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Manual de prcticas de laboratorio Biometra Hemtica

ALUMNO:
T.L.C. Sara E. Cambero Martnez C.B.T.i.s. 41 Belisario Domnguez 08/02/2011

GRUPO:

CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO Industrial y de Servicios No. 41 BIOMETRIA HEMATICA PRACTICAS DE LABORATORIO

Guia prctica para flebotomia ..................................................................................................... 3


INTRODUCCIN

....................................................................................................................... 3

LA SEGURIDAD PRIMERO ........................................................................................................... 3 REQUISITOS GENERALES PARA LA SEGURIDAD PERSONAL ............................................................... 3

MEDIDAS ESPECFICAS DURANTE LA FLEBOTOMA ......................................................................... 4 FACTORES PRE-ANALTICOS QUE AFECTAN LAS PRUEBAS: .............................................................. 4 INTERFERENCIAS: .................................................................................................................... 5 IDENTIFICACIN DEL PACIENTE................................................................................................... 5 LA PREPARACION DEL PACIENTE: ............................................................................................... 6 E T I C A: ............................................................................................................................. 7 PREPARACIN DEL EQUIPO ....................................................................................................... 7 EL PROCEDIMIENTO DE LA FLEBOTOMA ....................................................................................... 8 PROBLEMAS DURANTE LA EXTRACCIN VENOSA. ........................................................................ 10 LA PUNCIN CAPILAR: ............................................................................................................ 13 ORDEN DE LLENADO DE LOS TUBOS: ......................................................................................... 15 CONSIDERACIONES EN PACIENTES HOSPITALIZADOS:................................................................... 15 EXTRACCIN SANGUNEA EN PACIENTES CON VENOCLISIS: ........................................................... 16 EL ETIQUETADO: ................................................................................................................... 16 CUIDADOS DEL PACIENTE POSTERIOR A LA EXTRACCIN: ............................................................. 17 TRANSPORTE DE LA MUESTRA ................................................................................................. 17 AL TERMINAR SU LABOR.......................................................................................................... 17 Prctica 1 F l e b o t o m i a ................................................................................................... 18 Prctica 2 Recuento eritrocitario y determinacion de hematocrito ............................................. 23 Prctica 3 Dosificacion de hemoglobina .................................................................................. 30 Prctica 4 Formula roja y clasificacion de anemias .................................................................. 35 Prctica 5 Eritrosedimentacion globular y recuento de reticulocitos ........................................... 39 Prctica 6 Recuento de leucocitos totales ............................................................................... 44 Prctica 7 Recuento diferencial de leucocitos .......................................................................... 48 Anexo 1 .................................................................................................................................. 53 Anexo 2 .................................................................................................................................. 55 Bibliografia: ............................................................................................................................. 56

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GUIA PRACTICA PARA FLEBOTOMIA

Introduccin La flebotoma constituye una de las etapas ms importantes en el trabajo del laboratorio clnico. Por una parte representa el primer contacto entre el laboratorio y sus pacientes y desde el punto de vista de la muestra sangunea, la enorme importancia que conlleva una muestra apropiadamente colectada, la seguridad de su origen y el correcto envasado y transporte, constituyen factores fundamentales en la evaluacin e informe de los exmenes a realizar. El personal que ha de realizar la coleccin de la muestra sangunea, debe tener presente que en el trato correcto del paciente, su orientacin y la habilidad para realizar su trabajo, est la cara del Laboratorio Clnico ante la comunidad que ha de servir. El presente protocolo pretende ser una gua para el personal encargado de la coleccin de las muestras sanguneas, tal que sta funcin sea estandarizada en sus aspectos tcnicos y estableciendo las pautas necesarias en bioseguridad y de aquellos factores que pueden afectar la calidad de la muestra. La seguridad primero T eres un recurso altamente entrenado y valioso. No permitas que un accidente ponga en peligro tu vida. T eres el nico que puede practicar y hacer cumplir los procedimientos de seguridad para tu propia proteccin y la de tus compaeros de trabajo.

Requisitos generales para la seguridad personal Vestimenta y accesorios: Es obligatorio el utilizar bata durante todo el tiempo de trabajo en el laboratorio. Cuando se va a extraer muestra, es requisito la utilizacin de guantes de proteccin. Es recomendable el uso de lentes de proteccin. No se permite comer ni tomar en el rea de trabajo. No se permite fumar. Aplicacin de cosmticos: No permitido en el rea de trabajo. Lentes de contacto: No se permite su manipulacin en el rea de trabajo. Cabello: Se recomienda que las damas aseguren por detrs su cabello, de forma tal que no entren en contacto con superficies contaminadas. Lavado de las manos: Las manos deben ser lavadas con frecuencia durante todo el da de labor, antes y despus del contacto con los pacientes, antes de comer o tomar y antes de salir del laboratorio.

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Medidas especficas durante la flebotoma Practique las precauciones universales mnimas con todo paciente a ser atendido. Toda muestra debe ser considerada potencialmente infecciosa y se deben tomar las precauciones que garanticen la seguridad del flebotomista y de los pacientes. Limpie su mesa antes de iniciar sus labores. Si el paciente tose con frecuencia, colquese una mascarilla. Evite tocar reas visiblemente infectadas del paciente. Tome precauciones al manipular las agujas y lancetas. No deje agujas y lancetas usadas en la mesa de trabajo; descartar inmediatamente en su contenedor apropiado. No coloque el protector a la aguja. Si hay derrame de sangre, limpie con Hipoclorito de sodio al 10%. Limpie el torniquete con alcohol etlico despus de cada extraccin. Cambie los guantes si se han manchado de sangre u otros fluidos corporales. Siempre que sea posible, cambie los guantes entre pacientes. Al terminar su labor, qutese los guantes y lvese bien las manos. Si ocurre un pinchazo con aguja conteniendo sangre de un paciente HIV positivo, informe inmediatamente al jefe del laboratorio y dirjase a la clnica del empleado o a riesgos profesionales. Evite que los nios toquen o jueguen con los equipos de la flebotoma. Factores pre-analticos que afectan las pruebas: Es importante tener presente que existen muchos factores que pueden afectar las pruebas de laboratorio, algunos de los cuales pueden ser evitados con una adecuada orientacin al paciente y una correcta tcnica de extraccin sangunea. A continuacin enumeraremos algunos de estos factores y recomendaciones al respecto.

1. La ansiedad y la tensin mental o fsica puede afectar los niveles de muchos componentes
sanguneos. Tal es el caso de las concentraciones de Prolactina, Cortisol, Catecolamina, Aldosteronas y Renina. Tambin puede elevar la cuenta de leucocitos. 2. Se recomienda evitar ejercicios fsicos vigorosos durante 3 das previos a la toma de muestra, ya que pueden alterar los niveles de CPK, LDH, AST potasio, glucosa, lactato, prolactina y cortisol. 3. El ritmo diurno de algunos fluidos corporales muestran fluctuaciones durante el da. Por ejemplo los niveles de cortisol son altos en la maana, pero decrecen en la tarde. Los niveles de hierro tienden a caer durante el da. 4. La situacin diettica del paciente puede ser importante para ciertas pruebas. Tal es el caso de las variaciones en la concentracin de lpidos despus de una comida grasosa. El suero sanguneo muestra una apariencia lechosa debido a la presencia de triglicridos y quilomicrones. Estos sueros hiperlipidmicos influyen en las mediciones, por lo que se recomienda tomar muestra despus de un periodo de ayuno, usualmente de toda la noche. 5. La ingestin de etanol induce cambios en la composicin de los lpidos corporales. De particular inters son las enzimas hepticas, como la fosfatasa alcalina, transaminasas, gama glutamil transferasa y otros componentes como la glucosa, triglicridos, uratos y lactato. 6. El fumar puede producir variaciones en los resultados de algunos componentes como la lipasa, amilasa, colesterol, glucosa e igualmente afecta la absorcin gstrica en la prueba de tolerancia a la glucosa. 7. La ciruga y la inyeccin intramuscular provoca un aumento en la concentracin de creatincinasa. 8. La exploracin rectal o la manipulacin prosttica, puede causar un aumento en la concentracin del antgeno prosttico especfico. 9. Los anticonceptivos orales afectan profundamente la actividad estrognica y conducen al aumento de muchas protenas como la tiroxina, cortisol y las hormonas sexuales. 10. Medicamentos como barbitrico y fenitoina, inducen enzimas hepticas con valores elevados.

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11. Evite extraer sangre arriba de una inyeccin intravenosa previa, ya que las concentraciones de
muchos compuestos pueden resultar errneamente altos o bajos.

12. Evite provocar hemlisis durante el proceso de extraccin o llenado de los tubos, lo cual afectar
algunas pruebas relevantes. La hemlisis puede ocurrir tambin por exceso de residuos del alcohol utilizado durante la desinfeccin del sitio a puncionar. Tambin puede ser debido a un incremento en la fragilidad capilar y alto volumen de clulas empacadas, especialmente en recin nacidos. Evite agitar con fuerza los capilares para microcoleccin de muestra, ya que puede provocar su hemlisis. Evite puncionar en un rea con hematoma, fstulas, quemaduras, escoriaciones de la piel, cicatrices o del costado en que se ha realizado mastectoma reciente. Verifique condiciones de ayuno para las pruebas que lo requieran. Las pruebas seriadas como curvas de tolerancia, post-prandial, post-ejercicios, etc. deben monitorearse en el tiempo adecuado, por lo que tienen prioridad. En el caso de las pruebas seriadas, deben rotularse los tubos con la hora de toma de la muestra.

13. 14. 15. 16. 17.

