La Nutricion Durante El Embarazo y Lactancia Como Condicionante de La Salud en Etapas Avanzadas de La Vida

Ninguna cosa noble se hace sin el riesgo de un azar (Montaigne)
1136-4815/04/31-36 ALIMENTACION, NUTRICION Y SALUD Copyright 2004 INSTITUTO DANONE
ALIM. NUTRI. SALUD Vol. 11, N. 2, pp. 31-36, 2004
La nutricin durante el embarazo y lactancia como condicionante de la salud en etapas avanzadas de la vida
R. M. Ortega Anta, R. M. Martnez Garca, A. M. Lpez Sobaler
DEPARTAMENTO DE NUTRICIN. FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD COMPLUTENSE. MADRID
RESUMEN
uchas de las enfermedades que son las principales causas de morbilidad y mortalidad en la actualidad (cardiovasculares, hipertensin, diabetes, problemas cardiorrespiratorios, osteoporosis, etc.) han sido relacionadas, en los ltimos aos, con la alimentacin seguida durante el embarazo y primeras etapas de la vida. Los primeros estudios sobre el tema destacaron la existencia de mayor riesgo cardiovascular en adultos que tuvieron bajo peso al nacer. Desde que se formul la hiptesis sobre el origen fetal de las enfermedades del adulto, se han realizado numerosos estudios sobre el tema y se ha especulado sobre la razn de estos resultados. Es posible que la nutricin materna afecte a la formacin de rganos o module funciones, tambin es posible que programe (o condicione adaptaciones) en el descendiente hacia el ambiente nutricional en el que se espera que se desenvuelva. Teniendo en cuenta la importante relacin entre la alimentacin en las primeras etapas de la vida y supervivencia / calidad de vida posterior, la mejora de la dieta durante embarazo y lactancia se convierte en tema prioritario no slo pensando en la salud de la madre sino en la del hijo (a corto y tambin a largo plazo). Palabras clave: Nutricin. Embarazo. Lactancia. Peso del neonato. Enfermedades degenerativas. Salud.
ABSTRACT
any of the diseases which are a main cause of morbidity and mortality (cardiovascular, hypertension, diabetes, cardiorespiratory difficulties, osteoporosis...) have been in the last few years linked with eating habits during pregnancy and early stages of life. The first studies ruled out a higher cardiovascular risk in adults who were born underweight. Was made numerous studies have been carried out and much has been speculated about the rightness of the results since the hypothesis of the foetal origin of adult cardiovascular disease. It is possible that maternal nutrition might affect organ formation or modulate functions; it is also possible that it might program (or condition adaptations in) the offspring towards the nutritional environment in which it is expected to develop. Bearing in mind the important relationship between eating habits during early stages of life and survival / posterior quality of life, an improvement of the diet during pregancy and lactation becomes a priority not only for the mothers health but also for the childs (both in the short and long term). Key words: Nutrition. Pregnancy. Lactation. New-born weight. Degenerative diseases. Health.
INTRODUCCIN Hay una creciente evidencia que avala que muchas de nuestras predisposiciones a padecer enfermedades en la etapa adulta quedan determinadas en el momento del nacimiento y primeras etapas de la vida. Estas enfermedades parecen resultar de interacciones entre genes, ambiente intrauterino y estilo de vida postnatal (1,2).
La razn por la cual los desequilibrios nutricionales precoces pueden afectar, a largo plazo la salud del neonato ha sido objeto de numerosas especulaciones y se ha sealado que la influencia puede deberse a un fallo irreversible en la formacin de rganos o funciones, por alteraciones en etapas clave del desarrollo (3,4). En este sentido la alimentacin de la madre y su composicin corporal puede afectar al desarrollo y salud fetal, como resultado directo de la disponibilidad/
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escasez de sustratos para el feto, e indirectamente por condicionar cambios en la estructura y funcin de la placenta, lo que puede alterar las transferencias entre la madre y su descendiente (5,6) (Fig. 1).
Malnutricin de la madre durante el embarazo Malnutricin de la mujer lactante
Afecta al aporte de nutrientes al feto: Influencia directa (hay menos nutrientes) Indirectamente se afecta la estructura y funcin de la placenta Esto condiciona: Menor crecimiento fetal Adaptacin del feto a carencias Neonato
Condiciona: Su salud presente y futura La composicin de la leche materna (el contenido en relacin co algunos nutrientes puede verse afectado)
frentarse con un aporte limitado de alimentos en su vida posterior. En estos casos, el nio puede tener dificultad para adaptarse a un consumo abundante de alimentos despus del nacimiento (9) (Fig. 1). Algo similar sucede en individuos de comunidades que sufren una rpida transicin de un ambiente con recursos limitados a una sociedad de la abundancia. Desde una perspectiva global este cambio facilita el padecimiento de diabetes, enfermedad coronaria, accidentes cerebrovasculares y otras patologas (1). Tambin es necesario tener presente que un desequilibrio nutricional durante el embarazo se suele mantener durante la lactancia, afectando a la composicin de la leche materna y que los neonatos que han tenido un aporte insuficiente de un determinado nutriente en la vida intrauterina siguen padeciendo este problema durante la lactancia, con las consiguientes repercusiones en su salud (10-14) (Fig. 1). En mujeres fumadoras, al afecto negativo del tabaco se une la influencia de los cambios en hbitos alimentarios y situacin nutricional ms desfavorable (15-17), que tambin puede afectar a la salud y desarrollo del descendiente.
Menor tamao Mayor riesgo perinatal
Supresin de la lactancia materna
Menor crecimiento y peor situacin nutricional Etapas posteriores de la vida
Reducida saciedad Alteraciones en rganos y funciones Falta de adaptacin a excesos Mayor riesgo de sufrir enfermedades degenerativas Se incrementa considerablemente el riesgo de padecer: Obesidad Resistencia a la insulina Hipercolesterolemia Hipertensin Osteoporosis Enfermedades respiratorias Artritis
RIESGO DE HIPERTENSIN ARTERIAL
Numerosos estudios ponen de relieve que la hipertensin arterial en la etapa adulta y edad avanzada est influenciada por la nutricin temprana (18) y es ms frecuente en el caso de individuos que tuvieron bajo peso al nacer (8,19-21).
Ambiente con abundancia de alimentos
Favorece los excesos dietticos
Fig. 1. Esquema de los factores, que actuando desde el embarazo y lactancia pueden condicionar la salud del descendiente en su etapa adulta.
Tambin es posible que el ambiente intrauterino condicione una programacin del feto, para facilitar su adaptacin al tipo de dieta materna (que es la que probablemente tendr que asumir el nuevo ser) (1,7). La adaptacin en la etapa fetal puede llevar a inadaptaciones posteriores, lo que puede ser la base de padecimiento de enfermedades en la etapa infantil y en la adulta (4,8). Si el organismo en formacin se adapta a una situacin de carencia puede quedar preparado para en-
Tambin la mejora de la alimentacin postnatal puede tener beneficios importantes en la salud pblica (18,20). En este sentido diversos estudios encuentran una relacin inversa entre seguimiento de lactancia materna y presin arterial posterior (Tabla I). Concretamente, Taittonen y cols. (20) sealan que la presin arterial sistlica (en infancia y adolescencia) fue ms baja en 4,5 mmHg en mujeres y 6,5 mmHg en varones cuando siguieron lactancia materna durante 3 o ms meses, respecto a los resultados de nios que no siguieron lactancia materna. Otros estudios sealan la ventaja del seguimiento de dietas pobres en sodio y del consumo de frmulas infantiles enriquecidas con cidos grasos poliinsaturados en la mejora del control de la presin arterial en etapas posteriores (Tabla I).
RIESGO CARDIOVASCULAR Hasta hace poco la bsqueda de las causas de enfermedades cardiovasculares y otras enfermedades dege-
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LA NUTRICIN DURANTE EL EMBARAZO Y LACTANCIA COMO CONDICIONANTE DE LA SALUD TABLA I
INFLUENCIA DE LA ALIMENTACIN EN LAS PRIMERAS ETAPAS DE LA VIDA EN EL CONTROL POSTERIOR DE LA PRESIN ARTERIAL
Embarazo/lactancia Nios pretrmino alimentados con leche humana respecto a los alimentados con frmula Nios con dieta pobre en sodio, en las primeras etapas de la vida, respecto a nios control
Presin sistlica 2,7 mmHg ms baja a los 13-16 aos
Presin diastlica 3,2 mmHg ms baja a los 13-16 aos
Referencia Singhal y cols. (22)
2,1 mmHg ms baja a los 6 meses de edad
Hofman y cols. (23)
3,6 mmHg ms baja a los 15 aos de edad
2,2 mmHg ms baja a los 15 aos de edad
Geleijnse y cols. (24)
Nios con lactancia materna respecto a los alimentados con frmula Lactantes que reciben frmulas enriquecidas con cidos grasos poliinsaturados, respecto a los que toman frmula sin enriquecer
3,9 mmHg ms baja a los 7 aos de edad 3,6 mmHg ms baja a los 6 aos de edad
Wilson y cols. (25)
Forsyth y cols. (26)
nerativas se ha visto guiada por un modelo destructivo, que propone la existencia de influencias que actan en la etapa adulta, como el consumo de tabaco, padecimiento de obesidad, excesivo consumo de grasa saturada, etc., y aceleran los procesos destructivos relacionados con el envejecimiento, incluyendo un aumento en la presin arterial y la formacin de ateroma (27). Una posible explicacin del fallo en el modelo destructivo, utilizado en la prevencin de las enfermedades cardiovasculares, es que los individuos son heterogneos en sus respuestas a las influencias negativas, anteriormente mencionadas, y su heterogeneidad parece estar relacionada con sus pautas de crecimiento. El reciente descubrimiento que indica que los individuos que padecen enfermedades cardiovasculares crecen de manera diferente en su etapa fetal y primera infancia ha llevado a formular un nuevo modelo de desarrollo para explicar la aparicin de estas enfermedades (27). La alteracin del crecimiento intrauterino (por diversos factores, entre ellos la malnutricin) tiene una influencia negativa en el desarrollo del sistema cardiovascular y favorece el progreso de hipertensin, resistencia a la insulina, hipercolesterolemia e hiperuricemia posteriormente (21) (Fig. 1). En este sentido, Kuzawa y Adair (28) encuentran una relacin inversa entre el peso al nacer y el riesgo de sufrir enfermedades cardiovasculares en la etapa adulta, de tal forma que los neonatos de bajo peso (<2,6 kg) tienen mayores niveles de LDL-colesterol y colesterol total en la adolescencia respecto a los neonatos que tuvieron mayor peso.
Respecto a la ventaja de la lactancia materna en relacin con la salud cardiovascular. Owen y cols. (29) observaron que en la etapa adulta las cifras de colesterol y LDL-colesterol eran ms bajas en individuos que haban seguido lactancia materna en su infancia.
ENFERMEDADES RESPIRATORIAS En nios con bajo peso al nacer se puede encontrar un dficit pulmonar restrictivo que deriva de una afectacin en la formacin de los alvolos pulmonares que se produce en el tercer trimestre del embarazo (3). Por otra parte, un mayor dimetro de la cabeza es un indicador de rpido crecimiento fetal al comienzo de la gestacin lo que hace ms vulnerable al feto a la malnutricin al final del embarazo (3). Esta puede ser la razn por la que algunos estudios encuentran que los nios que nacen con mayor permetro ceflico tienen mayores concentraciones de IgE y ms predisposicin al padecimiento de asma y enfermedades obstructivas (3).
OSTEOPOROSIS Diversos estudios epidemiolgicos han demostrado una relacin entre peso al nacer y en la infancia, y densidad mineral sea en la etapa adulta, lo que parece estar mediado por una modulacin en el eje
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hipotalmico-pituitario-adrenal y el eje GH/IGF. El consumo materno de tabaco, la actividad fsica y la dieta parecen modular la adquisicin de mineral seo en esta etapa. Tanto el bajo peso al nacer como el escaso crecimiento en la infancia estn directamente enlazados con el riesgo futuro de fracturas (7,30) (Fig. 1). Por ello la optimizacin de la dieta materna y del crecimiento intrauterino deben ser incluidos entre las estrategias preventivas de osteoporosis para futuras generaciones (30). Jones y cols. (31) describen la asociacin entre la dieta materna durante el tercer trimestre del embarazo y la densidad mineral sea de nios de 8 aos. En concreto la densidad mineral sea estuvo positivamente asociada con el contenido de magnesio, potasio y protena en la dieta materna y negativamente asociado con la densidad en grasa de la dieta materna. Esto confirma que la dieta durante la gestacin tiene un importante papel en la prevencin temprana de la osteoporosis. Es reconocida la importancia del calcio en el embarazo, dado que la deficiencia de este mineral puede suponer un riesgo para la salud de la madre durante la gestacin (13) y perjudicar la mineralizacin de los huesos y la presin arterial de su hijo... (32). Estudios realizados en gestantes espaolas ponen de relieve que la ingesta de calcio es con frecuencia inferior a la recomendada y esto condiciona el contenido en calcio de la leche materna (10,13), por lo que el descendiente sufrir el insuficiente aporte del mineral en la vida intrauterina y durante la lactancia, lo que puede perjudicar su salud posterior (14). Posteriormente durante la infancia el nio se incorpora a los hbitos familiares y probablemente, si la alimentacin materna favorece el progreso de osteoporosis, este ser el tipo de dieta que ser aprendido y seguido por el nio (33).
Por otra parte la lactancia materna reduce el riesgo de sufrir diabetes tipo II (4). Mientras que la introduccin precoz (antes de los 3 meses) de alimentos como la leche vaca pueden condicionar un incremento de un 40% en el riesgo de sufrir diabetes tipo I, dado que la albmina de la leche de vaca tiene una notable similitud con una protena de superficie de las clulas beta del pncreas, por lo que los anticuerpos antialbmina srica bovina presentan una reaccin cruzada con la citada protena de las clulas beta (35).
ENFERMEDD CELIACA
La enfermedad celiaca es un problema sanitario frecuente, que puede estar sin diagnosticar en muchos individuos y se asocia con una gran morbilidad (36). Para evitar esta patologa se aconseja introducir los alimentos con gluten gradualmente y en cantidades pequeas. Tambin se ha comprobado que mantener la lactancia materna mientras se procede a introducir los alimentos con gluten reduce el riesgo de aparicin de reacciones indeseables y de sufrir la enfermedad celiaca en la primera infancia y probablemente en etapas posteriores (36).
DEFECTOS DEL TUBO NEURAL
DIABETES
La predisposicin a padecer diabetes tiene un componente gentico pero puede verse favorecido por el ambiente perinatal y por la salud de la madre antes y durante el embarazo (34). De hecho, el bajo peso al nacer (<2.500 g) y tambin el peso elevado (>4.000 g) se asocian con un aumento del riesgo de padecer diabetes en etapas avanzadas de la vida (4,8,19,27). El peso al nacer es un marcador del riesgo de sufrir enfermedades, como la resistencia a la insulina (8), pero un escaso crecimiento en etapas precoces de la vida, seguido de sobrenutricin en etapas avanzadas parecen ser una combinacin todava ms desfavorable para la salud de los adultos (8,34) (Fig. 1).
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En relacin con la prevencin de los defectos del tubo neural (DTN) es reconocida la importancia de aumentar el consumo de frutas y verduras y tomar un suplemento de 400 mcg/da de cido flico durante toda la etapa frtil (y especialmente en la etapa periconcepcional) (14). Pero otros factores nutricionales maternos pueden condicionar el riesgo de tener descendientes con DTN, por ejemplo incrementar la ingesta de zinc (37), vitamina C (38), y productos lcteos (39) se ha asociado con un descenso en el padecimiento de DTC en los descendientes. Otros factores maternos como la diabetes, la obesidad previa al embarazo, hiperinsulinemia (40) y elevado consumo de dulces y alimentos con alto ndice glucmico (41) han sido asociados con incrementos en el riesgo de tener descendientes con este tipo de malformaciones.
OBESIDAD Es un problema creciente que condiciona un incremento en el riesgo de sufrir otras muchas en-
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fermedades degenerativas (diabetes, hipertensin, hipercolesterolemia, sndrome metablico, etc.). Tambin en relacin con el mantenimiento del balance energtico existen influencias que actan en la etapa perinatal. En concreto, la restriccin de alimentos en los dos primeros trimestres de embarazo condiciona un aumento en la prevalencia de obesidad de los descendientes durante la juventud (42). Recientemente se ha descrito un mayor riesgo de padecimiento de obesidad en adultos cuyas madres fumaban durante el embarazo (43). El consumo de tabaco debe ser evitado durante la gestacin ya que numerosos estudios muestran que las gestantes fumadoras tienen nios de ms bajo peso y con mayor riesgo de mortalidad perinatal (44). Esto puede ser debido en parte a que el hbito de fumar se asocia a peores hbitos alimentarios (14,17), con peor situacin en diversos nutrientes, como vitamina C, B12, folatos, vitamina E (14-16) por lo que las mujeres fumadoras tienen problemas nutricionales adicionales, y el menor peso de los neonatos de madres fumadoras tambin puede aumentar su riesgo de padecer diversas patologas en la etapa adulta.
CONCLUSIN Hasta este momento las pautas marcadas para luchar contra diversas enfermedades degenerativas han sido principalmente restrictivas (disminuir el consumo de caloras, grasas, sal, colesterol, etc.) pero estas medidas no estn exentas de peligros, con frecuencia las limitaciones en las elecciones de alimentos llevan al padecimiento de carencias con riesgos similares o superiores a los que se queran evitar. Sin embargo la mejora de la situacin nutricional durante el embarazo y lactancia proporciona la oportunidad de intervenir precozmente, para mejorar la salud pblica y debe ser objeto de mayor investigacin y atencin en el futurol
CORRESPONDENCIA: Rosa M. Ortega Departamento de Nutricin Facultad de Farmacia Universidad Complutense 28040 Madrid Telefono: 34-1-3941837 Fax: 34-1-3941732 e-mail: rortega@farm.ucm.es
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La microbiota intestinal en el nio y la influencia de la dieta sobre su composicin

