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ATIVIDADE DE BACTRIAS ASSOCIADAS A FOLHAS DE NIM (AZADIRACTHA INDICA) SOBRE MORTALIDADE E MOBILIDADE DE MELOIDOGYNE JAVANICA, IN VITRO - Bruna Hanielle

Carneiro dos Santos, Isac Pereira Soares Martins, Regina Cassia Ferreira Martins, Adelica Aparecida Xavier, Leandro de Souza Rocha, Acleide Maria Santos Cardoso, Josiane Gonalves da Silva (bruninha_agro@hotmail.com) Introduo
Dentre os vrios nematides parasitas de plantas, o gnero Meloidogyne se destaca como o principal responsvel por grandes perdas na produo, pois ataca quase todas as culturas de interesse econmico e algumas de interesse na rotao de culturas [1]. O controle desses organismos pode ser feito pelo uso de defensivos qumicos, entretanto, muitos desses produtos, por serem persistentes e acumulativos em ecossistemas naturais, podem ser perigosos para animais e humanos [2]. As plantas antagonistas so tambm bastante utilizadas no controle de fitonematides. Destas destaca-se o nim que produz exsudatos radiculares txicos aos nematides afetando a sua mobilidade e ou a ecloso [3] e/ou por meio de mecanismos de resistncia afetando o desenvolvimento e reproduo do nematide no sistema radicular [4]. Outra caracterstica marcante de plantas antagonistas a presena de bactrias endofiticas (vivem no interior das plantas) e epifitas (aquelas que vivem na superficie das plantas) associadas. Entretanto, os efeitos dessas bactrias no controle de fitonematoides devem ser investigados. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar in vitro o efeito de bactrias epfitas, endofticas e do extrato fermentado de folhas de nim (Azadirachta indica) sobre a mortalidade e mobilidade de M. javanica.

Material e mtodos
A. Inculo de M. javanica Razes de tomateiro Kada cultivado em casa de vegetao com sintomas de galhas foram levados ao laboratrio de fitopatologia, sendo cuidadosamente lavadas em gua parada para no eliminar massas de ovos aderidas, em seguida com auxlio de estilete retirou-se as massas de ovos presentes nas galhas. Essas massas foram colocadas em cmara de ecloso, que foi montada em placa de Petri de nove centmetros de dimetro, na qual foi colocada peneira e, sobre essa duas folhas de papel absorvente. Sobre este adicionaram-se as massas de ovos coletadas. Abaixo da peneira foram adicionados 10 mL de gua destilada e autoclavada. Em seguida a placa foi acondicionada em cmara de incubao a 28C. Aps 48 horas os juvenis de segundo estdio (J2) eclodidos foram retirados da incubadora e levados para centrifuga, onde foram lavados por trs vezes em rotao de 3000 rpm por 6 minutos com gua destilada esterilizada. Os nematides foram recolhidos de tal forma que a suspenso final contivesse 1000 juvenis de M. javanica/mL. B. Obteno da suspenso bacteriana. Foram avaliados 28 isolados bacterianos obtidos de folhas de nim, sendo 10 bactrias epifitas, 1 bactria endofitica e 17 bactrias do extrato fermentado de folhas de nim. Em cmara de fluxo laminar, os 28 isolados foram repicados em meio lquido Trypic Soy Broth (TSB) e levados para agitador orbital shaker, onde permaneceram sob agitao constante por 48 horas, rotao de 100 rpm a 28C. Aps esse perodo as suspenses bacterianas foram centrifugadas a 10.000 rpm por 15 minutos e o sobrenadante (filtrado) descartado. Em seguida, foi adicionada soluo salina (0,85%) sobre o plete retido no tubo. A suspenso obtida foi calibrada em espectrofotmetro para OD 540 = 0,5 de absorbncia. C. Mortalidade e mobilidade de M. javanica

________________ Apoio financeiro: FAPEMIG.

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Para a montagem do ensaio in vitro, em clulas de 300 L de placas tipo Elisa foram colocados 20 L da suspenso contendo de 20 J2 de M. javanica, e 100 L do extrato de folhas ou da suspenso bacteriana. Aps 48 horas, a avaliao de mobilidade foi realizada pela contagem dos nematides mveis e imveis. A seguir foi realizada a avaliao de mortalidade, conforme metodologia descrita por Chen e Dickson [5], que consistiu em adicionar uma a duas gotas de NaOH 1 N suspenso de nematides. A contagem foi feita logo a seguir, considerando-se mortos os nematides retos e imveis, e vivos os retorcidos e mveis. O ensaio foi montado em delineamento inteiramente ao acaso com seis repeties e, como testemunhas foram utilizadas gua, soluo salina e temik. Os dados foram convertidos em porcentagem e submetidos anlise de varincia, sendo as mdias comparadas pelo teste de Scott e Knott a 5%.