Interferencias: Los tubos con anticoagulante deben invertirse suavemente y colocarlos en posicin vertical, para evitar el contacto prolongado con el tapn de caucho. Algunos compuestos se pueden adsorber al tubo. Tal es el caso de la hormona ACTH y la paratiroidea que se adsorben al vidrio con facilidad, por lo que se recomienda tubos de plstico. Los separadores de suero se utilizan para separar el suero libre del cogulo de sangre. Estos pueden ser de gel de silicn, poliester o perlas de vidrio. En algunos casos debido a problemas en la centrifugacin y a altas temperaturas, pueden quedar gotas de gel dentro del suero. Se ha demostrado que estas gotas de gel pueden interferir con algunas mediciones. Es conocido que la progesterona se reduce apreciablemente cuando se almacena sobre gel por varios das. Igualmente ocurre con la lidocana, fenobarbital, fenitoina y Carbamacepina. Algunas hormonas polipeptdicas de bajo peso molecular, como la ACTH, glucagn, gastrina y otras hormonas intestinales, se destruyen rpidamente por enzimas presentes en la sangre. Por lo que es necesario centrifugar la muestra a baja temperatura, 10 minutos despus de la toma y almacenar el suero o plasma inmediatamente a 20 C. Aquellos tubos con anticoagulantes deben ser llenados exactamente hasta la marca, cualquiera sea el mtodo que se utilice para extraer la sangre, para evitar que la concentracin del anticoagulante sea demasiada alta, tal que afecte el sistema de medicin. Identificacin del paciente Todas las muestras deben ir acompaadas de una solicitud debidamente formulada. La solicitud debe contener la siguiente informacin: a) La identificacin completa del paciente: Nombre completo Sexo Nmero de cdula o seguro social Datos para su localizacin Sala y nmero de cama si est hospitalizado Nmero de telfono si es ambulatorio b) Mdico solicitante:

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Nombre completo Especialidad Registro c) Pruebas que se realizarn d) Es deseable que la solicitud incluya informacin clnica de utilidad Diagnstico Ingestin de drogas Restricciones especiales e) Fecha de orden y fecha de coleccin f) Iniciales del flebotomista g) Hora de extraccin.

LA PREPARACION DEL PACIENTE: La primera impresin y las observaciones inmediatas pueden ser tiles para el flebotomista. Ayudarn a establecer el tipo de paciente, el sitio de la puncin, las precauciones necesarias y la forma correcta para el trato del paciente. El paciente espera de usted un trato profesional, corts y de comprensin, ya que l est frente a usted porque le aqueja su salud. La comunicacin afectiva es determinante en la relacin con el paciente. Hable con el paciente. Explique el procedimiento a seguir. Identificacin del paciente:

La identificacin correcta del paciente es obligante. Pregunte su nombre completo y nmero de cdula o seguro social. Si se trata de un paciente hospitalizado, observe su brazalete de identificacin y su nombre en la cama. Vigilancia del paciente: Observe si el paciente est sudoroso, agitado, sedado. Personalidad del paciente: Observe si el paciente es agresivo, arrogante, conflictivo. Evite cualquier discusin con el paciente. De ser as, llame al jefe del laboratorio. Trate de calmarlo y sea comprensivo. Sin embargo, usted siempre tiene la opcin de no atender un paciente agresivo que pueda causar lesin a usted o a s mismo. Comunique de sta situacin a la persona encargada de la sala. Si se trata de un nio agresivo o combativo, solicite ayuda para hacer la extraccin.

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E T I C A: En todo momento debe mantener la tica y confidencialidad del paciente y sus pruebas. Los Cdigos de tica de los trabajadores de la salud, prohben estrictamente que los aspectos de salud del paciente sean divulgados con propsitos no profesionales. Se deben evitar crticas, temas polticos, atencin de asuntos personales y conversaciones que distraigan o dilaten la adecuada atencin del paciente. No d preferencia a familiares ni amistades, tal que afecte la atencin de los pacientes. Preparacin del equipo Tubos de coleccin: Los tubos estn predeterminados para llenarse con un determinado volumen de sangre por vaco. El tapn de caucho est codificado por color, de acuerdo a su uso o sus aditivos.

TUBO CON TAPON ROJO USO: Qumica, Inmunologa, Banco de sangre ADITIVO: Ninguno

TUBO CON TAPON ROJO USO: Qumica ADITIVO: Gel - Separador

TUBO CON TAPON MORADO USO: Hematologa ADITIVO: Anticoagulante EDTA

TUBO CON TAPON CELESTE USO: Pruebas de Coagulacin ADITIVO: Anticoagulante Citrato de sodio Agujas: Estn numeradas dependiendo de su calibre. Para coleccin de sangre para hemogramas, se recomienda una aguja de un dimetro de 0.8 mm (21G) para evitar dao a las clulas. Las agujas de 0.9 mm a 1.1 mm de dimetro (20G 19G) se utilizan normalmente para puncin venosa en adultos. Jeringuillas: De 3, 5, 10 y 20 cc Adaptador para tubos-Vacutainer: Se utilizan para tubos al vaco. Torniquete: Recomendable de 2 tamaos para adultos y nios y de preferencia deben ser planos.

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Alcohol: Etlico o Isoproplico al 70%. Algodn Gasa Guantes Curita o venda adhesiva Iodo. Frascos para hemocultivos. El procedimiento de la flebotoma La muestra debe tomarse correctamente y bajo las condiciones ms favorables para evitar errores. Esto incluye la absoluta identificacin del paciente, el sitio a puncionar y el volumen a colectar. El paciente debe estar en posicin cmoda, de preferencia en una silla especial para venipuncin con descanso para los brazos y si est en cama, preferiblemente acostado. Seleccin del sitio a puncionar: Al proceder a seleccionar el sitio a puncionar, evite reas con hematoma, fstulas, quemaduras, escoriaciones de la piel o cicatrices. Si se trata de un paciente hospitalizado evite tomar muestra de un brazo que se est utilizando con venoclisis o del costado en que se ha realizado una mastectoma reciente. La palpacin: Antes de proceder a puncionar, se debe escoger la vena. La mejor manera es realizando una palpacin de las mismas para esa decisin. Para ello coloque el torniquete 3 a 4 pulgadas por arriba del sitio seleccionado, para visualizarlas mejor. Debe tener presente en no mantener el torniquete por ms de 3 minutos, para evitar la hemoconcentracin. Las venas ms utilizadas para la venipuncin, estn localizadas en el rea antecubital. Entre stas tenemos: a) Vena Cubital: Es la ms larga y gruesa de todas y es la preferida por bordear la musculatura del brazo. b) Vena Ceflica: Tiene iguales caractersticas de la anterior, pero es un poco menos gruesa. c) Vena Baslica: Es ms pequea que las anteriores. Esta vena est cerca de la arteria braquial, por lo que su puncin es riesgosa y su rea es ms sensible y dolorosa para el paciente.

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Al palpar hgalo con la punta de sus dedos, tratando de seguir el rastro de las venas. Aqu tambin son tiles sus conocimientos en la anatoma de las venas de las extremidades superiores. En ocasiones si no visualiza la vena, puede forzar la sangre dentro de la vena a travs de un suave masaje de abajo hacia arriba. PALPACIN DE LAS VENAS

La Descontaminacin: Una vez que se ha decidido por la vena a puncionar, debe proceder a descontaminar el rea con alcohol etlico o isoproplico al 70% utilizando algodn y con movimientos circulares del interior al exterior. Debe tener presente que una vez realizada la descontaminacin, no debe volver a tocar el rea venosa. DESCONTAMINACION DEL AREA

La puncin venosa: Ahora est preparado para realizar la extraccin sangunea. El brazo debe estar preferiblemente en posicin cmoda horizontalmente. Con el torniquete en posicin, haga que el paciente cierre y abra el puo de 3 a 5 veces para bombear mejor la sangre, y luego que mantenga el puo cerrado. Si se trata de un nio, es recomendable colocar 2 dedos de la mano, debajo del codo del paciente, para evitar que doble el brazo durante la extraccin. Extraccin con jeringuilla: Cuando vaya a proceder a realizar la extraccin con jeringuilla, usted debe tener presente el calibre a utilizar y el tamao de la jeringuilla segn el volumen a extraer.

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a) Coloque la punta de la aguja en un ngulo de 15 a 30 grados sobre la superficie de la vena escogida y atraviese la piel con un movimiento firme y seguro, hasta el lumen de la vena.

b) Apretando firmemente la jeringuilla, debe jalar el mbolo con movimiento continuo para extraer la sangre hasta el volumen requerido. Evite presionar fuertemente la aguja durante la extraccin. c) Afloje el torniquete para que la sangre fluya mejor y remueva la aguja del brazo con movimiento suave al terminar de colectar, sin apretar el rea de la puncin con el algodn.

d) Presione el algodn sobre el sitio de la puncin aplicando una presin adecuada y no excesiva para evitar la formacin de hematoma.

e) Llenar los tubos en su orden. f) Descarte la jeringuilla y aguja en un contenedor apropiado.

g) Colocar un curita o venda en el sitio de la puncin.

Problemas durante la extraccin venosa. Diversos problemas pueden surgir durante la coleccin de sangre venosa y pudiera no obtenerse sangre o su coleccin sea incompleta. a) Colocacin correcta de la aguja:

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Coloque la aguja con el bisel hacia arriba b) Cambio en la posicin de la aguja. Movimiento de retroceso que la saca del lumen venoso.

c) Movimiento hacia delante que atraviesa la vena.

c) Movimiento de la aguja, tal que el bisel de la aguja quede contra la pared de la vena, afectando la entrada de la sangre

d) Colapso de la vena:

En estos casos, afloje el torniquete para incrementar el flujo sanguneo, remueva la aguja ligeramente y vuelva a redireccionarla. d) Formacin de hematoma:

Si se forma un hematoma bajo la piel adyacente al sitio de la puncin, afloje el torniquete y retire la aguja. Aplique presin firmemente sobre el hematoma. e) Sangre arterial:

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Pudiera suceder que se atraviese una arteria, en estos casos la sangre se observa de un color rojo brillante. Retire la aguja y aplique presin por 5 minutos. Como prevenir los hematomas: Puncione solamente la pared superior de la vena. Remueva el torniquete antes de remover la aguja. Escoja las venas superficiales mayores. Aplique presin sobre el sitio de la puncin. Como prevenir la hemlisis: La hemlisis de una muestra sangunea puede ocurrir por diversas razones entre las que se pueden enumerar:

o o o o o o o

Trauma con una aguja de calibre muy pequeo. Por contaminacin con agentes antispticos. Agitacin violenta o excesiva de los tubos. Demasiado tiempo en ser analizadas las muestras o en ser separado el cogulo de sangre. Incremento en la fragilidad capilar de los eritrocitos o alto volumen de clulas empacadas, especialmente en neonatos. Presin excesiva para mejorar el flujo sanguneo. En tubos no llenados al vaco, puede ocurrir hemlisis al llenarlos haciendo una fuerte presin sobre el mbolo provocando un chorro de sangre muy fuerte.