O. C. Thompson Chagoyn, J. Maldonado Lozano1, A. Gil Hernndez2
DEPARTAMENTO DE PEDIATRA, HOSPITAL GENERAL DE ZONA 1 A LOS VENADOS. INSTITUTO MEXICANO DEL SEGURO SOCIAL. MXICO. 1DEPARTAMENTO DE PEDIATRA. FACULTAD DE MEDICINA. 2DEPARTAMENTO DE BIOQUMICA Y BIOLOGA MOLECULAR. FACULTAD DE FARMACIA. UNIVERSIDAD DE GRANADA, ESPAA
RESUMEN
ABSTRACT
his review focuses on the acquisition, composition, functions and turnover of the child intestinal microbiota, as well as the influence that specific nutrients have on the microbiota with special emphasis in the first two years of life. The specific effects that carbohydrates, proteins, nonprotein nitrogen, lipids and some minerals have on the colonic microorganisms and how they affect the individuals health are reviewed. Key words: Intestinal colonization. Diet. Infancy. Intestinal microbiota.
sta revisin tiene por objeto revisar la adquisicin, composicin, funciones y recambio de la microbiota intestinal del nio, as como los efectos que tienen los nutrientes especficos sobre ella con especial nfasis en los dos primeros aos de vida. Se consideran los efectos especficos que tienen los hidratos de carbono, protenas, nitrgeno no proteico, lpidos y algunos minerales sobre los microorganismos del colon y cmo afectan a la salud del individuo Palabras clave: Colonizacin intestinal. Dieta. Infancia. Microbiota intestinal.
INTRODUCCIN El tubo digestivo es un rgano especializado que se extiende desde los labios hasta el ano y representa el rea ms grande de contacto del organismo con el ambiente externo (1,2). La mucosa intestinal separa al ser humano de las bacterias que se encuentran en la luz intestinal en nmero 10 veces mayor que todas las clulas eucariotas que existen en sus tejidos. Se estima que el organismo contiene alrededor de 1.014 clulas, de las cuales slo el 10% son de mamfero; por lo tanto, el 90% de nuestro cuerpo est constituido por bacterias. A este conjunto de microorganismos que habitan el intestino se le conoce como microflora, microbiota intestinal o simplemente como microbiota (1,3-8). Se define a la microbiota intestinal como un ecosistema abierto que comprende una amplia variedad
de poblaciones microbianas metablicamente activas que coexisten en una regin espacio temporal definida y que juegan un importante papel en la salud del husped. Estas bacterias en conjunto pueden ser consideradas como un rgano metablico del cuerpo que, adems, tiene las propiedades de ser adaptable y rpidamente renovable (2,3,9). El intestino humano aloja entre 300 y 500 especies de bacterias cultivables pertenecientes a ms de 190 gneros, aunque el 99% de la poblacin total est representada por tan slo de 30 a 40 de estas especies (1,2,5,10,11). En el tracto intestinal se han descrito al menos cuatro diferentes tipos de hbitat: a) el lumen intestinal; b) el gel o placa de moco que recubre el epitelio en toda su extensin; c) las capas profundas de moco encontradas en las criptas intestinales; y d) la superficie de las clulas epiteliales mucosas. En estos sitios radican bacterias, o se encuentran en trnsito, y aunque siem37
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pre es difcil o a veces imposible determinar si un microbio en particular es un habitante constante de un sitio especfico del intestino, para diferenciarlos, al que reside en el hbitat se le conoce como indgena o comensal, si coloniza el intestino slo bajo circunstancias anormales es un alctono, al que no logra establecerse en el intestino se le nombra como microorganismo de trnsito y a los que se implantan slo en situaciones de desequilibrio de la microbiota, como patgenos y oportunistas (1,2). Las bacterias comensales se encuentran distribuidas a todo lo largo del tubo digestivo en cantidades que se relacionan con su capacidad para adaptarse al ambiente que lo circunda y, una vez establecidas, sus poblaciones son estables y no necesitan de reintroducciones peridicas de bacterias cuando logran que su reproduccin iguale o supere la velocidad de eliminacin del organismo que las alberga (1). Por esta razn el nmero de unidades formadoras de colonias bacterianas (UFC) es alto en la boca, desciende de forma significativa en el estmago, y se incrementa paulatinamente conforme se desciende hacia el recto, para alcanzar su nivel ms alto en el colon (Fig. 1). Adems de las condiciones ambientales del tubo digestivo, la cantidad y variedad de las bacterias en las diferentes regiones del mismo est determinada por una gran diversidad de factores complejos intrnsecos y extrnsecos (1) (Tabla I). As como el hus-
TABLA I FACTORES QUE AFECTAN A LA MICROBIOTA INTESTINAL
1. Factores mediados por el husped pH, secreciones (inmunoglobulinas, bilis, enzimas) Motilidad intestinal Clulas exfoliadas, mucinas, tejido exudado 2. Factores microbianos Adhesin Motilidad Flexibilidad nutricional Esporas, cpsulas, enzimas y componentes atimicrobianos 3. Interacciones microbianas Sinergia Cooperacin metablica Factores de crecimiento y excrecin de vitaminas Cambios en el EH, pH y tensin de oxgeno. Antagonismo/estimulacin cidos grasos de cadena corta/aminas Componentes antimicrobianos, sideroforos Requerimientos nutricionales 4. Dieta Composicin Fibras no digeribles Compuestos nitrogenados Leche materna 5. Drogas Modificadores de la motilidad intestinal Antibiticos Anticidos y bloqueadores de la produccin de HCL
(Modificado de Holzapfel WH y cols. Int J Food Microbiol 1998; 41: 85-101).
Duodeno 103- 104 CFU/ml Streptococcus Staphylococcus Lactobacillus
Boca Peptostreptococcus Fusobacterium Bacteroides Estmago <103 CFU/ml Streptococcus Staphylococcus Lactobacillus Algunos hongos
ped directa o indirectamente influye sobre la microbiota que habita su intestino, sta tambin tiene un impacto importante sobre el organismo que la aloja y estos efectos puede ser beneficiosos o perjudiciales para la salud del individuo (5), razn por la cual es necesario conocer estas interacciones para fomentar el crecimiento de las especies bacterianas que sean beneficiosas para el ser humano. El objetivo de esta revisin es dar a conocer algunos aspectos de la colonizacin, composicin, funciones y recambio de la microbiota intestinal del nio y los efectos que sobre estos aspectos tienen los componentes de la dieta ingerida en etapas tempranas de la vida.
leon 106- 1010 CFU/ml Coliformes Bacteroides Bifidobacterium Clostridium
Colon 1011- 1012 CFU/ml Bacteroides. Bifidobacterium Clostridium. Enterococcus
COMPOSICIN DE LA MICROBIOTA EN EL TUBO DIGESTIVO
Fig. 1. Microorganismos del sistema gastrointestinal. Modificado de Young y cols. J Pediatr Health Care 2003; 17: 27783.
La microbiota del tubo digestivo difiere en el tipo y nmero de microorganismos dominantes en cada uno de sus segmentos y existen diferencias geogrficas e individuales importantes, a pesar de lo cual existe un patrn de colonizacin ms o menos comn para todos los seres humanos (6).
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LA MICROBIOTA INTESTINAL EN EL NIO Y LA INFLUENCIA DE LA DIETA SOBRE SU COMPOSICIN
Cavidad bucal Debido al pH ms o menos alcalino de la boca, la microbiota es diversa y se estima que existen aproximadamente 500 especies diferentes. La microbiota encontrada difiere en cada sitio anatmico y su composicin est altamente relacionada con el estado clnico de las encas y los dientes, por lo que en una boca sana existen principalmente especies anaerobias Gram (+); en los huecos gingivales se encuentra una alta proporcin de bacterias anaerobias facultativas Gram (+) (Prevotella spp, Veillonella spp y Fusobacterioum spp) y en la regin supragingival se hallan sobre todo bacterias anaerobias facultativas Gram (+) (Streptococcus spp y Actinomyces spp) (1011 UFC/g de contenido). En las enfermedades periodontales la microbiota est integrada principalmente por especies Gram (-) anaerobias estrictas. La lengua es reservorio de especies anaerobias obligadas y aunque las bacterias no crecen en la saliva, s estn presentes en ella en altas concentraciones (ms de 108 UMF/mL) y la utilizan como medio de transporte para dirigirse a otros lugares del tracto digestivo (10).
tidades considerables de lactobacilos, debido al epitelio escamoso estratificado de esta zona y a la capacidad de adhesin de estas bacterias (1). En el yeyuno e leon existe un incremento continuo en el nmero (>108/g) y variedad de la microbiota con lo que, adems de las bacterias cido lcticas, aparecen un nmero considerable de bifidobacterias, grupos de anaerobios facultativos (Bateroides y Fusobacterium) y los anaerobios estrictos estn presentes en nmero creciente a partir de la vlvula ileocecal (2). La microbiota en la parte distal del intestino delgado es mucho ms densa (>109 UFC/mL) y se asemeja a la del ciego con gran cantidad de bacterias anaerobias obligadas y es considerada una zona de transicin (1,5,10).
Colon y recto El intestino grueso es considerado el lugar primario de la colonizacin bacteriana y tiene la ms alta densidad y diversidad de microbios en el cuerpo humano. El estudio de su composicin se realiza en las heces ya que parece ser que la microbiota que se encuentra en las mismas es muy semejante a la del colon y recto (10). Se han comunicado recuentos totales de 1010 a 1012 UFC/ g de heces y una gran proporcin de la masa fecal (60% de los slidos) est constituida por bacterias. No obstante, la verdadera extensin de la microbiota del colon no es conocida debido a que muchos microorganismos no pueden ser cultivados (5). As se estima que existen entre 400 y 500 gneros y especies bacterianas en el colon, donde los anaerobios predominan sobre los aerobios en una razn de 100: 1.000 (6,10,12) y se ha establecido que en los adultos los Bacteroides son las especies ms comunes (1011), seguidos por microorganismos Gram (+) no esporulados (109 a 1010) como Eubacterium, Lactobacillus, cocos anaerobios (Peptostreptococcus, Ruminococcus, Coprococcus, Veillonella, Acidaminococcus y Streptococcus), y el gnero Clostridium (107-108 UFC/g). En el intestino grueso son comunes los microorganismos anaerobios facultativos (Streptococcus y Enterococcus) as mismo, Escherichia coli es la bacteria anaerobia facultativa Gram (-), la (108/g de heces) que ms se aisla; otros microorganismos Gram (-) como Klebsiella pneumoniae y Enterobacter cloacae tienen recuentos menores. Diversos bacilos, Staphilococcus aureus y Candida albicans se aislan en una concentracin de 105/g de heces (10). Los pocos estudios realizados en relacin con la composicin de la microbiota asociada a la mucosa del colon sugieren que las poblaciones epiteliales son similares a las del lumen aunque en cantidades menores (106-1010). Las eubacterias, bifidobacterias (B vulgatus,
Estmago y duodeno La mayora de las bacterias deglutidas no sobreviven en el estmago porque el jugo gstrico es extremadamente cido (2,5 a 3,5) y generalmente est libre de bacterias, no obstante inmediatamente despus de las comidas el pH aumenta y el recuento microbiano aumenta hasta 105 UFC/mL con un descenso posterior a 103 UFC/mL. Las bacterias que sobreviven al estmago son especies cido-tolerantes e incluyen Gram (-) (Estreptococcus, Lactobacilos y levaduras) y Helicobacter pylori (10). Debido a lo agresivo de los lquidos intestinales y el tiempo corto de trnsito, es difcil la colonizacin estable de las bacterias en el lumen con lo que el duodeno tambin representa un ambiente hostil y contiene un nmero relativamente bajo de microbios meramente de trnsito (103 a 104 UFC/mL) (2,6).
Intestino delgado Desde el duodeno hacia abajo, la composicin de la microbiota se conoce poco debido a las dificultades inherentes a la toma de muestras en sujetos sanos, pero dado lo agresivo del medio la microbiota es escasa y contiene usualmente menos de 105 UFC por mL. En el intestino delgado proximal, adems de las especies encontradas en el estmago se aislan tambin Haemophilus sp, Actinomyces sp, algunos anaerobios (Veillonella sp y Bacteroides sp) y can-
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O. THOMPSON CHAGOYN ET AL. TABLA II EFECTO DE LOS NUTRIENTES SOBRE LA MICROBIOTA INTESTINAL
ALIM. NUTRI. SALUD
Nutrimento Protenas y aminocidos Leche humana Productos hidrolticos de casena Glicoprotenas Nitrgeno (proteico y no proteico) IgAS Lisozima Protenas de otros alimentos Histidina, metionina, valina, isoleucina, prolina y leucina Nucletidos Hidratos de carbono Celulosa, xilano y pectina Fructooligosacridos Oligofructuosa, inulina y lactilol Oligosacridos de leche humana Maltodextrinas Fibra diettica Lpidos Grasas saturadas y colesterol Ganglisidos
