Review

Mutaciones Genticas
Jorge Llerena A., Facultad de Ciencias Biolgicas, Universidad Nacional Mayor de San Marcos

Resumen En este review tratamos sobre dos investigaciones descriptivas y completas importantes en cuanto a mutaciones genticas: La localizacin de los locus donde estas ocurren y una clasificacin casi total de las mutaciones de una especie. La primera de ellas trata sobre la localizacin del locus en el cual se da el color de ojos azul en humanos, el cual se crea que estaba en el locus OCA2. Se trat con individuos provenientes de familias de Dinamarca donde es muy comn este color de ojos a los cuales se les extrae ADN para secuenciamiento y se compara con ADN extrado de individuos con ojos azules provenientes de Turqua y Jordania. Los resultados revelaron una equivocada ubicacin de la mutacin y adems sugirieron la hiptesis de que esta mutacin ocurri en alguna parte al norte del Mar Negro hace ms de 6000 aos. La otra investigacin se centra en hacer una descripcin total de las mutaciones del Pez Cebra, un animal que est siendo muy utilizado en investigacin gentica debido al gran parecido de su genoma con el humano. Se usaron los patrones mendelianos de herencia haciendo cruces de los cuales se cuantifican hasta tres generaciones filiales, anotando todos los datos obtenidos y describiendo todos los fenotipos haciendo el screen total.

Abstract In this review we discuss two important and comprehensive descriptive investigations regarding genetic mutations: the location of the locus where they occur and almost complete classification of the mutations of a species. The first one is about the location of the mutation of blue eye color in humans, which was believed to be the locus OCA2. It dealt with individuals from families of Denmark which is very common this eye color to which DNA is extracted and compared to sequencing DNA extracted from blue-eyed individuals from Turkey and Jordan. The results revealed a wrong location of the mutation and also suggested the hypothesis that this mutation occurred somewhere north of the Black Sea over 6000 years ago. The next research focuses on making a full description of Zebrafish mutations, an animal that is being widely used in genetic research because of its resemblance with the human genome. They used mendelian patterns of inheritance which quantifies three filial generations, scoring all obtained data and describing all phenotypes making the entire screen.

Palabras clave: mutacion puntual, snp, exn, intrn, screen, locus. Keywords: pointing mutation, snp, exon, intron, screen, locus

Mutaciones genticas

Review

Introduccin: Se denomina mutacin gentica, mutacin molecular o mutacin puntual a los cambios que alteran la secuencia de nucletidos del ADN. No confundir con una mutacin gnica que se refiere a una mutacin dentro de un gen. Estas mutaciones en la secuencia de ADN pueden llevar a la sustitucin de aminocidos en las protenas resultantes. Muchas mutaciones genticas, tales como la presencia de polimorfismos de nucletidos, sobre todo al afectar a clulas somticas, causan efectos degenerativos sobre el organismo, como el desarrollo de distintas formas de cncer. El estudio de la manifestacin de estas mutaciones se puede dar mediante el anlisis de la secuencia del DNA usando marcadores moleculares, su extraccin y amplificacin va PCR. A pesar de todo esto, el estudio de las mutaciones ha trado muchas ventajas para el entendimiento de los mecanismos de evolucin y variacin gentica, ahora se sabe que muchas de las grandes variaciones son causadas por mutaciones que una vez aparecidas fueron favorables para el desarrollo de la especie.

Zhu et al 2004;. Posthuma et al 2006;. Duvy et al. 2007). La prdida de la pigmentacin en la piel, cabello y ojos, tambin conocida como albinismo oculocutneo, se deriva de mutaciones en los genes OCA1-4(Sturm et al. 2001). El locus responsable de los fenotipos de color de ojos marrones o azules (MIM 227220) fue primeramente identificado por ligamiento en el cromosoma 15q (multipunto LOD de Z = 32,2) en la poblacin danesa Eiberg y Mohr (1996). El locus candidato fue mapeado en 15q12-13 flanqueado por los marcadores D15S156 y D15S144 con un mximo puntaje LOD cerca de D15S165 y OCA2 (MIM611409) fue sugerido que el gen candidato. Posteriormente, varios otros ligamientos y estudios de asociacin confirmaron el locus OCA2 como el principal contribuyentes a la variacin de color del ojo humano (Sturm et al 2001;. Zhu et al 2004;. Posthuma et al 2006;.. Frudakis et al 2003) (Duvy et al. 2007). Los intentos de identificar la BEY / azul mutaciones en OCA2 han fallado (frudakis et al. 2007), y una variacin dentro de la 5 regin de control del regulador proximal del OCA2 se sugiri a ser responsable del 90% de la variacin de la pigmentacin de color de los ojos (Duvy et al. 2007). La funcin de la protena OCA2 es ambigua (Rebbeck et al. 2002), y se ha sugerido para ser un antiportador Na + / H + (Ancans et al 2001;.. Puri et al 2000) o un transportador de glutamato (Lamoreux et al 1995.). Tanto las funciones indican que OCA2 est involucrado en el suministro de sustratos a una tirosinasa en la biosntesis de la melanina (Ancans et al. 2001). Alternativamente, OCA2 puede estar implicada en la va intracelular de la enzima durante la maduracin de la tirosinasa de melanosomas (Toyofuku et al. 2002). Arriba del OCA2 esta el gen HERC2 (MIM 605837). Las deleciones del exn 8690 o 53-86 en HERC2 de ratones se ha demostrado que afectan el ojo y la pigmentacin de la capa de color, as como la produccin de espermatozoides que conduce a la esterilidad masculina (Lehman et al 1998;.. Russel et al 1995). En los seres humanos, deleciones parciales del