Los componentes ms afectados son aquellos cuya concentracin son ms altas en las clulas que en el plasma, por ejemplo, in potasio, fosfato, deshidrogenasa lctica, aspartato aminotransferasa, hierro srico, etc. De ms est decir que la hemlisis afecta en diversa medida la lectura espectrofotomtrica de los componentes sanguneos. La hemlisis puede ser prevenida tomando en cuenta los siguientes elementos: a) Mezcle los tubos con aditivos anticoagulantes lentamente por 5 a 10 veces, inmediatamente despus de ser llenado el tubo. b) Evite extraer sangre de un hematoma. c) Acerque el bisel de la aguja a la pared interna del tubo, para evitar el choque fuerte de la sangre contra el fondo del tubo. d) Est seguro que el sitio de la puncin est seco del antisptico. e) Evite una puncin traumtica. f) Evite la agitacin vigorosa de los tubos. g) Evite el calentamiento de los tubos. Causas de la Hemoconcentracin:

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o o o

Aplicacin prolongada del torniquete. La presin hidrosttica causa que algo de agua y elementos filtrables escapen al espacio extracelular. Esto tiene efectos tambin sobre el empaque celular. Masaje vigoroso del sitio a puncionar. Esclerosis u obstruccin venosa.

Extraccin con vacutainer: En ocasiones, especialmente cuando se requiere colectar muchos tubos para diversas pruebas en secciones distintas, es sumamente til el uso del adaptador vacutainer o similar, el cual nos permite llenar cuantos tubos sean necesarios. En estos casos, una vez hecha la puncin, sostenga firmemente el vacutainer con una mano y con la otra inserte, llene y retire cuantos tubos requiera. EXTRACCION CON VACUTAINER

La Puncin Capilar: La obtencin de sangre por puncin capilar es particularmente til en las siguientes circunstancias:

1. 2. 3. 4.

Si la puncin venosa es peligrosa para el paciente. No se puede accesar las venas recomendadas. Las venas se estn utilizando para administrar medicamentos. El volumen de sangre requerido no justifica una extraccin venosa.

Estas circunstancias se aplican a:

a) b) c) d) e) f)

Neonatos. Lactantes. Nios. Adultos con quemaduras severas. En pacientes muy obesos. En caso de terapias intravenosas.

La puncin cutnea se puede llevar a cabo en: a) La superficie ms lateral o ms medial de la planta del pie. b) La superficie medial plantar del dedo gordo del pie. c) La superficie lateral del dedo medio o anular, preferiblemente. d) El lbulo de la oreja, evitando la mejilla. TIPOS DE PORTA-LANCETA

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El procedimiento de la Puncin Capilar: Una vez escogido el sitio de la puncin, puede dar un ligero masaje al rea para concentrar la sangre. Limpie el sitio con alcohol etlico o isoproplico al 70%. Con una mano sostenga el dedo o rea a puncionar y con la otra sostenga la lanceta. Haga la puncin con la lanceta, realizando un movimiento rpido, firme y profundo. Despus de puncionar, descartar la primera gota de sangre, que contiene lquido tisular, limpindolo con el algodn. Presione el dedo para hacer salir la sangre, procurando sea de manera ininterrumpida. Una vez tomada la muestra, sellar los tubos capilares con sellador o los microtubos con su tapa. Los microtubos y capilares con anticoagulantes deben ser invertidos suavemente por lo menos 10 veces para evitar su coagulacin. Coloque el algodn sobre el sitio puncionado haciendo presin para parar el sangramiento. SITIO RECOMENDADO PARA LA PUNCION CAPILAR

Consideraciones adicionales de la puncin capilar: a) La mala circulacin causa modificaciones en la concentracin de ciertos componentes sanguneos, por ejemplo el in potasio y del fosfato, debido a la contaminacin con lquido tisular, causada por la presin que se aplica para obtener la muestra. b) Al escoger el sitio de la puncin, evite hacerlo en dedos con quemaduras, excoriaciones o cianticos. c) Las muestra para mediciones de Ph y gases sanguneos en tubos capilares de vidrio heparinizados deben ser llenados sin formacin de burbujas de aire. Sellar inmediatamente un extremo del tubo y coloca una pequea barra magntica en direccin ascendente dentro del tubo. Colocar en agua con hielo, evitando la contaminacin de la muestra. PUNCION CAPILAR CON PORTA-LANCETA

Coleccin en Neonatos: El pie del neonato es el sitio apropiado para colectar muestra sangunea por puncin capilar. Es recomendable la pre-limpieza del pie con una gasa tibia para incrementar el flujo sanguneo. El siguiente diagrama ilustra con el color verde los sitios de puncin recomendados.

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Limpie el rea seleccionada con alcohol etlico al 70%. Mantenga firmemente el pie del neonato para evitar cualquier movimiento. Usando una lanceta estril realice la puncin con movimiento rpido, firme y profundo. Limpie con el algodn la primera gota obtenida. Utilice una ligera presin para obtener las gotas de sangre requeridas. No haga presin excesiva o masajes, que puedan provocar que la sangre se diluya con lquido tisular. Llene los microtubos requeridos. TUBOS DE MICRO-COLECCION

Al terminar mantenga presin sobre el sitio de la puncin con gasa o algodn para parar el sangramiento. Descarte la lanceta en un receptculo apropiado. Orden de llenado de los tubos: La sangre coleccionada debe ser llenada en un orden especfico para evitar contaminacin cruzada de aditivos entre los tubos. El orden recomendado es el siguiente:

1. El primer tubo a ser llenado es el de hemocultivo, si tambin se ha ordenado sta prueba. 2. Los siguientes tubos corresponden a los tubos sin aditivos, tal es el caso de los tubos con tapn rojo para
qumica y serologa.

3. Los tubos para pruebas de coagulacin, indicados por el tapn celeste. Estos tubos Nunca pueden ser
los primeros.

4. Los siguientes tubos son aquellos que contienen aditivos especialmente para evitar coagulacin, as: o 4.1 - Tubo con heparina (Tapn verde oscuro) o 4.2 - Tubo con EDTA (Tapn color lavanda). o 4.3- Tubo con Oxalato (tapn verde claro).
Nota: Los tubos con aditivos deben ser rpida y completamente mezclados. Consideraciones en pacientes hospitalizados: Los pacientes hospitalizados constituyen el mayor reto para el flebotomista. Ello incluye circunstancias muy especiales tales como pacientes gravemente enfermos, en ocasiones en estado de coma, con equipo de soporte respiratorio, quemaduras graves, pacientes psiquitricos, neonatos en incubadoras, etc. que exigen un esfuerzo especial al personal encargado de la extraccin de sangre.

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Por todo lo anterior enumeraremos algunas recomendaciones que han de ser tenidas en cuenta al momento de atender estos pacientes: a) Debe haber una plena identificacin del paciente. Si el paciente est despierto, pregntele su nombre. En todo caso debe comprobar la identificacin del paciente con el nombre colocado en la cama y su brazalete de identificacin que puede estar en el brazo o el tobillo. b) Tome en cuenta todos los aspectos explicados referente a pacientes con venoclisis o que reciben drogas intravenosas. c) Pida ayuda cuando va a atender pacientes psiquitricos o agresivos, para evitar causarle un dao durante la puncin. d) Limpie con alcohol el torniquete despus de cada extraccin. e) Siga las instrucciones de bioseguridad con todos los pacientes, especialmente las indicadas en la entrada de las salas de pacientes potencialmente peligrosos. f) No colecte sangre de una extremidad edematosa. g) En caso de pacientes con lnea arterial, las muestras de sangre deben ser extradas por el mdico, a excepcin de la muestra por tiempo de coagulacin, que debe ser tomada del otro brazo y lo cual puede hacerlo el tcnico. Extraccin sangunea en pacientes con venoclisis: A pesar de que ste procedimiento no est indicado para ser realizado por el personal de flebotoma del laboratorio clnico, hemos adicionado el mismo con la intencin de que el personal conozca el procedimiento para extraer sangre por debajo del sitio intravenoso. o o o o o o o o Cierre la llave del fluido intravenoso, al menos 2 minutos antes de hacer la puncin. Aplique el torniquete por debajo del sitio intravenoso. Seleccione una vena diferente a la utilizada en la conexin intravenosa existente. Realice la puncin. Deje escapar aproximadamente 5 ml de sangre y descrtela antes de colectar la muestra para los exmenes. Retire el torniquete. Aplique presin sobre la vena para parar el sangramiento. Abra la llave del fluido intravenoso. No se retire sin confirmar que el paciente est bien.

Nota: No se debe colectar sangre obtenida de un brazo con fstula, cnula o heparina, sin consultar al mdico tratante o a la enfermera. El Etiquetado: El etiquetado de los tubos debe realizarse inmediatamente posterior a la extraccin sangunea. Es incorrecto rotular los tubos previamente a la puncin. En el caso de pacientes hospitalizados, sta tarea se realiza en la cama del paciente. El etiquetado puede incluir:

a) Nombre del paciente b) Nmero de cdula o seguro social, el cual debe coincidir exactamente con el formulario de
solicitud de examen.

c) Fecha de la puncin. Colocar la hora si es muestra seriada. d) Iniciales del flebotomista.

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Una muestra del etiquetado de los tubos puede ser el siguiente:

CUIDADOS DEL PACIENTE POSTERIOR A LA EXTRACCIN: Una vez realizada la extraccin, es nuestra responsabilidad asegurarnos que el paciente se encuentra apto para levantarse de la silla y retirarse. Algunos pacientes sufren de mareos, debilitamiento y desmayo posterior a una extraccin. Para evitar que se caiga y se haga dao, debemos observarlo y preguntarle si est bien, antes de indicarle que se retire. Si el paciente est sudoroso, con la cara muy blanca o tiembla, pudiera necesitar nuestra ayuda, ya sea hacindole oler sales de amonio o alcohol. En caso de posible desmayo, debemos indicarle que coloque la cabeza entre sus piernas, para ayudar a irrigar de sangre su cerebro. Si fuera necesario, podemos acostarlo hasta que se reponga. En el caso de los nios, debemos asegurarnos que mantengan el curita o venda para evitar sangramiento posterior. Los pacientes especialmente los ancianos que estn en ayunas, debemos darle indicaciones para que pronto desayunen, a fin de evitar desmayos. Transporte de la muestra Una vez que se haya colectado la muestra sangunea, sta debe ser llevada pronto al laboratorio para su procesamiento. Algunas pruebas exigen que el suero sea separado cuanto antes del cogulo sanguneo, para evitar alteraciones en la composicin o niveles de algunos metabolitos. De ms est decir que la muestra debe ser acompaada por su correspondiente formulario de solicitud de examen. AL TERMINAR SU LABOR Una vez terminada su labor en la extraccin de muestras sanguneas el personal tiene la obligacin de dejar limpio y ordenado su puesto, con el fin de que el mismo pueda ser utilizado por otro personal con las condiciones apropiadas de trabajo. Esta labor incluye la limpieza del rea, el ordenamiento de los tubos, jeringuillas y agujas sobrantes y la colocacin de restos de basura en su recipiente. Al terminar sus funciones, debe informar al jefe de sala o a la persona asignada para su relevo, con el fin de mantener la continuidad de las labores.