Efecto sobre la microbiota
Estimulan crecimiento de Bifidobacterium
Efecto antiadhesivo sobre E. coli, Vibrio cholerae, Streptococcus pneumoniae, Salmonella Fija peptidoglicanos de pared celular y favorece la accin de anticuerpos contra E. coli Aumentan Clostridium, Bacteroides y Fusobacterium Inhiben crecimiento de Clostridium y la produccin de toxinas Estimula crecimiento de Bifidobacterium
Sirven de fuente de energa para las bacterias Estimulan Bifidobacterium, e inhibe Clostridium difficile y a la elaboracin de sus toxinas Favorecen crecimiento de Bifidobacterium y restringen los de E. coli y Clostridium Dificultan la adhesin bacteriana Favorecen crecimiento de enterococos Favorece crecimiento de anaerobios totales y Clostridium
Aumentan la susceptibilidad a padecer enfermedad por Clostridium difficile Inhiben la actividad de las enterotoxinas de E. coli y Vibrio cholerae
Minerales Calcio y fsforo Hierro: lactoferrina
Protegen contra infeccin por Salmonella Inhiben crecimiento bacteriano Favorece crecimiento de Bifidobacterium, Bacteroides, Enterococcus y anaerobios totales Inhibe crecimiento de Clostridium sp
B distasonis y B fragilisson), Clostridium y los cocos Gram (+) son las especies dominantes (10,13). En el lactante, adems de la Eubacterias, las Bifidobacterias B. bifidum, B. longum, B. adolescentes y B. animalis representan las especies ms importantes (14). En el lumen las bacterias pueden vivir en forma separada pero el examen microscpico muestra que la mayora no se encuentran dispersas, sino en grandes conglomerados que atacan las estructuras de los restos alimentarios slidos. El anlisis microbiano de las partculas de alimento parcialmente digerido muestra que las poblaciones bacterianas crecen en superficies particulares y, al menos fsicamente, las poblaciones son similares a la microbiota no adherente con predominio importante de bacteroides y bifidobacterias (13).
Por ltimo, se ha encontrado que la microbiota asociada a la mucosa del recto es aproximadamente la misma que en el colon (10).
IMPORTANCIA Y FUNCIONES DE LA MICROBIOTA INTESTINAL
Se conoce como microbiota normal a todas aquellas especies de microorganismos que se encuentran en el intestino de individuos sanos y que poseen una o varias funciones que pueden ser beneficiosas o perjudiciales para la salud del husped (8). Estas funciones se dividen en metablicas, trficas y de proteccin (5,8).
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1. Funciones metablicas. El metabolismo microbiano es responsable de la conversin de muchas sustancias energticas en nutrientes que pueden ser absorbidos y utilizados por el husped (5). La microbiota del intestino grueso juega un papel importante en los procesos digestivos del husped, generando energa de los residuos alimentarios no absorbidos, de las clulas de descamacin intestinal y de las secreciones a travs de la fermentacin de los hidratos de carbono y protenas, as como de la absorcin de los cidos grasos de cadena corta y otros productos metablicos (13), que son utilizados por el husped para suplir parte de su requerimiento de energa y por la microbiota para mantener su crecimiento y proliferacin (6). Las dietas que se consumen tpicamente en Europa aportan para la fermentacin bacteriana entre 50 y 60 gramos de hidratos de carbono al da, los cuales producen 0,5 a 0,6 moles de cidos grasos de cadena corta con un valor energtico total de 140 a 180 kilocaloras, que representan aproximadamente el 10% del requerimiento calrico basal del individuo (5). Esta funcin es tan importante que los roedores gnotobiticos, para mantener su peso, necesitan ingerir 30% ms de energa que los animales con microbiota, lo que prueba que las bacterias intestinales ayudan al husped a extraer el mximo valor energtico de los alimentos (5,11). Se calcula que el epitelio colnico obtiene entre el 60 y el 70% de sus necesidades energticas (5). La microbiota tambin contribuye a la homeostasis de los aminocidos en el husped. En aquellos animales no rumiantes ni coprfagos la protena microbiana no se utiliza en gran medida por el husped; sin embargo, una pequea cantidad de los requerimientos de ciertos aminocidos es proporcionado por la sntesis bacteriana. Este hecho fue observado al marcar aminocidos con N15 y encontrar que entre el 1 y 20% de la lisina y la treonina circulantes de estos animales deriv de las bacterias intestinales (2,15). Tambin se ha descrito que algunas bifidobacterias marcadas con N15 y administradas por va bucal, al ser destruidas en el lumen, aproximadamente el 90% de las protenas liberadas son absorbidas por el intestino y el 70% se retienen en el organismo (16). Los productos de la fermentacin bacteriana han sido implicados en la motilidad, la circulacin y la estimulacin del flujo intestinal y viceral que modulan la maquinaria metablica intrnseca de las clulas del husped, resultando en una ms eficiente absorcin del agua, calcio, magnesio y hierro (2,5,6,7,17). Adems de su capacidad para metabolizar numerosos polisacridos de plantas, tambin degradan una gran variedad de glicoconjugados derivados del husped (condroitn sulfato, mucina, hialuronato y heparina) (5). Finalmente, los microorganismos colnicos tambin producen vitaminas (17) por lo que los ratones gnotobiticos necesitan suplementos de
vitaminas K, B y folato, que son producidas por los bacteroides, eubacterium, propionibacterium y fusobacterium (2,18). 2. Funciones trficas. Posiblemente el papel ms importante de la microbiota intestinal sobre la fisiologa colnica es su efecto trfico en el epitelio intestinal (6). La diferenciacin de las clulas epiteliales est afectada en gran medida por la interaccin con los microorganismos residentes (19) y sus productos metablicos, principalmente por los cidos grasos de cadena corta (butirato, acetato y propionato) que estimulan la proliferacin y diferenciacin de las clulas epiteliales en el intestino humano (20). Adems, el acetato es utilizado por los msculos esqueltico y cardiaco para obtener energa y por los adipocitos para la lipognesis (5). 3. Funciones protectoras. Es conocido que la microbiota intestinal indgena representa una barrera formidable para el establecimiento de poblaciones patgenas en el husped. Este fenmeno es conocido como interferencia bacteriana, e incluye la produccin de bacteriolisinas, productos metablicos y otras condiciones inhibitorias como disminucin del pH y deplecin de los nutrientes requeridos para la multiplicacin de los patgenos. A todos estos mecanismos se les conoce como efecto mucoso de barrera (21). Efecto mucoso de barrera: el epitelio intestinal acta como una barrera natural para el movimiento de bacterias patgenas, antgenos y sustancias txicas del lumen intestinal. Esta barrera es sorprendentemente efectiva considerando las grandes cantidades de bacterias no residentes que entran al tubo digestivo diariamente; se ha estimado que el nio puede estar expuesto a alrededor de 500 a 1.000 antgenos diferentes entre los 6 y 12 meses de edad (2,21) y la mayora de ellos son excluidos por la mucosa intestinal, por lo que su integridad es necesaria para prevenir el transporte incontrolado de antgenos. El 90% de los antgenos de la dieta hace que se genere una respuesta disminuida durante el desarrollo posnatal, pero cuando la permeabilidad de la barrera est incrementada, como en los recin nacidos pretrmino, puede favorecer a la invasin de patgenos y el paso de otras sustancias dainas que conducen a una respuesta inmune aberrante y a la sensibilizacin. La modulacin del transporte de antgenos ha sido atribuda a los Lactobacilli ya que la absorcin intestinal de antgenos disminuye de manera importante en ratas tratadas con estos microorganismos (18). Se han descrito dos formas de efecto mucoso de barrera: la drstica, que elimina completamente las cepas bacterianas exgenas y la permisiva, que permite la implantacin de microorganismos en bajas cantidades (10). Los mecanismos que emplean las bacterias para realizar esta funcin incluyen la competencia por adherirse a las clulas epiteliales, con lo que previenen el ataque y la penetracin de patge41
ALIM. NUTRI. SALUD
nos enteroinvasivos a dichas clulas (6); esta funcin es esencial para el equilibrio de la microbiota intestinal, la actividad enzimtica bacteriana y la estabilizacin de la permeabilidad intestinal (22). La adhesin puede ser inespecfica por factores bioqumicos o, especfica, mediante molculas de adhesin en la superficie de las bacterias y receptores en las clulas epiteliales. Las bacterias comensales tambin inhiben el crecimiento de sus competidores mediante la produccin de sustancias antimicrobianas llamadas bacteriocinas (23,24) que son pptidos tambin conocidos como autobiticos y que se expresan de forma especfica para cada especie (25). La interfase entre el husped mamfero y la microbiota es la placa de gel mucoso y las clulas de recubrimiento (glicocalix), que consisten en glicoconjugados en la superficie apical del epitelio. La microbiota puede influenciar la expresin de estos glicoconjugados endoteliales utilizados como receptores de fijacin por los microorganismos patgenos con lo que impide su establecimiento en el husped (2). Otros mecanismos con los que las bacterias intestinales protegen al husped son la induccin de la produccin de inmunoglobulina A secretora (IgAs) contra de algunos patgenos, la restauracin de algunos comensales daados y la disminucin de la produccin de enterotoxinas sin disminuir el nmero de grmenes agresores (2,21,26). La proteccin contra los agentes infecciosos se completa intrnsecamente por el tejido linfoide asociado a la mucosa intestinal (GALT), considerado como el rgano inmune ms extenso del cuerpo humano ya que el 80% (1010) de todas las clulas que producen inmunoglobulinas se encuentran en este tejido linfoide (2,6). El GALT consiste en acumulaciones difusas de tejido linftico presentes en la lmina propia de la pared intestinal y en la placa epitelial (27) y se ha encontrado que la colonizacin bacteriana del tracto gastrointestinal afecta de forma directa la composicin del GALT, ya que despus de la exposicin a microbios luminales el nmero de linfocitos intraepiteliales se expande de forma significativa, los centros germinales con clulas productoras de inmunoglobulinas aumentan rpidamente en los folculos y la concentracin de inmunoglobulinas se incrementa sustancialmente en suero (28). Se ha observado que los animales en ambientes gnotobiticos tienen bajas densidades de clulas linfoides en la mucosa intestinal, las estructuras foliculares especializadas son pequeas y la concentracin de inmunoglobulinas circulantes es baja (28,29). La multiplicidad y complejidad de la microbiota intestinal es importante, no slo para la expansin del sistema inmune sino tambin para su especializacin, por lo que es muy difcil inducir tolerancia inmunolgica en animales gnotobiticos con una respuesta inmune especfica reducida o casi nula, secundaria a la ausencia de microbiota intestinal (21). La relacin entre el GALT y la microbiota intestinal en etapas tempranas de la vida es crucial para el desarrollo apropiado de las interacciones entre