Blue eye color in humans may be caused by a perfectly associated founder mutation ina regulatory element located within the HERC2gene inhibiting OCA2expression La variacin de color de los ojos es el resultado de distribucin de cantidades de melanina en el iris variables. En los seres humanos la ms notable diversidad de color de los ojos se encuentra entre los caucsicos. El color del ojo Azul / marrn en gentica son conocidas por el pblico como ejemplo tpico de herencia monognica, pero la variacin en la concentracin de pigmento y la distribucinde pigmento en el iris, sugieren la gentica del color de ojos a ser mucho ms complejo que el apoyo de los datos recientes (Eiberg y Mohr 1996; Sturm et al 2001;.

Mutaciones genticas

Review
locus OCA2-HERC2 son conocidos en el sndrome de Prader-Willi y sndrome de Angelman. Ambos sndromes se han asociado con albinismo oculocutneo o a la reduccin de la pigmentacin (Spritz et. Al, 1997). La funcin de HERC2 es desconocida, pero el gen codifica para diferentes conservados dominios de protenas funcionales que intervienen en la espermatognesis, ubiqutin proteolisis mediada y el transporte intracelular (Yonggang et al. 2000). El genoma humano codifica para 3-12 pseudo genes HERC2, localizados en el cromosoma 15q, pero se tienen estudios complicados de esta regin. Aqu presentamos evidencia de ligamiento y de estudios de asociacin deque una regin en HERC2 contiene un elemento regulador muy conservado, que es la causa del color de ojos azul en los seres humanos. Para ello se extrajo ADN de 28 familias danesas prximas entre s, se hizo el haplotipo usando los marcadores STS (un total de 400) D15S1002, D15S156, D15S1533, rs4074658, rs1129038, rs10680280, rs3054537, rs10627597 y D15S1048, y los SNPs fueron analizados por digestin con enzimas de restriccin. Para el secuenciamiento, cuatro individuos no relacionados que representan a los ojos de color fenotipo azul , el fenotipo BEY1 variante con varias manchas de color marrn, el BEY1 y el fenotipo Bey2, respectivamente, (fueron seleccionados para identificacin de posiciones de nucletidos polimrficos en la regin BEY candidata por anlisis de secuencia de ADN. Las tres personas con los fenotipos de color de ojos marrones diferentes fueron seleccionados de las familias, en las puntuaciones LOD superior a Z = 2,5 para los marcadores D15S1533 y rs10680280 en la regin candidata BEY. El promotor OCA2 (Lee et al 1995.) Y el exn 1, 2, 7 y 10 y HERC2 exn 21, 26, 30, 33, 39, 44-47, 51, 52, 54, 55, 59, 72, 76 - 78, 85, 87-93 incluyendo la secuencia UTR3 se secuenciaron bidireccionalmente. El SNP rs12913832 se encuentr asociado con el color de los ojos de color marrn y azul, pero esta variacin de ADN no puede explicar toda la variacin de color marrn del ojo de color marrn oscuro sobre la avellana de ojos azules con manchas marrones. Todos los individuos que llevan los BEY1 y Bey2 fenotipos en la familia CFG # 694 compartan los mismos dos haplotipos H-5 y H-1. Adems, todos los individuos de ojos castaos compartan una regin de MBP 7.6 que incluye la regin codificante entera OCA2 desde D15S113 a D15S144 (chr15:23.8-31 0,4 MBP) pero no incluye ningn secuencias reguladoras localizadas en OCA2 exn 1 y la regin promotora hacia arriba para el ojo marrn y las variaciones de color de pelo marrn en esta familia. Un estudio reciente realizado por Duvy et al. (2007) demostraron la asociacin el 90% con los tres alelos SNPs (TGT) en el intrn 1 OCA2. Esta regin puede tener una funcin reguladora en la variacin de color marrn del ojo, pero es ms probable que el haplotipo TGT para estos SNPs se asocia con el haplotipo h-1 identificado para el gen HERC2 encontrada en este estudio. En conclusin, se identifico un elemento regulador conservado en el intrn 86 del gen HERC2 que est perfectamente asociado con el color de los ojos marrn / azul en los individuos estudiados de Dinamarca, Turqua y Jordania. Este elemento tena un efecto inhibidor sobre la actividad promotora deOCA2 en cultivos de clulas. En total, todos estos datos apoyan firmemente un modelo donde el color de los ojos azules en los seres humanos es causada por la homocigosis del alelo rs12913832 g.