Resultados e Discusso
Por meio da anlise de varincia verificou-se efeito significativo dos isolados bacterianos testados em relao s testemunhas sobre a mortalidade e imobilidade de J2 de M. javanica (P0,05). Pelo teste de mdias, verificou-se que para a mortalidade (Tabela 1), dos 28 isolados testados, 23 diferiram das testemunhas gua e soluo salina, sendo que o temik juntamente com 22 dos isolados apresentaram mortalidade entre 23,04 e 100%. Cinco isolados provocaram a morte de 100% dos juvenis aps 48 h de exposio. Para a mobilidade (Tabela 1), verificou-se que 9 isolados proporcionaram imobilidade superior a soluo salina variando de 36,53 a 95,61%. A gua juntamente com 20 isolados apresentou as menores taxas de imobilidade. Dos 28 isolados testados apenas a bactria 11 do nim fermentado no teve efeito sobre a mortalidade e a mobilidade. Naves & Souza [6] trabalhando com filtrados das culturas de 40 isolados de bactrias endofticas, obtidos a partir do sistema radicular de diferentes espcies de plantas testados na motilidade, mortalidade e ecloso de juvenis de segundo estdio (J2) de M. javanica, verificaram que dos isolados testados, sete imobilizaram juvenis em 24 h, no ocorrendo recuperao da mobilidade aps serem transferidos para gua, provocando, dessa forma, porcentagens de mortalidade semelhantes induzida pelo nematicida aldicarbe utilizado como controle.

Concluso
Conclui-se que os isolados bacterianos apresentam efeito nematicida e nematosttico, exceto o isolado da bactria 11 do nim fermentado que no teve efeito sobre a mortalidade e mobilidade.

Agradecimentos
FAPEMIG pelo apoio ao desenvolvimento da pesquisa e pela concesso de bolsa de pesquisa.

Referncias
[1] SASSER, J.N. & FRECKMAN, D.W., A world perspective on nematology:the role of the society, Pp. 7-14, 1987. In: J.A. VEECH and D.W.DICKSON, ed. Vistas on Nematology, Maryland: Society of Nematoloists. [2] BECKER, J.O., ZAVALETA-MEJIA, E., COLBERT, S.F., SCHROTH, M.N.,WEINHOLD, A.R., HANCOCK, J.G., GUNDY, S.DV. and VAN-GUNDY, S.D. 1988. Effects of rhizobacteria on root-knot nematodes and gall formation. Phytopathology 78: 1466-1469. [3] MILLER, P.M. & AHRENS, J.F. 1971. Influence of growing marigolds, weeds, two cover crops and fumigation on subsequent populations of parasitic nematodes and plant growth. Plant Disease Reporter 56(8): 642-646. [4] PEACOCK, F.C. 1959. The development of technique for studying the host/parasite relationship of the root-knot nematode Meloidogyne incognita under controlled conditions. Nematologica 4: 43-55.

[5] [6]

CHEN, S.Y.; DICKSON, D.W. 2000. A technique for determining live second-stage juveniles of Heterodera glycines. Journal of Nematology, v. 32, n.1, p.117-121. NAVES, R.L., CAMPOS, V.P. & SOUZA, R.M. Filtrados de culturas bacterianas endofticas na motilidade, mortalidade e ecloso de

juvenis de segundo estdio de Meloidogyne javanica. Fitopatologia Brasileira 29:384-388. 2004.

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Tabela 1.Porcentagem de mortalidade e imobilidade de juvenis de segundo estdio (J2) de Meloidogyne javanica submetidos a diferentes isolados bacterianos obtidos de folhas de nim, in vitro. Tratamentos H2O Nim fermentado 11 Nim fermentado 17 Epifita 08 Nim fermentado 14 Nim fermentado 18 Nim fermentado 05 Soluo salina Nim fermentado 15 Nim fermentado 12 Nim fermentado 16 Nim fermentado 13 Epifita 11 Epifita 12 Epifita 01 Nim fermentado 04 Epifita 09 Nim fermentado 09 Epifita 03 Nim fermentado 10 Nim fermentado 06 Temik Nim fermentado 02 Epifita 16 Epifita 10 Nim fermentado 01 Epifita 06 Epifita 03 Endofitica 01 Nim fermentado 07 Nim fermentado 08 Epifita 02 Mdia CV (%) Mortalidade de J2 M. javanica (%) 0,00 g 0,00 g 1,50 g 2,63 g 5,82 g 10,32 f 12,52 f 17,66 f 23,04 e 27,71 e 34,09 d 35,75 d 39,91 d 40,75 d 58,30 c 63,46 c 88,80 b 89,26 b 90,00 b 90,87 b 91,08 b 91,31 b 92,43 b 93,66 b 98,04 a 98,33 a 99,33 a 100,00 a 100,00 a 100,00 a 100,00 a 100,00 a 58,22 13,96 Tratamentos Epifita 03 Epifita 02 Nim fermentado 08 Nim fermentado 07 Endofitica 01 Epifitica 06 Epifitica 16 H2O Nim fermentado 01 Epifitica 10 Nim fermentado 11 Nim fermentado 02 Epifitica 12 Temik Nim fermentado 06 Nim fermentado 10 Epifitica 03 Nim fermentado 09 Epifitica 09 Nim fermentado 18 Nim fermentado 14 Epifitica 01 Soluo salina Nim fermentado 04 Nim fermentado 12 Epifitica 11 Nim fermentado 16 Nim fermentado 13 Nim fermentado 15 Nim fermentado 17 Nim fermentado 05 Epifitica 08 Mdia CV (%) Imobilidade de J2 M.javanica (%) 0,00 f 0,00 f 0,00 f 0,00 f 0,00 f 0,66 f 0,66 f 1,66 f 1,66 f 1,96 f 2,50 f 6,28 e 7,88 e 7,93 e 8,91 e 9,12 e 10,00 e 10,73 e 11,19 e 11,27 e 11,39 e 34,57 d 35,26 d 36,53 d 52,38 c 60,08 c 64,20 c 64,24 c 76,95 b 84,16 b 84,81 b 95,61 a 25,30 36,18

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