los distintos tipos celulares de la mucosa y la inmunorregulacin sistmica (6). La maduracin ulterior del GALT requiere de estmulos constantes de bacterias de la microbiota intestinal y numerosos estudios han mostrado que la supresin o inadecuacin de tales estmulos conduce a una disminucin de la superficie intestinal, alteracin de los patrones enzimticos de la mucosa, defectos en la barrera no inmune del intestino, capacidad reducida de la respuesta inflamatoria, un sistema defectuoso de IgAs, abrogacin de la tolerancia oral y falta de respuesta a los antgenos no patgenos previamente encontrados en las superficies mucosas (1,30). La respuesta inmune a los microbios tiene componentes innatos y adaptativos; el sistema inmune innato discrimina entre patgenos potenciales y bacterias comensales mediante el uso de receptores preformados (6). El GALT responde de dos formas a los antgenos que llegan al intestino: una positiva (inmunidad contra organismos patgenos) y otra negativa (a gran cantidad de antgenos alimentarios y de bacterias en el ambiente mucoso). La tolerancia a una gran cantidad de antgenos previene al sistema inmune de una respuesta inmune excesiva. Algunos productos de la pared celular bacteriana [el peptidoglicano de las bacterias Gram (+) y Gram (-) y el lipopolisacrido de las Gram (-)] activan la inmunidad no especfica y pequeas cantidades de estos compuestos, adems de una secuencia especfica de DNA bacteriano (CpG), se liberan continuamente en la luz intestinal y parece ser que son importantes para el mantenimiento, desarrollo, funcin y adquisicin de tolerancia inmune (13,21,27,31). La microbiota es necesaria para la induccin de tolerancia a los antgenos, lo cual se ha comprobado con experimentos en ratones gnotobiticos en los cuales la tolerancia oral slo se obtiene cuando la microbiota intestinal es reconstituida con bifidobacterias durante el periodo neonatal (31). Cuando el balance establecido por la microbiota se rompe, se produce la enfermedad que en el intestino se manifiesta como diarrea y a nivel sistmico como atopia y asma. Enfermedad diarreica: las infecciones gastrointestinales generalmente son producidas por virus y bacterias como Escherichia coli, Campilobacter sp, Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, Salmonella sp, Shigella sp, Listeria sp, Yersinia y algunos protozoarios, aunque tambin puede ser ocasionadas por oportunistas como Candida albicans o Clostridium difficile (10). Algunas cepas bacterianas del intestino, sobre todo los lactobacilos, previenen la aparicin o disminuyen la duracin del cuadro diarreico, sobre todo cuando es producido por rotavirus ya que estabilizan la mucosa intestinal, aumentan la actividad fagoctica y reducen la excresin fecal de virus (6,18,32). La administracin de lactobacilos previene o mejora el cuadro diarreico, lo que prueba que son unos de los encargados de evitar la colonizacin por patgenos.
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Enfermedades atpicas y asma: existen datos de que el estmulo inicial y posterior de la microbiota intestinal sobre el sistema inmune puede tener un efecto importante sobre el desarrollo de atopia (33). El recin nacido posee una respuesta humoral dominante (tipo Th2) y este estado es transformado a una inmunidad celular posiblemente debido a infecciones durante la infancia. La primera exposicin a un patgeno forneo estimula la respuesta inmune innata, que es no especfica, y se liberan mediadores como las citocinas. La inmunidad especfica o adaptativa involucra linfocitos con receptores de antgeno especficos que estimulan a su vez subespecies de linfocitos cooperadores Th (Th1 y Th2). Las citocinas secretadas por las clulas Th1 estn involucradas en la inflamacin y activacin de clulas T citotxicas (34) y este tipo de inmunidad est acrecentada por respuestas inmunes inducidas por microbios que incluyen esporas y hongos (35). De acuerdo con la hiptesis de la higiene, las infecciones tempranas pueden preparar la inmunidad inmadura de los nios para enfrentarse con los alergenos y reducir la prevalencia de alergia cambiando la respuesta Th2 por una respuesta Th1, y se ha sugerido que el desarrollo de la microbiota intestinal es crucial para la maduracin de la inmunidad de los menores (36). Experimentos con animales gnotobiticos muestran que su sistema inmune se expande rpidamente en relacin directa con la colonizacin de su intestino con microbios (21), por lo que esta hiptesis tambin propone que el incremento de la prevalencia y severidad de las enfermedades alrgicas en los pases desarrollados, es debido a que los nios estn expuestos con menos frecuencia a los microorganismos del tracto gastrointestinal durante su infancia (21,35,36), ya que la exposicin a cepas especficas de la microbiota comensal pueden representar la llave moduladora del sistema inmune contra la atopia y las enfermedades atpicas (31,37). Debido a esto se adjudica a la microbiota un efecto regulador en la maduracin del sistema inmune (38,39) y que durante las etapas tempranas de la vida la buena higiene provoca una baja maduracin del sistema inmune con el consecuente retardo en la obtencin del balance entre la inmunidad Th1 y Th2 (1,2,40). Se ha encontrado que diferencias en la microbiota intestinal preceden al desarrollo de atopia y el hallazgo caracterstico es una menor razn, bifidobacterias:clostridios (31,41). Los resultados de un estudio comparativo entre nios alrgicos de Estonia demuestran diferencias en la microbiota intestinal, asocindose una mayor incidencia de alergia con una menor presencia de Lactobacilli y mayor de Clostridium (42). Otros estudios encuentran en nios alrgicos una mayor cantidad de Clostridium y menor cantidad de bacterias productoras de cido lctico (36,43). Estudios recientes demuestran el efecto benfico de los Lactobacilli sobre la enfermedad alrgica inflamatoria y la alergia alimentaria (44,45).
SECUENCIA DE LA COLONIZACIN BACTERIANA EN EL INTESTINO DEL NIO
Colonizacin inicial El feto humano y el recin nacido se consideran libres de bacterias (1,5,10). Sin embargo, se encuentran pequeas cantidades de microorganismos inmediatamente despus del nacimiento (5 x 104 a 5 x 105) y las bacterias ms frecuentemente aisladas son Staphylococcus, Streptococcus, Propionibacterium y Corynebacterium. Cuando las membranas amniticas se rompen, las bacterias de la microbiota intestinal y vaginal materna tambin pueden aislarse (31). Bajo circunstancias normales, la colonizacin inicial del intestino del nio ocurre durante el parto al ponerse en contacto con la microbiota vaginal de su madre y posteriormente por el contacto con la microbiota normal de sus padres. Esto lleva a la inoculacin con bifidobacterias, enterobacterias, bacteroides, Clostridium y cocos Gram positivos (41). Un hallazgo constante es que todos los nios son inicialmente colonizados por E. coli y Streptococcus que a veces alcanzan cifras de 108 a 1010 UFC/g de heces, por lo que se ha propuesto que son las responsables de la creacin de un ambiente favorable para el establecimiento de los anaerobios de los gneros bifidobacterium, bacteroides y clostridium entre los 4 y 7 das de vida (1). As mismo, el tipo de nacimiento tiene un efecto significativo en el desarrollo de la microbiota intestinal. Nacimiento vaginal: normalmente la colonizacin se inicia durante el parto por exposicin a la microbiota de la madre; a esta forma de adquisicin microbiana se le conoce como transmisin vertical y a las posteriores como transmisin horizontal (11). Con el largo proceso del nacimiento por va vaginal se hace ms viable el aislamiento de microbios en el estmago y la boca del beb. De hecho inmediatamente despus del nacimiento, es posible aislar de la nasofaringe del 62% de los recin nacidos, bacterias que fueron aisladas en la vagina de sus madres antes del inicio del parto, y los microorganismos encontrados en el contenido gstrico del neonato entre los 5 y 10 minutos posteriores al nacimiento, son similares a los aislados en el crvix de la madre antes del parto (1, 21). Se han encontrado ms de 18 grupos diferentes de bacterias en el tracto gastrointestinal inferior de la mujer embarazada y esas son las principales bacterias a las que est expuesto el recin nacido, siendo la E. coli y el Strepcococcus las que con frecuencia se aislan del tracto digestivo del nio (1). En los neonatos las bacterias aparecen en las heces durante el primer da de vida, siendo las prime-
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ras E. coli, Streptococcus y Enterocuccus sp; los bifidobacterium aparecen alrededor del da 3 de vida extrauterina. Hacia el dcimo da postnatal, la mayora de los neonatos sanos a trmino estn colonizados por una microbiota bacteriana heterognea, en donde predomina bifidobacterium en los alimentados al pecho y una microbiota mixta en los que reciben frmula (1,46). Nacimiento por cesrea: estos nios inician la vida prcticamente sin bacterias. El primer contacto con ellas es fortuito y los microorganismos son introducidos del ambiente por el equipo hospitalario (46). Los nios nacidos por cesrea pueden tambin estar expuestos a los microbios de su madre, pero la exposicin inicial es ms frecuente con grmenes del ambiente (equipo, aire y otros nios) siendo el vector personal el de enfermera (1). Existen datos de que las mismas cepas de bifidobacterium se detectaron en las heces de nios nacidos en el mismo hospital, lo que sugiere una forma de transmisin horizontal (11). Despus del nacimiento, los microbios ambientales, orales y cutneos pueden ser transferidos mecnicamente de la madre al recin nacido por varios mecanismos tales como la succin, los besos y el cuidado materno (1). En estos nios, la colonizacin anaerobia es generalmente retardada y la microbiota est compuesta por bacterias microaeroflicas, anaerobios facultativos y bacterias esporuladas (Clostridium) que se encuentran en el medio hospitalario. Entre los das 4 y 6, todos los nios nacidos por va vaginal son colonizados por bacterias anaerobias pero slo el 9% de los nacidos por cesrea tienen estas bacterias (10). Los microorganismos introducidos durante los primeros siete das de vida tienen una baja capacidad de colonizacin y la adquisicin de bacteroides anaerobios est retrasada. Anteriormente se crea que la colonizacin por bifidobacterias y E. coli era similar a la de nios nacidos por va vaginal (46), pero ahora se sabe que en pases con buenas medidas de higiene transcurre un lapso considerable de tiempo antes de que se implanten E. coli y otras bacterias Gram (-) (21), y que en los nios de pases en vas de desarrollo se encuentra una fuerte exposicin y adquisicin de bacterias en etapas tempranas de la vida (1,46).
permiten el crecimiento de anaerobios estrictos, los cuales aumentan paulatinamente durante la primera semana de vida, an y cuando en los primeros das los alimentados al pecho muestran un recuento superior de colonias, debido a la contaminacin por la leche y la piel maternas. La leche contiene bacterias cido lcticas, entre las que predominan L. gaseri y E. faecium y es una fuente natural de bacterias para el intestino del recin nacido (47). Las principales especies aisladas durante esta etapa son: Staphylococcus aureus (4%), S. epidermidis (20%), S. fecalis (30%), S. faesium (10%), S. no hemoltico (10%) y Enterobacteriaceae [E. coli (20%), Klebsiella aerogenes (20%), Proteus mirabilis (2%), Enterobacter cloacae (1%), Serratia sp (1%) y Pseudomona aeuroginosa (0,5%)]. Las bacterias aerobias facultativas son seguidas de cerca por Bifidobacterium sp (46). Durante el primer ao se establece un patrn parecido al del adulto y se desarrolla el tejido linfoide asociado a la mucosa intestinal (GALT) que se convierte en el rgano ms importante del sistema inmune adaptativo (31).
Colonizacin a partir del segundo ao La microbiota del colon de los nios es generalmente vista como casi idntica a la de los adultos a partir de los 2 aos de edad (10), si bien los anaerobios facultativos se encuentran en mayor concentracin que en el adulto, lo que est de acuerdo con la observacin de que la microbiota no se iguala a la del adulto hasta la niez tarda. Se ha descrito que una vez que se ha establecido el clmax de la microbiota, los grupos mayores de bacterias en las heces permanecen relativamente constantes durante el tiempo (48). Y hacia el final de segundo ao de vida, la microbiota del nio forma placas densas que actan en forma efectiva como barrera para la colonizacin de la microbiota exgena y alcanzan una velocidad de replicacin que sobrepasa los mecanismos de eliminacin bacteriana del husped (1,10). La evolucin de la microbiota en funcin del tiempo se presenta en la figura 2.
DIVERSIDAD DE LA MICROBIOTA EN FUNCIN DE LA DIETA
Colonizacin durante el primer ao de vida Leche materna vs frmula En todos los casos existe un aumento del nmero de bacterias en la primera semana; durante este tiempo se obtienen recuentos bacterianos de 109 UFC/g, sin que influya la va de nacimiento. Esta similitud se debe a que, al nacer, el ambiente en el intestino del nio muestra un potencial redox positivo, que permite la colonizacin inicial con anaerobios facultativos que a su vez disminuyen este potencial y
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La colonizacin se inicia en el momento del nacimiento y ocurre en pocos das. El tipo de nacimiento (cesrea o parto) y la dieta (pecho o frmula) pueden afectar el patrn de colonizacin (41,49) y entre los factores involucrados en la colonizacin bacteriana, el tipo de leche juega un factor de primer orden (10).
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12 10 8 6 4 2 0 Al nacer 1 semana 1 mes 1 ao 2 aos