Mutaciones genticas

Review
En la tabla a continuacin se tiene la variacin en las secuencias de TAATG del alelo rs12913832 en el intron reconocido de HERC2:

A genetic screen for mutations embryogenesis in zebrafish

affecting mM, y la dosis se repiti dos a seis veces (vase la Tabla 1). Sobre 240 de 266 hombres sobrevivieron a los regmenes mutagnicos. Las mutaciones fueron recuperado de mutagenizada germinal proliferacin, de manera que mutaciones fueron fijadas en el G0 masculino. Los machos mutagenizadas fueron criados varias veces con mujeres heterocigotas para cuatro desvinculado pigmentacin mutaciones cin para determinar la eficiencia de la mutagnesis. Entre 4 semanas y 2 meses despus de la mutacin gnesis, los machos fueron criados con hembras AB, excepto por el conjunto 11 NB, para los que se obtuvo aproximadamente la mitad de la progenie de los cruces con AB / HK hembras hbridas. La generacin F1 compuesto 17000 progenie de G0 machos de 346 cruces. La supervivencia de las larvas de F1 para la edad adulta fue bajo, y oscil entre 10% y aproximadamente 70% para las

Modelos sistemticos en todo el genoma de mutagnesis para fenotipos de embriones han sido fundamentales en la comprensin de invertebrados y desarrollo de la planta. En este trabajo, se presenta los resultados de la primera aplicacin de un anlisis gentico a gran escala en el desarrollo devertebracin de Pez cebra macho, mutagnesis con N-etil N-nitrosourea para inducir mutaciones en las clulas espermatogonias en un tipo de locus especfico promedio de uno de cada 651genomas mutados. El screen fue diseado como una pantalla de reproduccin de dos generaciones con anlisis de los fenotipos mutantes en embriones F3 (Solnica-Krezel et al., 1994). Varn adulto AB pez cebra se incubaron a intervalos semanales para 1 hora cada uno en soluciones de la ENU mutgeno. Nueve grupos de machos fueron mutagenizado usando ENU a concentraciones entre 2 mM y 3,5

Mutaciones genticas

Review
familias individuales. Entre agosto de 1992 marzo de 1994, hasta 50 familias F2 fueron generado cada semana. Slo cruza con ms de 60 larvas con vejigas infladas por 5 dpf (da postfertilizacin) se mantuvieron y hasta 125 larvas se criaron. 2.312 familias de cruces F1 F1 y 487 de F1 AB se plantearon, lo que representa un total de 5.111 genomas mutagenizados. De estos 2.799 familias F2, 594 fueron descartados antes la edad de 4 meses, ya que el nmero de peces haba cado por debajo de 20, lo que hizo imposible la deteccin eficiente. De las 2205 familias F2 elevado a la edad adulta, 397 no pudieron ser examinados, ya sea porque el contenido de un solo sexo o ningn cruce productivo podran ser obtenidos. Por lo tanto, 1.808 familias F2 desde F1 (317 AB de 1491 de la F1 F1 cruces), que representan 3299 genomas, se seleccionaron. El general la pantalla se representa en la figura. 1. En el momento en la pantalla fue diseada, la nica posibilidad para la cartografa de mutaciones pareca estar basado en un mapa de RAPD (Postlethwait et al., 1994), por lo que se tuvo cuidado de realizar la mutagnesis y generar F1 y familias F2 en un fondo endogmica AB-deformacin. Con la disponiblidad de un mapa basado en SSR, sin embargo, la cartografa de las mutaciones recuperadas de fondos outbred se ha convertido en factible (Knapik et al., 1996). Dado que las tasas de locus especficos haban sido determinadas para cada uno de los regmenes mutagnicos separados, que fueron capaces de comparar la especfica tasa de locus (Solnica-Krezel et al., 1994) con el nmero de letal las mutaciones inducidas por genoma mutagenizado, y encontraron que la correlacin fue buena.