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PRACTICA No. 1

FLEBOTOMIA
OBJETIVO: Aplicar sus conocimientos previos de la anatoma del sistema circulatorio, para realizar una extraccin sangunea venosa. Concientizndose de la importancia de su desempeo en la rehabilitacin del paciente, a si mismo, valorando las medidas de tica y bioseguridad. INTRODUCCION: FLEBOTOMIA: es el proceso de colectar sangre como una medida teraputica, con el fin de diagnosticar adecuadamente la causa de la enfermedad. VENIPUNTURA: o venipuncin, es la extraccin de sangre por una vena. Los lugares ms habituales de realizar esta puncin son la flexura del codo, venas de la mano, mueca y tobillo. En la flexura del codo existe una anastomosis especial entre la vena baslica y ceflica formado entre ellas una especie de anclaje que evita que estas venas se muevan lo que facilita la flebotoma.

PUNCION CAPILAR Este tipo de flebotoma se utiliza en pacientes que no permiten una adecuada puncin venosa; facilita al flebotomista la obtencin de muestra sin causar traumatismos al paciente. Esta puncin capilar se realiza en las yemas de los dedos de las manos, en el lbulo de la oreja o en los talones de los pies. A continuacin se mencionaran algunas de las ms frecuentes causas en las que se recomienda puncin capilar: En pacientes quemados severamente, quienes presentan deshidratacin y su circulacin sangunea es deficiente. En pacientes de oncologa cuyas venas se reservan con fines teraputicos (quimioterapia). En pacientes obesos cuyas venas son demasiado profundas. En pacientes geritricos en los que las venas son poco accesibles y demasiado frgiles. En nios y bebes prematuros cuyas venas son inaccesibles.

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En el caso de los bebes prematuros o nios menores de 1 ao se recomienda hacer la puncin capilar en la planta de los pies, en las zonas laterales, evitando la parte central, que es donde se concentran gran cantidad de arterias y venas axial como el hueso, pudiendo ocasionar infecciones o daos en tendones y cartlagos. Sin embargo este tipo de punciones (capilar en dedo y en taln) puede frecuentemente sufrir hemlisis, esto debido ha: Que se presiona demasiado el dedo o el pie, lo que evita una buena circulacin sangunea. Fragilidad en los eritrocitos, esto es frecuente en los recin nacidos. Que en la piel no se haya secado el alcohol al hacer la puncin, provocando la hemlisis. MATERIAL: 1. Jeringas (5 10 mL). 2. Agujas desechables. 3. Torniquete. 4. Torundas de algodn o gasas. 5. Alcohol isoproplico al 70 %. 6. Tubos desechables adecuados a la muestra requerida. 7. Gradilla. 8. Recipiente de recoleccin para desechos infecto-contagiosos. 9. Banda adhesiva. PROCEDIMIENTO: 1. RECEPCION DEL PACIENTE.- Es sumamente importante recibir al paciente con amabilidad, establecer una comunicacin cordial y atenta para lograr su confianza. Por lo tanto, se debe llevar un registro adecuado del paciente, y as evitar confusiones y errores tanto de la o las muestras que se le van a obtener, as como de sus resultados. Se sugiere considerar los siguientes aspectos : a. Nombre, sexo y edad del paciente. b. Nmero de registro. c. Fecha y hora en que la muestra fue tomada. d. Nombre del mdico que atiende al paciente. e. Diagnostico presuntivo. f. Frmacos administrados. g. Nombre o iniciales de la persona responsable de la flebotoma. 2. 3. 4. 5. El paciente debe de estar en una posicin cmoda, en un lugar iluminado y accesible al tcnico. Preguntarle al paciente a qu hora fue su ltima comida. Colocar el torniquete. Localizar la vena a puncionar, en caso de no ser visible, utilizar el tacto palpando la vena; cuando el paciente tiene venas difciles de palpar, ya sea porque son muy delgadas o estn ocultas, es

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6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.

necesario dar un masaje al brazo hacia abajo, estimulando la circulacin sangunea; bajar los brazos del paciente para que las venas se llenen de sangre por la gravedad; o aplicarle compresas con agua caliente en el brazo (con el calor las venas se ensanchan , logrando as su visualizacin). Hacer asepsia de la zona a puncionar, en UN SOLO SENTIDO con una torunda con alcohol isopropilico. Introducir la aguja con el bisel hacia arriba y siguiendo la trayectoria de la vena. Extraer la sangre, girando poco a poco el mbolo de la jeringa hacia fuera. Quitar el torniquete. Sacar la aguja de un solo movimiento, sin lastimar Presionar con la torunda de algodn, a forma de compresa, el sitio de la extraccin. Trasvasar la sangre a los tubos segn sea el uso de la muestra. Rotular tubos con la muestra. Aplicar una banda adhesiva en el sitio de la puncin.

REACCIONES QUE PUEDE PRESENTAR EL PACIENTE DURANTE LA FLEBOTOMIA: Desmayo: Se recomienda suspender la extraccin, retirar la aguja, bajar los brazos y la cabeza del paciente y colocarle compresas de agua fra en el cuello. Nauseas: Aplicar compresas de agua fra, preparar un recipiente en caso de evacuacin. Shock hipoglucemico: Los primeros signos son: sudor fro, semblante plido, debilidad, temblores corporales y confusin mental. Convulsiones: El paciente puede estar inconsciente o con movimientos convulsivos, NO restringir los movimientos, retirar los muebles que puedan ocasionarle dao; generalmente la convulsin pasa en pocos minutos. Llamar al mdico en caso necesario. Paro cardiaco: El paciente estar sin pulso ni respiracin, las pupilas dilatadas y la piel con un tono azul o gris. Inmediatamente acudir a personas certificadas en resucitacin cardio pulmonar, y llamar al mdico. PARTES DE LA JERINGA Y AGUJA

BISEL

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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California

a _______ de _____________________ del 20 _____

PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA: REGISTRO:

RESULTADO: (explique su experiencia personal durante la extraccin de sangre, al desempear los papeles de paciente y de flebotomista)

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C.

Nombre y firma de quien supervis el estudio:

T.L.C.

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CUESTIONARIO 1 1. Con sus propias palabras explica que es FLEBOTOMIA?

2.

Cules son los sitios ms comunes para realizar una flebotoma?

3.

En qu casos se puede realizar una puncin en el taln del pie?

4.

Mencione 5 datos importantes del paciente durante la recepcin, para realizar un adecuado registro de sus exmenes a realizarle:

5.

Si tenemos a un paciente con venas difciles de visualizar, que se sugiere hacer, para realizar una extraccin exitosa?

6.

Investigue y explique el trmino: hemolisis

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PRACTICA No. 2 RECUENTO ERITROCITARIO Y DETERMINACION DE HEMATOCRITO

INTRODUCCION: EL RECUENTO DE ERITROCITOS es un examen de sangre que determina el nmero de glbulos rojos (GR) que tiene una persona. La cantidad de oxgeno recibida por los tejidos corporales depende de cuntos glbulos rojos tenga la persona y de qu tan bien stos estn funcionando. El recuento de eritrocitos, leucocitos y plaquetas son expresados en concentracin (clulas por unidad de volumen de sangre); en este caso que es el mtodo manual es de mm. FUNDAMENTO DEL METODO MANUAL: Para EL RECUENTO DE ERITROCITOS, la sangre se diluye con una solucin isotnica, conservando ntegros a los eritrocitos, impidiendo a su vez, que se hinchen o se contraigan, pero tambin esta solucin destruye a los leucocitos. Luego, esta dilucin se coloca en una cmara de Neubauer con la ayuda de una pipeta automtica, Pasteur o de Thoma y se cuentan cada uno de los eritrocitos al microscopio con el objetivo de 40X, para calcular el nmero de eritrocitos por mm. Es preciso que cuando se interprete los resultados del conteo eritrocitario, se complemente con otras medidas de la biometra hemtica, es decir, con la hemoglobina, el hematocrito, la VCM, la HCM y la VMHC. No obstante, los valores disminuidos pueden deberse a: Alteraciones dietticas Anemias ocasionadas por causas varias Cncer Enfermedades sistmicas Embarazo Fibrosis de mdula sea Hemorragias Los valores aumentados a: Cardiopatas Enfermedades pulmonares crnicas Estancias en lugares de gran altitud Poliglobulia de diferentes causas.