+ +
UCF/g de heces
Gram (+) Escherichia coli Lactobacilos Bacteroides Bifidobacterias
Clostridium
Edad
Fig. 2. Evolucin de la microbiota en funcin del tiempo.
La sucesin de microorganismos en las heces de los nios alimentados con frmula es marcadamente ms alta en bacterias aerobias facultativas (Staphylococcus, Streptocuccus, Enterobacteriaceae) y la colonizacin por Bifidobacterium se inicia generalmente algunos das despus. Los bacteroides predominan entre los anaerobios y se encuentra una gran cantidad de Enterobacteriaceae (46). Despus de la primera inoculacin, la microbiota cambia rpidamente, presumiblemente bajo la influencia de la dieta. En los nios alimentados de forma exclusiva con leche materna en pocas semanas la microbiota es dominada por las bifidobacterias, posiblemente causado por factores estimuladores de su crecimiento presentes en la leche humana (41).
incremento paralelo de bacteroides y anaerobios Gram (-) (15,50). La introduccin de alimentos slidos a los nios alimentados con leche materna causa un gran disturbio en la microbiota intestinal; los recuentos de enterobacterias aumentan considerablemente, ocurriendo al mismo tiempo la colonizacin por bacteroides y Clostridium. Este fenmeno no se observa en nios alimentados con frmula; en los que, la cantidad de anaerobios facultativos permanece alta a pesar de que la colonizacin por anaerobios estrictos contina (1,10,46).
Inicio de alimentos diferentes a la leche (beikost) Despus de la introduccin de alimentos slidos las bifodobacterias no son ya dominantes y las diferencias en la microbiota se pierden y su composicin es semejante a la del adulto. Durante el 2 ao de vida aumenta gradualmente el nmero de bacteroides, cocos Gram (+) y anaerobios (Peptococcus y Peptoestreptococcus) (1,41). Entre los 4 y los 24 meses de edad se introducen en la dieta del nio una gran variedad de alimentos y se pierden las diferencias en la microbiota entre los nios alimentados al pecho materno y con frmula, existiendo un incremento de enterobacterias, principalmente E. coli, Enterococcus y Clostridium con
COMPONENTES ESPECFICOS DE LA DIETA Y CRECIMIENTO DE LA MICROBIOTA INTESTINAL
Protenas y aminocidos Se ha encontrado que varios de los componentes de la leche humana estimulan el crecimiento de Bifidobacterium, entre ellos destacan los productos hidrolticos de la casena, las glicoprotenas del suero, el nitrgeno (proteco y no proteco) y la lisozima, que adems fija los peptidoglicanos de las paredes celulares de las bacterias y, aunque no produce lisis de los microorganismos, si potencializa la accin de los anticuerpos especficos contra estas bacterias. De la misma manera, la IgAs tiene un efecto antiad45
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hesivo contra E. coli (16), Vibrio cholerae, Streptococcus pneumoniae, Salmonella y otras bacterias (51). Las protenas de la dieta pueden incrementar el nmero de Clostridium, bacteroides y ciertas fusobacterias (24). En animales de experimentacin se ha observado que ms que el origen de la protena dietaria, lo que influye sobre la microbiota es la composicin total de la dieta (52), aunque algunos compuestos como el dipptido aspartato-lisina en unin con el cobre inhiben la colonizacin por Clostridium perenne (17). Tambin se ha encontrado que algunos aminocidos (histidina, metionina, valina, isoleucina, prolina y leucina) en concentraciones altas juegan un papel importante en el crecimiento y produccin de toxinas de varias cepas de Clostridium (26). Nucletidos: tienen un papel importante en el funcionamiento normal del intestino, actuando como fuentes de energa en el metabolismo celular (53). En la leche humana existen al menos 13 nucletidos y se ha sugerido que son cofactores potenciales para el crecimiento selectivo de bifodobacterias, a pesar de que su adicin a las frmulas infantiles no produce un crecimiento de estas bacterias que se asemeje al de los nios alimentados al pecho. En las heces de los nios alimentados al seno materno existe mayor cantidad de bifidobacterias y menor de lactobacilos y bacteroides que en los alimentados con frmula lctea. Sin embargo, en las heces de los lactantes alimentados con frmulas suplementadas con nucletidos se encuentan valores intermedios en los recuentos de las bacterias anteriormente mencionadas, aunque ms cercanos a los de aquellos alimentados al pecho; la bacteria ms estimulada en su crecimiento fue Bifidobacterium adolescentis. Por ltimo, los nucletidos tambin favorecen la absorcin de hierro e inhiben el crecimiento de algunas enterobacterias (16).
parte mediante la adopcin de una microbiota intestinal que tiene la propiedad de degradar esas molculas (5). Los hidratos de carbono no digeribles modifican selectivamente la microbiota colnica, estos efectos han sido demostrados con los fructooligosacridos, que tienen un efecto bifidognico. Otros hidratos de carbono que estimulan el crecimiento de Bifidobacterium y a la vez mantienen bajas las poblaciones de bacterias potencialmente patgenas (E. coli y Clostridium) son la oligofructuosa, la inulina y el lactilol oligosacrido (9,54,55). En perros alimentados con manoligosacridos se aislaron en heces mayores cantidades de lactobacilos y menores de anaerobios fecales (56). Los oligosacridos de la leche humana son inhibidores potentes de la adhesin bacteriana a las superficies epiteliales y las maltodextrinas favorecen el crecimiento de los enterococos (53). En la leche materna se encuentra una cantidad importante de lactosa que probablemente tenga influencia en el crecimiento de algunos tipos de bacterias, ya que se absorbe ms lentamente que la lactosa y permite una mayor fermentacin (16). La oligofructuosa favorece el crecimiento de las bifidobacterias, disminuye el de E. coli, Clostridium perfringens y Clostridium ramnosus en el intestino de animales gnotobiticos a los que se les administr microbiota fecal de nios (57). De la misma forma, algunos componentes de la fibra diettica (goma arbiga y xilooligosacridos) favorecen el crecimiento de los anaerobios totales y Clostridium; adems, los fructooligosacridos promueven el crecimiento de bacterias acidognicas con lo que contribuyen a la prevencin del crecimiento de Clostridium difficile y a la elaboracin de sus toxinas (24,26).
Lpidos Hidratos de carbono La fuente principal de carbono y energa para las bacterias intestinales son los hidratos de carbono, junto con pptidos y otras sustancias de bajo peso molecular que escapan a la digestin y absorcin en el intestino delgado (13). Los hidratos de carbono que no son absorbidos ni digeridos en el tracto gastrointestinal superior llegan al colon y son utilizados por las bifidobacterias residentes (9). Los hidratos de carbono no absorbibles son metabolizados por las bacterias colnicas en cidos grasos de cadena corta que son rpidamente absorbidos. Entre estos hidratos de carbono no digeridos se incluyen los polisacridos componentes de clulas vegetales (celulosa, xilano y pectina), as como almidn no digerido. El problema del husped de obtener beneficio de esos polisacridos se resuelve en
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La colonizacin por algunos lactobacilos depende de la composicin y concentracin de los cidos grasos de la dieta (16); as, una dieta rica en grasas saturadas y colesterol, aumenta la susceptibilidad a padecer enfermedad por Clostridium difficile (25). Los ganglisidos se encuentran en la fraccin de membrana de los glbulos grasos y existe un perfil especfico de los mismos en la leche humana (58). Se cree que juegan un papel importante como falsos receptores contra bacterias patgenas durante la lactancia e inhiben la actividad de las enterotoxinas de E. coli y Vibrio cholerae; esta propiedad es atribuida principalmente al ganglisido GM1, el cual es aislado en muy bajas concentraciones en la leche humana y en cantidades 10 veces menores en la leche de vaca. En recin nacidos pretrmino alimentados con una frmula suplementada con ganglisidos se encontr que la cantidad de E. coli disminua y
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aumentaba el de bifidobacterias a los 30 das de vida extrauterina (16,58).
coli en medios deficientes de hierro, que es potenciado por la presencia de inmunoglobulinas, y existe evidencia de que la suplementacin con lactoferrina es efectiva para el control de algunas cepas de Clostridium (16,25). De la misma manera, en ratones gnotobiticos inoculados con microbiota de nios alimentados al pecho, con leche de vaca o frmula con protenas del suero, se encontr que, cuando se les adicion lactoferrina, en los alimentados con la dieta de protenas sricas se incrementaron las cantidades de bifidobacterium, bacteroides, enterococcus y anaerobios totales (25). Se ha observado que la administracin oral de lactoferrina bovina produce un efecto bacteriosttico sobre varias cepas de Clostridium (C. ramnosus, C. paraputrificum y C. perfringens) (25) l
Minerales
Calcio y fsforo: producen un efecto trfico en la microbiota que protege en contra de la infeccin por Salmonella por incremento de la resistencia a la colonizacin y la traslocacin. El calcio tambin estimula la fermentacin por la microbiota intestinal e incrementa junto con la lactulosa la toxicidad luminal para la Salmonella (16). Hierro: la lactoferrina reduce la disponibilidad de Fe y disminuye la proliferacin bacteriana. El sulfato ferroso de la dieta es oxidado a sulfato frrico que posteriormente puede ser quelado por la lactoferrina y no estar disponible para el crecimiento bacteriano. Se encontr que los nios alimentados con frmulas enriquecidas con hierro presentaban recuentos ms altos de E. coli en las heces y que la adicin de este microelemento tiene poco efecto sobre el crecimiento de bifidobacterias y no parece afectar en forma significativa el ecosistema intestinal en etapas tempranas de la vida. La lactoferrina tiene un efecto bacteriosttico sobre el crecimiento de E.
CORRESPONDENCIA: ngel Gil Hernndez Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular Facultad de Farmacia Campus de Cartuja 18071 Granada Tel.: 958 243 838 Fax: 958 248 960 e-mail agil@ugr.es
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Valoracin de la biodisponibilidad de folatos en la dieta