Como resultado se tienen estn tablas descriptivas de las mutaciones observadas:

Mutaciones genticas

Review

Referencias Heinemeyer T, Wingender E, Reuter I, Hermjakob H, Kel AE, Kel OV,Ignatieva EV, Ananko EA, Podkolodnaya OA, Kolpakov FA et al (1998) Databases on transcriptional regulation: TRANSFAC,TRRD, and COMPEL. Nucleic Acids Res 26:364370 Lamoreux ML, Zhou BK, Rosemblat S, Orlow SJ (1995) The pinkeyed-dilution protein and the eumelanin/pheomelanin switch: in support of a unifying hypothesis. Pigment Cell Res 8:263270 Lee ST, Nicholls RD, Jong MT, Fukai K, Spritz RA (1995). Organization and sequence of the human P gene and identiWcation of a new family of transport proteins. Genomics 20:35463 Lehman AL, Nakatsu Y, Ching A, Bronson RT, Oakey RJ, Keiper-Hrynko N, Finger JN, DurhamPierre D, Horton DB (1998) A very large protein with diverse functional motifs is deficient in rjs(runty, jerky, sterile) mice. Proc Natl Acad Sci USA 95:94369441 Myant NB, Fobes SA, Day INM, Gallagher J (1997) Estimation of the age of Ancestral Argenine3500 ! Glutamine mutation in Human ApoB-100. Genomic 45:7887 Novak EK, Reddington M, Zhen L, Stenberg PE, Jackson CW, McGar- ry MP, Swank RT (1995) Inherited thrombocytopenia caused by reduced platelet production in mice with the gunmetal pigment gene mutation. Blood 85:17811789 Posthuma D, Visscher PM, Willemsen G, Zhu G, Martin NG, Slagboom PE, de Geus EJ, Boomsma DI (2006). Replicated linkage for eye color on 15q using comparative ratings of sibling pairs. Behav Genet 36:1217 Puri N, Gardner JM, Brilliant MH (2000). Aberrant pH of melanosomes in pink-eyed dilution (P) mutant melanocytes.J Inves Dermatol 115:607 613 Stemple, D. L., Solnica-Krezel, L., Zwartkruis, F., Neuhauss, S. C. F.,Schier, A. F., Malicki, J., Stainier, D. Y. R., Abdelilah, S., Rangini, Z.,Mountcastle-Shah, E. and Driever, W. (1996). Mutations affectingdevelopment of the notochord in zebrash. Development 123, 117128. Streisinger, G., Walker, C., Dower, N., Knauber, D. and Singer, F. (1981).Production of clones of

Mutaciones genticas

Review
homozygous diploid zebra sh (Brachydanio rerio). Nature 291, 293-296. Streisinger, G., Singer, F., Walker, C., Knauber, D. and Dower, N. (1986). Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrash. Genetics112, 311-319. Talbot, W. S., Trevarrow, B., Halpern, M. E., Melby, A. E., Far, G.,Postlethwait, J. H., Jovett, T., Kimmel, C. B. and Kimelman, D. (1995). Ahomeobox gene essential for zebrash notochord development. Nature 378,150-157. Thomas, K. R. and Capecchi, M. R. (1990). Targeted disruption of the murineint-1 protooncogene resulting in severe abnormalities in midbrain andcerebellar development. Nature 346, 847-850. Urbanek, P., Wang, Z. Q., Fetka, I., Wagner, E. F. and Busslinger, M.(1994). Complete block of early B-cell differentiation and altered patterningof the posterior midbrain in mice lacking Pax5/BSAP. Cell 79, 901-912. Weinstein, D. C., Ruiz i Altaba, A., Chen, W. S., Hoodless, P., Prezioso, V.R., Jessel, T. M. and Darnell, J. E. (1994). The winged-helix transcriptionfactor HNF-3 is required for notochord development in the mouse embryo.Cell 78, 757-588. Weinstein, B. M., Schier, A. F., Abdelilah, S., Malicki, J., Solnica-Krezel,L., Stemple, D. L., Stainier, D. Y. R., Zwartkruis, F., Driever, W. andFishman, M. C. (1996). Hematopoietic mutations in the zebrash. Development 123, 303-309. Westereld, M. (1994). The Zebrash Book. Eugene, University of OregonPress. Westereld, M., Liu, D. W., Kimmel, C. B. and Walker, C. (1990).Pathnding and synapse formation in a zebrash mutant lacking functionalacetylcholine receptors. Neuron 4, 867-74. Woo, K., Shih, J. and Fraser, S. (1995). Fate maps of the zebrash embryo. Curr. Op. Genet. Dev. 5, 439-443. Wurst, W., Auerbach, A. B. and Joyner, A. L. (1994). Multiple developmental defects in Engrailed-1 mutant mice: an early mid-hindbrain deletion and patterning defects in forelimbs and sternum. Development 120,

Mutaciones genticas