El hematocrito Con el valor hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas, como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportan oxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En este proceso, se pueden apreciar dos niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasma total que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito. La finalidad que se persigue con esta prueba es la de confirmar el diagnostico de varias patologa o afecciones. Los valores altos de hematocrito puede deberse a afecciones tales como: Cardiopatas Hemoconcentracin o eritrocitosis Deshidratacin Eclampsia durante el embarazo

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Enfermedades pulmonares crnicas Policitemia primaria o secundaria Shock Sin embargo, los valores disminuidos nos pueden indicar: Anemia Hemodilucin Hemorragia Fallos en la mdula sea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc.) Embarazo Hemorragias Hipertiroidismo Hemolisis por una transfusin Leucemia Problemas de alimentacin Artritis reumatoide. MATERIAL BIOLOGICO: Sangre total REACTIVOS: Liquido de Hayem o solucin de Dacie E.D.T.A. al 10 % MATERIAL NECESARIO: Pipeta de Thoma Hemacitmetro (cmara de Neubauer) Boquilla Microscopio Contador celular Tubos capilares Micro centrfuga Plastilina selladora PROCEDIMIENTO: Para recuento de eritrocitos: 1. Obtener sangre total siguiendo el protocolo ya conocido 2. Con la boquilla y la pipeta de Thoma aspirar sangre hasta la marca 0.5 (SIN BURBUJAS) 3. Aspirar diluyente (Hayem o Dacie) hasta la marca 101 de la pipeta 4. Agitar la pipeta por 3 min. 5. Desechar las 5 o 6 primeras gotas de la pipeta de Thoma 6. Colocar el cubreobjetos sobre la cmara de Neubauer y llenarla, tratando que fluya libremente por difusin el liquido evitando llenar en exceso o formacin de burbujas 7. Dejar en reposo 2 o 3 minutos el Hemacitmetro con el fin de que los eritrocitos sedimenten 8. Localizar la cuadricula de la cmara de Neubauer con el objetivo seco dbil (10X); enseguida enfocar con seco fuerte (40X) 9. El recuento se realizara en los cuadros ms pequeos de la cmara, contando los hemates localizados en los 4 cuadros de los extremos y en el del centro, haciendo un total de 5 cuadros. (VER FIGURAS MAS ABAJO) 10. Realizar los clculos para determinar la cantidad de eritrocitos resultantes

Nota: Se puede realizar con la pipeta automtica, se toma 20 L (0,02mL) de sangre total con anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de solucin de Hayem (aqu se tiene una dilucin de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5 minutos y se procede a cargar la cmara con la misma pipeta usando un nuevo tip.

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PARTES DE LA PIPETA DE THOMA:

ILUSTRACION PARA EL LLENADO DE LA CAMARA DE NEUBAUER

CONTEO DE GLOBULOS ROJOS Cuadrantes dentro de la camara de neubauer donde se realizara el conteo celular, contaremos cada uno de los globulos rojos que encontremos en los cuadrantes que estan marcados con la letra R y en el orden como se indica en las flechas

De los 25 cuadrados en que se encuentra subdividido, se cuentan los cuatro angulares y el central, con un recuento total representativo de 1/5 de milmetro cuadrado. Sobre la base de una dilucin de 200, de un 2 recuento de 1/5 mm y una profundidad de 0.1 mm, el clculo se efecta como sigue:

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Eritrocitos contabilizados X 5 X 200 X 10 = NUMERO DE ERITROCITOS POR mm , o bien Eritrocitos contabilizados X 10,000 = NUMERO DE ERITROCITOS/ mm
3

Para determinacin de hematocrito: Con el valor del hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas, como es el caso de las anemias y la policitemia. En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportan oxgeno frente al volumen total de sangre, determinado por proceso de centrifugacin. En este proceso, se pueden apreciar dos niveles, los elementos formes que se sedimentan, y el plasma total que flota. En definitiva es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito. PROCEDIMIENTO: 1. 2. 3. 4. Utilice tubos capilares de 7 cm de largo por 1 mm de grosor, llenar las partes del capilar, con sangre venosa bien homogeneizada. Cerrar la punta del tubo capilar sellando a la llama del mechero (evite quemar el paquete globular) o con plastilina. Centrifugar por 5 min. a 10,000 rpm Leer el resultado en escalas comerciales, de la siguiente manera: a. el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la lnea horizontal correspondiente al cero. b. Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el nmero 100 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos contine sobre la lnea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posicin vertical. c. La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicar la fraccin de volumen de stos.

La disposicin celular es: Fuente: Manual de tcnicas bsicas para un laboratorio de salud. OPS, N 2.

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TUBO DE MICROHEMATOCRITO Y METODOS DE LECTURA DEL VOLUMEN DE CELULAS EMPACADAS.

CAUSAS DE ERROR EN RECUENTO DE GLOBULOS ROJOS: o Agitado imperfecto. o Suciedad del material. o Error en la aspiracin de sangre y dilucin hasta las marcas correctas. o Desecamiento del lquido en la cmara de recuento. o Errores en el recuento y en el clculo. o Olvido de descartar el liquido de dilucin de la pipeta antes de cargar la cmara o Carga excesiva de la cmara CAUSAS DE ERROR EN DETERMINACION DE HEMATOCRITO: o Velocidad inadecuada al centrifugar. o Actividad muscular del paciente antes de la toma de muestra. o Exceso de anticoagulantes. o Prolongado uso del torniquete. o Quemar el paquete globular al cerrar el capilar. o Utilizar sangre hemolisada. VALORES NORMALES: HOMBRES Eritrocitos (RBC) Hematocrito (HTO) 5.4 45 (4.6 6.0) (42 52) MUJERES 4.8 42 (3.9 5.0) (36 48) UNIDADES 10 L %
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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA:

a _______ de _____________________ del 20 _____

REGISTRO:

RESULTADO: PARAMETRO ERITROCTIOS (RBC) HEMATOCRITO (HTO) CALCULOS:

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

COMENTARIO:

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C. Nombre y firma de quien supervis el estudio: T.L.C.

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CUESTIONARIO 2 RECUENTO DE ERITROCITOS Y DETERMINACION DE HEMATOCRITO

1.

Con tus propias palabras, explica Para qu nos sirve el recuento de glbulos rojos, en un examen de salud?

2.

Qu enfermedades o patologas se pueden considerar al tener un recuento eritrocitario bajo?

3.

El recuento de glbulos rojos elevado En qu casos clnicos se presenta?

4.

Qu es lo que mide el hematocrito (Hto)?

5.

Menciona 3 enfermedades que nos puedan arrojar un Hto. elevado:

6.

Menciona 5 patologas que nos puedan dar un Hto bajo:

7.

El conteo de eritrocitos con el mtodo manual, puede tener errores y afectar al resultado de la prueba; menciona al menos 3 de estas causas de error:

8.

Menciona 3 causas de error para el hematocrito:

9.

Que clculos aritmticos se deben realizar para obtener el nmero total de glbulos rojos contabilizados:

10. Cul es la modificacin que se realizo en la dilucin de la sangre con el reactivo de Hayem, para hacer el recuento eritrocitario?

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PRACTICA No. 3 DOSIFICACION DE HEMOGLOBINA


INTRODUCCION: La hemoglobina es el componente principal de los glbulos rojos constituye el 95% del peso eritrocitario, es una protena conjugada que sirve de vehculo para el transporte de O2 y CO2. Est constituida por 4 estructuras de hem unidas a una de globina. La hemoglobina es el mejor ndice para medir la capacidad transportadora de gases, tanto para oxigeno como para bicarbonato por parte del eritrocito. Tanto la concentracin de hemoglobina como el hematocrito representan en forma directa el nmero de eritrocitos. Desde el punto de vista de la evaluacin de la integridad hematolgica, la determinacin de hemoglobina es superior al hematocrito y al recuento de eritrocitos. Las enfermedades relacionadas con los eritrocitos (especialmente los sndromes anmicos) estn definidas por la concentracin de la hemoglobina. La determinacin de la hemoglobina por mtodos electrnicos, se obtiene por el mtodo de la cianometahemoglobina que determina otras formas de hemoglobina como la oxihemoglobina y la carboxihemoglobina, mediante un pequeo hemoglobinmetro incorporado al equipo. El mtodo de la cianometahemoglobina fue recomendado por el Comit Internacional para la Estandarizacin de Hematologa (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el ms recomendado. Este procedimiento tiene muchas ventajas, tales como la disponibilidad de estndares satisfactorios y la capacidad de cuantificar todas las formas de Hb de importancia clnica. Es el mtodo de eleccin para efectuar estudios cientficos sobre anemia y para determinar su prevalencia en encuestas de salud pblica. Los niveles de hemoglobina por debajo de los niveles normales pueden deberse a: - Anemia (diversos tipos) - Sangrado - Deficiencia de eritropoyetina (por enfermedad renal) - Intoxicacin con plomo - Desnutricin - Deficiencias nutricionales de hierro, folato, vitamina B12 y vitamina B6 - Sobre hidratacin - Destruccin de los glbulos rojos asociada con una reaccin a transfusin La hemoglobina alta es normalmente debido a un aumento del nmero o anormalidad de los glbulos rojos. Las causas incluyen: Vivir en una gran altura Fumar Enfermedad cardaca congnita Cicatrices y engrosamiento del tejido pulmonar (fibrosis pulmonar) Policitemia vera La deshidratacin, como de la diarrea severa o sudoracin excesiva La enfermedad renal El uso de esteroides anabolizantes FUNDAMENTO Al mezclar la sangre con el reactivo de DRABKIN, se transforma la hemoglobina en cianometahemoglobina, la intensidad de color de esta reaccin es medida en un fotocolormetro o espectrofotmetro.

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La reaccin se da as: El reactivo de Drabkin contiene cianuro potsico y ferrocianuro potsico. El ferrocianuro hace pasar el hierro de la hemoglobina del estado ferroso (Fe++) al frrico (Fe+++) para formar metahemoglobina, la cual se combina con cianuro potsico y da un pigmento estable, la cianometahemoglobina. La intensidad del color se mide mediante un fotmetro a una longitud de onda de 540 nm. La densidad ptica de la solucin es proporcional a la concentracin de hemoglobina. FUNDAMENTO DE ESPECTROFOTOMETRIA: La base de la colorimetra y la espectrofotometra es que muchas sustancias tienen color propio, o pueden dar lugar a productos finales coloreados en ciertas reacciones qumicas. Hay una relacin entre la intensidad de este color y la concentracin del producto final, o sea la concentracin de uno o varios de los reactivos; de esta manera, la intensidad del color puede utilizarse para medir la concentracin. Para este fin se emplean los espectrofotmetros, que son instrumentos para la medicin del color (Mathew, 1977) REACTIVOS: Reactivo de Drabkin MATERIAL: Tubos de ensaye de 13 X 100 mm Pipeta de Sal o micropipetas Espectrofotmetro (VER ANEXO 1) Celdas analticas Pipetas de 5 mL Plumones sharpie MATERIAL BIOLOGICO: Sangre total venosa con EDTA PROCEDIMIENTO: 1. 2. Obtener una muestra de sangre total Prender el fotocolormetro o el espectrofotmetro y esperar a que alcance la temperatura adecuada para su funcionamiento. 3. Dispensar exactamente 5ml de reactivo de Drabkin en 2 tubos de ensayo, rotulados uno como BLANCO (B) y el otro como PROBLEMA (P). 4. Homogeneizar la muestra sangunea 5. Medir exactamente 20 L (0.02 ml) de la sangre en la micro pipeta de Salhi. 6. Eliminar el exceso de sangre que queda en las paredes externas de la pipeta antes de introducirla en la solucin de Drabkin. 7. Llevar la pipeta hasta el fondo del tubo y depositar la sangre, procurando lavar las paredes internas de la pipeta; esto se logra mediante aspiraciones y expulsiones consecutivas de reactivo dentro del tubo. Evitar la formacin de burbujas. 8. Tapar el tubo y mezclar varias veces por inversin. 9. Dejar reposar por 10 minutos para que se produzca la hemlisis total de las clulas rojas y se complete la reaccin. 10. Transferir la solucin a las cubetas del fotocolormetro, para su lectura la cual se realizara de la siguiente manera: a. Colocar el haz de luz a la longitud de onda adecuada (en este caso es de 540 nm) b. Colocar en una cubeta de lectura el reactivo del tubo Blanco (no contiene muestra) y ajustar el aparato a 0 (cero) de absorbancia. c. En otra cubeta colocar el reactivo con la muestra problema y leer la absorbancia que nos indique el espectrofotmetro. Anotar la lectura.