A. B. Olivares Martnez, M. J. Bernal Cava, G. Ros Berruezo, C. Martnez Graci, M. J. Periago Gastn
DEPARTAMENTO DE TECNOLOGA DE ALIMENTOS, NUTRICIN Y BROMATOLOGA. FACULTAD DE VETERINARIA. UNIVERSIDAD DE MURCIA
RESUMEN
ABSTRACT
l concepto de biodisponibilidad de folatos se utiliza para referirnos a la eficiencia en conjunto de la utilizacin, incluyendo los procesos fisiolgicos y bioqumicos involucrados en la absorcin intestinal, transporte, metabolismo y excrecin. Para ello es muy importante entender la qumica bsica de esta vitamina, as como la fisiologa y bioqumica de la utilizacin y funcin de los folatos, antes de intentar comprender y valorar la biodisponibilidad de estos compuestos. Existen diferencias entre individuos en cuanto a digestin, absorcin y metabolismo de folatos se refiere. Tambin se han comprobado diferencias en la biodisponibilidad de folatos dependiendo del alimento y/o del conjunto de la dieta ingerida. Se deduce as que son numerosos los factores que intervienen en la disponibilidad de los folatos ingeridos, y que no basta, por tanto, con conocer el contenido de folatos de la dieta, si no evaluar la cantidad que realmente ser aprovechada por el organismo.
olate bioavailability is a term used to describe the overall efficiency of utilization, including physiological and biochemical processes involved in intestinal absorption, transport, metabolism and excretion. Thus, it is important to understand the basic chemistry of this vitamine and, its phisiology and biochemistry of treatment and function of folates, before assessing folate bioavailability. There are variation among individuals in folate digestion, absorption and metabolism. It is showed different bioavailability depending on food and/or intake diet. Then, folate bioavailability is influenced by several factors and it is not enough to know the folate content in the diet, but to evaluate the real amount utilized by the body.
Palabras clave: Biodisponibilidad. cido flico. Folatos. Monoglutamatos. Poliglutamatos.
Key words: Bioavailability. Folic acid. Folates. Monoglutamate. Polyglutamate.
INTRODUCCIN El cido flico o vitamina B9 se considera esencial para muchos aspectos de la salud humana. En los ltimos aos han aumentado los estudios relacionados con esta vitamina, debido a su relacin con el riesgo de padecer enfermedades cardiovasculares (Boushy y cols., 1995), determinados tipos de cncer (Giovannucci y cols., 1993), y sndromes del sistema nervioso al nacimiento (Czeizel y cols., 1992).
Esta vitamina se encuentra ampliamente distribuida en la naturaleza en sus diferentes formas qumicas, la mayora de las cuales podemos hallar en nuestra dieta diaria. Se localiza en alimentos tales como hgado, verduras, pan, productos lcteos derivados y frutas. Las recomendaciones diarias para esta vitamina son de 200-400 g/da, correspondiendo el valor ms alto a los periodos periconcepcional y de gestacin, as como durante la lactancia. En muchos casos no se llega a ingerir esta cantidad, y adems se ha de tener en cuenta que parte de esta vitamina ingerida no es absorbida por el intestino y
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que, por tanto, no es biodisponible (Melse-Bonstra, 2003). Biodisponibilidad es un concepto ampliamente usado, sobre todo, en micronutrientes (vitaminas y minerales) y que podra ser definido como la proporcin del micronutriente ingerido que es usado y almacenado en el organismo. Es necesario conocer los procesos que influyen en la biodisponibilidad y llegar a entenderlos, con la finalidad de predecir qu alimentos seran una mejor fuente de folatos o no.
mayora de las enzimas folato-dependientes, usualmente exhiben una afinidad elevada por estas enzimas (Shane, 1989), y adems, son preferentemente retenidos por los tejidos. Los mamferos carecen de la capacidad de sintetizar folatos y necesitan su adquisicin a travs de la dieta. Los folatos presentes de forma natural son derivados reducidos, por lo que se deduce que el cido flico completamente oxidado no tiene lugar de forma natural en la naturaleza, por lo que en la dieta slo aparece cuando se toma en forma de suplementos o incluido en alimentos enriquecidos. En cuanto a estabilidad, los folatos reducidos son menos estables que el cido flico y vara dependiendo de la sustitucin de molculas un-carbono. Debido a su inestabilidad, se producen elevadas prdidas en los folatos de los alimentos durante la preparacin de los mismos, en especial durante el calentamiento, sobre todo si se realiza bajo condiciones oxidativas (Gregory, 1989). A esto, se deben unir las prdidas que ocurren por lixiviacin durante el preparado de los alimentos. Tambin es conocido que son sensibles a la luz (Gregory, 1989). Por todo ello, para preservar los folatos se debe realizar el almacenamiento de los alimentos en fro, aunque, an as se puede producir la hidrlisis de poliglutamatos hasta monoglutamatos. De esta manera, se establece que los folatos han de ser estabilizados en almacenamiento en ausencia de oxgeno o en presencia de agentes reductores como ascorbato, a fin de minimizar las prdidas (Gregory, 1989). Los folatos presentes de forma natural en los alimentos son las formas poliglutmicas, las cuales deben ser hidrolizadas hasta poliglutmicas en el intestino, previamente a su absorcin. Esta hidrlisis est catalizada por la enzima -glutamilhidrolasa, localizada en el borde en cepillo de la mucosa intestinal y codificada por el gen de la carboxipeptidasa II. Los folatos presentes como monoglutamatos no necesitan deconjugacin, de tal forma que su paso a travs de la membrana intestinal involucra a un transportador de folatos pH dependiente, codificado este por el gen del transportador de los folatos reducidos. Incluso a altas concentraciones de folatos la absorcin puede tener lugar mediante un mecanismo o saturable que involucra difusin pasiva (Gregory, 1995). La forma monoglutmica predominante en sangre es el 5-metil tetrahidrofolato (5-metil-H4PteGlu). Una vez los pteroilmonoglutamatos estn en sangre, se dirigen a hgado en cuya circulacin portal son de nuevo conformados en poliglutamatos, los cuales pueden ser reenviados a sangre o a bilis. El hgado y las clulas rojas de la sangre son los principales tejidos de almacenamiento para folatos. La excrecin se realiza principalmente va renal, a travs de la orina (Gregory, 1995). Los folatos endgenos en tejidos de mamferos son, en su mayora, derivados folilpoliglutamatos, mientras que las formas pteroilmonoglutmicas estn en plasma y orina (Shane, 1995).
BIOQUMICA Y METABOLISMO DE LOS FOLATOS
Con el trmino folatos se abarca un amplio grupo de compuestos derivados del cido flico o cido pteoilmonoglutamato (PteGlu), que consiste en una molcula de 2-amino-4-hidroxipteridina (pterina) unido a una molcula de -aminobenzoil-glutamato a travs de un grupo metilen en la posicin C-6 (Fig. 1). Durante el metabolismo de los folatos se produce la reduccin del anillo de pirazina de la molcula de pteridina hasta la forma tetrahidro (que es la forma activa coenzimticamente), y tambin se produce la elongacin de la cadena por la adicin de residuos de glutamato en unin -pptido, y la adquisicin y oxidacin o reduccin de un carbono unido a las posiciones N-5 y/o N-10 (Shane, 1995).
cido flico (pteroglutmico) COOH CH2 CH2 OH N N NH2 N N NH CO NH CH COOH n
2-amino-4-hodroxi-6-metilpteridina
Ac. p-aminobenzoico
Ac. L-glutmico
cido pteroico
Fig. 1. Estructura qumica del cido pteroliglutmico.
La funcin coenzimtica de los folatos es como aceptores y donantes de molculas de un-carbono en reacciones involucradas en el metabolismo de nucletidos y aminocidos. Las formas coenzimticamente activas usadas en estas reacciones son los folilpoliglutamatos, que son sustratos e inhibidores ms efectivos que los pteroilmonoglutamatos de la
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VALORACIN DE LA BIODISPONIBILIDAD DE FOLATOS EN LA DIETA
ADN sntesis
CIDO FLICO DR
dTMP (timidilato) Dihidrofolato

