CROMATOGRAFIA EN CAPA FINA Eluya de la misma manera que Si es necesario se utiliza una rayos ultravioleta (UV), se bandas individuales

es y se sealan (mtodos alternativos: se cubre cuidadosamente con papel dejando expuesta una franja de centro y se desarrolla en vapores despus supone que las bandas posicin recta. Separe raspando las bandas de individual. El gel de slice es un poco soluble en etanol o metanol. Evapore el disolvente. Se cristaliza o se destila el producto y se identifica. para CCF. lmpara de localizan las con un lpiz. la placa aluminio, 0.5 cm en el de yodo, estn en forma

NOTA: para el trabajo a pequea escala, estas debe limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus se dejan secar completamente antes de aplicar la mezcla. Es indispensable que se utilicen disolventes puros y redestinados.

CROMATOGRAFA EN COLUMNA Por medio de la CCF se sistema (adsorbente Dimensiones de la columna: adsorbente se debe empacar una proporcin de altura de 10:1; para estimar la adsorbente en relacin con el la columna La cromatografa en capa tcnica para determinar el nmero de optimiza eluyente). el en esta en dimetro cantidad de dimetro de fna es una

componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una cromatografa en columna, entre otros. El proceso de cromatografa en columna se controla por cromatografa en capa

fina, de tal manera que se puede separar cada componente de la mezcla. La cromatografa en columna se usa para separar grandes cantidades de material: >100 mg. El proceso de cromatografa consta de una fase mvil

(eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de las sustancias que se deseen separaf. Se le proporcionar una mezcla slida de cido benzoico contaminado con azul de metileno, los cuales se separan por cromatografa en columna. Para empacar la columna sujtela en el soporte con las pinzas. Si la llave es de vidrio, engrsela ligeramente y mantenga la posicin de cerrado. Introduzca hasta el fondo un pequeo pedazo de algodn ayudndose con la varilla de vidrio, agregue 8 mL de eluyente (acetato de etilo) y presione suavemente el algodn para que quede bien colocado y sin burbujas (Nota 1). Prepare una suspensin de.l0 g de qel de slice para columna en 40 mL de eluyente y agite por 5 min. para elminar las burbujas de aire. A travs del embudo de vidrio vierta la suspensin en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme. Abra la llave para eliminar el exceso de disolvente teniendo cuidado de no dejar la gel de slice sin disolvente (Nota 2). En un vaso de precipitado de 100 mL L disuelva 0.4 q de la mezcla problema con la mnima cantidad de eluyente (4 o 5 mL), ayudndose con el agitador, virtala con cuidado para que quede distribuida uniformemente encima de la superficie de la gel de slice. Abra la llave para colectar el disolvente y que se adsorba la muestra aplicada (cuidando que no se seque la columna). Colecte fracciones (eluatos) de 6 mL en los frascos viales y verifique la separacin haciendo cromatoplacas (Notas 3 y 4) de cada una de las fracciones usando una muestra testigo como se indica en la figura I . Eluya las cromatoplacas en mezcla de hexano-acetato de etilo (2:1) y observe en cuales fracciones hay presencia del compuesto separado (Figura 1). En cada cromatoplaca observe el cambio de la coloracin de la mancha del producto principal (a menor concentracin menor intensidad de color).

La elucin y separacn termina en el momento en el que ya no se observa en la cromatoplaca presencia del producto separado. En un matraz rena las fracciones que contienen producto. Para recuperar la sustancia: destile el exceso de disolvente utilizando una destilacin simple, calentando el matraz en un bao mara (Nota 5), deje en el matraz un residuo de 5 mL aproximadamente y virtalo en un vidrio de reloj o en un vaso, para que termine de evaporarse en la campana. Pese el producto recuperado y calcule el rendimiento. Testigo Faccin 1 Figura 1. Seguimiento de la separacin por cromatografa en capa fina Notas: 1) Otra opcin para preparar la columna es, agregando 10 mL de eluyente indicado .y despus colocar en el fondo de la columna un pedazo de algodn o fibra de vidrio ayudndose con la varilla de vidrio presionando suavemente sin apretar el algodn. 2) Mntenga siempre el nivel del eluyente 0.5 cm por arriba del nivel del adsorbente. 3i Para pparar ias cromatoplacas se introducdn 2 portaobjetos juntos, limpios y secos en una suspensin de silica gel al 35% en acetato de etilo. 4) Para aplicar las muestras a la cromatoplaca utilice los capilares, los que previamente deben ser estirados en la flama del mechero con el fin de que tengan el dimetro adecuado. 5) Para recuperar un slido disuelto en un dsolvente, siempre se destila el disolvente calentando en un bao-mara.