] = VMax Km: constante de afinidad de M-M, su inversa se relaciona con la afinidad aparente de la enzima por el substrato. Corresponde [S] para la cual r = VMax/2. Es independiente de [E0]. Vara con T, pH, fuerza inica

[S]Km
r VMax [S] [S ] Km

[S]<<Km
Se comporta como una reaccin de 1er Orden

Cintica de crecimiento microbiano

Cuantificacin del crecimiento. Modelos cinticos.

Modelos cinticos de crecimiento controlados por sustrato

Modelos cinticos - Inhibicin

Inhibicin por sustrato Inhibicin por producto Inhibicin por productos txicos

Competitiva No competitiva Acompetitiva

Cintica de crecimiento microbiano

Mtodos Directos

Mtodos Directos
Turbidimetra con espectrofotmetro Volumen de material celular luego de la centrifugacin.

Mtodos Indirectos
Dosaje de componentes celulares (Ej: dosar nitrgeno o protena celular. Seguimiento de sustrato y/o productos resultantes de la actividad metablica.

Bioreactores - Diseo

Batch o discontinuos
Tiempo muerto (t1):
Preparacin del reactor (esterilizacin y carga). Sembrado Recuperacin del producto del reactor

t1 debe considerarse dentro del clculo de tiempo de proceso y depende del diseo del reactor y caractersticas del proceso (3-10 hs). La mayora de los batch operan con una relacin Xf/X0 10-20.

Reactor batch
Volumen constante (VR = cte) Cerrado para fase lquida: FS = F0 = 0 La concentracin final de biomasa, Xf, depende del rendimiento y de la cantidad de sustrato limitante

Cultivos continuos
Turbidostato Quimiostato FPI (ms utilizado en sistemas inmovilizados)

Balance de masa

SIN CONSIDERAR METABOLISMO ENDOGENO

EFECTO DEL METABOLISMO ENDOGENO

KS D S m D
X Y
M X /S

KS ( D k d ) S m D kd
X YXM / S ( S0 S ) ( D ) D kd

( S0 S )

Con formacin de producto

Con formacin de producto

KS D S m D
X YXM / S ( S0 S ) ( D YXM D qP /S YP / S )

KS ( D k d ) S m D kd
X YXM / S ( S0 S ) ( D YXM D kd q P / S YP / S )