Serina
B6
Glicina
TFH
Metionina
dUMP (deoxiuridilato) 5, 10-metilen TFH

MS B12
SAM
SAH MTHFR 5-metilen-TFH Hemocistena CS

B6
Cistena ADN metilacin
Fig. 2. Principales pasos del metabolismo de folatos en humanos. SAM: S-adenosil-metionina; SAH: S-adenosil-homocistena. MTHFR: 5,10 metilentetrahidrofolato reductasa; DR: dihidrofolato reductasa; CS: cistatonina sintasa; MS: metionina sintasa; B6, B12: vitaminas B6 y B12.
FUNCIONES METABLICAS DE LOS FOLATOS El papel de los folatos en el metabolismo es con raras excepciones, el transporte de unidades un-carbono (Fig. 1). Estas unidades un-carbono presentan distintos grados de oxidacin que vara desde el ms reducido como sera el caso del metano, hasta el ms oxidado que sera el dixido de carbono. Con la excepcin de este ltimo, las unidades un-carbono son sintetizadas en la clula durante el metabolismo y transportadas de una reaccin a otra en forma de derivados folato (Wagner, 1995). De esta manera van a intervenir en reacciones tales como (Konings, 2001; Gregory, 1997): 1. Sntesis de ADN, donde la funcin de coenzima folato es en la sntesis de timidilato y purinas. 2. Transferencia de unidades un-carbono mediada por folatos desde la serina, la cual provee una importante fuente de folato en el metabolismo de uncarbono.
3. Conversin de homocistena hasta metionina, donde interviene la vitamina B12 como coenzima y el 5-metiltetrahidrofolato como sustrato. En esta reaccin el grupo metil es transferido enzimticamente hasta la homocistena para formar metionina. La importancia de este proceso radica en que es la mayor fuente de metionina para la sntesis de S-adenosil-metionina, que es un agente metilante esencial en el organismo. Debido al importante papel que desempea en el metabolismo, existen numerosas enfermedades relacionadas con el cido flico. Es esencial poseer un correcto status de folatos, y para alcanzar unos niveles adecuados en plasma se debe recurrir a niveles adecuados de ingesta. Para ello, es necesario conocer la cantidad de folatos que contienen los alimentos, con el objetivo de adecuar la dieta a los niveles que de la vitamina se precisan. Actualmente, los valores de ingesta estn basados en tablas de composicin de alimentos cuyos datos sobre folatos pueden ser cuestionables a menudo (Cuskelly y cols., 1996). Los mtodos utilizados para la determinacin de folatos en alimentos son los que se detallan a continuacin.
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MTODOS DE VALORACIN DEL CONTENIDO DE FOLATOS EN ALIMENTOS
La valoracin del contenido de folatos en los alimentos no resulta sencilla. Todos los mtodos disponibles poseen limitaciones ya que existen ciertas formas qumicas derivadas que pueden no ser cuantificadas y, en otros casos, se sobrestima sobre la realidad del contenido. De modo sencillo podemos dividir los mtodos en microbiolgicos y cromatogrficos, que son brevemente descritos a continuacin. En la tabla I se explican las principales caractersticas de ambos mtodos y se hace referencia a los ensayos con protenas unidoras, RPBA y EPBA, los cuales son menos utilizados y slo se aplican en la valoracin de las protenas.
mentos. Por su comodidad es el mtodo utilizado de forma usual (Finglas y cols., 1993). Este mtodo no puede diferenciar entre formas distintas de folatos. El organismo comnmente usado es el Lactobacillus rhamnosus variedad Casei que responde a la presencia de monoglutamatos, as como a los di y triglutamilfolatos (Martn, 1995) pero con crecimiento diferente. No obstante, ciertos compuestos pueden estimular o inhibir el crecimiento bacteriano dando lugar a resultados no reales. Como se ha demostrado en recientes estudios (De Souza y cols., 1990, Pfeiffer y cols., 1997, Tamura y cols., 1997), los mtodos usados anteriormente pueden no haber sido aplicados con las ptimas condiciones de extraccin. El uso de mtodos optimizados para el anlisis de folatos en alimentos pueden tener como resultados unos datos ms reales.
Mtodo microbiolgico Este es el mtodo oficial aprobado por AOAC, que permite valorar el contenido de folatos totales en ali-
Metodo cromatogrfico El mtodo de cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC) puede asegurar la separacin y deter-
TABLA I MTODOS PARA LA DETERMINACIN DE FOLATOS EN ALIMENTOS
Mtodo Ensayo microbiolgico Bell, 1974 Phillips y Wright, 1982 Finglas et al, 1990 Williams, 1984 Pedersen, 1988 Scott, et al, 1974 Wilson y Horne, 1982
Caractersticas Mtodo Oficial (AOAC) (34) Extraccin: incubacin de la muestra con amilasa y proteasa para su extraccin de la matriz del alimento y deconjugacin por adicin de conjugasa (de pncreas de pollo) Microorganismo utilizado: Lactobacillus rhamnosus Siembra en microplaca e incubacin 20-22 horas. Extraccin: buffer Ches-Hepes pH 7,85 Incubacin: extracto + conjugasa (HK, CP o RP), amilasa y proteasa (37 C) Purificacin: columnas de intercambio aninico (SAX) Fase mvil: acetonitrilo + buffer fosfato (gradiente) Protenas unidoras de la leche e I-PGA como indicador
Deteccin Abs. 630 nm lector de microplacas de Elisa Turbimetra (575, 595 nm)
HPLC Vahteristo et al, 1996
Detector UV (290 nm), FL (ex 290-em 350) o combinacin de ellos
Ensayo con radioprotenas unidoras (RPBA)
Contaje de centelleo
Ensayo con enzimas proticas unidoras Competicin entre cido flico libre aadido (EPBA) y una enzima protena unidora de la Finglas et al, 1988a, b; Hansen y leche marcada Holm, 1988
Lector de microplacas (450 nm) o procesamiento de video-imagen
HK: conjugasa de rin de cerdo; CP: conjugasa de pncreas de pollo; RP: conjugasa de plasma de rata; SAX: columnas de intercambio aninico fuerte; UV: ultravioleta; FL: fluorescencia; ex: excitacin; em: emisin.
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minacin de diferentes formas de folatos (Pfeiffer y cols., 1997, Gregory y cols., 1984, Vahteristo, y cols., 1996). Puede tambin diferenciar entre cantidades de monoglutamatos y poliglutamatos. Los folatos son extrados mediante homogeneizacin en buffer y posterior tratamiento trmico. Tras la extraccin, una porcin del extracto es incubado con una preparacin enzimtica conteniendo conjugasa (de rin de cerdo o pncreas de pollo), -amilasa (de Aspergillus oryzae) y proteasa (Streptomyces griseus) (Pfeiffer y cols., 1997). Tras la incubacin se procede a la purificacin mediante afinidad cromatogrfica, las formas monoglutmicas se determinan por cromatografa lquida en fase reversa. Los detectores utilizados son el de fluorescencia (excitacin 280 nm-emisin 350 nm), ultravioleta (290 nm) y diodo array. La fase mvil utilizada para la separacin de las distintas especies qumicas es una fase gradiente compuesta por buffer fosfato y acetonitrilo (Vahteristo y cols., 1996). Las formas ms abundantes presentes en alimentos son detectadas mediante este mtodo, estas son el tetrahidrofolato (THF), el 5-metil-THF, 5-formil-THF y la forma 10formil cido flico. Tambin el cido flico utilizado para el enriquecimiento de alimentos es detectable y cuantificable con este mtodo. La diferencia entre la concentracin de folato en los extractos de muestra, con o sin tratamiento de conjugasa, es una medida de la cantidad de poliglutamatos en la matriz del alimento. Un tratamiento adicional con conjugasa, amilasa y proteasa refleja la cantidad de folatos vinculados a la matriz. El uso del tratamiento trienzimtico (conjugasa, alilasa y proteasa) se ha demostrado
que es ms ventajoso, y las cantidades de 5-metilTHF est muy de acuerdo con los resultados obtenidos a travs de otros sistemas de cromatografa lquida (Konings, 1999). No obstante, todos ellos emplean mtodos validados y probados mediante el anlisis de materiales certificados de referencia (CRM), con cantidades previamente conocidas de las distintas formas qumicas de folatos. Como ejemplo de los resultados que se obtienen con CRM se muestran en la tabla II los valores obtenidos por los dos mtodos (microbiolgico y cromatogrfico) con distintos ensayos (basados en el uso o no de tratamientos enzimticos) sobre 4 CRM. De esta tabla se pueden extraer varias conclusiones: 1. El mtodo microbiolgico comnmente usado para la determinacin de folatos como ya se ha afirmado, solamente cuantifica el contenido total de folatos. Ciertos componentes no folatos pueden influir sobre el resultado del desarrollo del microorganismo utilizado, con lo que los datos pueden no ser reales. 2. Las diferencias entre los mtodos analticos y la forma de preparacin de la muestra es el factor ms crucial que impide una determinacin exacta de los folatos procedentes de los alimentos de la dieta. El contenido total de folatos se determina por el mtodo microbiolgico. Limitados resultados estn basados en el anlisis en HPLC. Se observa que los resultados con el ensayo microbiolgico son siempre ms altos (incluso 2 3 veces superiores) que con el mtodo cromatogrfico (Finglas, 1996). Otros problemas podran derivarse de la naturaleza misma de los folatos, lo que dificulta tambin la medida de los
TABLA II RESULTADOS EXPRESADOS EN g/100 g DE PESO SECO DE LA DETERMINACIN DEL CONTENIDO DE FOLATOS MEDIANTE MTODO MICROBIOLGICO (MA) Y CROMATOGRAFA LQUIDA (HPLC) EN 4 MUESTRAS DE CRM TOMADO DE KONNINGS (2001)
CRM 485-mezcla de verduras
Tipo de ensayo 5-metilTHF 1 189 2 205 3 202 1 2 3 1 2 3 4 3 56 270 330 15,7 25 29,8 2,59 4,20
5-formilTHF
Forma qumica Mtodo analtico THF 10-formil- cido flico HPLC MA folato g/100 g g/100 g 182 18 198 13 315 28 195 14 60 800 1440 1,20 1,5 1,8 70 66 77 6,1 11,6 114 14 1040 180 1750 58 86 2 92 4 107 2 12 1 37 3
CRM 487-hgado de cerdo
1340 140
CRM 421-leche en polvo
142 14
CRM 121-harina integral
3,6 18
6,0
50 8
*1: no deconjugacin ni adicin de enzimas; 2: adicin de conjugasa; 3: adicin de conjugasa y fungamil y flavourzima; 4: no adicin de conjugasa, adicin de fungamil y flaovourzima. HPLC: cromatografa lquida. MA: mtodo microbiolgico.
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niveles de ingesta, pues como ya se ha explicado son muy sensibles y el contenido de folatos de los alimentos puede verse influido por las condiciones de crecimiento, almacenamiento, y las diferentes formas de preparacin de los mismos hasta que son consumidos. 3. A la vista de la dificultad de obtener valores completos en la cuantificacin de los folatos de los alimentos, se puede afirmar que no existe ninguna tabla de composicin de alimentos que incluya datos completamente fiables en cuanto a cantidad de folatos se refiere. De esta forma resulta difcil establecer la ingesta media de folatos en alimentos para adultos, pues estudios recientes realizados entre la poblacin de varios pases europeos establecen la ingesta media en un amplio rango de 168-320 g/da (de Bree y cols., 1997). Pero sobre todo la aparente menor disponibilidad de las formas poliglutmicas frente a las monoglutmicas, as como la posible diferencia en la biodisponibilidad de las diferentes formas de la vitamina (Gregory, 1995), muestra la necesidad de validar un mtodo de anlisis que discrimine estas distintas especies de folatos en los alimentos. De esta manera, aunque el mtodo oficial es el microbiolgico, los estudios ms recientes se basan en la utilizacin de los mtodos de cromatografa lquida. Incluso se estn perfeccionando tcnicas para la determinacin en cromatografa combinada de lquidos-masas (LCMS), que permitira una mayor certeza de la especie qumica que se determina. Otros ensayos que se estn realizando para la determinacin de folatos en alimentos estn basados en las protenas unidoras de folatos, y son los denominados RPBA o ensayo con radioprotenas unidoras y EPBA o ensayo con enzimas proteicas unidoras (Finglas y cols., 1988 y Hansen y Holm, 1988).
Accesibilidad: hace eferencia a la proporcin de folatos disponibles en el intestino, que se estima pasan la barrera intestinal y llegan a sangre. Biodisponibilidad: se ha definido como la fraccin de folatos ingeridos que son absorbidos en el intestino delgado y que pueden ser usados por los procesos metablicos o almacenados, en el cuerpo (Melse-Bonstra, 2003). Es este ltimo trmino el ms usado en la bibliografa para referirse a los folatos realmente aprovechados por el organismo, pero a partir de aqu surgen nuevos conceptos como: Bioconversin: proporcin de folatos ingeridos que son metabolizados en sus formas derivadas. Bioeficacia: fraccin de folatos ingeridos que tiene un efecto favorable en otro biomarcador tal como concentracin plasmtica de homocistena (Brower y cols., 2001). Existen estudios que demuestran que la biodisponibilidad de los folatos procedentes de una dieta mixta y variada es de alrededor de 50%. La biodisponibilidad de formas monoglutmicas puede variar entre 70 y 120% en relacin a la del cido flico (100%). De aqu surge el concepto de equivalentes de folato diettico (DFE); cuando el cido flico sinttico es consumido como suplemento sin alimento, tiene una biodisponibilidad cercana al 100% (Gregory, 1997). Sin embargo cuando es consumido con alimento como ocurre siempre en caso de productos fortificados, su absorcin es reducida en un pequeo porcentaje, y se estima que la biodisponibilidad es aproximadamente del 85% (Institute of Medicine, 1998; Cuskelly y cols., 1996; Pfeiffer y cols., 1997b). Se ha comprobado que los folatos presentes de forma natural en los alimentos son menos absorbidos en el organismo que el cido flico sinttico. Sauberlich y cols., en 1987 demostraron una biodisponibilidad de folatos alimentarios de aproximadamente 50%. As, los DFE pueden expresarse de distintas formas dependiendo del tipo de conversin necesaria (West and Bailey, 2000): 1 g de DFE = 1,0 g de folato del alimento = 0,6 g de cido flico aadido a los alimentos = 0,5 g tomados sin alimento.
BIODISPONIBILIDAD DE FOLATOS EN LA DIETA Y FACTORES DETERMINANTES
Una vez conocido el contenido de folato de los alimentos que componen la dieta, se ha de estimar qu proporcin realmente es aprovechada por el organismo. A partir de aqu surgen una serie de trminos que es necesario definir y que se refieren al comportamiento metablico de los folatos absorbidos: Disponibilidad: hace referencia al contenido en folatos que tiene un alimento y que, una vez llegue al intestino, podr ser potencialmente utilizado por el organismo para ser incorporado al metabolismo.
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1 g de cido flico tomado como suplemento o ayuno = 2,0 g DFE. No obstante, se necesita informacin ms detallada en cuanto a contenido de folatos en los alimentos y composicin de los mismos para describir con seguridad la ingesta y estimar la biodisponibilidad, ya que son numerosos los factores que confluyen e influencian dicha biodisponibilidad, as como bioconversin y bioeficacia:
1 g de cido flico tomado como fortificante = 1,7 g DFE
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1. Forma de folato: las formas reducidas muestran una ms alta biodisponibilidad que las oxidadas. 2. Unin a la cadena poliglutmica: existen estudios que muestran menor biodisponibilidad de las formas poliglutmicas en relacin a las monoglutmicas. 3. Cantidad de folato: la respuesta relativa de la concentracin de folato en suero y eritrocitos a bajas dosis de cido flico (<200 g/da) es ms alta que a concentraciones mayores. Se ha comprobado que dosis superiores a 500 g/da no da lugar a mayores efectos en la disminucin de las concentraciones de homocistena. 4. Complejidad de la matriz del alimento: se ha comprobado que la biodisponibilidad de los folatos en una dieta variada es de 50% (Sauberlich y cols., 1987). En el caso de dietas ricas en frutas y verduras, la biodisponibilidad vara en un rango mayor de entre 60 y 98% dependiendo de los parmetros medidos. La disrupcin previa de la matriz en verduras, por cortado de la misma o bien por tratamiento enzimtico, aumenta la biodisponibilidad. 5. Efectos modificadores (otros constituyentes de la dieta): la biodisponibilidad se ve reducida por otros constituyentes de los alimentos como es el caso de la fibra diettica. La actividad de la folilpoli -glutamil carboxipeptidasa es pH dependiente con un ptimo entre 6,5 y 7,0) y puede ser inhibida por tomate y zumo de naranja y tambin por citrato. El alcohol tambin puede inhibir la absorcin de folatos. Es conocido que la enzima necesita zinc para su actividad, por tanto, la biodisponibilidad de los folatos poliglutamatos ingeridos depender de la cantidad de zinc presente en la dieta. 6. Estatus de nutriente en el organismo: la deficiencia de folatos puede alterar el reparto de folatos entre los tejidos corporales, pero todava no se ha aclarado si esto afecta a la bioeficacia de folatos. Cuando existe dficit de vitamina B12 s se afecta la bioconversin de folato en el organismo ya que se requiere esta vitamina para la correcta actividad de la metionina-sintasa, que transfiere el grupo metil de la forma 5-metil-tetrahidrofolato hasta la homocistena para formar metionina. El status de zinc tambin afectar a la absorcin de poliglutamatos folatos. 7. Factores genticos: el gen portador de folatos reducidos regula la absorcin de folatos. Un polimorfismo en el gen de la glutamato carboxipeptidasa II ha sido comprobado que reduce la actividad de la folilpoli -glutamil carboxipeptidasa. Un comn polimorfismo en el gen que codifica para la metilen tetrahidrofolato reductasa afecta la bioconversin de derivados folatos en el cuerpo y, por tanto, su bioeficacia. 8. Factores relacionados con el hospedador: la edad no tiene influencia en la biodisponibilidad de folatos. Los requerimientos se aumentan pericon-
cepcionalmente y durante la gestacin, con fines preventivos frente a la enfermedad del tubo neural. La biodisponibilidad se ve afectada negativamente en caso de desrdenes del tracto gastrointestinal. 9. Interacciones matemticas: esto hace referencia al hecho de que el efecto combinado de los factores anteriormente citados, puede ser distinto al producto de los efectos por separado. De todo esto surge la necesidad de hallar un mtodo fiable para estimar la biodisponibilidad de los folatos de la dieta.
MTODOS PARA LA DETERMINACIN DE BIODISPONIBILIDAD DE FOLATOS
Actualmente, son muchos los estudios dedicados a la estimacin y a la valoracin de la biodisponibilidad del cido flico procedente de los alimentos de la dieta (Gregory, 1995): 1. Por la necesidad de predecir si la dieta provee suficiente folatos disponibles para cubrir las necesidades diarias. Es prcticamente imposible estimar la cantidad de folatos disponible en un grupo de poblacin en base a los datos de consumo de alimentos. Adems, la asociacin de los folatos dietticos ingeridos con el estado nutricional y la relacin dieta/enfermedad no puede ser completamente interpretada. 2. Por el impacto nutricional de los cambios en la dieta, tales como enriquecimiento de productos con cido flico no puede ser prevista con seguridad. 3. Porque el intento de definir los requerimientos de folato a travs de modelos cinticos est limitada por el hecho de la falta de desconocimiento en cuanto a informacin concerniente a biodisponibilidad de folatos de la dieta se refiere. 4. Porque la mejora de los mtodos para la valoracin de biodisponibilidad de folatos en individuos puede ayudar en el diagnstico y manejo de condiciones de malabsorcin. Los mtodos de estimacin de la biodisponibilidad pueden ser divididos en dos grupos: mtodos in vivo y mtodos in vitro. Muchos de ellos tienen limitaciones conceptuales, es decir, los mtodos in vitro pueden no predecir la biodisponibilidad in vivo de los folatos, mientras que, en el caso contrario, los mtodos isotpicos pueden no predecir la biodisponibilidad de los folatos que estn presentes de forma natural en los alimentos. Hasta ahora, la mayora de los mtodos han ofrecido informacin referente a la biodisponibilidad de los folatos totales en relacin al
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Fig. 3. Bioensayo en animales.
cido flico, ms que sobre la biodisponibilidad absoluta del total de folatos o de las diversas especies qumicas de la vitamina. No obstante, estos son los mtodos de los que se dispone y con los cuales se est trabajando actualmente.
Mtodos in vivo Estos mtodos incluyen distintos bioensayos con animales (Fig. 3), generalmente ratas y pollos, as como, protocolos a corto plazo y a largo plazo (Fig. 4) con dosis simple, mtodos isotpicos (Fig. 5) y estudios de perfusin intestinal todos ellos realizados en humanos y animales (Gregory, 1988 y 1989). Los estudios de perfusin intestinal y los estudios de cultivos celulares han sido tiles en la determinacin del ratio de absorcin en ciertas condiciones, pero estos mtodos han proporcionado tambin informacin que es aplicable para la prediccin de la biodisponibilidad de la vitaminas en los alimentos.
Fig. 5. Ensayo con radioistopos. (13C5) AF: cido flico marca2 do con 13C5. ( H2) AF: cido flico marcado con 2H2.
cin en cuanto a bienestar animal de especies de laboratorio de refiere. En el caso de los estudios realizados en humanos, es necesaria autorizacin legal y aprobacin de los protocolos que se vayan a seguir, deben ser estudios ticamente correctos, adems de laboriosos y caros; suponen una seleccin previa de los individuos a estudiar. Por otro lado, los datos obtenidos en estos casos sern ms exactos y fcilmente validables.
Bioensayos con animales (Fig. 3)

