EXTRAO DE DNA

INTRODUO Uma molcula de desoxirribonucleico (DNA) consiste em duas longas cadeias polipeptdicas compostas por quatro tipos de unidades nucleotdica. Cada uma dessas cadeias conhecida como cadeia de DNA, ou fita de DNA. As ligaes de hidrognios entre as bases de nucleotdeos mantm as duas cadeias unidas. Os cidos nucleicos so necessrios para o armazenamento e a expresso da informao gentica. Existem dois tipos de cidos nucleicos: O cido desoxirribonucleico (DNA), como citado acima, e o cido ribonucleico (RNA). O DNA o depositrio da informao gentica, est presente no somente nos cromossomos dentro do ncleo dos organismos eucariontes, mas tambm nas mitocndrias e nos cloroplastos das plantas. A informao gentica encontrada no DNA copiada e transmitida as clulas filhas por meio da replicao do DNA. A prtica realizada a seguir teve por objetivo a extrao do DNA de tecido animal, utilizando os princpios de precipitao de protenas desenvolvidas em prticas anteriores. Os cidos nucleicos presentes num tecido (especialmente DNA) podem estar firmemente ligados a ctions ou a protenas catinicas, tais como histonas e protaminas. Utilizando um homogeneizado de fgado de rato possvel realizar a precipitao do DNA ligado a essas estruturas. Os polinucleotdeos podem ser precipitados pela ao de solues salinas, ou por lcool em presena de sais.

EXPERIMENTAL

OBTENO DE EXTRATO DE CIDO NUCLECO Ao homogeneizado de fgado, previamente formado, foi adicionado 1 ml de soluo de tricloroactico 20%. Posteriormente a soluo foi agitada e deixada em repouso por 10 minutos. Em seguida essa soluo foi levada a centrfuga a 200 rpm por 10 minutos, ao fim do qual, desprezou-se o sobrenadante e ao sedimento obtido juntou-se 5 ml de soluo de tricloroactico 5%. Misturou-se cuidadosamente com um basto de vidro e deixou-se a suspenso se decantar num tubo de ensaio. O produto da etapa anterior foi levado ao banho-maria fervente por 20 minutos, esfriado e transferido novamente para a centrfuga por 10 minutos 200 rpm.

O sobrenadante foi decantado para um tubo de ensaio limpo. Esse sobrenadante conter quase todo o RNA e DNA existente nos 2 ml de homogenato usado inicialmente. Para que houvesse uma melhor separao, centrifugou-se. A centrifugao um processo de separao em que uma amostra fluida submetida a uma centrfuga a fim de se promover a separao dos componentes via sedimentao dos lquidos imiscveis de diferentes densidades. Aps este processo, denotou-se que a sobrenadante continha substncias que no eram necessrias para o estudo especifico (Substncias hidro e lipossolveis, sais, cidos graxos e etc.), portanto fez-se o seu descarte. Preservou-se o precipitado porque o mesmo possua o material de analise desejado (cidos nucleicos), alm de enzimas, protenas e demais.

IDENTIFICAO DOS CIDOS NUCLEICOS NO EXTRATO CIDO.

Identificao de DNA. Pipetou-se num tubo de ensaio 2 ml do sobrenadante obtido na etapa anterior e em outro tubo, 2 ml de gua destilada. Aos tubos foram adicionado 2 ml do reativo de difenilamina, agitou-se essas solues e foram aquecidas a 100C por 10 minutos. RESULTADO E DISCUSSES O DNA ao ser identificado a partir da reao da difenilamina com a 2-desoxirribose apresentou uma tonalidade azulada, no tanto quanto esperada. Essa diferena na tonalidade deve-se a presena no somente de DNA no extrato, mas tambm de RNA e impurezas. Outra possibilidade seria o fator de diluio utilizado. O tubo contendo gua destilada junto ao extrato no se coloriu de azul j que esta no continha cidos nucleicos para reagir. IDENTIFICAO DE RNA Pipetou-se num tubo de ensaio 2 ml do mesmo sobrenadante da etapa anterior e em um outro tubo de ensaio adicionou-se 0,2 ml de gua destilada. Aos dois tubos foram adicionado 0,8 ml de gua destilada 2 ml de reativo de orcinol. Aps agitar a soluo, esta foi levada ao banho-maria por 10 minutos. RESULTADO E DISCUSSES O extrato adiquiriu uma colorao azulada (verde-azulada), demonstrando a presena de RNA. O tubo contendo gua destilada misturada ao extrato deu resultado negativo ao reativo de Bial, j esperado pois nesse tubo no se tinha cidos nucleicos para reagir.

CONCLUSO

Concluiu-se que a extrao dos cidos nucleicos pode ser realizada atravs do rompimento da membrana celular, munindo-se de cido ctrico 2% e que atravs de adio de cido tricloroactico (TCA) a 20 e 5% podem-se fazer desnaturaes do meio. Portanto, pode-se confirmar a presena de ambos os cidos nucleicos na amostra, utilizando-se de testes simples como a reao entre a difenilamina com a 2desoxirribose (para identificar o DNA) e entre o reativo de Bial com a ribose (para identificao de RNA).

BLIBLIOGRAFIA

Queiroz, J. H. Prticas de Bioqumica. Viosa, MG: Editora UFV, 120p. Pamela, C. Champe Bioqumica Ilustrada. Editora Artmed, Porto Alegre, 3 Edio, 2006.
Baynes, John. Bioqumica Mdica. Editora Elsevier, Rio de Janeiro, 3 Edio 2006.