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11. Calcular la concentracin de hemoglobina, utilizando la curva de calibracin o multiplicando por una constante que resulta de la calibracin del mtodo. CALCULOS: Se divide la absorbancia del problema entre la absorbancia del estndar, el resultado se multiplica por la concentracin del estndar. Conc Hb Pac. = Abs. Prob. X Conc. STD = __?___ gr/dL HEMOGLOBINA Abs. Std

Valores de referencia: Estos varan segn la edad, el sexo y la altura sobre el nivel del mar: Varones adultos: 13 - 18 g/dL Mujeres adultas: 12 - 16 g/dL Lactantes - nios: 11 - 16 g/dL Recin nacidos: 14 - 24 g/dL Posible valor crtico: <5 g/dL CAUSAS DE ERROR Errores en la obtencin de la sangre. La estasis prolongada causada por usar ms de un minuto el torniquete en el brazo del paciente, origina resultados falsamente elevados de hemoglobina en las muestras de sangre venosa. En sangre capilar ocurre lo contrario cuando se ejerce una presin excesiva en el sitio de puncin y aumenta el flujo de los lquidos tisulares diluyendo la muestra de sangre. La muestra no se mezcla bien. Para evitarlo, invertir el tubo varias veces o, de preferencia, usar un mezclador mecnico. Errores de pipeteo o de dilucin. Muestra de sangre con coagulo. Sangre lipemia. 9 Recuento de leucocitos muy elevado (50.0 x10 /L). Instrumento incorrectamente calibrado.

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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA:

a _______ de _____________________ del 20 _____

REGISTRO:

PARAMETRO

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

COMENTARIO:

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C.

Nombre y firma de quien supervis el estudio:

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CUESTIONARIO No. 3 1. Qu es un espectrofotmetro?

2.

Para qu nos es til el espectrofotmetro?

3.

Con tus propias palabras, explica como se realiza la lectura del haz de luz en el espectrofotmetro: (laboratorio)

4.

Para la determinacin de la hemoglobina, usaremos un espectrofotmetro, menciona como haremos el procedimiento de la lectura de las absorbancias: (laboratorio)

5.

Qu es la hemoglobina y para que nos es til?

6.

Qu clculos se efectuarn para obtener la concentracin de hemoglobina en nuestro paciente?

7.

En qu ocasiones patolgicas podremos obtener una hemoglobina baja?

8.

En qu patologas se puede encontrar una hemoglobina alta?

9.

Menciona 3 causas de error que podemos tener al realizar esta prueba de manera manual:

10. Segn tus caractersticas fsicas, cuales serian TUS valores de hemoglobina normales?

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PRACTICA No. 4

FORMULA ROJA Y CLASIFICACION DE ANEMIAS

OBJETIVO: Realizar una formula roja mediante la medicin de cada uno de los parmetros que la integran: recuento de eritrocitos, medicin de la hemoglobina, Hematcrito y clculo de los valores absolutos de la concentracin de hemoglobina; para poder diagnosticar y clasificar una anemia. INSTRUCCIONES: Tomar una muestra de sangre y realizar CADA UNO DE LOS RECUENTOS que ya hemos realizado (eritrocitos, Hematcrito y dosificacin de hemoglobina) con el material requerido para cada prueba. Anotar y hacer clculos correspondientes para determinar y clasificar anemias. Y finalmente realizar el reporte correspondiente a cada paciente. CLASIFICACION DE ANEMIAS POR MEDIO DE LA DETERMINACIONES DE LOS INDICES ABSOLUTOS La anemia es una deficiencia en la cantidad o calidad de los glbulos rojos y frecuentemente es secundaria a alguna enfermedad subyacente. Para diagnosticar a un paciente con anemia debemos clasificar que tipo de anemia est cursando, es necesario realizar algunos clculos para la determinacin del tamao, contenido y concentracin de hemoglobina en los glbulos rojos. Estos ndices han resultado tiles para la caracterizacin morfolgica de las anemias y pueden calcularse a partir del recuento de glbulos rojos, de la concentracin de hemoglobina y del hematocrito. El Volumen Corpuscular Medio (VCM o VGM) da idea DEL TAMAO promedio DE CADA ERITROCITO, se calcula con la siguiente frmula: VGM= Hto X 10 Eritroc. HCM: Hemoglobina Corpuscular Media es la CANTIDAD HEMOGLOBINA PRESENTE en los eritrocitos, se calcula: HCM= Hb (g /dL) x 10 Eritroc. CMHC: Concentracin Corpuscular Media de Hemoglobina , es la CONCENTRACIN media de Hb en un volumen determinado de eritrocitos, y se calcula: CMHC= Hbx 100 Hto.

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VGM

LIMITES NORMALES 82 97 fl 26 34 pg 31 37 %

HCM CMHC

SIGNIFICADO Normal Aumentado Disminuido Normal Disminuido Normal Disminuido

Normoctico Macroctico Microctico Normocrmico Hipocrmico Normocrmico Hipocrmico

CALCULOS:

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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA:

a _______ de _____________________ del 20 _____

REGISTRO:

PARAMETRO ERITROCITOS (RBC) HEMATOCRITO (HTO) HEMOGLOBINA V.G.M. H.C.M. C.M.H.C. COMENTARIO:

RESULTADO/UNIDADES

VALOR DE REFERENCIA

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C.

Nombre y firma de quien supervis el estudio:

T.L.C.

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CUESTIONARIO 4 1. Qu es la hemoglobina?

2.

Menciona tres tipos diferentes de hemoglobinas:

3.

Qu es la anemia?

4.

Cules son los valores normales de hemoglobina en hombres y mujeres adultos?

5.

Para qu son tiles los valores absolutos que se obtienen a partir de la concentracin de la hemoglobina, del nmero de eritrocitos y del hematocrito?

6.

Generalmente en las anemias microcticas hipocrmicas, Cmo se resultan los ndices absolutos?

7.

Menciona al menos tres pruebas de laboratorio que se deban realizar adicionalmente a la formula roja (biometra hemtica), como auxiliares al diagnostico de anemia:

8.

Menciona cinco sntomas que se pueden manifestar por causa de anemia:

9.

Menciona tres posibles tratamientos que se pueden emplear para combatir la anemia:

10. Mencione 3 tipos de anemia que se puedan manifestar en los seres humanos:

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PRACTICA No. 5

ERITROSEDIMENTACION GLOBULAR Y RECUENTO DE RETICULOCITOS

La eritrosedimentacin globular es una prueba que se usa ampliamente para estudiar la actividad de diversas enfermedades. La velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos se refiere al tiempo que tardan en separarse del plasma. Se le mide en MILIMETROS POR HORA. La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, pues resulta anormal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos o estrictamente locales. FUNDAMENTO: La eritrosedimentacin depende de la formacin de ROULEAUX, de la concentracin de fibringeno y de la concentracin de globulinas alfa y beta en el plasma. La concentracin de las diversas protenas plasmticas afecta la eritrosedimentacin y en muchas enfermedades se altera la relacin entre las protenas, con la consiguiente aceleracin de la eritrosedimentacin. Una disminucin en el nmero de glbulos rojos tambin la acelera y en algunos laboratorios se corrige su resultado en los casos de anemia. Adems de las elevaciones producidas en procesos infecciosos e inflamatorios, se producen elevaciones fisiolgicas en el embarazo y durante la menstruacin. La VSG disminuye en la anemia falciforme y en las 39fibringeno39 severas. FENOMENO DE ROULEAUX: El ROULEAUX o formacin de pilas de monedas, es un fenmeno que consiste en que los glbulos se aglomeran en masas. Las causas de este fenmeno radican en el plasma o en el suero y no estn influidas por la temperatura. La administracin de algunos medicamentos puede producir este fenmeno. Otras veces se trata de una causa intrnseca al paciente, que tiene un desequilibrio de sus protenas (aumento del 39fibringeno o aparicin de protenas anormales). Observado en el microscopio, el fenmeno de Rouleaux es caracterstico: se ven los glbulos reunidos en filas, apilados por sus caras planas, varias filas se entrecruzan en diversos planos, produciendo un grumo el cual puede ser visto de forma macroscpica (a simple vista) INTERPRETACION CLINICA: La VSG es un buen ndice de la presencia de procesos infecciosos activos como la tuberculosis o la endocarditis bacteriana subaguda, el lupus eritematoso diseminado, las carditis reumticas, ciertas neoplasias, embarazo ectpico, etc. Sirve igualmente para controlar la actividad evolutiva de las infecciones mencionadas. MATERIAL: Tubos de Wintrobe Pipetas Pasteur Gradilla de wintrobe Reloj cronometro Papel secante Guantes

PROCEDIMIENTO (METODO DE WINTROBE): 1. Mezclar la muestra de sangre

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2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.

Llenar de sangre una pipeta Pasteur Introducir la punta de la pipeta Pasteur hasta el fondo del tubo de Wintrobe Lentamente vaciar la sangre e ir retirando la pipeta arrastrndola por la pared interna del tubo EVITANDO la formacin de burbujas de aire. El tubo se llena hasta la marca cero y se coloca en una gradilla en posicin vertical. INMEDIATAMENTE activar el cronometro que indique 1 hora, durante la cual ocurrir el fenmeno de Rouleaux Transcurrida la hora se leern los milmetros que haya sedimentado la muestra de sangre La escala se lee hacia abajo, representando cada numero 10 mm o 1 cm.