Fig. 4. Ensayos en humanos a corto y largo plazo.
La desventaja de los ensayos realizados en animales es que los datos obtenidos deben ser extrapolados al hombre, salvando las diferencias en condiciones fisiolgicas, microflora, etc. (Said, 1987); son laboriosos y requieren de tiempo, instalaciones adecuadas, personal adecuado para el manejo de los animales, conocimiento y cumplimiento de la legisla56
Los ms comnmente usados son los realizados en ratas y pollos. Adems estos procedimientos han sido usados muy extensamente, pero en la actualidad se recomienda un uso menor debido a que su relevancia en la biodisponibilidad de folatos en humanos no ha sido establecida. Las conclusiones de biodisponibilidad en animales no puede hacerse extensiva a humanos porquen existen diferencias bien
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documentadas entre animales (ratas y pollos) y humanos, en cuanto a la deconjugacin intestinal de folatos (Gregory, 1995; Halsted, 1990). Adems existen otras consideraciones: la forma de administracin de folatos en animales (en polvo incluido en dietas basales) es distinta a como se realiza en humanos; las dietas de animales incluyen antibiticos para suprimir la microflora intestinal y su produccin endgena de folatos; ciertos alimentos o suplementos dietticos no pueden ser administrados en modelos animales (pldoras).
al test y las dosis de referencia son comparadas slo en base a los cambios de los folatos plasmticos 1-2 horas despus de la administracin de la dosis oral. Por lo cual los resultados dependen del estatus previo de los sujetos, que debern haber sido examinados para conocer si tienen un estado nutricional similar de folatos (Fenech y cols., 1999; Pietrzik y cols., 1990; Prinz-Lagenohld y cols., 1999).
Ensayos en humanos a largo plazo (Fig. 4) Son estudios de duracin variable (entre 3 y 6 semanas de duracin) que sirven para comparar dietas que difieren en la fuente de folatos, con lo que el contenido final de folatos puede ser debido a diferencias en la biodisponibilidad de folatos. La concentracin de folato srico es el indicador ms sensible en estos estudios, mientras que los niveles de homocistena plasmtica refleja las diferencias en el estatus de folatos tras varias semanas de ingesta de la dieta del protocolo (Brower y cols., 1993; Sauberlich, 1987; Malinow, 1998).
Ensayos en humanos a corto plazo (Fig. 4) Estn basados en la medida de los cambios producidos en plasma, folatos sricos y en la excrecin de folatos urinarios (Cooperman y cols., 1970; OKeefe y cols., 1995). Una limitacin de estos mtodos es que son relativamente insensibles, lo que hace estos protocolos adecuados slo para alimentos con alto contenido de folatos (>300 g). Las respuestas
Fig. 6. TIM model o modelo multicompartimental, los puntos esenciales en esta sistema son: 1: entrada del alimento en el sistema; 2: recogida de muestra de liberado ileal; A: compartimiento gstrico; C: duodeno; E: yeyuno; G: leon; N: membranas de dilisis; P: recogida de muestras, dializado; H: salida del alimento hacia intestino grueso (no incluido en el sistema); I: electrodos para control de pH.
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Mtodos isotpicos (Fig. 5) Su principal ventaja es la especificidad y claridad de interpretacin, por ejemplo, las molculas de folato marcadas aparecen en plasma u orina pudiendo slo ser derivadas de la dosis marcada administrada. Se ha usado tanto en animales como en hombre para estudios de absorcin, metabolismo y cintica in vivo. Actualmente han disminuido debido a la tendencia actual de no usar radioistopos y de reducir la exposicin de sujetos humanos. Tambin por el desarrollo de procedimientos alternativos usando istopos estables marcados. El protocolo ms usado es el que utiliza administracin oral de (13C5) y un bolo intravenoso de (2H2) cido flico. Segn este protocolo la respuesta variable usada es una excrecin normalizada que ser igual a la excrecin de los folatos marcados derivados de la dosis oral dividido por la excrecin derivada de la dosis inyectada (Gregory y col., 1991 y 1992; Pfeiffer y col., 1997).
ce de biodisponibilidad es calculado en base a dos conceptos, in vitro retencin (estabilidad) y extensin de la deconjugacin. Es de inters el factor de correlacin significativa obtenido entre el ndice de biodisponibilidad in vitro y la biodisponibilidad aparente in vivo derivada de los estudios de Tamura y Stokstad (1973). Se estn desarrollando otros mtodos, tales como los cultivos celulares y los mtodos basados en poblaciones, que tambin se utilizan para obtener informacin acerca de la biodisponibilidad, pero no se obtienen valores seguros ya que est limitado por los valores imprecisos de las tablas de composicin de alimentos. Otro modelo de biodisponibilidad in vitro es el desarrollado en el TNO (Zeist, Holanda) denominado modelo TIM (TNO In vitro model) (Fig. 6). Este es un sistema controlado por ordenador que determina el destino de los productos ingeridos en un medio cerrado simulando las condiciones gstricas e intestinales (Minekus y cols., 1995). Durante la digestin de estos compuestos el modelo monitoriza y regula de forma continua los parmetros naturales tales como: temperatura corporal, pH, mezclado salivar, gstrico e intestinal y transporte por movimientos peristlticos, secrecin gastrointestinal y absorcin de agua y pequeas molculas tales como componentes liberados y digeridos. Sus ventajas son numerosas ya que permite obtener resultados seguros y reproducibles, no presenta limitaciones ticas, est validado, posee gran sensibilidad, es econmico y necesita de limitados materiales para los tests. Sin embargo, no permite la reproduccin de la microflora intestinal as como la presencia de protenas transportadoras. No obstante, se estn desarrollando protocolos en los que se comienza a incluir este tipo de enzimas y protenas (Verwei y cols., 2003) Tambin se estn empleando mtodos modificados de digestin in vitro ms sencillos basados en la tcnica de disponibilidad de Miller y cols. (1981) aunque necesitan ser validados. Con este mtodo se trata de evaluar el paso por difusin de los folatos a nivel intestinal, basndose en la concentracin de folatos en dializados. No obstante, estn en fase de optimizacin y validacin, pues son muchas las condiciones a tener en cuenta.
Mtodos in vitro El desarrollo de estos mtodos intenta realizar la determinacin de la biodisponibilidad de nutrientes permitiendo un mayor screening de muestras, ms rpida y fcilmente que con los mtodos in vivo. La ventaja de estos mtodos es que son ms econmicos, menos laboriosos, se prescinde de los problemas ticos y de las limitaciones que conlleva trabajar con seres vivos. Se trata de simular los procesos enzimticos que tienen lugar durante la digestin, de tal forma que se controlan las condiciones de pH, temperatura y tiempos de digestin, pero no se pueden controlar el resto de procesos fisiolgicos que tienen lugar. La hiptesis inicial era que los componentes de los alimentos podan reducir la biodisponibilidad de los poliglutamatos por inhibicin de la accin de la enzima localizada en el borde en cepillo de la mucosa intestinal (conjugasa). Existen estudios que demuestran que los inhibidores predominantes de la conjugasa son algunas especies aninicas de cidos orgnicos incluyendo citratos, malato y ascorbato donde todos ellos actan como inhibidores competitivos (Wei y Gregory 1998). La importancia de estos estudios es que predicen la incompleta biodisponibilidad potencial de los poliglutamilfolatos en alimentos, pero no predicen definitivamente la incompleta biodisponibilidad. Seyoum y Selhub (1999) idearon una aproximacin alternativa a la estimacin in vitro de la biodisponibilidad de folatos. En este mtodo un extracto de alimento conteniendo folatos naturales es incubado bajo condiciones diseadas para simular el cido gstrico, seguida de una neutralizacin y una exposicin a la actividad de la conjugasa intestinal. El ndi-
CONCLUSIONES Debido al importante papel del cido flico en el metabolismo humano y, por consiguiente, a su influencia en la salud, se requiere un mayor conocimiento en lo que respecta a composicin de la dieta y aprovechamiento de la misma. Se necesitan estudios fiables de composicin de alimentos, ya no tanto cuantitativa si no cualitativa, a fin de conocer la
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forma qumica presente y poder valorar de algn modo su disponibilidad por el organismo. De tal manera que actualmente un gran nmero de las investigaciones estn enfocadas a la caracterizacin de la ptima ingesta de folatos asociada con la reduccin de riesgo de enfermedades crnicas (Boushey y cols., 1995; Giovannucci, 1998) y defectos del desarrollo (Daly y cols., 1997). No obstante, son muchos los factores que intervienen en la absorcin de micronutrientes y sera necesario continuar con estas lneas de investigacin para poder contar con la posibilidad de estimar de forma ms certera la disponibilidad de los micronutrientes dentro de las dietas ms ptimas.
dentro de su 5 Programa Marco, y al proyecto AGL2003-03598 financiado por el Ministerio de Ciencia y Tecnologal
AGRADECIMIENTOS A los proyectos QLK1-1999-00576 FOLATE FUNC HEALTH financiado por Comisin Europea
CORRESPONDENCIA: A. B. Olivares Martnez Nutricin y Bromatologa Facultad de Veterinaria Universidad de Murcia Campus de Espinardo 30071 Murcia Tel.: 968 228 263 Fax: 968 364 798 E-mail: gros@um.es
BIBLIOGRAFA
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La Nutricion Durante El Embarazo y Lactancia Como Condicionante de La Salud en Etapas Avanzadas de La Vida

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La Nutricion Durante El Embarazo y Lactancia Como Condicionante de La Salud en Etapas Avanzadas de La Vida

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Ninguna cosa noble se hace sin el riesgo de un azar (Montaigne)

1136-4815/04/31-36 ALIMENTACION, NUTRICION Y SALUD Copyright 2004 INSTITUTO DANONE

ALIM. NUTRI. SALUD Vol. 11, N. 2, pp. 31-36, 2004

R. M. ORTEGA ANTA ET AL.

ALIM. NUTRI. SALUD

Menor tamao Mayor riesgo perinatal

Supresin de la lactancia materna

Menor crecimiento y peor situacin nutricional Etapas posteriores de la vida

RIESGO DE HIPERTENSIN ARTERIAL

Favorece los excesos dietticos

Vol. 11, N. 2, 2004

LA NUTRICIN DURANTE EL EMBARAZO Y LACTANCIA COMO CONDICIONANTE DE LA SALUD TABLA I

Presin sistlica 2,7 mmHg ms baja a los 13-16 aos

Presin diastlica 3,2 mmHg ms baja a los 13-16 aos

Referencia Singhal y cols. (22)

2,1 mmHg ms baja a los 6 meses de edad

Hofman y cols. (23)

3,6 mmHg ms baja a los 15 aos de edad

2,2 mmHg ms baja a los 15 aos de edad

Geleijnse y cols. (24)

Wilson y cols. (25)

Forsyth y cols. (26)

R. M. ORTEGA ANTA ET AL.

ALIM. NUTRI. SALUD

DEFECTOS DEL TUBO NEURAL

Vol. 11, N. 2, 2004

LA NUTRICIN DURANTE EL EMBARAZO Y LACTANCIA COMO CONDICIONANTE DE LA SALUD

ALIM. NUTRI. SALUD

1136-4815/04/37-48 ALIMENTACION, NUTRICION Y SALUD Copyright 2004 INSTITUTO DANONE

ALIM. NUTRI. SALUD Vol. 11, N. 2, pp. 37-48, 2004

La microbiota intestinal en el nio y la influencia de la dieta sobre su composicin

O. THOMPSON CHAGOYN ET AL.

ALIM. NUTRI. SALUD

TABLA I FACTORES QUE AFECTAN A LA MICROBIOTA INTESTINAL

Duodeno 103- 104 CFU/ml Streptococcus Staphylococcus Lactobacillus

leon 106- 1010 CFU/ml Coliformes Bacteroides Bifidobacterium Clostridium

Colon 1011- 1012 CFU/ml Bacteroides. Bifidobacterium Clostridium. Enterococcus

COMPOSICIN DE LA MICROBIOTA EN EL TUBO DIGESTIVO

Vol. 11, N. 2, 2004

LA MICROBIOTA INTESTINAL EN EL NIO Y LA INFLUENCIA DE LA DIETA SOBRE SU COMPOSICIN

ALIM. NUTRI. SALUD

Efecto sobre la microbiota

Estimulan crecimiento de Bifidobacterium

Minerales Calcio y fsforo Hierro: lactoferrina

IMPORTANCIA Y FUNCIONES DE LA MICROBIOTA INTESTINAL

Vol. 11, N. 2, 2004

LA MICROBIOTA INTESTINAL EN EL NIO Y LA INFLUENCIA DE LA DIETA SOBRE SU COMPOSICIN

O. THOMPSON CHAGOYN ET AL.

ALIM. NUTRI. SALUD

Vol. 11, N. 2, 2004

LA MICROBIOTA INTESTINAL EN EL NIO Y LA INFLUENCIA DE LA DIETA SOBRE SU COMPOSICIN

SECUENCIA DE LA COLONIZACIN BACTERIANA EN EL INTESTINO DEL NIO

O. THOMPSON CHAGOYN ET AL.

ALIM. NUTRI. SALUD

DIVERSIDAD DE LA MICROBIOTA EN FUNCIN DE LA DIETA

Vol. 11, N. 2, 2004

LA MICROBIOTA INTESTINAL EN EL NIO Y LA INFLUENCIA DE LA DIETA SOBRE SU COMPOSICIN

12 10 8 6 4 2 0 Al nacer 1 semana 1 mes 1 ao 2 aos

Gram (+) Escherichia coli Lactobacilos Bacteroides Bifidobacterias

Fig. 2. Evolucin de la microbiota en funcin del tiempo.

COMPONENTES ESPECFICOS DE LA DIETA Y CRECIMIENTO DE LA MICROBIOTA INTESTINAL

O. THOMPSON CHAGOYN ET AL.

ALIM. NUTRI. SALUD

Vol. 11, N. 2, 2004