VALORES DE REFERENCIA: Hombres: 0 9 mm/hr Mujeres y nios: 0 15 mm/hr CAUSAS DE ERROR: 1. Uso de anticoagulante incorrecto (heparina aumenta el resultado). 2. Exceso de anticoagulante (aumenta) 3. Posicin inadecuada del tubo (que este ladeado el tubo) 4. Aglomeracin anormal de los glbulos rojos en pilas de monedas.

CUENTA DE RETICULOCITOS FUNDAMENTO: La investigacin de reticulocitos es una de las pruebas ms tiles en la investigacin de la causa de la anemia, pues nos d idea del estado de la produccin de glbulos rojos por la mdula sea. Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por microscopa REACTIVOS: Azul brillante de cresilo MATERIAL: Tubos de ensaye 13 X 75 mm Papel parafilm Plumn sharpie Portaobjetos Contador celular (pianito) Aceite de inmersin Microscopio Reloj cronometro

PROCEDIMIENTO: 1. En un tubo de ensaye chico se depositan tres gotas de sangre con EDTA 2. Se agregan 3 gotas de reactivo 3. Mezclar el tubo y tapar con parafilm o 4. Incubar a 37 C por 10 minutos. 5. Hacer frotis en un portaobjetos 6. Leer en el microscopio con el objetivo de inmersin (100X) 7. Se leern varios campos, contando 300 eritrocitos en total, incluyendo a los reticulocitos

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8.

Se har un clculo de regla de tres simple para obtener el valor porcentual de los reticulocitos encontrados.

VALORES DE REFERENCIA: Recin nacidos: 3 6 % Adultos: 0.5 1.5 % INTERPRETACION CLINICA: Causas de aumento El nmero de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe un incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemlisis, como respuesta a sangrados o tras el inicio de un tratamiento antianmico que ha resultado eficaz. Causas de disminucin Como la produccin de reticulocitos es necesaria para compensar las prdidas fisiolgicas de glbulos rojos maduros, una disminucin de su nmero es la expresin de un estado arregenerativo o hiporregenerativo de la serie roja. Esta circunstancia es tpica de anemias aplsicas, anemias carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplsicas.

CALCULOS:

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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA:

a _______ de _____________________ del 20 _____

REGISTRO:

PARAMETRO

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

COMENTARIO:

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C.

Nombre y firma de quien supervis el estudio:

T.L.C.

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CUESTIONARIO 5 ERITROSEDIMENTACION Y RECUENTO DE RETICULOCITOS 1. Explique que es el fenmeno de rouleaux:

2.

Qu son los reticulocitos?

3.

En qu casos patolgicos se presenta un aumento en la sedimentacin globular?

4.

Por qu se les llama reticulocitos a estas clulas?

5.

Explique cules son las unidades en las que se mide la eritrosedimentacin globular y porque:

6.

Qu indican los valores anormales de los reticulocitos?

7.

Mencione 2 causas de error que pueden alterar el resultado de la velocidad de sedimentacin globular:

8.

Se han mencionado varios sinnimos de la prueba que mide la sedimentacin de la sangre, Cules son estos?

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PRACTICA 6

RECUENTO DE LEUCOCITOS TOTALES INTRODUCCION: Efectuaremos un recuento de leucocitos totales de un paciente. Esto nos servir de referencia para determinar si hay algn proceso infeccioso activo. Al efectuar el recuento total no encontraremos diferenciacin entre los 5 tipos de leucocitos normales (neutrfilos, monocitos, linfocitos, basfilos y eosinfilos). En esta prctica nos limitaremos a contar manualmente los leucocitos 3 totales dados en mm o litros. FUNDAMENTO: En el mtodo de Turk se utiliza un solucin de acido actico al 2% que tiene como funcin lisar los eritrocitos para evitar interferencias en el recuento. MATERIAL UTILIZADO: 1. Pipeta de Thoma para LEUCOCITOS 2. Cmara de Neubauer 3. Microscopio 4. Contador celular 5. Boquilla REACTIVO UTILIZADO: Reactivo de Turk PROCEDIMIENTO: Se requiere de sangre total con EDTA 1. Pipetear sangre con la pipeta de Thoma y la boquilla, hasta la marca de 0.5 evitando la formacin de burbujas. 2. Limpiar la pipeta para ELIMINAR el exceso de sangre 3. Aspirar reactivo de Turk hasta la marca 11, EVITANDO las BURBUJAS. 4. Se retira la boquilla de la pipeta y esta se agita vigorosamente por 3 min. 5. Preparar la cmara de Neubauer. 6. Se eliminan las 3 primeras gotas de la dilucin. 7. Colocar una gota en la cmara de Neubauer y dejar reposar por 3 min. para que se asienten los leucocitos. 8. Leer al microscopio con objetivo de 10X y el contador celular, SOLO EN LOS 4 CUADROS GRANDES de la cmara de Neubauer, como se indica en la figura. 9. Realizar clculos correspondientes. CALCULOS: El total de clulas en estos 4 mm se multiplica por 50 (factor obtenido entre la dilucin de la sangre y la profundidad de la cmara).
3

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El recuento de glbulos blancos se realizara en las 4 CUADRICULAS GRANDES que estn en las orillas, en este dibujo estn MARCADAS con la letra W (White). Y con el OBJETIVO DE 10X
3

LEUCOCITOS TOTALES/ mm = clulas contadas X 50 VALORES DE REFERENCIA: 3 5,000 10,000/mm 9 5.00 10.00 X10 /L SIGNIFICADO DE LOS RESULTADOS ANORMALES: Un bajo nmero de glbulos blancos se denomina leucopenia y puede deberse a: Insuficiencia de la mdula sea (por ejemplo: debido a infeccin, tumor o cicatrizacin anormal) Enfermedades vasculares del colgeno (como el lupus eritematoso) Enfermedad del hgado o el bazo Radioterapia o exposicin a la radiacin Un alto nmero de glbulos blancos se denomina leucocitosis y puede deberse a: Anemia Enfermedades infecciosas Enfermedad inflamatoria (como artritis reumatoidea o alergia) Leucemia Estrs emocional o fsico severos Dao tisular (como, por ejemplo, quemaduras), entre otros

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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA:

a _______ de _____________________ del 20 _____

REGISTRO:

CALCULOS:

PARAMETRO

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C.

Nombre y firma de quien supervis el estudio:

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CUESTIONARIO 6 RECUENTO DE LEUCOCITOS TOTALES 1. Qu es la leucopoyesis?

2.

Cuntas especies de leucocitos existen en la sangre, y cules son?

3.

El valor elevado de leucocitos totales, que significado clnico tiene?

4.

A que se le conoce como leucopenia?

5.

Qu enfermedades pueden manifestar una leucopenia?

6.

Mencione al menos 3 enfermedades que manifiesten leucocitosis:

7.

Cules son los valores normales de leucocitos totales?

8.

Cul es el efecto del reactivo de Turk, para permitir la observacin de los glbulos blancos con ms facilidad?

9.

Dibuje un esquema que represente lo observado en el microscopio al hacer el conteo de los glbulos blancos y explique ampliamente el proceso para realizarlo.

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PRACTICA 7

RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

INTRODUCCION: El recuento diferencial de leucocitos es una parte rutinaria de la biomtrica hemtica que puede ser til en la valoracin de una infeccin o inflamacin, en la determinacin de los defectos de intoxicacin posible por sustancias qumicas o drogas, en el monitoreo de trastornos sanguneos como la leucemia, y en los efectos secundarios de tratamientos como la quimioterapia. El procedimiento consta de una toma de sangre, la misma se disemina en un portaobjetos de vidrio y luego se tie. A continuacin se determina el porcentaje de cada tipo de leucocitos. FUNDAMENTO: Los leucocitos son parte fundamental del tejido hemtico y presentan las siguientes caractersticas: son clulas que tienen un mayor dimetro que los eritrocitos, presentan un ncleo de forma irregular, su citoplasma presenta algunas granulaciones las cuales son teidos con diferentes colorantes, y la cromatina del ncleo puede ser de diferentes densidades. Pueden distinguirse 5 tipos de leucocitos maduros (neutrfilos, eosinfilos, basfilos, monocitos y linfocitos) basndose en general en las siguientes caractersticas: Tamao de la clula Forma del ncleo Contenido de grnulos Consistencia de la cromatina nuclear Coloracin de los grnulos El 65% de leucocitos corresponde a los GRANULOCITOS: Eosinfilos, Basfilos y Neutrfilos. El 35% corresponde a los AGRANULOCITOS: Monocitos y Linfocitos. Los leucocitos se desplazan por medio de movimientos amiboideos saliendo de los vasos sanguneos y llegando a los tejidos, por medio de la DIAPEDESIS. Estas clulas vagabundas son importantes en las reacciones de defensa contra enfermedades y en general en infecciones, puesto que pueden fagocitar cuerpos extraos y bacterias. Tienen una importante funcin en las reacciones inmunolgicas de nuestro organismo favoreciendo la produccin de anticuerpos. MATERIAL: Portaobjetos de vidrio Palillos aplicadores de madera Papel secante Plumn sharpie Contador celular Cronometro Aceite de inmersin Alcohol metanol fijador Eosina bufferizada Policromo

PROCEDIMIENTO: 1. Homogenizar la muestra sangunea y ANTES de 3 hrs. realizar un frotis 2. Empleando un aplicador de madera, depositar una pequea gota de sangre en el extremo de un portaobjetos totalmente limpio.

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3.

4. 5.

6. 7. 8.

Con el borde de otro portaobjetos a 20 o 30 grados, tocar la gota, esperar a que la sangre se distribuya por capilaridad en el extremo del portaobjetos extensor y deslizarlo suavemente sobre el otro portaobjetos, en sentido longitudinal hasta que la gota quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjetos (NOTA: revisar clase de leucopoyesis para recordar la forma de hacer el frotis) Dejar secar el frotis. Teir el frotis con la tincin correspondiente de la siguiente manera: a. fijar la extensin en metanol absoluto aproximadamente 30 segundos. b. teir con la solucin de Eosina bufferizada por 20 segundos. c. enjuagar con agua de la llave. d. introducir la extensin en solucin de azul de policromo durante 30 segundos. e. enjuagar con agua de la llave, dejar escurrir el agua y dejar secar al aire libre. colocar una gota de aceite de inmersin y leer al microscopio con el objetivo de 100x. se har un recuento de 100 clulas blancas en total, DIFERENCIANDO cada una de ellas segn sus caractersticas antes citadas. (VER CLASE LEUCOPOYESIS) evaluar la morfologa de eritrocitos, leucocitos y plaquetas y reportar anormalidades.

VALORES DE REFERENCIA: Cellular Neutrfilos en Banda Neutrfilos segmentados Linfocitos Monocitos Eosinfilos Basfilos Relativo (%) 0-5 45 - 65 30 - 40 3-8 1-5 0-1

VARIACIONES FISIOLGICAS La frmula diferencial vara con la edad. El nio en trminos generales, posee ms linfocitos que el adulto normal y alrededor de los 10 aos comienza a estabilizarse en los valores normales del adulto. 9 El anciano presenta un recuento de leucocitos entre 3.1 - 8.5 x 10 /L y el recuento diferencial tiene una media de 65 +/- 10% de polimorfo nucleares neutrfilos y linfocitos de 30 +/- 9%. 9 En el embarazo y sobre todo en el ltimo trimestre, la leucocitosis puede llegar a 15 x 10 /L, con un aumento de polimorfo nucleares neutrfilos y bandas neutrfilos.

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REPORTE DE LABORATORIO

Ensenada, Baja California PACIENTE: EDAD: ___________SEXO: MEDICO: DIAGNOSTICO PRESUNTIVO: MEDICAMENTOS EN USO: FLEBOTOMISTA:

a _______ de _____________________ del 20 _____

REGISTRO:

PARAMETRO RECUENTO TOTAL LINFOCITOS MONOCITOS NEUTROFILOS SEGMENTADOS NEUTROFILOS EN BANDA EOSINOFILOS BASOFILOS OTROS COMENTARIO:

RESULTADO

VALOR DE REFERENCIA

Nombre y firma de quien realiz el estudio: EST. T.L.C.

Nombre y firma de quien supervis el estudio:

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CUESTIONARIO 7 RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS

1.

Cul es la utilidad del estudio de las extensiones sanguneas?

2.

Qu caractersticas celulares se deben observar para diferenciar a los leucocitos y poder clasificarles?

3.

Adems de evaluar la serie blanca, Qu otras cosas deben ser evaluados al observar una extensin sangunea?

4.

Qu caractersticas de calidad, debe tener la extensin sangunea para realizar la lectura diferencial?

5.

Qu significado clnico tiene un aumento de los eosinfilos?

6.

Cmo se le llama a la elevacin de los linfocitos y qu significado tiene?

7.

Mencione 3 enfermedades o patologas que produzcan una neutrofilia:

8.

Menciones 3 patologas que manifiesten una linfopenia:

9.

Elabore un esquema de un campo visual del microscopio, e indique las clulas observadas

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ANEXO 1
Espectrofotmetro

Un espectrofotmetro es un instrumento usado en la fsica ptica que sirve para medir, en funcin de la longitud de onda, la relacin entre valores de una misma magnitud fotomtrica relativos a dos haces de radiaciones. Tambin es utilizado en los laboratorios de qumica para la cuantificacin de sustancias y microorganismos. Hay varios tipos de espectrofotmetros, puede ser de absorcin atmica o espectrofotmetro de masa. Este instrumento tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. Esto le permite al operador realizar dos funciones: 1. Dar informacin sobre la naturaleza de la sustancia en la muestra 2. Indicar indirectamente que cantidad de la sustancia que nos interesa est presente en la muestra ESPECTROFOTOMETRIA: Se refiere a la medida de cantidades relativas de luz absorbida por una muestra, en funcin de la longitud de onda. Cada componente de la solucin tiene su patrn de absorcin de luz caracterstico. Comparando la longitud de onda y la intensidad del mximo de absorcin de luz de una muestra versus soluciones estndar, es posible determinar la identidad y la concentracin de componentes disueltos en la muestra (solucin incgnita). Las ventajas de la espectrofotometra sobre otros mtodos analticos de laboratorio son varias: es rpida, precisa, verstil, fcil de usar y eficiente en costo. Los espectrofotmetros se han mejorado en precisin y versatilidad en los ltimos aos con los avances de tecnologa, y hoy se consideran indispensables en un laboratorio de qumica analtica. La espectrofotometra se usa para diversas aplicaciones, como: Anlisis cuantitativo y cualitativo de soluciones desconocidas en un laboratorio de investigacin, Estandarizacin de colores de diversos materiales, como plsticos y pinturas, Deteccin de niveles de contaminacin en aire y agua, Y determinacin de trazas de impurezas en alimentos y en reactivos. La espectrofotometra ultravioleta-visible usa haces de radiacin del espectro electromagntico, en el rango UV de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y en el de la luz visible de 400 a 800 nm, por lo que es de gran utilidad para caracterizar los materiales en la regin ultravioleta y visible del espectro. Al campo de luz uv de 200 a 400 nm se le conoce tambin como rango de uv cercano, la espectrofotometra visible solamente usa el rango del campo electromagntico de la luz visible, de 400 a 800 nm.

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Un espectrmetro tpico posee cuatro componentes bsicos: una fuente de radiacin que tiene intensidad constante en el rango de longitud de onda que cubre (usualmente es lmpara de tungsteno para luz visible, y deuterio para ultravioleta), un compartimiento para la muestra, un monocromador que separa la banda de longitud de onda deseada del resto del espectro y la dispersa al compartimiento de la muestra, y un foto detector, que mide cuantitativamente la radiacin que pasa por la muestra. En general, los espectrmetros miden en % de transmitancia (T) y absorbancia (A). El por ciento de transmitancia se refiere a la cantidad de radiacin que pasa a travs de la muestra y alcanza el detector. Una solucin lmpida, no absorbente, mostrara una lectura de 100% de transmitancia en un espectrofotmetro calibrado. Las unidades de absorbancia van de 0 a 2. Las medidas de absorbancia son frecuentemente usadas en qumica analtica, ya que la absorbancia es proporcional al grosor de una muestra y la concentracin de la sustancia en sta. El espectrofotmetro tiene la capacidad de proyectar un haz de luz monocromtica (de una longitud de onda particular) a travs de una muestra y medir la cantidad de luz que es absorbida por dicha muestra. El espectrofotmetro mide la absorbancia de una muestra en los espectros de luz ultravioleta y visible (200 a 850 nm). El largo de onda es determinado por un prisma que descompone el rayo de luz de acuerdo al largo de onda escogido. Luego la luz pasa por una hendidura que determina la intensidad del haz. Este haz atraviesa la muestra y llega a un tubo fotogrfico, donde es medido. La cantidad de luz que atraviesa la muestra es el porcentaje (%) de transmitancia

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ANEXO 2
VALORES NORMALES EN LA BIOMETRIA HEMATICA

PARAMETRO Leucocitos Eritrocitos Hemoglobina Hematcrito MCV MCH MCHG RDW (ADE) Plaquetas MPV Linfocitos Monocitos Granulocitos Eosinfilos Bandas

LIMITES NORMALES 5.0 10.0 3.5 5.7 12.0 17.2 36.1 50.3 82.2 97.4 26.0 34.0 31.0 37.0 11.6 37.6 150 450 7.8 11.0 20.5 51.1 1.7 9.3 42.2 75.2 0 0.7 0 0.2

UNIDADES 10 /L 10 /L g/dL % fL Pg % % 10 /L fL % % % % %
9 12 9

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BIBLIOGRAFIA: 1. Garza D and Becan-McBride K. Phlebotomy Handbook, 2nd Ed. Norwalk, Connecticut: Appleton and Lange: 1989. 2. National Committee for Clinical Laboratory Standards; Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Venipuncture, 3rd Ed. Document H3-A3. Vol. 11 No. 10, 1991. 3. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Procedures for the Collection of Diagnostic Blood Specimens by Skin Puncture. Document H4-A3. Vol. 11 No. 11, 1991. 4. Phelan, S. Phlebotomy Techniques: A Laboratory Workbook. Chicago, Ill.: American Society of Clinical Pathologists: 1993. 5. University of Iowa Hospital and Clinics, Pediatric Phlebotomy Training Manual. 1994. 6. University of Iowa Hospital and Clinics, Phlebotomy Training Manual. 1994. 7. Mejora Continua de la Calidad. Gua para los laboratorios clnicos de Amrica Latina. Editores: M.L.Castillo de Snchez y M.E.Fonseca Yerena en colaboracin con COLABIOCLI. Editorial Mdica Panamericana. 8. Virtual Phlebotomy: A Computer Aided Course of Instruction. http://www.parsons.umaryland.edu/~vguy/phleb.htm 9. California Phlebotomy Training. http://www.scpt.com/PhlebotomyViews.html 10. Virtual Hospital: CLIA. Pre-Analytical Factors Affecting Laboratory Results. http://www.vh.org/Providers/CME/CLIA/Phlebotomy/Phlebotomy.html 11. Center for Phlebotomy Education. http://www.phlebotomy.com 12. Medstat Utah. http://www.medstat.med.utah.edu/webpath/tutorial/PHLEB/PHLEB.html Autor: Eric Caballero J. ecaballe[arroba]cwpanama.net http://www.ventajas.com/foro/view.cgi?header_id=235 http://reina.4life.biz/enfermedades.aspx?eId=107 Mathew, L. (1977). Metodos de laboratorio. Mexico, D.F.: Nueva Editorial Interamericana, S.A. de C. V. Espinoza, Eligio (2009). Manual de hematologa. Unison, Universidad de Sonora Muoz Zambrano, Mara E.; Morn Cortijo, Cecilia G. Manual de procedimientos de laboratorio en tcnicas bsicas de hematologa. Lima: Ministerio de Salud, Instituto Nacional de Salud, 2005. Theme, Color Atlas of Hematology 2004 Theme ABC OF CLINICAL HAEMATOLOGY Second Edition Edited by DREW PROVAN Senior Lecturer, Department of Hematology, Barts and the London, Queen Marys BORBOLLA Escoboza, Jos Rafael; Principios de hematologa. Primera edicin, Mxico, D.F. MASSON DOYMA MEXICO, S.A.; 2005

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